肝炎患者外周血单个核细胞IL-18 mRNA和蛋白水平与HBV感染的关系

检测了慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(ＰＢＭＣ )ＩＬ 18基因及蛋白表达水平 ,以探讨ＩＬ 18在乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ )感染中的作用。1　材料与方法1 1　病例　慢性乙型肝炎 30例 ,排除合并感染其他病毒性肝炎 ,近 6月无应用影响免疫功能的药物。所有病例均检测血清ＨＢＶＤＮＡ水平 (斑点杂交法 )。1 2　方法　分别以逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ )技术 ,流式细胞术检测ＩＬ 18基因的转录及表达水平。方法见文献[1]。ＰＢＭＣ内ＨＢＶＤＮＡ检测 ,抽提细胞内ＤＮＡ后采用ＰＣＲ法扩增。所得实验结果采用ＳＰＳＳ 8 0软件进…     

丙型肝炎病毒感染外周血单个核细胞的进一步研究

本文用三项不同技术 ,同时检测 2 0例慢性丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)中的ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＶＮＳ5抗原 ,以进一步了解ＨＣＶ感染ＰＢＭＣ的状况 ,并对不同方法的检测结果进行比较分析。1　病例来源　 2 0例慢性丙型肝炎患者为同济医大附属协和医院住院或门诊病人 ,男性 13例 ,女性 7例 ,年龄在 14～ 6 5岁之间。诊断依据 1995年全国传染病会议修订的标准。甲、乙、戊型肝炎病毒感染指标均阴性。 15例健康成人作为对照。2　方法　用ＲＴ ＰＣＲ检测血清ＰＢＭＣ中的ＨＣＶＲＮＡ ,试剂盒系浙江温州伊利康生物技术有限…     

儿童慢性淋巴细胞性甲状腺炎T细胞CD40L表达及其与细胞因子失衡的关联研究

为研究慢性淋巴细胞性甲状腺炎(ＣＬＴ)患儿发作期Ｔ细胞ＣＤ40ＬｍＲＮＡ表达及其与ＴＨ1/ＴＨ2细胞因子失衡的关系,以8例ＣＬＴ患儿为研究对象,采用ＲＴＰＣＲ技术和ＥＬＩＳＡ法分别检测在丝裂原诱导下外周血Ｔ细胞ＣＤ40ＬｍＲＮＡ的表达及单个核细胞(ＰＢＭＣ)产生Ｉ...     

乙型肝炎病毒前C/C基因准种与变异特点的研究

近年来的研究提出ＨＢＶ感染者体内存在有准种的假说 ,我们以前Ｃ/Ｃ基因为研究靶区域 ,应用多聚酶链反应(ＰＣＲ)技术扩增慢性乙型肝炎患者血清中的靶序列 ,随机选择克隆测序 ,比较其结果 ,证明了ＨＢＶ准种的存在 ,并发现多种基因突变形式。试验用 4例患者诊断为病毒性肝炎 ,乙型、慢性 ,临床检测ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ阳性。提取 2 0 0 μｌ血清中的ＨＢＶＤＮＡ ,用于多聚酶链反应 (ＰＣＲ)。以甘人宝等发表的ＨＢＶａｄｒ亚型序列为依据 ,设计引物序列。其上游引物为 :5′ＡＣＴＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＴＧＣＡＡＣＴＴＴＴ…     

多发性硬化症患者PBMC Fas和FasL的表达

多发性硬化 (ＭＳ )病因及发病机制至今未明 ,目前认为它是一种与中枢神经系统髓鞘成分有关的自身免疫性疾病。Ｆａｓ分子是死亡因子Ｆａｓ配体 (ＦａｓＬ )的受体 ,Ｆａｓ/ＦａｓＬ是细胞凋亡的诱导因子[1] ,Ｆａｓ/ＦａｓＬ功能异常可能是自身免疫性疾病的发病机制之一。本文应用ＲＴ ＰＣＲ方法检测ＭＳ患者外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ )Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达 ,探讨其在ＭＳ发病中的作用。1　对象与方法1 1　研究对象　 4 5例ＭＳ患者 ,男性 2 3例 ,女性 2 2例 ,年龄 2 0～ 4 6岁 ,平均 (32 5± 9 1)岁 ,病程 2月～ 11年 ,平均病程 2 …     

