富血小板血浆对脂肪间充质干细胞生物学行为的影响

目的 探讨富血小板血浆(PRP)对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)在体外培养条件下增殖、分化及细胞成骨能力的影响,研究PRP的生物学功能.方法 健康志愿者静脉血经2次离心法制备PRP,氯化钙加入凝血酶激活后提取萃取液.hADSCs成骨诱导实验分4组,即空白对照组、只加成骨诱导液组、只加50% PRP 20 μl组、既有成骨诱导液又加50% PRP 20 μl组,倒置相差显微镜观察细胞增殖、分化.碱性磷酸酶(ALP)染色实验分4组,即空白对照组、不同浓度PRP(即原液、50%、25%)组,每孔各加20 μl PRP,第6天ALP活性染色.细胞增殖能力检测,成骨诱导培养后2、4、6、8、16 d采用CCK-8法检测不同浓度PRP对细胞增殖活性的影响.结果 成骨诱导实验中倒置相差显微镜见加PRP组细胞数量多于单纯诱导组和空白组,细胞形态多数为梭形;ALP活性检测见高浓度PRP组ALP阳性细胞深染,并有浓度依赖性.CCK-8测定细胞增殖活性,显示12.5%PRP组第4、6天平均OD值分别为 0.035、-0.063,高于对照组(-0.833、-1.041)(P<0.05).结论 适宜浓度的PRP可促进hADSCs的增殖,但对其成骨分化有抑制作用.过高浓度的PRP虽然同样有促进增殖的作用,但并非浓度越高越好.     

PI3K／Akt信号通路在骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化调控中的作用

目的：研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,加入PI3K抑制剂LY294002（1、10μmol/L）,应用MTT法测定细胞增殖,常规成骨诱导分化培养3或7d,采用碱性磷酸酶（ALP）染色观察成骨分化水平,化学比色法测定ALP活性,茜素红染色后观察矿化钙结节数量并定量分析,Westernblot检测磷酸化Akt蛋白表达,应用Realtime-PCR检测各组细胞BMP2、Runx2、OPN及Osterix等成骨分化标记物的基因表达水平。结果从24至72h,LY294002对hMSCs增殖均产生显著抑制,随时间推延,可见抑制增殖效果增强（P＜0.05）。ALP染色和定量测定提示10μmol/L的ALP活性最强,在不同时间显著高于对照组和1μmol/L组（P＜0.05）。成骨诱导培养3和7d,1、10μmol/L组矿化量都显著高于对照组（P＜0.05）。10μmol/L组矿化量在成骨诱导7d也显著高于1μmol/L组（P＜0.05）。Westernblot检测结果证实成骨诱导可激活Akt磷酸化蛋白表达,但LY294002可抑制该蛋白磷酸化。成骨诱导分化7d,1、10μmol/L均明显促进BMP2、Runx2、OPN、Osterix4种基因mRNA表达（均P＜0.05）。结论PI3K/Akt信号通路参与hMSCs增殖和分化过程。成骨分化伴随下游Akt蛋白表达。PI3K抑制剂可抑制hMSCs增殖,但同时促进其向成骨分化和矿化。     

TGF-β1对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)在体外对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)增殖和分化的影响.方法原代培养HPDLFs,用MTT法观察细胞增殖情况,考马斯亮蓝法和流式细胞仪技术检测细胞蛋白总含量和细胞周期变化,酶动力学法和RT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)活性和ALP mRNA表达变化.结果 2～10μg/L的TGF-β1可促进HPDLFs增殖,呈剂量、时间依赖性(P<0.05);同样剂量的TGF-β1作用48h,细胞蛋白总含量显著升高,且细胞ALP活性增强(P<0.05);10μg/L的TGF-β1作用48h,G1期细胞降低(P<0.05),S期细胞和细胞增殖指数(PI)显著增高(P<0.05);不同浓度TGFβ1作用48h,细胞ALP mRNA表达上调(P<0.05).结论 TGF-β1体外具有促进HPDLFs增殖和分化的作用,可能与TGF-β1促进细胞DNA、蛋白质合成和ALP mRNA的表达及ALP酶活性增强有关.     

