苦参碱对小鼠H22肝癌细胞凋亡作用的实验研究

目的：研究中药苦参碱在体内外对小鼠H22肝癌细胞的诱导凋亡作用，探讨其可能的抗肿瘤作用机制。方法：Annexin V-FITC／PI双标记法检测苦参碱对H22细胞的早期促凋亡作用；免疫组织化学法检测苦参碱作用后H22细胞内Bcl-2、Bax两种凋亡相关蛋白的表达。建立H22肝癌移植瘤小鼠模型，观察苦参碱对荷瘤小鼠肿瘤生长情况的影响及肿瘤抑制率；电镜观察荷瘤小鼠肿瘤组织的超微结构改变；免疫组化方法检测小鼠肿瘤组织内Bcl-2、Bax的表达情况。结果：AnnexinV法检测到1．0mg／mL和1．5mg／mL苦参碱作用48h后H22细胞有早期凋亡改变，凋亡细胞百分率分别为11．71％和17．86％，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。苦参碱对荷瘤小鼠肿瘤的抑制率达60％以上；免疫组化显示，苦参碱作用后H22细胞内及小鼠肿瘤组织内Bcl-2蛋白的表达水平下降，Bax蛋白表达增强。电镜证实苦参碱治疗后荷瘤小鼠肿瘤组织内有凋亡细胞和凋亡小体的存在。结论：苦参碱在体内体外都对小鼠H22肝癌细胞表现出较强的抗肿瘤作用和诱导凋亡作用。促凋亡作用与其上调细胞内Bax表达，抑制Bcl-2表达有关。     

褪黑素对H22肝癌细胞凋亡作用的影响

目的　探讨褪黑素 (MLT)在体外对H2 2肝癌细胞凋亡作用的影响及其机制。方法　应用免疫细胞化学染色方法及原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法 (TUNEL)对bcl 2、bax及凋亡细胞进行检测。结果　经MLT孵育相同的时间后 ,凋亡指数 (AI)随MLT浓度的增加而增加 ,中等剂量组与低剂量组及对照组间差异均有显著性 (P <0 .0 5) ,大剂量组、5 Fu组与低剂量组、对照组间差异均有显著性 (P <0 .0 1)。同一药物浓度下 ,中等剂量组、大剂量组及 5 Fu组在孵育 2 4,3 6h后 ,其AI差异有显著性 (P <0 .0 5)。随MLT浓度增加 ,bcl 2的表达呈降低趋势 ,低剂量组与对照组差异有显著性 (P <0 .0 1)。在孵育 2 4,3 6h后 ,bcl 2的下降差异有显著性 (P <0 .0 5)。随MLT浓度增加 ,bax表达在 2 4h内呈上升趋势 ,随时间延长变化不大。结论　MLT在体外有促进肿瘤细胞凋亡的作用 ,且随时间和浓度的增加 ,其促凋亡作用增强 ,bcl 2和bax参与了其中的调节作用     

五倍子酸对H22肝癌细胞荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的 观察五倍子酸(trihydroxybenzoic acid,TBA)对小鼠移植性肝癌H22肿瘤生长的抑制作用。方法 建立移植性H22肝癌细胞荷瘤小鼠模型,每组10只,TBA高、中、低剂量组TBA溶液0.50g/kg、0.25g/kg、0.13g/kg灌胃给药;对照组0.5%羧甲基纤维素钠溶液0.2mL/10g灌胃给药;阳性对照组CTX 20mg/kg腹腔注射,每天固定时间给药一次,连续给药10d。观察各组小鼠实体瘤重,计算抑瘤率,HE染色检测肿瘤组织细胞形态变化。结果 TBA 0.50g/kg、0.25g/kg和0.13g/kg组小鼠平均瘤重不同程度下降,其中TBA 0.25g/kg组平均瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),TBA三组抑瘤率分别为24.83%、45.52%和15.86%。结论 TBA灌胃给药可以不同程度抑制H22肿瘤的生长。     

TNP-470对小鼠肝癌H22腹水瘤的治疗研究

 目的 探讨TNP-470治疗小鼠肝癌H22腹水瘤的疗效及机制。方法 体外采用细胞增生法和迁移法探讨TNF-470的治疗机制；体内建立H22腹水瘤小鼠模型评价TNP-470的疗效。结果TNP-470对瘤细胞H22的增生、血管内皮细胞HMEC的增生和迁移都有抑制作用；能明显提高小鼠生活质量、降低腹水的产生和瘤细胞的存活率及小鼠失明率，延长生存期。结论 TNP-470对荷H22腹水瘤小鼠有明显疗效。     

