白细胞介素1β通过p38信号通路上调大鼠肾小球系膜细胞骨调素mRNA的表达

目的 探讨p38信号通路(1938MAPK)在白细胞介素1(IL-1)β介导的大鼠肾小球系膜细胞表达骨调素(OPN)中的作用。方法 应用Western印迹检测p38MAPK在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察p38MAPK特异性阻断剂SB203580对IL-1β诱导的系膜细胞促炎症介质OPNmRNA的影响。结果 IL-1β以时间和剂量依赖方式刺激系膜细胞引起p38MAPK的活化，并明显上调系膜细胞OPNmRNA的表达。p38MAPK特异性抑制剂SB203580以剂量依赖性方式显著抑制IL-1β诱导的OPNmRNA的表达。结论 p38MAPK在IL-16介导的肾小球系膜细胞上调表达黏附分子OPN中起重要作用。     

戊糖多硫酸钠通过抑制P38MAPK通路的激活干预高糖刺激下肾小管上皮细胞的增殖

目的观察戊糖多硫酸钠是否通过调控P38MAPK干预糖尿病肾病肾小管上皮细胞的损伤。方法利用不同浓度(10 mmol/L~50 mmol/L)葡萄糖刺激人近端肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cells,HK-2)48 h,应用CCK-8比色法检测肾小管上皮细胞增殖的改变。利用不同时间段(0~48 h)葡萄糖刺激细胞,用Western blot法检测P38MAPK蛋白的表达水平,分为正常对照组(CON组)、高糖组(high glucose,HG组,葡萄糖30 mmol/L)、戊糖多硫酸钠(pentosan polysuflate,PPS)组(PPS 200μg/ml)、高糖+戊糖多硫酸钠组(HG+PPS组),P38抑制剂组(SB 202190,20μmol/L),p38抑制剂+高糖组(SB+HG组)、p38抑制剂+戊糖多硫酸钠组(SB+PPS),刺激48 h后检测HK-2细胞增殖的改变,刺激6 h后检测HK-2细胞P38MAPK蛋白的表达水平。结果高糖刺激下HK-2细胞增殖在30 mmol/L的浓度最高。与HG组相比,加用戊糖多硫酸钠干预能明显抑制HK-2的增殖,差异有统计学意义(P均0.01);与正常对照组相比,高糖刺激HK-2细胞6 h后磷酸化(p)p38MAPK蛋白表达水平明显增加(P均0.01);与HG组相比,HG加戊糖多硫酸钠干预6 h后HK-2细胞p-p38MAPK蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P均0.05)。应用p38MAPK抑制剂SB202190(20μmol/L)处理细胞,与HG组相比,HG加用SB202190干预能明显抑制p-p38MAPK蛋白表达及HK-2细胞的增殖(P均0.05);与PPS组相比,PPS加SB202190干预后p-p38MAPK蛋白表达降低及HK-2细胞数目减少(P均0.05)。结论戊糖多硫酸钠可能通过抑制p38MAPK的表达,减少肾小管上皮细胞的增殖而对糖尿病肾病起保护作用。     

反义寡核苷酸对间质性肾炎肾小管上皮细胞骨调素表达的调节

目的 探讨骨调素（ＯＰＮ）反义寡核苷酸对间质性肾炎肾小管上皮细胞ＯＰＮ表达的影响。方法 以一侧输尿管梗阻（ＵＵＯ）所致的间质性肾炎为研究模型,肾动脉内注射全硫代修饰的ＯＰＮ反义寡核苷酸,免疫组织化学双染及原位杂交技术检测ＯＰＮ的表达及巨噬细胞的浸润。结果 ＯＰＮ及其ｍＲＮＡ在间质性肾炎的发展过程中表达明显升高,巨噬细胞的局部浸泣均发生在过度表达ＯＰＮ的肾小管周围;ＯＰＮ反义寡核苷酸能显著抑制肾小管     