脱氢表雄酮对离体大鼠成骨细胞的影响

目的探讨脱氢表雄酮(DHEA)对离体大鼠成骨细胞的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,取传一代细胞,分别给予10-5、10-7、10-9mmol/L DHEA培养72h,以10-8mmol/L雌二醇(E2)为阳性对照,另设空白对照组。碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞,MTT法检测成骨细胞的增殖能力,PNPP法测定ALP活性。行矿化结节染色,低倍镜下测量矿化结节面积并计算面积比,观察DHEA对矿化能力的影响。结果和空白对照组相比,不同浓度DHEA组成骨细胞增殖能力均有上升,其中以10-7mmol/L DHEA组最显著(P<0.01),其作用和E2相似(P>0.05);不同浓度DHEA组ALP的活性均升高,亦以10-7mmol/L DHEA组最显著(P<0.01),10-7、10-9mmol/L DHEA的作用和E2相似(P>0.05);10-9mmol/L DHEA组单位细胞数的ALP活性高于空白对照组(P>0.05)。不同浓度DHEA组矿化面积及矿化面积比均有显著增加(P<0.01),其作用和E2相似。结论DHEA在体外促进大鼠成骨细胞生长和增殖,提高ALP活性,并促进骨矿化物质在骨内沉积。     

低浓度补肾中药血清联合骨形态发生蛋白-2对人脐血间充质干细胞的生物学作用

目的观察低浓度补肾中药血清联合骨形态发生蛋白(BMP)-2对人脐血间充质干细胞(MSCs)体外增殖、成骨分化的生物学作用。方法取正常孕妇脐静脉血培养第3代人脐血MSCs,制备补肾中药大鼠血清,按诱导分化培养基不同,随机分为空白对照组、中药血清组、BMP-2组、中药血清+BMP-2组(联合组)。以MTT比色法检测脐血MSCs增殖活性,观察碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节及Ⅰ型胶原染色以检测细胞成骨分化能力。结果与空白对照组比较,联合组、BMP-2组在诱导第3、5天细胞增殖活性明显提高,在诱导第3、6、9、12天ALP活性明显提高(P0.05)。与BMP-2组比较,中药血清+BMP-2组在诱导第5天增殖活性明显提高,在诱导第6天ALP活性明显提高(P0.05)。成骨诱导第14天,除空白对照组外各组von Kossa染色均可见细胞间散在黑色颗粒,尤以联合组为明显;而Ⅰ型胶原纤维表达,BMP-2组、联合组与空白对照组相比均明显增强。结论低浓度补肾中药血清联合BMP-2后能诱导人脐血MSCs增殖及定向成骨分化,是复合型诱导因子的一种理想选择。     

鼠成骨细胞诱导兔BMSCs成骨的实验观察

目的观察乳鼠成骨细胞诱导乳兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）的成骨情况。方法取SD大鼠乳鼠颅盖骨,采用组织块培养法培养成骨细胞;取乳兔长骨,采用全骨髓培养法培养BMSCs;用Transwell双层细胞培养板共育,实验组于培养上室接种成骨细胞,对照组培养上室不接种细胞,两组培养下室均接种BMSCs。观察BMSCs形态变化,用酶标仪检测诱导分化后BMSCs的ALP活性,RT—PCR检测BMSCs中的骨钙素、骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、Ⅰ型胶原基因。结果共培养后实验组BMSCs形态逐渐向成骨样细胞转化,对照组无明显变化;实验组BMSCs中ALP活性高于对照组,实验组的BMSCs的骨钙素、BMP-2、Ⅰ型胶原基因有所表达,对照组无表达。结论乳鼠成骨能够诱导乳兔BMSCs向成骨细胞分化。     

杜仲水/醇提取物对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 观察杜仲水提取物和醇提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化的影响.方法 SD大鼠骨髓细胞体外培养并传代3次后进行成骨化诱导,诱导物分为水/醇提取物的102、103、104和105 4个稀释度.诱导6 d后,测定细胞增殖活力和细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,14 d后水溶性茜素红S染色法钙化测定结节形成.结果 杜仲水/醇提取物对MSCs的增殖活力均无明显影响,对ALP活力均有上调作用.水/醇提取物在103到105稀释度下,对钙化结节的形成具有显著刺激作用,醇提取物对ALP活性和钙化结节形成的促进作用大于水提取物.结论 杜仲水/醇提取物能促进骨髓MSCs成骨分化,醇提取物的作用大于水提取物.     

