三种近交系小、鼠脂肪细胞对胰岛素敏感差异性的分析

为了从细胞水平探讨近交系小鼠对胰岛素(Ins)的敏感性,测试了3种近交系小鼠脂肪细胞在Ins刺激下的葡萄糖转运和Ins抑制异丙肾上腺素介导的脂肪细胞分解.结果显示A/J小鼠脂肪细胞对葡萄糖的转运显著高于Balb/cJ和129/J小鼠(分别为P<0.05和P<0.01),而Balb/cJ又显著高于129/J(P<0.05);Ins对A/J小鼠脂肪细胞脂解的抑制作用显著高于Balb/cJ和129/J(P<0.01).表明A/J小鼠脂肪细胞对Ins敏感性高,Balb/cJ次之,129/J较低.这对研究不同种系的近交系小鼠的生理病理特征及是否易于发生与胰岛素抵抗有关的疾病将提供一定的依据.     

高浓度葡萄糖诱导脂肪细胞产生胰岛素抵抗

目的 观察不同浓度的葡萄糖对脂肪细胞葡萄糖转运的影响,探讨建立胰岛素抵抗细胞模型的方法。方法 首先诱导3T3-L1和SW872两株前脂肪细胞分化,然后分别用25.50mmol/L的葡萄糖刺激分化成熟的脂肪细胞．采用2-Deoxy[3^H]-D-glucose掺入法测定脂肪细胞葡萄糖转运,同时测定相应的细胞总蛋白,以每毫克蛋白的衰变数来反映葡萄糖转运的情况。结果 ①胰岛素明显刺激3T3-L1和SW872脂肪细胞的葡萄糖转运．与基础葡萄糖转运相比．差异有显著性意义（P＜0.01）.25、50mmol/L葡萄糖均可影响3TS-L1和SW872脂肪细胞的葡萄糖转运，与基础葡萄糖转运相比，差异有显著性意义（（P＜0.01））②25、50mmol/L。葡萄糖均可影响3T3-L1脂肪细胞的基础葡萄糖转运（P〈0．05）．并减弱胰岛素诱导的葡萄糖转运（P〈0．01）．但高糖组之间差异无显著性意义，③25、50mmol/L葡葡糖对SW872脂肪细胞的基础葡萄糖转运无明显影响（P〉0．05）．但能减弱胰岛素诱导的葡萄糖转运（P＜ 0．01）。结论 高糖可以诱导3T3-L1和SW872两株脂肪细胞产生胰岛素抵抗．为深入研究胰岛素抵抗的发生、发展提供了新的细胞模型。     

3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型建立的3种方法对葡萄糖转运时效关系的影响

目的:对比3种不同方法(地塞米松、游离脂肪酸、高糖高胰岛素)诱导的胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖转运时效关系及对葡萄糖转运子4(Glut4)蛋白表达的影响.方法:采用3种不同方法诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,分别检测各组细胞12,24,36,48及60h时的葡萄糖转运率及各组细胞60 h后Glut4蛋白的表达.结果:在24 h内,造模组细胞的葡萄糖转运率与正常对照组相比均明显降低(P＜0.01);在24 h以后,游离脂肪酸组葡萄糖转运率与正常对照组相比无明显统计学差异(P＞0.05),地塞米松组葡萄糖转运率相比正常对照组明显降低(P＜0.05),而高糖高胰岛素组葡萄糖转运率较地塞米松组明显降低(P＜0.01);地塞米松组及游离脂肪酸组的Glut4蛋白表达水平较正常对照组明显降低(P＜0.01);相对于地塞米松组及游离脂肪酸组,高糖高胰岛素组的Glut4蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论:高糖高胰岛素能够诱导3T3-L1脂肪细胞产生更强的胰岛素抵抗,这种抗性的产生可能是因为抑制了Glut4蛋白的表达获得的.     