胰岛素增强5-氟脲嘧啶对H22肝癌移植瘤的抑制作用及其机制

目的: 建立裸鼠H22肝癌移植瘤模型,观察胰岛素是否增强5-氟脲嘧啶(5-FU)对裸鼠移植瘤的化疗疗效并探讨其机制。 方法: 免疫组织化学方法检测肿瘤组织中细胞周期蛋白D(CyclinD)的表达。用流式细胞仪检测肿瘤组织细胞周期改变。 结果: 大、中、小剂量胰岛素(0.09,0.06,0.03U/20g)联合5-FU均能增加单用5-FU时的抑瘤作用,大剂量胰岛素联合5-FU组对H22肝癌移植肿瘤生长抑制率达51.35%,明显高于单用5-FU组的27.93%(P<0.05)。大剂量胰岛素组H22肝癌移植瘤组织中CyclinD的阳性表达率为62%,明显高于对照组的30%(P<0.05)。大剂量胰岛素组G1期和S期所占比例分别为53.87%和46.13%,与对照组的61.37%和38.25%相比,G1期细胞明显减少,S期细胞显著增多(P<0.05)。 结论: 在裸鼠H22肝癌移植瘤模型中,胰岛素能增强5-FU对H22肝癌移植瘤的化疗疗效。推测胰岛素可以通过或者至少是部分通过增加CyclinD蛋白的表达而使大量肿瘤细胞处于S期,此时加入S期特异性化疗药物5-FU能够更加有效地杀伤肿瘤细胞。     

人参皂甙Rg3对小鼠肝癌H22腹水瘤的治疗研究

目的：研究人参皂甙Rg3治疗小鼠恶性腹腔积液的疗效。方法：100只雌、雄各半昆明种小鼠随机分为5组：Ⅰ组生理盐水组（0．9％NS）;Ⅱ组顺铂组（DDP0．5mg／kg）;Ⅲ组低剂量人参皂甙Rg3组（LPD0．3mg／kg）;Ⅳ组中剂量人参皂甙Rg3组（MPD1．0mg／kg）;Ⅴ组高剂量人参皂甙Rg3组（HPD3．0mg／kg）。所有小鼠肝癌H22腹水瘤模型建立后24小时开始分别腹腔注射0．2ml／只治疗,每日1次,共14天,同时观察小鼠的生活状态和体重。治疗结束后24小时,处死各组半数小鼠测各项指标,剩余小鼠停止治疗并观察生存时间。结果：各用药组较生理盐水组在腹水量（P〈0．05）、腹水中瘤细胞数和瘤细胞存活率方面都下降（P〈0．05）;随着人参皂甙Rg3给药浓度的增加,腹水中瘤细胞数及瘤细胞存活率下降（P〈0．05）;人参皂甙Rg3高剂量组腹水中瘤细胞数及瘤细胞存活率低于DDP组（P〈0．05）。各实验用药组较生理盐水组小鼠寿命延长,其中中剂量人参皂甙Rg3组延长最明显（P〈0．05）。结论：人参皂甙Rg3对小鼠恶性腹腔积液的形成具有抑制作用,这为临床应用提供了实验依据。     

