陕西食品中蜡样芽胞杆菌毒力基因的分布及分子分型研究

目的了解陕西省食品中蜡样芽胞杆菌的毒力基因的分布及分子分型情况。方法采用PCR方法对2016年本省不同地区不同食品中收集到的123株食源性蜡样芽胞杆菌的10种毒力基因进行检测,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)的方法对携带呕吐基因的蜡样芽胞杆菌进行分子分型,并用Bio Numerics软件对结果进行聚类分析。结果 123株蜡样芽胞杆菌均携带有毒力基因且均携带3种以上,最多携带9种。nhe基因和ent FM基因是本省的主要毒力基因。不同地区溶血素hbl基因的分布差异有统计学意义,不同食品bce T基因的分布差异有统计学意义。8株携带呕吐基因的蜡样芽胞杆菌的PFGE结果显示没有聚集性。结论本省食源性蜡样芽胞杆菌毒力基因携带率较高,基因型多样,对食品安全和公共健康构成潜在的毒性威胁,具有一定的安全隐患。     

米面食品中呕吐型蜡样芽胞杆菌的分子分型及耐药性分析

目的 了解陕西米面食品中呕吐型蜡样芽胞杆菌的分子分型和耐药性。方法 对近5年(2012-2016年)陕西地区的米面食品中收集到的208株蜡样芽胞杆菌用PCR方法进行呕吐型菌株的鉴别,用多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST)技术对鉴别的呕吐型菌株分子分型,用微量肉汤稀释法测定其药物敏感性。结果 鉴别出8株呕吐型蜡样芽胞杆菌,分为ST-1050、ST-1606和ST-26三个ST 型。呕吐型蜡样芽胞杆菌对氨苄西林、青霉素、苯唑西林、复方新诺明耐药率100%。对头孢西丁、头孢唑林,耐药率分别为62.5%、50.0%。对红霉素、克林霉素、四环素,敏感率均为87.5%,对环丙沙星、达托霉素、万古霉素、氯霉素、庆大霉素100%敏感。结论 陕西地区米面食品中存在呕吐型蜡样芽胞杆菌的污染,ST-26是优势型别,应作为陕西防控工作的重点。氨苄西林、青霉素、苯唑西林、复方新诺明耐药率高不应作为临床治疗用药。     

北京朝阳164株蜡样芽胞杆菌耐药性及腹泻毒力基因分析

目的了解北京朝阳2013年-2014年164株蜡样芽胞杆菌生化分型、耐药及毒力基因携带情况。方法全自动细菌鉴定药敏系统进行药敏试验,手工生化分型,PCR检测毒力基因。结果 164株蜡样芽胞杆菌分成13型,主要为3型(45株)、8型(29株)、1型(19株)、12型(16株)、9型(14株)、6株未分型; 8种基因携带率依次为nheC(59. 15%)、hblC (49. 39%)、bceT (23. 17%)、cytK (16. 46%)、hblA (14. 02%)、nheA (9. 14%)、hblD (8. 54%)、nheB(6. 70%); 164株蜡样芽胞杆菌对氨苄青霉素、头胞西丁、青霉素G 100%耐药,对其余20种抗生素均敏感。结论 164株蜡样芽胞杆菌主要为3型,无13型、15型; 78%菌株至少携带一种毒力基因,52%菌株携带2种以上毒力基因,nheC携带率最高,食品来源菌株均不携带cytK;青霉素类、头孢类药物100%耐药。     

开封市售奶茶中蜡样芽胞杆菌的鉴定与分析

目的确认市售奶茶中的蜡样芽胞杆菌污染状况。方法按照GB 4789.14-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》和蜡样芽胞杆菌及其呕吐毒素基因的实时荧光PCR鉴定方法,对市售奶茶进行检测并对其中的疑似蜡样芽胞杆菌进行定性和定量鉴定。结果从市售奶茶中检出非呕吐型蜡样芽胞杆菌,其污染量为4.56×104CFU/m L。结论首次在开封市售奶茶中检出高污染量的非呕吐型蜡样芽胞杆菌。     

应用多重PCR技术检测120株蜡样芽胞杆菌毒力基因

目的 应用多重PCR技术对蜡样芽孢杆菌毒力基因进行快速检测,为研究蜡样芽胞杆菌致病性提供有力依据。 方法 根据蜡样芽胞杆菌（B.cereus）的cer、hblA、hblC、nheA、nheB、cytK和bceT基因设计并合成引物,优化反应条件,应用多重PCR技术检测120株B.cereus毒力基因序列。结果 多重PCR检测结果非常理想,不同基因扩增条带清晰可辨,蜡样芽胞杆菌呕吐毒素基因cer携带率为96.66%（116/120),细胞毒素cytK基因携带率为42.37%(50/118),肠毒素bceT基因携带率为38.33%(46/120),非溶血性基因nheA携带率为78.33％(94/120),非溶血性基因nheB携带率为83.05％(98/118),溶血性基因hblA携带率为55.0%(66/120),溶血性hblC基因携带率为27.96%(33/118)。结论 多重PCR结果很好,7对引物所扩增出的DNA条带区分明显,电泳条带清晰,特异性强,敏感度高。本实验对120株蜡样芽胞杆菌7种毒力基因进行检测,为研究蜡样芽胞杆菌致病性提供有力依据。     