JNK对胰岛素和葡萄糖刺激下脂肪细胞功能的影响

目的:探讨JNK对胰岛素和葡萄糖刺激下脂肪细胞表达脂联素(adiponectin)和抵抗素(resistin)的影响。方法:用不同浓度葡萄糖(5mmol/L,25mmol/L)和胰岛素(0.1nmol/L,100nmol/L)刺激分化成熟的脂肪细胞,各浓度均设立JNK抑制剂组(SP600125),采用荧光定量PCR检测adiponectin和resistin的mRNA表达。结果:高浓度胰岛素和葡萄糖均能使adiponectinmRNA表达降低(P<0.01),resistin表达升高(P<0.01),对应的抑制剂组adiponectin表达较高浓度组增加(P<0.05),resistin表达降低(P<0.05);两个低浓度组与对应抑制剂组及对照组相比均无明显差异。结论:高浓度葡萄糖和胰岛素影响了脂肪细胞脂联素和抵抗素的表达,JNK在其中起到了介导作用。     

Ghrelin对脂肪细胞糖代谢及胰岛素敏感性的影响

目的 观察Ghrelin对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖代谢和胰岛素敏感性的影响,并探讨其机制.方法 体外培养3T3-L1前脂肪细胞,诱导分化为成熟的脂肪细胞,然后加入不同浓度Ghrelin作用24 h.采用2-脱氧-(3)~H-D葡萄糖摄入法,测定葡萄糖转运率;RT-PCR检测不同浓度Ghrelin作用24 h后CAPmRNA的表达.结果 10~(-9)mol/L Ghrelin作用24h,对基础状态及胰岛素刺激下,SW872脂肪细胞葡萄糖摄取率无影响:10~(-8)-10~(-6)mol/L Ghrelin作用24h使基础状态及胰岛素刺激下SW872脂肪细胞葡萄糖摄取率分别增加30%vs 28.6%、42.3% 38.8%、48% vs 48.4%.10~(-9)mol/LGhrelin作用24 h,对脂肪细胞CAP mRNA的表达无影响;随着Ghrelin浓度的增加,可促进CAPmRNA的表达.结论 Ghrelin通过cbl/CAP信号途径促进3T3-L1脂肪细胞葡萄糖的转运,从而增加脂肪细胞胰岛素的敏感性.     

氯氮平对大鼠脂肪细胞GLUT4的影响

目的:了解氯氮平对大鼠血糖(FPG)、血浆胰岛素(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)及脂肪细胞上葡萄糖转运蛋白(GLUT)4表达的影响。方法:12只雄性SD大鼠随机均分成氯氮平组和空白对照组,分别将氯氮平片按20 mg/(kg.d)剂量溶于生理盐水中给大鼠灌胃,空白对照组直接蒸馏水灌胃,共28 d。在第1,14,28天分别剪尾采血,测FPG、FINS,计算ISI,用Western blot法分别测大鼠脂肪细胞内外膜上GLUT4的含量。结果:第14天时氯氮平组大鼠的FPG水平高于空白对照组(P<0.05),ISI水平略低于空白对照组,但差异无显著性(P>0.05)。灌胃28 d时,氯氮平组的FPG、FINS均高于空白对照组差异有显著性(P<0.05),ISI水平低于对照组且差异有显著性(P<0.05)。氯氮平组大鼠脂肪细胞内外膜上的GLUT4含量均较空白对照组下降,但差异不明显。结论:长期服用氯氮平的大鼠体内产生胰岛素抵抗,外周组织GLUT4的表达降低,氯氮平可能既影响胰岛素的分泌功能又同时减少了外周组织对葡萄糖的吸收利用从而影响了糖代谢的正常进行。     

