不同剂量流感病毒感染小鼠模型免疫应答的比较性研究

目的 比较不同剂量流感病毒感染小鼠后肺组织急性损伤情况,初步探讨感染剂量与机体抗病毒的固有、适应性免疫应答的关系。方法 用流感病毒A/PR/8/34（PR8;H1N1）构建小鼠感染102 PFU和103 PFU剂量模型,HE法检测肺组织损伤情况,HA法和免疫荧光染色法检测肺组织病毒滴度和感染程度,RT - PCR法检测肺组织炎性因子干扰素α（interferon - α, IFN - α）、干扰素β（interferon - α, IFN - β）、白细胞介素1β（interleukin - 1β, IL - 1β）、白细胞介素6（interleukin - 6, IL - 6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor - α, TNF - α）及Toll样受体7（Toll - like receptor - 7, TLR7）、髓样分化因子88（myeloid differentiation primary response gene 88, MyD88）、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6（TNF receptor associated factor 6, TRAF6）和核因子κB（nuclear factor κB, NF - κB）mRNA水平,免疫组化法对肺组织TLR7、MyD88、TRAF6和NF - κB蛋白定位。流式细胞术检测肺组织、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid, BALF）和淋巴结中CD4+、CD8+T细胞比例。结果 与102 PFU组比较,103 PFU组小鼠肺组织病毒滴度显著升高（t = 3.071,P = 0.008）,炎症因子IFN - α、IFN - β、IL - 1β、IL - 6、TNF - α mRNA水平上升（t = 4.816,P = 0.003;t = 4.104,P = 0.006;t = 3.992,P = 0.007;t = 4.049,P = 0.007;t = 3.737,P = 0.009）,TLR7、MyD88、TRAF6和NF - κB mRNA水平有不同程度的升高（t = 2.905,P = 0.027;t = 3.854,P = 0.008;t = 3.760,P = 0.009;t = 4.312,P = 0.005）及蛋白表达显著增加（t = 4.712,P = 0.003;t = 4.008,P = 0.007;t = 4.398,P = 0.005;t = 4.564,P = 0.004）,BALF、肺组织和淋巴结中CD4+T细胞比例呈上升趋势（t = 3.771,P = 0.009;t = 2.463,P = 0.049;t = 3.386,P = 0.015）,BALF和肺组织CD8+T细胞比例上调（t = 5.297,P = 0.002;t = 3.502,P = 0.013）。结论 病毒载量影响机体固有和适应性免疫应答状态,通过上调 TLR7 - MyD88 - TRAF6 - NF - κB信号通路促进下游炎症反应,并启动CD4+T和CD8+T细胞发挥抗病毒效应。     

噪声对小鼠血糖、炎症因子及肠道菌群的影响

目的 探讨噪声对小鼠血糖、炎症因子及肠道菌群的影响。方法 32只雄性 C57BL/6J小鼠,每组8只,随机分为15 d对照组、15 d噪声组、30 d对照组和30 d噪声组。干预结束后进行腹腔注射葡萄糖耐量试验,用ELISA法检测血清TNF - α、TNF - γ、IL - 6、IL - 1β、IFN - γ水平,16S rRNA高通量测序技术检测粪便菌群。结果 与对照组相比,噪声组的体重变化无明显差异（P＞0.05）;葡萄糖耐量试验曲线下面积（AUC）显著升高（P＜0.05）,糖耐量减退;血清TNF - α、TNF - γ、IL - 6、IL - 1β、IFN - γ水平也明显升高（P＜0.05）。肠道菌群结果显示,与各对照组相比,各噪声组小鼠肠道菌群的α多样性均降低（P＜0.05）,β多样性的主成分分析（PCoA）图明显的区分。所有组别均以拟杆菌门（Bacteroidetes）和厚壁菌门（Firmicutes）为主,噪声组的Bacteroidetes、普雷沃菌属（Prevotella）增加,Firmicutes、疣微菌门（Verrucomicrobia）、阿克曼菌属（Akkermansia）和瘤胃球菌属（Ruminococcus）减少。α多样性指数chao1、faith_pd、shannon与AUC均呈负相关,Bacteroidetes与TNF - α呈正相关,Firmicutes与AUC、TNF - α、IL - 6呈负相关,Prevotella与AUC、TNF - α呈正相关。结论 噪声暴露能引起小鼠炎症反应增强和肠道菌群改变,导致糖耐量减退。     