广州市食品中蜡样芽胞杆菌生化分型和多位点测序分型分析

目的 了解广州市食品中蜡样芽胞杆菌的生化分型、多位点测序分型(multilocus sequence type,MLST)情况和优势序列型。方法 根据国标将79株食品来源蜡样芽孢杆菌进行生化分型,并根据PubMLST网站提供的蜡样芽胞杆菌MLST分型方案,扩增7个管家基因,经测序后,在PubMLST网站上比对获得菌株的序列型,利用eBURST V3和START2和MEGA6.0软件进行分析。结果 广州市食品中的蜡样芽胞杆菌优势序列型为ST26,占16.46%。结论 蜡样芽胞杆菌具有高度的遗传多样性。     

温州市市售奶粉蜡样芽胞杆菌污染情况调查及毒力基因分析

目的了解温州市市售奶粉中蜡样芽胞杆菌的污染状况及毒力基因的携带情况。方法采集温州市市售奶粉样品,依据国家标准GB 4789. 14—2014进行蜡样芽胞杆菌分离鉴定,并采用PCR法对分离株进行毒力基因检测。结果 400份奶粉样品,共检出76株蜡样芽胞杆菌,检出率为19. 00%。其中复合型非溶血性肠毒素nhe基因、溶血素BL基因携带率分别为75. 00%、21. 05%,2. 63%菌株携带呕吐毒素基因,非溶血性基因nhe基因与肠毒素FM基因为主要毒力基因。结论温州市市售奶粉存在一定程度的蜡样芽胞杆菌污染,且分离的蜡样芽胞杆菌毒力基因携带率较高,存在潜在的食品安全隐患。     

中国八省婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染状况研究

目的了解中国八省婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌的污染状况。方法2012年在中国8个省市进行了调查,共采集1716份婴幼儿食品,采用平板计数法进行蜡样芽胞杆菌的定量分析。结果 9.85%的婴幼儿食品检出蜡样芽胞杆菌,婴幼儿配方粉和婴幼儿即食谷基辅助食品中蜡样芽胞杆菌阳性率分别为14.08%和6.01%,定量结果 100 CFU/g的样品分别占总样品量的2.20%和1.11%。结论我国零售婴幼儿食品存在不同程度的蜡样芽胞杆菌污染,应继续加强对婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌的监管。     

蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株分子分型分析

目的建立蜡样芽胞杆菌的分子分型方法,应用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的溯源研究。方法从2000-2009年广东省深圳市食物中毒暴发和散发病例的临床分离株中挑选47株蜡样芽孢杆菌进行鉴定及生化分型,同时进行vrrA基因PCR扩增并对产物进行测序,用Bio-edit和MEGA软件对DNA序列进行同源性比较。结果传统生化分型:47株蜡样芽胞杆菌中有5株菌不能分型,其余42株菌可分为2型、10型和4型,其中2型16株,占34.04%,10型16株,占34.04%,4型10株,占21.28%;分子分型:47株菌可分为13个基因型MT1-MT13,其中MT13型19株,占40.43%,MT1型8株,占17.02%,MT10型4株,占8.51%。结论 vrrA基因作为蜡样芽胞杆菌分子分型的一个多态性遗传标记,可用于蜡样芽胞杆菌DNA分子分型研究,对食物中毒溯源有重要意义。     

河南省洛阳市餐饮食品中蜡样芽孢杆菌污染状况及毒力基因分析

目的 检测河南省洛阳市餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的污染状况和毒力基因携带情况,为防控该菌引起的食源性疾病提供参考依据。方法 2021年,按照《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》的要求,从洛阳市餐饮服务环节和流通环节采集餐饮食品样品113份,定量检测蜡样芽孢杆菌,并采用PCR方法对分离得到的31株蜡样芽孢杆菌菌株所携带的10种毒力基因进行检测。结果 蜡样芽孢杆菌总检出率为27.43%(31/113)。不同种类食品中,熟制米面的蜡样芽孢杆菌检出率最高,为32.69%(17/52)。第三季度蜡样芽孢杆菌的检出率最高,为39.53%(17/43);不同季度蜡样芽孢杆菌检出率差异有统计学意义(χ²=8.607,P=0.014)。不同采样地点中流动摊档食品蜡样芽孢杆菌的检出率最高,为37.50%(12/32)。散装食品蜡样芽孢杆菌的检出率(28.26%)略高于预包装食品(23.81%)。100%菌株至少携带一种腹泻型毒素基因,共计12种毒力基因携带模式,非溶血性肠毒素基因nheA、nheB检出率最高,为96.77%;未检出呕吐型毒素基因ces。结论 洛阳市餐饮食品中蜡样芽...     