脂肪细胞因子和胰岛素抵抗的关系

人类为维持生命活动需要经常从外界摄取能量 ,而脂肪组织作为能量储存场所 ,发挥重要的作用。肥胖是胰岛素抵抗和 2型糖尿病的一个主要的危险因素 ,近年来发现脂肪组织不仅有储藏能量的作用 ,还能分泌各种生理活性物质影响胰岛素的敏感性、影响机体体内的平衡 ,包括有 1型血纤维蛋白溶酶原激活物抑制因子 (ＰＡＩ 1)、瘦素 (ｌｅｐｔｉｎ)、肿瘤坏死因子 α(ＴＮＦ α)、细胞间黏附因子 1(ｓＩＣＡＭ 1)、抵抗素 (ｒｅｓｉｓｔｉｎ)、游离脂肪酸 (ＦＦＡ)等 ,这些物质统称为脂肪细胞因子 (ａｄｉｐｏｃｙ ｔｏｋｉｎｅ)。 2型糖尿病患者的…     

地塞米松对脂肪细胞糖转运系统的影响

目的 :探讨糖皮质激素对原代培养老鼠脂肪细胞的糖转运系统及脂解的影响。方法 :分离的老鼠脂肪细胞在 5mM浓度糖或加 0 .3μM地塞米松孵育 2 4h ,然后测定胰岛素受体结合率、脂解、糖的转运率以及细胞内和细胞膜的葡萄糖转运子 4 (glut4 )的蛋白表达。结果 :地塞米松抑制了这些细胞的胰岛素与靶细胞表面受体结合率、脂解、糖的转运率以及细胞膜的glut4蛋白表达 ,对细胞内 glut4量无影响。结论 :糖皮质激素可以诱导胰岛素抵抗。其作用机制可能与影响了这些细胞的糖转运系统有关。     

Visfatin对SW872脂肪细胞胰岛素信号分子蛋白表达的影响

目的:观察visfatin对胰岛素抵抗状态下的SW872成熟脂肪细胞胰岛素信号分子胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达的影响。方法:体外培养SW872前脂肪细胞,诱导细胞分化成熟,建立胰岛素抵抗模型,用含有100nmol/L visfatin的无血清培养液孵育1h后收获细胞,采用Western印迹法检测visfatin刺激前后信号分子IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达水平。结果:在正常状态下(正常组内比较),visfatin促进脂肪细胞IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达,分别增加了51.65%(P<0.01)、44.74%(P<0.01)和61.38%(P<0.01)。在胰岛素抵抗状态下,visfatin刺激组的IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达水平,分别比基础状态组增加了26.98%(P<0.05)、35.59%(P<0.05)、27.61%(P<0.01)。结论:在胰岛素抵抗状态下,visfatin通过调节脂肪细胞胰岛素信号分子IRS-1、IRS-2和PI3K蛋白表达而发挥促进葡萄糖转运、改善胰岛素抵抗的生物学作用。     

脂肪细胞因子与胰岛素抵抗及慢性心力衰竭的关系

近年来研究发现,胰岛素抵抗作为许多临床疾病联系的纽带和基础,在诸多心血管疾病乃至心力衰竭的发生、发展过程中起着相当重要的作用。而脂肪组织分泌的脂肪细胞因子在胰岛素抵抗及心血管疾病的病理生理过程中扮演重要角色。随着对脂肪细胞因子了解的深入,逐步认识到其可能是胰岛素抵抗和心血管疾病的中间环节。本文重点阐述脂肪细胞因子与胰岛素抵抗及慢性心力衰竭的关系,并希望在多种心血管疾病和心力衰竭的临床治疗过程中起到一些指导作用。     