Toll样受体2和肠道菌群在高脂饮食诱导的胰岛素抵抗中的作用

目的 研究高脂喂养与基础饮食喂养条件下,野生型（wild type, WT）小鼠与Toll样受体2（Toll like receptor 2,TLR2）基因敲除(TLR2-/-）小鼠肠道菌群的变化及其与胰岛素抵抗的关系。 方法 出生10周龄雄性TLR2-/-小鼠和WT小鼠各两组分别进行高脂饲料与基础饲料喂养,每组3只小鼠,喂养9周后,进行葡萄糖耐量实验（glucose tolerance test, GTT）和胰岛素抵抗实验（insulin resistance test, ITT）实验;收集小鼠粪便进行16S rDNA高通量测序;处死后,ELISA测定血清中细胞因子IL - 6、TNF - α和IL - 10的含量。结果 与基础饮食组的WT小鼠和高脂饮食组的TLR2-/-小鼠相比,高脂饮食组的WT小鼠GTT（t = 3.210,P = 0.033;t = 3.689,P = 0.021）、ITT（t = 3.332,P = 0.029;t = 4.125,P = 0.015）曲线下面积均升高,差异具有统计学意义;与基础饮食组的WT小鼠、基础饮食组的TLR2-/-小鼠和高脂饮食组的TLR2-/-小鼠相比,高脂饮食组的WT小鼠血清炎性因子IL - 6和TNF - α含量均升高,差异具有统计学意义（IL - 6:t = 9.646,P = 0.001;t = 16.02,P＜0.001;t = 7.677,P = 0.002;TNF - α:t = 7.731,P = 0.002;t = 10.73,P＜0.001;t = 5.802,P = 0.004）;抗炎因子IL - 10均降低,差异具有统计学意义（t = 4.219,P = 0.014;t = 27.6,P＜0.001;t = 10.2,P = 0.001）;与基础饮食组的WT小鼠相比,高脂饮食组的WT小鼠肠道菌群组成发生变化,拟杆菌门减少（Z = - 1.528,P = 0.127）,厚壁菌门/拟杆菌门比值升高（Z = - 0.218,P = 0.827）,变形菌门占比升高（Z = - 0.655,P = 0.513）,普雷沃菌属降低（Z = - 0.218,P = 0.827）,颤螺旋菌属和拟杆菌属升高（Z = - 1.528,P = 0.127;Z = - 1.964,P = 0.050）;与基础饮食组的TLR2-/-小鼠相比,高脂饮食组的TLR2-/-小鼠厚壁菌门/拟杆菌门比值没有明显改变,变形菌门占比升高（Z = - 1.964,P = 0.050）,普雷沃菌属降低（Z = - 0.655,P = 0.513）,颤螺旋菌属和拟杆菌属升高（Z = - 1.993,P = 0.046;Z = - 1.528,P = 0.127）。结论 高脂饮食会导致肠道菌群紊乱,并改变小鼠的葡萄糖调节能力,TLR2信号通路的激活促进炎症反应以及胰岛素抵抗的发生,但可能并不通过肠道菌群发挥作用。     