低密度培养兔骨髓基质干细胞的生物学特性

目的探讨低密度体外培养条件下兔骨髓基质干细胞的成骨能力及对Bio-oss胶原复合的影响。方法利用全血贴壁法培养兔骨髓基质干细胞,取第2代细胞进行不同密度的培养,观察细胞克隆的形成及形态变化。细胞消化后进行爬片,测定Stro-1+、CD4+4细胞表面抗原,以流式细胞仪检测正常培养细胞CD3+4、CD4+4表达变化并与非低密度培养组比较。低密度培养细胞成骨诱导后,进行钙化结节诱导,同时进行碱性磷酸酶(ALP)定量测定。把诱导后的细胞与Bio-oss胶原复合,观察与载体材料的生物相容性并进行电镜扫描观察。结果低密度培养的细胞可形成克隆,细胞爬片后CD4+4、Stro-1+免疫荧光测定显示阳性,钙化结节在成骨诱导14 d后形成。低密度培养的细胞CD3+4阳性率为43.83%,而正常培养的细胞CD3+4阳性率为4.20%,二者间有统计学差异(P<0.05)。诱导后细胞ALP定量测定为(1.666±0.015)U/(g.prot),而非诱导细胞为(0.450±0.023)U/(g.prot),二者间有统计学差异(P<0.05)。诱导后的细胞与Bio-oss胶原复合较好,电镜扫描观察细胞表面有大量"伪足"形成。结论低密度培养的骨髓基质干细胞可表达较强干细胞特性和成骨能力,与Bio-oss胶原复合后生长良好。     

地塞米松对体外人骨髓基质细胞增殖及成骨分化的影响

目的观察地塞米松对骨髓基质细胞(MSCs)增殖及成骨分化的影响。方法以离心法分离培养MSCs,分别以10~(-9)、10~(-8)和10~(-7) mol/L地塞米松对细胞进行干预,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测细胞增殖率；测细胞质碱性磷酸酶(ALP)含量；利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术在转录水平检测成骨细胞标记物骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达。结果地塞米松干预8 d后,各干预组的吸光度值均低于对照组,10~(-8)和10~(-7) mol/L地塞米松组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0．05)；地塞米松干预12 d后,各干预组细胞质ALP含量呈浓度依赖性增加,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0．05)；地塞米松干预12 d后,各干预组均有OPN mRNA表达,且随浓度增加表达增强。结论地塞米松对体外MSCs增殖有抑制作用,但对MSCs成骨分化有促进作用。     

阿霉素体外抑制成骨分化和促进破骨形成的机制研究

目的:研究阿霉素在体外对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化和骨髓单核细胞(BMMs)向破骨细胞分化的影响。方法:将大鼠BMSCs在成骨培养基中用不同浓度的阿霉素处理,以CCK-8法检测其对BMSCs活性的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色以及ALP活性的测定检测阿霉素对成骨细胞分化的影响。实时...     

Preptin对人成骨细胞增殖和分化的影响及机制研究

目的 探讨preptin对人成骨细胞增殖和分化的影响及其信号途径.方法 体外培养人成骨细胞,用10-10、10-9、10-8和10-7mol/L preptin干预24 h,以[3H]脱氧胸腺嘧啶苷掺入法分析细胞增殖,用分光光度计法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性判断细胞分化程度.Western印迹法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平.并在preptin干预前以ERK抑制剂(PD98059)、p38 MAPK抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125)预处理,观察preptin诱导人成骨细胞增殖和分化的途径.结果 Preptin剂量依赖地增加人成骨细胞的增殖和ALP活性,10-9mol/L浓度时达最大效应(均P<0.01).Preptin刺激人成骨细胞ERK的磷酸化,对p38MAPK和JNK无作用.PD98059阻断preptin刺激的成骨细胞增殖及ALP活性增加(均P<0.05),而SP600125和SB203580无此效应.结论 Preptin通过ERK途径促进人成骨细胞的增殖和分化.     