氧化苦参碱对小鼠肉瘤和肝癌的体内外抗肿瘤作用

目的： 研究氧化苦参碱对小鼠肉瘤和肝癌的体内、外抗肿瘤作用,为氧化苦参碱在抗肿瘤方面的应用提供实验依据。方法： 取对数生长期S₁₈₀和H₂₂细胞悬液预培养24 h,分别设立小鼠S₁₈₀和H₂₂细胞的空白对照组（RPMI-1640培养基）、阴性对照组（不加药的S₁₈₀和H₂₂细胞悬液）、5-氟尿嘧啶（5-FU,5×10^-5 g/L）阳性对照组及5个不同浓度（1×10^-4、1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7、1×10^-8 g/L）的氧化苦参碱培养组,连续培养48 h后,采用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测氧化苦参碱对S₁₈₀和H₂₂细胞的增殖抑制率。分别将S₁₈₀和H₂₂瘤细胞悬液接种于昆明种小鼠,建立S₁₈₀和H₂₂荷瘤小鼠模型,分别设立正常对照组、模型组、阳性对照组、氧化苦参碱高、中、低剂量组,每组10只。正常对照组和模型组灌胃给予等体积蒸馏水,高、中、低剂量小鼠分别灌胃浓度为100、50、25 mg/kg的氧化苦参碱,阳性对照组灌胃给予30 mg/kg的环磷酰胺。各组连续给药8 d后,检测氧化苦参碱对S₁₈₀和H₂₂荷瘤小鼠的抑瘤率、胸腺系数和脾系数以及对S₁₈₀和H₂₂腹水瘤小鼠生存期的影响。结果： 体外研究结果表明,与阴性对照组比较,氧化苦参碱对小鼠S₁₈₀和H₂₂细胞的增殖均有抑制作用（P<0.05）。动物实验表明,与模型组比较,氧化苦参碱100、50和25 mg/kg剂量组均能够显著抑制小鼠S₁₈₀肉瘤的生长,抑瘤率分别为48.48%、41.67%和32.58%,差异具有统计学意义（P<0.05）;氧化苦参碱100和50 mg/kg剂量组均能够显著抑制小鼠肝癌H₂₂的生长,抑瘤率分别为33.95%和31.63%,差异具有统计学意义（P<0.05）;氧化苦参碱50 mg/kg剂量组可显著延长S₁₈₀腹水型小鼠的生存期,其生命延长率为31.18%,差异具有统计学意义（P<0.05）。与正常对照组比较,氧化苦参碱各剂量组对S₁₈₀荷瘤小鼠和H₂₂荷瘤小鼠的胸腺系数和脾系数无明显影响（P>0.05）。结论： 氧化苦参碱对小鼠肉瘤和肝癌体外和体内均具有一定的抗肿瘤作用。     

肝癌H-22细胞膜抗原肽提取物对小鼠免疫功能的影响及其抑瘤作用

目的应用小鼠肝癌H-22细胞膜相关抗原肽(TAP)提取物免疫小鼠,观察其对小鼠自身移植肿瘤生长及免疫学参数的影响,为制备肿瘤疫苗提供实验依据.方法采用微酸洗脱法制备分子量≤3000 Da的细胞膜TAP提取物,皮下免疫小鼠,检测胸腺细胞增殖反应、T细胞亚组百分数的变化,脾细胞Con A反应性、IL-2和IFN-γ活性、CTL杀伤活性的变化及抑瘤效应.结果 TAP提取物免疫后,移植肿瘤的发生率降低(P＜0.01),平均出现时间延迟(P＜0.001),生长速度减慢;同时,脾细胞Con A反应性(P＜0.01)、IFN-γ(P＜0.05)和IL-2分泌活性和CTL杀伤活性(P＜0.05)不同程度增强;胸腺细胞3H-TdR自发掺入率(P＜0.05)及CD4 和CD8 T细胞百分数(P＜0.05)也有不同程度增高.结论小鼠肝癌H-22细胞膜TAP提取物具有免疫原性,能有效激发免疫系统功能,抑制自身移植肿瘤的生长.     

白细胞介素-2和苦参碱对小鼠微小残留白血病的治疗作用

 目的 研究微小残留白血病的治疗新方法。方法 采用重组人白细胞介素-2（rhIL-2）和苦参碱单独或联合治疗小鼠多药耐药微小残留白血病。 DBA小鼠接种P388／VCR-G细胞（1×106／只）后第3天,用环磷酰胺（Cy）35 mg／kg一次腹腔注射,24 h 后实验分4组。对照组：腹腔注射生理盐水0.2 ml／次,2次／d,连续5 d。rhIL-2组：腹腔注射rhIL-2 1×105U／次,2次／d,连续5 d。苦参碱组：腹腔注射苦参碱25 mg／kg,1次／d,连续5 d。rhIL-2＋苦参碱组：腹腔注射rhIL-2 1×105U／次,2次／d,连续5 d;苦参碱25 mg／kg,1次／d,连续5 d。结果 对照组小鼠平均生存期（25.2±1.10）d,rhIL-2治疗组平均生存期分别延长至（36.25±1.26）d,按回归方程y天数= -1.98x细胞数+28.61推算,相当于杀灭了1×103左右的白血病细胞。苦参碱治疗组平均生存期分别延长至（37.8±13.7）d,亦相当于杀灭了1×103左右的白血病细胞。rhIL-2联合苦参碱治疗组平均生存期为（37.0±1.87）d,与单用比较无统计学差异（P＞0.05）。结论 rhIL-2和苦参碱单独应用均有显著抑制微小残留白血病细胞增生的作用,但两者联合应用无明显协同作用     