黄芪多糖对流感病毒感染小鼠急性肺损伤的保护作用的实验研究

目的研究黄芪多糖对流感病毒感染小鼠急性肺损伤的保护作用及机制。方法实验分为正常对照组、流感病毒模型组、黄芪多糖治疗组,黄芪多糖预防组,利巴韦林抗病毒阳性对照组。用甲型H1N1流感病毒鼠肺适应株PR8构建小鼠流感模型,观察黄芪多糖在治疗(PR8感染后给药)和预防(PR8感染前给药)两种不同给药方式下小鼠生存率和肺组织病理变化情况,RT-PCR法检测肺组织炎性相关因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-αmRNA表达,Western blot法检测肺组织TLR4、TLR7、My D88、NF-κB蛋白表达。免疫组化法对肺组织NF-κB表达进行定位。结果黄芪多糖治疗和预防组均能延长小鼠生存时间,减轻肺组织病理变化;下调肺组织炎性相关因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-α水平(P0.01);抑制TLR4、TLR7、My D88、NF-κB的表达(P0.01)。结论黄芪多糖治疗给药和预给药的方式均能缓解流感病毒诱导的肺炎性病理损伤,通过TLR4/7-My D88-NF-κB信号转导通路降低肺组织的炎性反应,发挥抗流感病毒感染的作用。     

脂多糖经MyD88／NF-KB信号途径抑制Bewo细胞中乙型肝炎病毒复制

目的探讨Toll样受体4（TLR4）配体脂多糖（LPS）抑制人滋养层细胞Bewo中乙型肝炎病毒（rtBv）复制的作用机制,为防治HBV宫内感染提供依据。方法首先将2txg1．3倍HBV全基因重组质粒pcDNA3．1（＋）-HBV1．3转染Bewo细胞12h后,以TLR4配体LPS处理3d。尔后用LPS处理Bewo细胞,观察IFN—β、TNF-a表达的动力学、NF—KB拮抗剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对LPS诱导Bewo细胞产生细胞因子的作用。采用微粒子酶免疫分析法（MEIA）和荧光定量PCR法分别检测HBsAg、HBeAg和HBVDNA水平,并以ELISA和RT—PCR分别检测IFN-β、TNF—a水平及TIR结构域的转接蛋白（TRIF）、髓样分化蛋白（MyD88）表达。结果与对照组比较,LPS可显著抑制Bewo细胞中HBV复制（P〈0．01）,且LPS可显著诱导Bewo细胞产生TNF-a（P〈0．05）,呈时间和剂量依赖性。PDTC可抑制LPS诱导细胞产生TNF-a,显著低于对照组（P〈0．01）,但对IFN—β无显著作用（P〉0．05）。与对照组比较,LPS可诱导HBV重组质粒转染的Bewo细胞表达MyD88（P〈0．01）。结论通过MyD88／NF—KB信号途径诱导Bewo细胞产生TNF—a,TLR4配体LPS可显著抑制HBV复制。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对短肠综合征大鼠肠道代偿和肠道屏障的影响

目的 观察研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对空肠切除后的短肠综合征（SBS）模型大鼠剩余肠道代偿功能和肠道屏障的影响。方法 32只SPF级健康雄性SD大鼠,平均随机分为4组,每组8只,分别为假手术组、手术对照组、低剂量EGCG手术组和高剂量EGCG手术组。假手术组进行空肠横断吻合,其余手术组均切除中段小肠,形成SBS模型。假手术组和手术对照组术后2～14天灌胃生理盐水,低剂量和高剂量EGCG手术组分别灌胃等体积50 mg/kg和100 mg/kg EGCG,术后第15 d处死大鼠。测定各组大鼠术后各组大鼠体重变化;血清超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）水平;ELISA法检测回肠组织肿瘤坏死因子（TNF - α）和白细胞介素6（IL - 6）的水平;分析小肠病理切片的绒毛长度和隐窝深度评估肠道代偿功能;采用免疫荧光法检测紧密连接蛋白claudin - 1和occludin的分布和平均荧光强度（MFI）;RT - qPCR方法检测大鼠回肠组织TLR4、MyD88和NF - κB p65 mRNA相对表达量。结果 与手术对照组比较,各剂量EGCG手术组大鼠体重均增加（P＜0.05）;血清SOD、CAT的活性和MDA含量增加（P＜0.05）;小肠绒毛高度和隐窝深度增加（P＜0.05）;回肠组织TNF - α和IL - 6的水平减少（P＜0.05）;回肠黏膜紧密连接蛋白claudin - 1和occludin的MFI增加（P＜0.05）,回肠组织TLR4、MyD88 和NF - κB p65 mRNA相对表达量减少（P＜0.05）。结论 EGCG可以通过抑制TLR4/NF - κB信号通路的活化,减轻SBS大鼠的氧化应激和组织炎症,促进小肠功能恢复和保护肠道屏障,加快术后的肠适应和肠康复。     