BMSCs的分离培养、纯化与鉴定

目的 建立一种持续、稳定的可多向分化的骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离培养体系.方法 运用密度梯度离心法从1月龄新西兰兔骨髓中分离培养BMSCs,利用相差显微镜观察其形态及生长情况,扫描电镜观察其细胞结构,运用流式细胞术分析分离细胞群所处细胞周期和细胞活力,用MTT比色法绘制细胞生长曲线,并用特定诱导液将分离的BMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞定向诱导分化,利用ALP和油红O进行染色鉴定.结果 所分离的BMSCs细胞在形态学观察与生长动力学上均符合BMSCs特征,分离培养的BMSCs细胞在第3天进入对数生长期,第10天进入平台期;在成骨、成脂肪的诱导培养条件下,分别出现成骨、成脂肪表型特征,可进一步定向分化,结论所收获的细胞具有BMSCs的特异性.     

骨髓基质细胞成脂分化及辛伐他汀对其影响的实验研究

目的　观察骨髓基质细胞的成脂分化潜能 ,研究辛伐他汀对骨髓基质细胞成脂分化的影响 ,探讨辛伐他汀刺激成骨的作用机制。　方法　体外培养成年小鼠骨髓基质细胞 ,脂肪细胞分化诱导剂 (HI)作用 6d ,检测细胞碱性磷酸酶 (ALP)比活性的变化。HI与不同浓度的辛伐他汀共同作用 72h ,RT PCR检测脂蛋白脂酶 (LPL)mRNA表达水平的变化 ;HI与不同浓度的辛伐他汀或 10 0μg/L重组人骨形态发生蛋白 2 (rhBMP 2 )共同作用 12d后 ,油红O染色、荧光活化的细胞分选(FACS)检测脂肪细胞分化比例。　结果　HI作用 6d后 ,细胞ALP比活性降低 ,约 4 0 3%。分别为( 383 6 1± 134 30 )U·g 1·L 1和 ( 891 5 1± 2 82 5 2 )U·g 1·L 1,P <0 0 1。在含HI的培养液中 ,辛伐他汀作用 72h后 ,LPLmRNA表达水平降低 ;辛伐他汀作用 12d后 ,脂肪细胞的分化比例显著减低 (P<0 0 1)。　结论　骨髓基质细胞可以分化为脂肪细胞 ,并伴随成骨活性减低 ;辛伐他汀抑制骨髓基质细胞的成脂分化 ,辛伐他汀治疗骨质疏松的作用机制可能与此有关。     

氢气对糖尿病介导的骨质疏松症的干预作用及其机制研究

目的 探索氢气对糖尿病介导的大鼠骨质疏松症的治疗作用及其对炎症反应的影响.方法 本研究分为细胞实验和动物实验.细胞实验:分离骨髓间充质干细胞(BMSC),用流式细胞仪检测CD44和CD45,并分为对照组,成骨诱导组,成骨诱导+10％氢气组,成骨诱导+15％氢气组,成骨诱导+20％氢气组.采用茜素红和碱性磷酸酶ALP染色...     