Bcl-2 和Bax蛋白在慢性病毒性肝炎肝组织中的表达

目的研究细胞凋亡相关的Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白在慢性病毒性肝炎（ＣＨ）肝组织中表达的情况与该病发生发展的关系。方法对３５例不同病变程度的ＣＨ肝组织用免疫组化法检测Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达及定位。结果Ｂｃ１－２和Ｂａｘ分布基本一致，轻、中度ＣＨ主要见于碎屑样坏死（ＰＮ）区中的单个核细胞（ＭＮ），邻近ＰＮ区边缘的肝细胞浆中也有强阳性表达。ＨＥ染色观察，这些Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ阳性肝细胞多呈重度水样变性或嗜酸性变。在重度ＣＨ肝组织中Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ阳性的ＭＮ主要分布于重度ＰＮ区和桥接坏死区，周围部分肝细胞Ｂａｘ阳性，而Ｂｃｌ－２为阴性。在慢性重型肝炎，Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ除在亚大块肝细胞坏死区浸润的ＭＮ胞浆内表达外，残存肝细胞亦呈阳性表达。结论Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ在肝组织中的表达可能不仅与ＣＨ的细胞凋亡有密切关系，而且与慢性重型肝炎的发生发展有关     

原发性肝癌患者HBV血清学标志与HBV DNA的关系探讨

已有报道 ,乙型肝炎病毒 (ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ ,ＨＢＶ)与原发性肝癌 (ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ ,ＰＨＣ)密切相关 ,但多局限于对ＨＢＶ血清学标志物的单方面研究 ,我们采用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ法 ,同时对ＨＢＶ标志物和ＨＢＶＤＮＡ进行了检测 ,以探讨二者之间的关系 ,为ＰＨＣ的临床诊断及治疗提供实验依据。1　对象和方法1.1　研究对象　ＰＨＣ患者 6 37例 ,均为本院 1994～ 2 0 0 0年期间的住院患者 ,其中男 5 5 9例 ,女 78例 ,年龄 2 0～ 87岁 ,平均 5 1岁。全部患者均按《中国常见恶…     

原发性肾病综合征患者尿液单个核细胞分布和粘附分子CD44表达

采用流式细胞术测定 45例原发性肾病综合征 (ＮＳ)患者尿液单个核细胞分布和粘附分子ＣＤ44 ,并对相关临床及病理因素进行分析。选择住院行肾活检、诊断为ＮＳ患者45例 ,对照组为 40例本院健康工作人员 ,2组年龄和性别构成无显著差异。在肾活检前留取尿液 5 0ｍｌ,15 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 10ｍｉｎ ,按常规方法制成细胞悬液用于各项测定。ＣＤ3、ＣＤ4、ＣＤ8、ＣＤ14、ＣＤ44 (移巢受体 )单克隆抗体均由国际免疫公司生产。采用ＢａｃｔｏｎＤｉｃｋｅｎｓｏｎ公司流式细胞仪及其软件测定尿液单个核细胞 (ＵＭＣ)。ＮＳ患者各种ＵＭＣ数密度为 …     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCVRNA检测及其临床意义

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中ＨＣＶＲＮＡ检测及其临床意义空军总医院传染科应用套式ＰＣＲ检测了８８例丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ；结果发现：慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙肝患者（Ｐ＜０．０...     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Fas和FasL的表达及临床意义

Ｆａｓ和ＦａｓＬ是介导细胞凋亡的主要系统 ,我们应用逆转录 ＰＣＲ方法 ,对 37例慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达进行检测 ,初步探讨其在慢性乙型肝炎患者活化诱导的外周血淋巴细胞凋亡中的作用。对象与方法病例来源 :我院 1998～ 1999年 37例慢性乙型肝炎患者 ,男 2 6例 ,女 11例 ,年龄 16～ 6 0岁。诊断按1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎标准〔1〕。活动期 :ＡＬＴ >10 0Ｕ/Ｌ ,乙肝标志物 :ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ阳性 ,ＨＢＶＤＮＡ阳性。排除ＨＡＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ、ＨＥＶ…     

黄芪总皂甙对CVB_3感染心肌细胞cTnI、SERCA活性及mRNA表达的影响

目的 :探讨黄芪提取物 -黄芪总皂甙对柯萨奇Ｂ3(ＣＶＢ3)感染的培养ＳＤ乳鼠心肌细胞损伤模型的保护作用 ,对病毒引起的肌浆网钙泵 (Ｓａｒｃｏ/ＥｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍＣａ2 ＡＴＰａｓｅ,ＳＥＲＣＡ)活力及其ｍＲＮＡ表达变化的影响。方法 :将培养ＳＤ乳鼠心肌细胞分为正常组、模型组及黄芪组 ,模型组及黄芪组以柯萨奇Ｂ3亲心肌病毒株 (ＣＶＢ3ｍ,ＴＣＩＤ50 为 1 0 5 .83)感染心肌细胞。 72～ 96ｈ后 ,观察各组细胞病变作用 (ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆ ｆｅｃｔ,ＣＰＥ) ,检测其培养上清心肌肌钙蛋白Ｉ(ｃＴｎＩ)含…     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生IL-18、IL-4和IFN-γ的水平