姜黄素通过增强自噬水平抑制急性肺损伤大鼠肺组织炎症反应

目的 观察脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠模型肺组织中自噬表达,探讨姜黄素是否通过上调急性肺损伤大鼠自噬水平抑制肺组织的炎症反应。方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组、急性肺损伤组（ALI组）、姜黄素组、自噬抑制剂3 - 甲基腺嘌呤组（3 - MA组）。采用一次性气管内滴注LPS（4 mg/kg）制备ALI大鼠模型。姜黄素组与3 - MA组于造模前15 min分别腹腔注射姜黄素（200 mg/kg）或自噬抑制剂3 - MA（15 mg/kg）。于造模后24 h取材HE染色观察肺组织形态变化;ELISA法测定支气管肺泡灌洗液中（BALF）中细胞总数及肿瘤坏死因子 -α（TNF -α）、白介素- 1β（IL - 1β）及白介素 - 6（IL - 6）的含量;real - time PCR检测自噬基因ATG5、 ATG7的mRNA水平;western blot法检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC - 3）、Beclin - 1。结果 与对照组相比,ALI组大鼠肺组织中大量炎症细胞浸润,BALF中细胞总数增加,TNF -α、IL - 1β及IL - 6水平较对照组显著上调（P＜0.05）,自噬指标ATG5、ATG7 mRNA水平与LC - 3、Beclin - 1蛋白表达量明显上调（P＜0.05）。与ALI组相比,姜黄素组炎症细胞浸润减轻,BALF中细胞总数减少,TNF -α、IL - 1β及IL - 6水平显著减少（P＜0.05）,自噬相关基因和蛋白表达进一步上调（P＜0.05）。3 - MA处理显著抑制自噬相关指标的表达,加重炎症细胞浸润, 增多BALF中TNF -α、IL - 1β的含量（P＜0.05）。结论 姜黄素处理通过进一步增强ALI的细胞自噬水平减轻大鼠肺组织的炎症损伤,进而发挥保护性疗效。     