甲状旁腺激素通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导人近曲小管上皮细胞结缔组织生长因子表达

目的 观察甲状旁腺激素（PTH）对人肾小管上皮细胞分泌结缔组织生长因子（CTGF）的影响，并探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号途径在此过程中的作用。 方法 采用实时定量PCR、Western印迹、报告基因等技术，观察PTH诱导人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞CTGF表达的情况。使用信号通路抑制剂PD98059、U0126阻断信号通路以明确PTH发挥作用的信号途径。 结果 正常HK-2细胞有基础水平的CTGF mRNA和蛋白表达，PTH刺激后其表达水平显著增加。10-10 mol/L PTH作用12 h后，荧光素酶活性较对照组明显升高[（1.8884±0.0780）比（0.9891±0.0300） A，P ＜ 0.01]。正常HK-2细胞有少量p-ERK1/2表达，PTH刺激后p-ERK1/2表达明显升高，以10-10 mol/L PTH作用30 min时效应最强；MAPK通路抑制剂PD98059、U0126作用后，CTGF mRNA、蛋白、基因启动子表达均明显下降。 结论 PTH可诱导HK-2细胞CTGF表达，其作用可能是通过MAPK信号通路来实现的。     

p38丝裂素活化蛋白激酶信号通路在单核细胞趋化蛋白1介导系膜细胞增殖及细胞外基质表达中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）介导大鼠系膜细胞（MCs）增殖及纤连蛋白（FN）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）表达中的调控作用。方法用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）评估不同浓度的MCP-1（12．5、25、50、100ng／ml）及p38MAPK阻断剂SB203580（1、5、10μmol／L）于不同时间对体外培养的大鼠MCs的增殖作用。采用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）检测细胞内FN、ColⅠmRNA的表达。用ELISA法检测上清液FN、ColⅠ蛋白含量。结果MCP-1能刺激MCs的增殖，呈剂量和时间依赖性（P〈0．05），而p38MAPK阻断剂明显抑制上述MCP-1的作用（P〈0.01）。MCP-1能使细胞FN、ColⅠ的表达上调，而p38MAPK阻断剂能抑制其上调表达的作用。结论p38MAPK信号转导通路在MCP-1介导大鼠MCs增殖及FN和ColⅠ表达中起调控作用。MCP-1在系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）的发病中起一定的作用。     

地塞米松和川芎嗪对狼疮肾炎外周血单个核细胞白细胞介素12表达的影响

目的　探讨地塞米松、川芎嗪对活动期、静止期狼疮肾炎（ Ｌ Ｎ） 外周血单个核细胞（ Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ） 白细胞介素１２（ Ｉ Ｌ１２） 表达的影响。方法　应用地塞米松（１０ － ５ ｍｏｌ／ Ｌ） ,川芎嗪（３３ μｇ／ｍｌ） 对 Ｌ Ｎ 患者 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 培养,以正常人为对照,分别采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法和半定量 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 法检测细胞上清液及细胞 Ｉ Ｌ１２ 和 Ｉ Ｌ１２ Ｐ４０ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达。结果 Ｌ Ｎ 活动期、静止期较正常对照组 Ｉ Ｌ１２ 蛋白、基因水平明显增高（ Ｐ ＜ ０ ．０１） 。地塞米松明显抑制狼疮肾炎 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ Ｉ Ｌ１２ 表达（ Ｐ ＜ ０ ．０１） ,而川芎嗪仅对活动期狼疮肾炎 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ Ｉ Ｌ１２ 表达抑制明显（ Ｐ ＜ ０ ．０５） ,两种药物对正常人对照 Ｉ Ｌ１２ 表达无明显抑制作用（ Ｐ ＞ ０ ．０５） 。结论　狼疮肾炎 Ｉ Ｌ１２ 表达水平增高,这与 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 处于异常活化状态有关;地塞米松、川芎嗪下调狼疮肾炎 Ｉ Ｌ１２ 表达,提示它们通过免疫调节直接抑制了活化的狼疮肾炎 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 表达 Ｉ Ｌ１２     