为了研究细胞因子在慢性乙型肝炎中的表达水平变化及诱生活性 ,检测不同临床类型慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ )ＩＬ 18、ＩＬ 4及ＩＦＮ γ的水平并对其意义作初步探讨。1　资料与方法1 1　资料　选择临床确诊的 10 5例慢性乙型肝炎患者 ,分为三组 ,39例轻度组 ,37例中度组 ,2 9例重度组。正常对照组 32例来自健康志愿者。1 2　方法　取研究对象抗凝血 ,常规分离ＰＢＭＣ。调整ＰＢＭＣ浓度 ,一组加入脂多糖 (ＬＰＳ为Ｓｉｇｍａ公司产品 ) ,终浓度为 1μｇ/ｍｌ;另一组不加ＬＰＳ ,调整细胞悬液浓度为10 6/ｍｌ。置入 37℃…     

乙肝病程发展中CD4/CD8、TNF-α及sIL-2R水平变化及意义

1　材料与方法1.1　研究对象　慢性乙型肝炎患者 89例 ,年龄 16～ 6 8岁 ,其中轻度慢性乙肝 (ＣＨ) 2 3例 ,中重度慢性乙肝 35例 ,肝炎后肝硬变 (ＬＣ) 19例 ,重型肝炎 (ＦＨ) 12例 ,所有病例的诊断均符合病毒性肝炎诊断标准。原发性肝癌 (ＨＣＣ) 2 8例 ,年龄39～ 6 7岁 ,所有病例为ＨＢＶ标志阳性 ,经临床与病理细胞学检查等方法确诊。正常对照组 30例 ,年龄 2 1～ 4 5岁 ,均为健康献血员。1.2　Ｔ细胞亚群检测　直标荧光抗体 :小鼠抗人ＣＤ4 ＦＩＴＣ/ＣＤ8 ＰＥ双荧光标记抗体 (美国Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ公司 )。流式细胞仪 :…     

实验性病毒性心肌炎小鼠血清ICAM-1、TNF-α和IL-2水平及意义

病毒性心肌炎 (ＶＭＣ )主要是由柯萨奇Ｂ组病毒侵犯心脏所致 ,并以心肌炎性坏死和间质单个核细胞浸润为主要病理变化。病毒感染引起的细胞免疫功能紊乱而致的心肌损害 ,是ＶＭＣ发病的重要机制之一[1] 。而多种细胞因子则是ＶＭＣ发病过程中的重要介质 ,我们建立了ＶＭＣ小鼠模型 ,并观察其血清中ＩＣＡＭ 1、ＴＮＦ α及ＩＬ 2的水平 ,现报告如下。1　材料和方法1 1　动物　选取 4～ 6周龄雄性ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,体重 14±2ｇ,由中科院上海实验动物中心提供。1 2　病毒　柯萨奇Ｂ3 病毒 (ＣＶＢ3 )、Ｎａｎｃｙ株 ,由上海医科大学卫生部病…     

IL-7与IL-2、PHA或抗CD3联用诱导人外周血LAK细胞的研究

ＰＨＡ ＬＡＫ细胞和ＣＤ3ＡＫ细胞的活性均优于ＩＬ 2培养的常规ＬＡＫ细胞[1,2 ] 。本文分析比较ＩＬ 7对ＰＨＡ ＬＡＫ、ＣＤ3ＡＫ细胞诱导和活性的影响。1　材料与方法1 1　主要试剂　ＩＬ 7(Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ Ｉｎｃ,美国 ) ;余参见文献 [3]。1 2　效应细胞的诱生与培养　常规方法从Ｏ型血分离单个核细胞 ,分别用ＰＨＡ (12 5 μｇ/ｍｌ)预刺激 48ｈ或抗ＣＤ3(1μｇ/ｍｌ)包被 4ｈ ,然后与含ｒＩＬ 2 (2 5 0ｕ/ｍｌ)的ＲＰＭＩ 16 40培基 (含ＡＢ型血清 )共培养 ,诱生ＰＨＡ ＬＡＫ和ＣＤ3ＡＫ细胞 ,与ＩＬ 7(10ｎｇ/ｍｌ)诱生的Ｉ…     

Gamma射线照射对人树突状细胞表型及功能的影响

Ｇａｍｍａ照射通常被用来处理混合淋巴细胞反应 (ＭＬＲ)中刺激细胞进而获取单向性的应答 ,本研究探讨了Ｇａｍｍａ射线对人树突状细胞 (ＤＣ)表型与功能的影响。肝素抗凝人外周血 11份 ,每份 2 0～30ｍｌ,经密度梯度离心分离单个核细胞(ＰＢＭＣ) ,在含有 5 0ＩＵ ｍｌ青霉素、5 0 μｇ ｍ1链霉素、1%非必需氨基酸、2ｍｍｏｌ Ｌ谷胺酰胺及 10 %胎牛血清的ＲＰＭＩ 16 40培养基中 ,置 37℃ ,5 %ＣＯ2 2ｈ后移去非贴壁的细胞 ;贴壁细胞用含有重组的人ＧＭ ＣＳＦ ( 80 0Ｕ ｍｌ)和ＩＬ 4 ( 5 0 0Ｕ ｍｌ)的ＲＰＭＩ 16 40培养基中培养 7ｄ…     