HMGB1 - TLR9 - MyD88 - TRAF6 - NF - κB信号通路在急性胰腺炎肠粘膜屏障损伤中的作用

目的 探讨雨蛙素和脂多糖诱导的小鼠重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）模型中肠道粘膜屏障损伤的机制。方法 采用雨蛙素和脂多糖诱导小鼠SAP模型。将雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和SAP组,每组12只。每组分为6 h和12 h两个时间点。HE染色观察胰腺及回肠病理学,ELISA法检测TNF - α、IL - 1β、IL - 6、DAO和EndoCAb的表达水平,Western blot检测HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6、NF - κB p65、p - NF - κB p65和occludin表达水平,TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况。采用单因素方差分析比较不同处理组之间的结果,组间差异进一步采用LSD - t多重比较。结果 与对照组相比,SAP组血清中 IL - 1β、IL - 6、TNF - α、DAO 和EndoCAb水平升高（F = 104.50,P＜0.05;F = 140.36,P＜0.05;F = 328.21,P＜0.05;F = 372.23,P＜0.05;F = 80.67,P＜0.05）;HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6和p - NF - κB p65蛋白表达升高（F = 65.95,P＜0.05;F = 84.16,P＜0.05;F = 58.27,P＜0.05;F = 122.26,P＜0.05;F = 178.38,P＜0.05）,occludin的表达降低（F = 456.91,P＜0.05）、小鼠肠上皮细胞凋亡增加(F = 400.47,P＜0.05)。与12 h SAP组相比,6 h SAP组血清IL - 1β、IL - 6和TNF - α水平及p - NF - κB p65蛋白表达升高更明显(ｔ = 4.95,P＜0.05;ｔ = 4.57,P＜0.05;ｔ = 3.32,P＜0.05;ｔ =2.93,P＜0.05)。与6 h SAP组相比,12 h SAP组回肠组织中occludin水平降低更明显（ｔ = - 3.52,P＜0.05）,血清DAO、EndoCAb水平、HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6蛋白表达水平更高（ｔ=6.55,P＜0.05;ｔ = 4.96,P＜0.05;ｔ = 6.88,P＜0.05;ｔ = 8.52,P＜0.05;ｔ = 7.37,P＜0.05;ｔ = 7.78,P＜0.05）,肠上皮细胞出现细胞凋亡更明显 (ｔ = 3.10,P＜0.05)。结论 HMGB1 - TLR9 - MyD88 - TRAF6 - NF - κB信号通路可能参与了SAP肠粘膜屏障损伤。     

LncRNA-MIAT在LPS致COPD中的表达及在炎症浸润与肺纤维化中的机制

目的 探讨长链非编码RNA MIAT(LncRNA-MIAT)在细菌脂多糖(LPS)致慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠肺部炎症浸润与肺纤维化的相关机制。方法 将大鼠分为对照组、模型组、过表达LncRNA-MIAT组、敲低LncRNA-MIAT组，采用LPS诱导构建慢性阻塞性肺病大鼠模型，苏木精-伊红染色法染色观察肺组织炎症浸润与纤维化损伤程度，实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肺组织中LncRNA-MIAT和TOLL样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)mRNA水平，蛋白质免疫印迹法检测TLR4/NF-κB蛋白表达，酶联免疫吸附法检测肺组织中白细胞介素(IL)-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平，并分析。结果 对照组肺泡和气管结构清晰，未见炎症浸润；模型组、过表达LncRNA-MIAT组、敲低LncRNA-MIAT组大鼠出现不同程度炎细胞浸润，上皮结构紊乱，存在纤维化现象；模型组大鼠肺组织中的LncRNA-MIAT和TLR4、NF-κB mRNA水平及TLR4、NF-κB蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05); LncRNA-MIAT过...     

Toll样受体7激动剂对荷瘤小鼠肾癌的抑制作用及免疫机制

目的　研究Toll样受体7激动剂Imiquimod对荷瘤小鼠肾癌的抑制作用及免疫机制。方法　用Renca肾癌细胞构建BABL/c小鼠肾癌模型,实验分为control组、imiquimod组和sorafenib组。观察3组小鼠肿瘤体积及重量、抑瘤率,qPCR法检测肿瘤组织中炎性相关因子肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）、干扰素α（Interferon-α,IFN-α）、干扰素β（Interferon-β,IFN-β）、干扰素γ（Interferon-γ,IFN-γ）及Toll样受体通路相关因子Toll样受体7（Toll-like receptor 7,TLR7）、髓样分化因子88（Myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88）、核因子κB （Nuclear factor κB,NF-κB）mRNA表达,Western blot法检测瘤组织中TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达。流式细胞术检测脾脏中CD4+T、CD8+T、CD4+IFN-γ和CD8+IFN-γ细胞比例。结果　与control组比较,imiquimod组和sorafenib组小鼠的肿瘤体积及瘤体重量降低（P＜0.05）;与control组相比,imiquimod组TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-α、IFN-β、IFN-γ及TLR7、MyD88、NF-κB mRNA水平升高（P＜0.05）,而sorafenib组各因子略有上升（P＞0.05）;与control组和sorafenib组比较,imiquimod组CD4+T、CD8+T细胞比例有不同程度的升高（P＞0.05）,CD4+IFN-γ和CD8+IFN-γ细胞比例增加（P＜0.05）。结论　Toll样受体7激动剂通过活化TLR7-MyD88-NF-κB信号刺激多种炎性细胞因子分泌,并上调CD4+T、CD8+T比例及功能,对荷瘤小鼠肾癌发挥抑制作用。     