重复肾活检检测Ⅳ型狼疮肾炎的病理转型特点

目的探讨弥漫增殖型狼疮肾炎（Ⅳ型）的病理转型特点及影响因素。方法经肾活检确诊的Ⅳ型狼疮肾炎32例，平均间隔686天后行重复肾活检，观察其病理转型特点与临床表现的关系。结果病理转型为Ⅱ型者12例、Ⅲ型者3例、Ⅳ型者13例、Ⅴ型者2例、Ⅵ型者1例。临床病理分析显示病理转型为Ⅲ型及Ⅳ型者舒张压、24h尿蛋白定量、血清BUN与SCr明显升高。单因素分析显示男性、首次肾活检收缩压与舒张压均升高、尿红细胞数较多、肾脏血管病变的发生比率高、重复肾活检间隔时间长、未应用免疫抑制剂的患者多转型为Ⅲ型和Ⅳ型；多因素分析显示重复肾活检间隔时间、未用免疫抑制剂治疗与肾脏血管病变的差异具有统计学意义。结论Ⅳ型狼疮肾炎可有各种病理转型。恰当地治疗可以缓解病情，有助于改善病理类型与远期预后。     

内质网三磷酸肌醇受体在fractalkine诱发BV-2小胶质细胞p38MAPK信号通路激活中的作用

目的 探讨内质网三磷酸肌醇受体在fractalkine诱发BV-2小胶质细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路激活中的作用.方法 将BV-2小胶质细胞以1×105个/ml浓度接种于3.5 cm培养皿(5 ml/皿)、50 ml培养瓶(8 ml/瓶)、24孔培养板(1 ml/孔)或6孔培养板(2 ml/孔),采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=25)∶正常对照组(C组)、fractalkine组(F组)、CX3C趋化因子受体1抗体anti-CX3CR1+ fractalkine组(CF组)、内质网三磷酸肌醇受体拮抗剂2-APB+ fractalkine组(AF组)及p38MAPK抑制剂SB203580+ fractalkine组(SF组).除C组外,其他4组加入10 nmol/L fractalkine,CF组、AF组及SF组于加入fractalkine前1h分别加入15 μmol/L anti-CX3CR1、50 μmol/L 2-APB及10 μmol/L SB203580.测定fractalkine孵育10 min期间细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的最大值作为[Ca2+]i,于fractalkine孵育即刻、30、60、120、240 min时测定p38MAPK磷酸化水平,于fractalkine孵育24h时测定细胞培养液白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度.结果 与C组比较,F组、CF组、AF组和SF组[Ca2+]i、p38MAPK磷酸化水平、IL-1β和TNF-α浓度升高(P＜0.05);与F组比较,CF组和AF组[Ca2+]i降低,CF组、AF组及SF组p38MAPK磷酸化水平、IL-1β和TNF-α浓度降低(P＜0.05).结论 内质网三磷酸肌醇受体参与了fractalkine诱发BV-2小胶质细胞p38MAPK信号通路激活.     

高糖通过ERK1/2通路对人肾小管上皮细胞脂联素表达的影响

目的通过体外培养人肾小管上皮细胞(human proximal tubular epithelial cells,HK-2),观察高糖对HK-2脂联素(adiponectin,ADPN)表达水平的影响并探讨其可能机制。方法将培养的HK-2细胞分为4组:①低糖对照组(5.6 mmol/L葡萄糖);②PD98059(职K1/2信号传导通路的抑制剂)组(5.6 mmol/L葡萄糖+50μmol/L PD98059);③高糖组(30 mmol/L葡萄糖);④高糖+PD98059组(30 mmol/L葡萄糖+50μmol/L PD98059)。各组分别培养48 h后荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测HK-2细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activator receptor,PPAR-γ)及脂联素mRNA的表达,免疫印迹(Western blotting)法检测各组脂联素蛋白的表达水平。结果 HK-2细胞表达脂联素;PD98059组与低糖对照组相比,PPAR-γmRNA及脂联素的mRNA和蛋白表达的差异均无统计学意义(均P0.05);与低糖对照组相比,高糖组PPAR-γmRNA及脂联素mRNA和蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(均P0.05);与高糖组相比,高糖+PD98059组PPAR-γmRNA及脂联素mRNA和蛋白表达均显著升高,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论高糖可以降低HK-2细胞脂联素mRNA和蛋白的表达;高糖作用于HK-2细胞可能是通过激活ERK1/2信号传导通路降低PPAR-γ的表达,从而影响其脂联素的表达。