海藻色素糖蛋白对小鼠H22肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究麒麟菜海藻色素糖蛋白（seaweed pigment glycoprotein,SPG）对小鼠H22肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：将不同浓度SPG与小鼠H22肝癌细胞共同培养,用MTT法测定癌细胞增殖活性。建立H22移植瘤小鼠肝癌模型,随机分为SPG高、中、低剂量组,对照组及环磷酰胺组。实验组小鼠每天分别给予不同剂量（100、50、10mg/kg）的SPG灌胃,连续10d,对照组同法给予等量生理盐水,环磷酰胺组小鼠腹腔注射20mg/kg环磷酰胺,隔日一次。各组小鼠均于末次给受试物后24h处死,取肿瘤组织用免疫组化法检测各组Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：SPG高剂量组瘤细胞增殖活性（0.545±0.002）明显高于对照组（0.404±0.008）（P〈0.05）;SPG高剂量组Bcl-2和Bax蛋白阳性表达率分别为16.78%和38.1%,对照组分别为65.16%和4.68%,两组间的差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：SPG具有抑制小鼠H22肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞侵袭转移及USP22蛋白表达的影响

目的:探究不同浓度三氧化二砷(As2O3)对肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响以及对HepG2细胞中USP22蛋白表达的影响,进一步完善其分子机制。方法:CCK8细胞增殖实验检测不同浓度As2O3在不同时间点对HepG2细胞增殖的影响;细胞划痕和Transwell方法检测HepG2细胞在不同浓度As2O3作用下侵袭转移能力的变化;Western blot检测As2O3作用下HepG2细胞中USP22蛋白的表达水平。结果:随着As2O3浓度和作用时间的增加,HepG2细胞增殖明显受到抑制。与对照组相比,24 h时分别用2、4、8 μmol/L的As2O3处理的HepG2细胞侵袭转移能力降低,细胞中USP22蛋白表达水平明显下降。结论:As2O3可抑制人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力,其分子机制可能与下调的USP22蛋白水平相关。     

苦参碱对胃腺癌细胞SGC-7901 Bcl-2表达的影响

目的　研究苦参碱 (matrine ,Ma)对胃腺癌细胞SGC 790 1Bcl 2表达的影响。方法　Ma作用于胃腺癌细胞SGC 790 1,48h后收集细胞爬片 ,用抗Bcl 2mAb和免疫组织化学SABC法及图像分析技术分析Bcl 2。结果　Ma作用的胃腺癌细胞Bcl 2表达量A值 118.80 4± 0 .2 65 ,较对照组细胞 10 4.5 2 7± 0 .0 86下降显著 (P <0 .0 5 )。结论　Ma对胃癌细胞的凋亡诱导作用可能与其影响Bcl 2表达有关     

Caspase-3在苦参碱诱导鼻咽癌CNE2细胞凋亡中的作用

目的：探讨苦参碱对鼻咽癌CNE2细胞生长和凋亡的影响以及Caspase-3在其中的作用。方法：将不同浓度（0、0.25、1.00、4.00g/L）的苦参碱分别作用于体外培养的CNE2细胞48h;采用MTT法检测细胞的存活与增殖,采用Annexin-Ⅴ和PI双染法测定细胞凋亡,采用Westernblot法检测细胞中Caspase-3蛋白的含量。结果：在苦参碱1.00和4.00g/L浓度作用下,CNE2细胞存活和增殖受到影响,其存活率分别为对照组的65.1%和50%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）;且CNE2细胞的凋亡频率明显增加,分别达到15.78%和28.44%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。苦参碱1.00和4.00g/L浓度组细胞的Caspase-3蛋白水平分别为1.22±0.34和1.69±0.46,均比对照组0.87±0.26明显增高（P均〈0.05）。结论：苦参碱能够引起鼻咽癌CNE2细胞的增殖抑制和凋亡增加,并对Caspase途径有激活作用。