蒿芩清胆汤对流行性感冒病毒性肺炎湿热证小鼠机体的免疫调节作用

目的 在动物模型的基础上,探讨蒿芩清胆汤在小鼠机体免疫调节中的信号传导机制,为该药物治疗湿热证打下理论基础.方法 采用随机数字表法将40只由美国国立卫生研究院(National Institute of Health,NIH)培育而成的小鼠(1980年引进我国,简称NTH小鼠)分为正常组8只、流行性感冒(简称流感)病毒组(单纯病毒感染)8只、复合模型组(高脂饮食+湿热环境+病毒感染)8只、阳性药物组(模型组+病毒唑)8只、蒿芩清胆汤组(模型组+蒿芩清胆汤)8只.计算各组小鼠肺指数及肺指数抑制率;提取小鼠腹腔巨噬细胞用逆转录PCR(RT-PCR)法检测TLR2(Toll样受体-2)及NF-κB mRNA(核因子κB-mRNA)的表达;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定标本中白介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)的浓度,求出IFN-γ/IL-4比值用于了解机体Th1/Ih2(Th1类与Th2类细胞比值)类细胞的平衡状态.结果 正常组、病毒组、复合模型组、阳性药物组和蒿芩清胆汤组小鼠的肺指数分别为(0.79±0.11)%、(1.93±0.38)%、(1.41±0.26)%、(1.10±0.26)%、(1.02±0.16)%;阳性药物组和蒿芩清胆汤组小鼠的肺指数和复合模型组相比均有所减低,有统计学意义(t=0.322,P＜0.05).RT-PCR的结果显示,正常组、病毒组、复合模型组、阳性药物组和蒿芩清胆汤组TLR2 mRNA的表达分别是0.145±0.017、0.991±0.149、0.903±0.124、0.257±0.032和0.413±0.031;蒿芩清胆汤组、阳性药物组比复合模型组的小鼠低,均有统计学意义(t=0.013,F=73.467,P＜0.05).正常组、病毒组、复合模型组、阳性药物组和蒿芩清胆汤组NF-κB mRNA的表达分别是0.075±0.015、379±0.019、0.291±0.012、0.169±0.026和0.175±0.033;阳性药物组、蒿芩清胆汤组与复合模型组相比均有所减低(t=0.422,F=112.834,P＜0.05).正常组、病毒组、复合模型组、阳性药物组和蒿芩清胆汤组小鼠血清中IFN-γ含量分别为(7434.06±323.27)pg/ml、(8679.77±198.70)pg/ml、(8068.78±113.8)pg/ml、(7454.66±301.30)pg/ml和(7484.56±229.85)pg/ml;蒿芩清胆汤组和阳性药物组血清中IFN-γ含量比复合模型组减低,有统计学意义(t=0.201,F=5.390,P＜0.05).正常组、病毒组、复合模型组、阳性药物组和蒿芩清胆汤组小鼠血清中IL-4含量分别为(3701.74±256.00)pg/ml、(3569.64±161.35)pg/ml、(3530.88±334.63)pg/ml、(3481.84±282.25)pg/ml和(3618.00±262.16)pg/ml;各组间差异无统计学意义(t=0.414,F=0.505,P＞0.05).Th1/Th2比值(即:IFN-γIL-4)分别为:2.02±0.19、2.38±0.10、2.36±0.14、2.22±0.17和2.07±0.15;与复合模型组相比,蒿芩清胆汤组和阳性药物组均呈减低趋势,但无统计学意义(t=0.587,F=3.684,P＞0.05).结论 蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热证疗效显著,它通过降低膜表面受体TLR2的表达来抑制NF-κB的活化,降低血清IFN-γ水平,使Th1/Th2类细胞趋于平衡;降低肺泡内炎症反应,从而达到减少肺组织损伤的治疗目的 .     