整合素α2在老龄骨质疏松BMSC成骨分化的调控机制

目的分析整合素α2在老龄骨质疏松骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的调控机制。方法检测慢病毒转染BMSCs效率、骨质疏松患者BMSCs中整合素α2转染后高表达,分析骨质疏松患者BMSCs成骨、增殖受到整合素α2高表达的影响及作用机制。结果 BMSCs对整合素α2进行转染3 d后,荧光显微镜下可见有GFP表达,感染复数(MOI)=10、20、50、100时视野中分别有零星荧光、少许荧光、显著较多的荧光、最多的荧光。转染后BMSC整合素α2表达显著高于野生型(P<0.05)。整合素α2蛋白表达在慢病毒转染后显著提升,免疫荧光强度显著增强。培养4 d后,细胞向增殖期进入,具有较大的生长曲线斜度,说明细胞增殖速度在转染后明显加快,骨质疏松患者BMSC整合素α高表达能够为细胞增殖提供良好的前提条件。对比转染后野生型Osterix、RUNX2表达显著提升。对整合素α2进行转染能够促进骨质疏松BMSC矿化能力的增强。骨质疏松患者BMSC整合素α高表达能够为成骨分化提供良好的前提条件。成骨诱导后30 min,转染后细胞外信号调节激酶(ERK)快速活化,1 h时显著低于未转染组(P<0.05),但是二者的蛋白激酶B(AKT)/JNK/P38之间的差异不显著(P>0.05)。整合素将ERK1/2通路活化,从而为细胞增殖、分化提供了良好的前提条件。PD98059能够抑制活化ERK、转染后RUNX2,进而抑制茜素红染色所体现的成骨分化、碱性磷酸酶(ALP)活性。结论整合素α2/ERK/Runx2信号通路参与了老龄骨质疏松发病,为老龄骨质疏松的预防与治疗提供了新的分子机制。     

Wnt/β-catenin基因对骨髓瘤患者间充质干细胞成骨潜能的影响

目的:探讨Wnt/β-catenin基因和多发性骨髓瘤骨病的关系。方法:分离培养多发性骨髓瘤患者和正常人的骨髓间充质干细胞(MSCs),体外诱导分化成骨细胞,茜素红实验检测矿化物沉积、荧光定量RT-PCR方法检成骨指标(OPN、OC、ALP、Cbfal)和Wnt/β-catenin mRNA表达,分析MSCs细胞成骨能力变化及两组间Wnt/β-catenin mRNA表达差异。结果:骨髓MSCs体外成骨诱导后,茜素红染色阳性,呈现明显红色钙化结节;MSCs体外诱导成骨细胞,试验组与对照组比较,成骨指标OPN、OC、ALP、Cbfαl mRNA表达降低(P<0.05);骨髓MSCs体外成骨诱导后β-catenin mRNA表达降低(P<0.05)。结论:骨髓MSCs体外可成功诱导分化为成骨细胞;多发性骨髓瘤患者MSCs向成骨细胞分化潜能比正常人降低,Wnt/β-catenin可作为多发性骨髓瘤骨病潜在治疗靶点。     

复方接骨中药介导MAPK信号通路促进骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化

目的探讨复方接骨中药介导MAPK信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的促进作用。方法取健康雄性SD大鼠60只,随机平均分为实验组和对照组,实验组灌喂复方接骨中药煎剂,对照组灌喂等体积自来水,处理10 d后提取各组大鼠血清。分离BMSCs,利用体积分数为0.1的含药血清及非含药血清单独处理BMSCs 24、48、72 h及联合10μmol/L p38MAPK抑制剂SB203580处理BMSCs 72 h后,MTT检测细胞增殖;RT-PCR及Western印迹检测两组血清单独处理及联合SB203580处理BMSCs 72 h后成骨细胞分化标记基因ALP、BGP、BMP-2的表达;Western印迹检测两组血清处理BMSCs 72 h p38蛋白表达及磷酸化。结果含药血清处理24、48 h,细胞OD值与非含药血清组及对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),第72小时含药血清组细胞OD值显著高于对照组及非含药血清组(P<0.01),非含药血清组细胞OD值与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。两组血清处理72 h后,含药血清处理组ALP、BGP、BMP-2表达及p38磷酸化明显高于对照组及非含药血清组(P<0.01),非含药血清组ALP、BGP、BMP-2表达及p38磷酸化与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),p38总蛋白表达三组差异无统计学意义(P>0.05)。SB203580联合两组血清处理72 h后,非含药血清+SB203580组与SB203580组细胞增殖及ALP、BGP、BMP-2表达差异无统计学意义(P>0.05),明显低于对照组(P<0.01),含药血清+SB203580组细胞增殖及ALP、BGP、BMP-2表达显著高于SB203580组(P<0.01),与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方接骨中药可能通过促进MAPK信号通路促进BMSCs的增殖及成骨分化。     