泉州地区肝炎患者TT病毒感染状况调查

ＴＴ病毒(ＴＴＶ)是新近发现的一种被认为可能与肝炎有关的新型病毒。为了解闽南地区ＴＴＶ感染情况,我们采用ＰＣＲ技术对泉州地区43例肝炎患者血清ＴＴＶＤＮＡ进行检测。43例为1998年1～4月住院的肝炎患者,男34例,女9例,年龄22～70岁。临床类型:急性肝炎11例,慢性肝炎21例,重型肝炎4例;肝炎肝硬化5例,洒精性肝炎2例。收集血清标本47份,采用ＥＬＩＳＡ法检测抗ＨＡＶＩｇＭ、ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅ、抗ＨＢｃＨＢｃＩｇＭ(以上为上海荣盛公司试剂)、抗ＨＣＶ(华美公司)、ＨＤＡｇ、抗ＨＤＶＩｇＭ(河南瑞安公司)、抗…     

乙肝病毒相关肝病患者肝移植后外周血单个核细胞及肝组织中乙型肝炎病毒cccDNA的检测

背景：肝移植后受者体内绝大部分病毒负荷被清除,植入新肝后其复发性肝炎病原体从肝外进入肝内的途径及其复制规律目前尚无定论。 目的：检测肝移植前后外周血单个核细胞和肝组织中乙型肝炎病毒cccDNA及血清中乙型肝炎病毒DNA的表达。 方法：采用淋巴细胞分离液从乙肝病毒相关终末期肝病37例患者外周血中分离出单个核细胞,采用荧光定量PCR检测肝移植前后及移植后乙肝复发3个时期外周血单个核细胞和肝组织中cccDNA及血清乙型肝炎病毒DNA表达。 结果与结论：肝移植前,单个核细胞cccDNA阳性12例,肝组织cccDNA阳性6例,检出率分别为32%和16%,单个核细胞、肝组织中cccDNA拷贝范围分别为(3.028~6.508)×10⁴,(4.158~6.234)×10⁴ 拷贝/mL。肝移植后,单个核细胞cccDNA阳性1例,无血清乙型肝炎病毒DNA检测阳性病例。6例肝移植后乙肝复发病例中外周血单个核细胞cccDNA阳性4例,肝组织活检cccDNA阳性1例,6例血清乙型肝炎病毒 DNA均为阳性。提示乙肝病毒相关终末期肝病患者肝移植后乙肝复发途径可能是残留乙肝病毒在外周单个核细胞中以cccDNA为模板复制,然后再迁移到肝脏。     

红细胞CRl在急性颅脑损伤患者表达及免疫功能的探讨

人类红细胞膜上 1型补体受体 (ＣＲ1)属于糖肽 ,其配体有Ｃ3ｂ、Ｃ4ｂ、ｉｃ3ｂ、ｉｃ4ｂ。ＣＲ1的主要免疫功能是清除循环免疫复合物 (ＣＩＣ)及病原体 ;将抗原提呈给淋巴细胞 ,增强Ｔ淋巴依赖性反应 ;增强免疫调控作用及效应细胞样作用[1] 。因此 ,研究红细胞ＣＲ1分子的表达及其免疫粘附 (ＲＣＩＡ)功能的变化与疾病的关系具有重要意义。我们采用ＥＬＩＳＡ法和酵母菌花环试验 ,测定了 37例急性颅脑损伤患者外周血红细胞ＣＲ1分子的表达、ＲＢＣ Ｃ3ｂＲ形成率及ＲＢＣ ＩＣＲ形成率 ,旨在了解患者的红细胞免疫功能及意义。1　材料和方法…     

人脐带血抗巨细胞病毒和EB病毒的特异性细胞毒？…

目的：探讨用人的脐带血单个核细胞体外同时扩增对抗ＥＢ病毒（ＥＢＶ）和巨细胞病毒（ＣＭＶ的特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的可行性。方法：利用人的脐带血单个核细胞（ＣＢＭＣ）,通过ＥＢＶ感染转化成Ｂ成淋巴细胞细胞株（ＢＬＣＬ）,再通过逆转录病毒载体,将ＣＭＶ蛋白基因ｐｐ６５导入ＢＬＣＬ,用这种细胞体外刺激同一供者脐带血的ＣＢＭＣ产生细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）,经「＾５１Ｃｒ」释放实验（ＣＲＡ）检测产生的ＣＴＬ