ω-3PUFAs对LPS诱导急性肺损伤大鼠前炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的影响

目的 分析ω-3PUFAs对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠(acute lung injury, ALI)TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的影响。方法 60只Sprague-Dawley幼年大鼠按随机数字分为Control组(生理盐水+生理盐水)、LPS组(生理盐水+脂多糖)和Omega(10%脂肪乳尤文+脂多糖)组。各组分别采用生理盐水或尤文脂肪乳剂处理7 d;并均在取标本前8 h时于气管内滴入生理盐水或脂多糖, 建立ALI大鼠模型;观察各组大鼠肺组织的病理改变, 测定肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β、IL-6的表达。结果 1)ALI模型组大鼠肺组织病理切片均可见明显炎症细胞浸润和出血;2)ALI模型组肺系数、病理评分均高于Control组(P均＜0.05);3)BALF中Omega组TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白水平低于LPS组, 差异具有统计学意义(P均＜0.05)。结论 ω-3PUFAs能够通过降低TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌而减轻ALI大鼠炎症反应, 减轻肺部损伤。     

脂多糖经MyD88/NF-κB信号途径抑制Bewo细胞中乙型肝炎病毒复制

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)配体脂多糖(LPS)抑制人滋养层细胞Bewo中乙型肝炎病毒( HBV)复制的作用机制,为防治HBV宫内感染提供依据.方法 首先将2μg 1.3倍HBV全基因重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染Bewo细胞12h后,以TLR4配体LPS处理3d.尔后用LPS处理Bewo细胞,观察IFN-β、TNF-α表达的动力学、NF-κB拮抗剂二硫代氨基甲酸吡咯烷( PDTC)对LPS诱导Bewo细胞产生细胞因子的作用.采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测HBsAg、HBeAg和HBV DNA水平,并以ELISA和RT-PCR分别检测IFN-β、TNF-α水平及TIR结构域的转接蛋白(TRIF)、髓样分化蛋白(MyD88)表达.结果 与对照组比较,LPS可显著抑制Bewo细胞中HBV复制(P＜0.01),且LPS可显著诱导Bewo细胞产生TNF-α(P＜0.05),呈时间和剂量依赖性.PDTC可抑制LPS诱导细胞产生TNF-α,显著低于对照组(P＜0.01),但对IFN-β无显著作用(P＞0.05).与对照组比较,LPS可诱导HBV重组质粒转染的Bewo细胞表达MyD88(P＜0.01).结论 通过MyD88/NF-κB信号途径诱导Bewo细胞产生TNF-α,TLR4配体LPS可显著抑制HBV复制.     

寨卡病毒感染人神经母细胞瘤细胞所诱导的细胞因子表达水平变化

目的 研究寨卡病毒（ZIKV）感染人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）所导致的细胞因子分泌的变化,探讨ZIKV影响神经系统功能紊乱的机制。方法 建立ZIKV感染SH-SY5Y细胞模型,采用噻唑蓝（MTT）分析法检测细胞活力,采用悬浮芯片系统（Bio-Plex^® 200）Luminex多重检测技术同时定量检测24、48、72 h细胞培养上清液中细胞因子IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13、IL-18、IFN-γ、TNF-α、IL-12P70、GM-CSF的浓度。结果 病毒感染组24、48、72 h细胞存活率均低于正常对照组（均P<0.01）。病毒感染组（24~72 h）分泌IL-1β、IL-5、IFN-γ、TNF-α、IL-12P70、GM-CSF的浓度水平均高于对照组（均P<0.01）。病毒感染组（48 h）分泌的IL-1β、IL-12P70、GM-CSF浓度水平均高于对照组（48 h）,病毒感染组（72 h）分泌TNF-α高于对照组（72h）（P<0.05或P<0.01）。结论 ZIKV感染SH-SY5Y细胞后致其细胞存活率降低,并以时间依赖的方式分泌浓度水平相对较高的促炎性细胞因子。     