慢性间歇性低压低氧抑制内质网应激改善大鼠血管钙化

目的证实慢性间歇性低压低氧(CIHH)通过抑制内质网应激(ERS)改善大鼠血管钙化。方法使用维生素D3肌注和尼古丁灌胃(VDN)制备的大鼠在体血管钙化模型,检测主动脉组织Ca2+含量和碱性磷酸酶(ALP)活性以及血浆ALP活性,Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果与对照组大鼠相比,VDN大鼠主动脉组织Ca2+含量和ALP活性以及血浆ALP活性均显著升高(P0.05),同时主动脉组织平滑肌细胞收缩表型标志蛋白calponin和SM22α的表达水平显著下调(P0.05),成骨样细胞表型标志蛋白骨形态发生蛋白2(BMP2)和RUNX2的表达水平显著上调(P0.05)。而CIHH能够显著改善VDN大鼠的上述改变。此外,VDN大鼠主动脉组织ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOP(C/EBP homologous protein)和active-caspase12的表达水平较对照组大鼠显著升高(P0.05),而CIHH能够显著抑制上述蛋白表达水平的升高(P0.05)。结论 CIHH可能通过抑制ERS,发挥改善血管钙化和平滑肌细胞表型转化的作用。     

巴戟天含药血清对成骨-破骨细胞共育体系原癌基因、核心结合因子1mRNA表达的影响

目的观察不同浓度巴戟天含药血清对体外培养成骨-破骨细胞共育体系中原癌基因(C-FOS)、核心结合因子(Cbfa)1 mRNA表达的影响。方法提取24 h内新生SD乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,采用5周龄SD大鼠双侧股骨、胫骨的骨髓基质细胞,加入集落细胞刺激因子(M-CSF)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养破骨细胞。采用碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色、电镜扫描等鉴定破骨细胞,体外建立成骨-破骨细胞共育体系,设置低、中、高三种浓度巴戟天含药血清组和不含药血清组,干预3 d后提取各组总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定各组C-FOS、Cbfa1 mRNA表达量。结果不同浓度巴戟天含药大鼠血清对成骨-破骨细胞共育体系C-FOS有抑制作用,对Cbfa1 mRNA的表达有促进作用。高浓度含药血清组两者的表达差异显著(P<0.05,P<0.000 1)。结论巴戟天含药血清可抑制成骨-破骨细胞共育体系C-FOS的表达,促进Cbfa1 mRNA的表达,从而达到降低破骨细胞分化成熟及骨吸收活性,促进骨形成。     

杜仲叶提取物对人牙周膜干细胞体外增殖及成骨分化的影响

目的研究杜仲叶提取物对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)体外增殖与成骨分化的影响。方法原代培养hPDLSCs,分别将含10~(-4),10~(-5),10~(-6) g/ml杜仲叶提取物的传统矿化诱导培养基与hPDLSCs作用作为实验组,以DMEM完全培养基为空白对照组,以传统矿化诱导培养基为阳性对照组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞的增殖活性、检测碱性磷酸酶(ALP)活性、RT-PCR法检测各组细胞成骨相关基因(Runx2,OPN,OCN)的表达。结果 MTT结果显示,5组细胞分别培养1 d后,OD值均较小,组间无显著差异(P0.05)。各组细胞OD值在3～7 d持续增加,实验组显著高于空白对照组和阳性对照组(P0.05)。浓度为10~(-4),10~(-5),10~(-6) g/ml的杜仲叶提取物均可促进hPDLSCs的增殖,且各实验组OD值随着杜仲叶提取物质量浓度的增加而增加,存在剂量依赖效应。3个实验组和阳性对照组ALP活性均明显增高,且各实验组与阳性对照组差异显著(P0.05)。空白对照组的ALP活性变化不显著。ALP活性变化具有时间依赖性,实验组和阳性对照组从第5天开始显著升高,第7天达到最高值。RT-PCR结果显示,各实验组和阳性对照组的Runx2,OPN,OCN表达均上调,且3个基因的表达量在各实验组均明显高于阳性对照组、空白对照组(P0.05,P0.01)。结论质量浓度为10~(-4),10~(-5),10~(-6) g/ml的杜仲叶提取物可促进hPDLSCs增殖和成骨分化,其中10~(-4) g/ml浓度作用最显著。