附子多糖对胰岛素抵抗脂肪细胞模型GLUT4蛋白表达和转位的影响

目的研究附子多糖对胰岛素抵抗脂肪细胞模型葡萄糖转运4(GLUT4)蛋白表达和转位的影响。方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,用高糖和高胰岛素联合诱导培养脂肪细胞,造成胰岛素抵抗脂肪细胞模型,实验设对照(CON)组、模型(MOD)组、附子多糖(FPS)组、罗格列酮(ROS)组,干预培养24 h,收集细胞,提取全细胞蛋白及细胞外膜蛋白,SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳后,通过Western blot方法检测各组全细胞蛋白及细胞外膜蛋白中GLUT4的含量。结果各组对GLUT4表达差异无统计学意义(P0.05)。模型组转位显著降低,仅为正常脂肪细胞的30.4%,以模型组转位量为基值,各组分别与之相比计算GLUT4蛋白的相对定量,附子多糖组、罗格列酮组分别使GLUT4蛋白转位增加164%、301%,与模型组比较差异有统计学意义(P0.01),附子多糖组显著低于罗格列酮组(P0.01)。结论附子多糖对胰岛素抵抗脂肪细胞模型全细胞GLUT4蛋白表达无影响,但可促进其转位,其促进胰岛素抵抗脂肪细胞对葡萄糖的摄取可能与这一机理有关。     

麦冬多糖对脂肪细胞胰岛素敏感性的作用机制

【目的】研究麦冬多糖对3T3-L1细胞诱导分化的脂肪细胞胰岛素敏感性作用机制的研究。【方法】将实验分为5组：模型对照组、阳性对照罗格列酮组、麦冬多糖低、中、高剂量组。体外诱导分化3T3-L1细胞为脂肪细胞,ELISA法检测各实验组3T3-L1脂肪细胞上清液中肿瘤坏死因子-α的表达量;RT-PCR法检测各实验组3T3-L1脂肪细胞瘦素、脂联素、抵抗素mRNA的表达水平。【结果】与模型对照组相比：其他实验组肿瘤坏死因子-α表达量降低,且3T3-L1脂肪细胞肿瘤坏死因子-α表达量随着麦冬多糖剂量的增加而降低;瘦素、脂联素mRNA表达升高,且3T3-L1脂肪细胞瘦素、脂联素mRNA表达随着麦冬多糖剂量的增加而增高;抵抗素mRNA的表达量随着麦冬多糖剂量的增加而降低。【结论】麦冬多糖降糖作用的部分机制可能与促进脂肪细胞高表达瘦素、脂联素而抑制TNF-α、抵抗素的表达而增加胰岛素的敏感性有关。     

原代大鼠脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的:建立一种大鼠脂肪细胞抵抗模型原代培养方法,为科研实验提供原代胰岛素抵抗大鼠脂肪细胞。方法:取4周龄大鼠附睾的脂肪组织,原代培养前脂肪细胞经分化后,采用地塞米松造模方法,建立胰岛素抵抗的原代大鼠脂肪细胞模型。结果:原代前脂肪细胞培养后,经分化成为成熟的脂肪细胞,脂肪细胞内脂滴聚集,用油红O染色后,确定分化成为脂肪细胞。用地塞米松造模,用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量,计算各组细胞的葡萄糖消耗量,确定胰岛素抵抗脂肪细胞模型。结论:用4周龄大鼠附睾组织能培养出大鼠脂肪细胞,并用1 μmol/L浓度的地塞米松培养48 h造模法建立了胰岛素抵抗的脂肪细胞模型。     

氯沙坦改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的机制研究

目的探讨氯沙坦改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的主要作用机制。方法以地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞,建立胰岛素抵抗细胞模型,根据细胞模型添加干预药物的不同分为模型对照组（不添加任何药物）、氯沙坦组（分别给予1、10、100μmol/L氯沙坦干预48 h）和wortmannin＋氯沙坦组,wortmannin＋氯沙坦组以100 nmol/L的磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）特异性抑制剂wortmannin预处理20 min后再加入100μmol/L氯沙坦干预48 h。观察脂肪细胞体积的变化,采用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养上清液中葡萄糖的浓度,采用Western blotting分析脂肪细胞中PI3K和胰岛素受体底物1（IRS-1）的表达以及IRS-1丝氨酸磷酸化水平。结果与模型对照组比较,氯沙坦组脂肪细胞体积明显缩小（P〈0.01）,细胞培养上清液中葡萄糖的浓度显著降低（P〈0.01）,PI3K和IRS-1表达明显上升（P〈0.01）,IRS-1丝氨酸磷酸化水平显著下降（P〈0.01）但可被wortmannin阻断。结论氯沙坦可使3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的细胞体积缩小,并增加细胞对葡萄糖的利用,其机制可能与PI3K信号通路有关。     