Multiple amino acid substitutions involved in enhanced pathogenicity of LPAI H9N2 in mice

Human infection of avian influenza H9N2 virus highlighted the need to better understand the mechanism of interspecies transmission. In this study, we generated mouse-adapted influenza virus (ma01) through serial lung-to-lung passages of a wild-type H9N2 (A/chicken/Hubei/01/1999). Ma01 caused highly lethal infection in mice with severe lung pathology and extended tissue tropism. Nine amino acid substitutions of ma01 were observed in five viral genes (those for PB2, PA, NA, M1, and NS1). Of these mutations, substitutes of PB2₆₂₇, PA₃₄₉, PA₆₀₅, NA₈₈, and NA₃₅₆ were absent in influenza H9N2. Furthermore, the targets of wild-type virus responding to mouse microRNA mmu-mir-1940 and mmu-mir-1904 were eliminated in ma01. The mutation PB2₆₂₇ of ma01 confirmed as a key virulence determinant of influenza H5N1 was responsible for the altered recognition of mmu-mir-1904. In addition, induction of IL-1β, IL-6, TNF-α, and IFN-β was found in significantly higher levels in ma01 infected mouse peripheral blood than parental strain. These results demonstrate that multiple amino acid substitutions and avoidance of microRNA recognitions may be essential for lethal infection and high speed of virus growth can outcompete the antiviral response of infected host.     

帕拉米韦对流感病毒感染小鼠免疫功能及炎症反应的调节作用

目的探究帕拉米韦对流感病毒感染小鼠免疫功能及炎症反应的调节作用。方法将48只BALB/c小鼠随机分为对照组、感染组、低、高剂量治疗组,每组12只,病毒感染组、低、高剂量治疗组小鼠用H1N1病毒株(PR8)滴鼻途径攻毒,4 h后治疗组小鼠通过肌肉注射帕拉米韦4、20 mg/kg·d,连续注射5 d,对照组和病毒感染组给予等量生理盐水;在攻毒后3 d时,每组随机取2只小鼠处死,观察肺组织病理变化及其病毒载量;攻毒后5 d时,每组随机取6只小鼠处死,取脾制成单细胞后,利用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群水平,取肺组织制成组织匀浆,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)水平,每日观察小鼠状态,持续观察14 d,根据观察结果分析小鼠的存活率及平均生存时间。结果攻毒14 d后,感染组小鼠全部死亡,死亡率明显高于低、高剂量治疗组(P<0.05),低剂量治疗组的死亡率高于高剂量治疗组(P<0.05);攻毒后3 d时,低、高剂量治疗组小鼠的肺指数及肺组织病毒载量低于感染组(P<0.05),高剂量治疗组上述指标变化更显著(P<0.05);感染组小鼠肺组织的病理损伤及炎症浸润严重,低、高剂量治疗组小鼠的病理损伤及炎症浸润有不同程度减轻,且高剂量治疗组改善更明显;攻毒后5 d时,低、高剂量治疗组小鼠的CD₄⁺、CD₄⁺/CD_₈⁺、IL-6、TNF-α水平低于感染组,IL-2、IFN-γ水平高于感染组(P<0.05),且高剂量治疗组的IL-6、TNF-α水平低于低剂量治疗组,IL-2、IFN-γ水平高于低剂量治疗组(P<0.05)。结论帕拉米韦通过抑制肺组织中流感病毒的释放和增殖,缓解过度免疫反应引起的炎症损伤,进而提高小鼠存活率。