微卫星技术对近交系小鼠遗传质量的分析

目的对14个品系近交系小鼠24个微卫星座位进行遗传分析,以期用微卫星位点分析法区分不同近交系小鼠。方法通过Mouse Genome Informatics数据库确定合适的微卫星位点和引物,对近交系小鼠基因组DNA进行扩增,分析不同品系小鼠在所选微卫星座位的基因片段,与数据库小鼠品系数据进行比较,并对14个品系近交小鼠进行了DNA多态性分析。结果24个微卫星位点在不同品系的小鼠之间具有多态性,不同品系小鼠之间的遗传距离为0.045~1.526;在不同的亚系之间也有具有多态性。结论微卫星标记方法能区分不同的近交小鼠品系、近交小鼠亚系,为小鼠遗传质量的检测提供了一个快捷简便的方法。     

苏子油对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌胰岛素敏感性相关基因表达的影响

目的 探究富含n-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)的苏子油高脂饮食对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性及其相关基因表达的影响。方法 将胰岛素抵抗模型大鼠随机分为2组:高脂组(high fat group, HF)和苏子油组(perilla oil group, PO),PO为苏子油替代HF中猪油比例的20%,4周后测定大鼠胰岛素敏感性;气相色谱法检测苏子油及大鼠血清α-亚麻酸(α-linolenic acid, ALA)含量;Western blot方法检测骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)和胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)蛋白表达;real time PCR方法检测骨骼肌Glut4、Irs-1 mRNA表达。结果 苏子油干预4周后,与HF组相比,随着PO组大鼠ALA摄入量及血清ALA含量升高,GLUT4蛋白和mRNA表达量均显著升高,而IRS-1蛋白和mRNA表达均显著降低;高胰岛素-正常血糖钳夹实验结果显示两组大鼠胰岛素敏感性没有明显差异。结论 ALA(0.556 g/d)高脂饮食干预可以调节骨骼肌GLUT4、IRS-1表达,但不能改善胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性。     

DXB／c近交系小鼠的建立及遗传学检测

将ＤＢＡ／２雌鼠与Ｃ５７ＢＬ／６雄鼠杂交后，利用其Ｆ２代中结进行兄妹交配，建立了ＤＸＢ／ｃ近交系小鼠。目前已近交２８代，历时１３年，经皮肤移植试验、下颌骨形态分析、混合淋巴细胞培养、毛色基因及生化标志基因检测，表明ＤＸＢ／ｃ系小鼠的基因已经纯合，符合一个近交系小鼠的标准，毛色基因及生化标志基因测试结果同时表明ＤＸＢ／ｃ系小鼠的遗传背景组合了两亲代品系的遗传基因。     

脂肪细胞缺陷可导致肌肉和肝脏的胰岛素抵抗

不能正常吸收血糖的脂肪细胞似乎也可导致肌肉和肝脏出现同样的问题,波士顿Beth Deaconess医疗中心的研究人员采用复杂的遗传方法去除老鼠脂肪细胞上接受胰岛素指令将血液中葡萄糖转移到细胞内的关键蛋白。不     

近交系小鼠超数排卵的研究

近交系小鼠超数排卵(简称超排)的研究可为小鼠胚胎库的建立提供大量胚胎。以孕马血清促性腺激素(PMSG)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)为主,按不同品系小鼠的特点,加前列腺素(PGF_(2α))1μg/只以上。超排BALB/c系小鼠,平均每只雌鼠取可用胚胎22枚,C 57 BL/6 A系小鼠为23枚,对照组分别取得7枚和8枚,实验组与对照组差异显著(P<0.05)。超排处理后的雌鼠交配受孕率较高。实验结果提示改进的超排方法可提高国产激素制品的超排效果。