2012年广东省婴幼儿食品中3种食源性致病菌污染状况调查

目的了解广东地区市场上销售的婴幼儿食品中3种食源性致病菌的污染状况。方法根据广东省人口分布情况、食品生产特点和地域分布特点选择广东省13个地区的市及县、乡镇的超市、百货、便利店和农贸市场进行采样,参照2012全国食源性致病菌监测工作手册,对婴幼儿食品（包括婴幼儿配方食品和婴幼儿谷基辅助食品）分别进行阪崎肠杆菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的定性和定量检测。结果共采集到64个生产厂家的婴幼儿食品314份,其中婴幼儿配方奶粉92份、婴幼儿谷基辅助食品222份。314份样品中检出阪崎肠杆菌10份,检出率为3.18%,其中婴幼儿配方奶粉阳性检出率为2.17%（2/92）,谷基辅助食品阳性检出率为3.60%（8/222）;检出蜡样芽孢杆菌90份,检出率为28.67%,其中婴幼儿配方奶粉阳性检出率为30.43%（28/92）,谷基辅助食品阳性检出率为27.93%（62/222）;未检出金黄色葡萄球菌。10份阪崎肠杆菌阳性样品定量检测结果：9份〈5 MPN/100g,1份〉110 MPN/100g;90份蜡样芽孢杆菌阳性样品中66份采用MPN法检测,结果显示3份〉103MPN/100g,41份〈102MPN/100g,22份未检出,另外24份采用平板法检测,结果显示14份〈102cfu/g,10份未检出。结论广东省婴幼儿食品中阪崎肠杆菌和蜡样芽孢杆菌的污染状况不容忽视,对婴幼儿的健康可能存在风险,今后应加强婴幼儿食品的监管,预防和控制婴幼儿食源性疾病的发生。     

一起蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株的毒力基因分析研究

目的 对红河州发生的一起蜡样芽孢杆菌食物中毒分离株进行毒力基因分析研究。方法 本次食物中毒从一位病人肛拭子标本和三种剩余食物中分离出4株蜡样芽孢杆菌,利用PCR检测分离株的腹泻型毒力基因:hbl(ACD)、nhe（ABC）、cytK、entFM、bceT 和呕吐型毒力基因:NRPS 。结果 病人（肛拭子）和剩余食物（火腿烩乳饼）分离株均携带有hbl(ACD)、nhe（ABC）、cytK、entFM、bceT 基因;剩余食物（虾）分离株携带有nhe（ABC）、entFM 基因;剩余食品（冰木瓜凉水）分离株携带有hbl(CD)、nhe（ABC）、cytK、entFM、bceT 基因;所有分离株均不携带有呕吐型毒力基因NRPS 。结论 本次食物中毒根据毒力基因检测结果,可以确定为由蜡样芽孢杆菌引起的腹泻型食物中毒。     

2012 -2014年江西省市售婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染情况调查

目的 了解2012-2014年江西省市售婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌的污染情况。 方法 采集全省选定的13个市县的超市、百货商场等流通环节销售的4类婴幼儿食品(谷类辅助食品、婴幼儿配方食品、罐装辅助食品和其他婴幼儿食品)样品共799份,采用国家食品污染和有害因素风险监测工作手册方法检测和鉴定蜡样芽胞杆菌。 结果 三年799份样品中蜡样芽胞杆菌总检出率为10.39%,2013年污染率较高为15.26%,4类食品平均阳性率由高到低分别为婴幼儿配方食品12.53%,谷物辅助食品8.77%,其他婴幼儿食品3.70%,罐装辅助食品0.00%,进一步分析得出饼干类和生制类谷物辅助食品阳性率较高,分别达到33.33%(1/3)和66.67%(2/3)。不同地区采集的样品阳性检出率差异有统计学意义(χ2=60.19,P<0.001)而不同流通环节抽取的样品差异无统计学意义(χ2=7.08,P=0.215)。 结论 江西省市售婴幼儿食品中存在蜡样芽胞杆菌的污染,有一定的安全隐患,相关监管部门应加强重视,预防食源性疾病的发生。     

2012 - 2016年陕西省897份婴幼儿食品中阪崎肠杆菌检测

目的 通过连续5年对陕西省婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的监测,调查陕西省婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的污染情况。方法 随机采集省内超市、零售店、农贸市场、网购场所的婴幼儿食品,依照食品微生物检验国家标准GB 4789.40—2010 对所采集的婴幼儿食品进行阪崎肠杆菌的检测。结果 2012 - 2016年共采集婴幼儿食品897份,总检出率为3.01%（27/897）。婴幼儿辅助食品的检出率（6.54%）高于婴儿配方食品（1.90%）,第二季度的检出率（3.82%）较高,0～6个月婴幼儿配方食品中也检出了阪崎肠杆菌,检出率为1.67%,羊奶粉的检出率（5.51%）高于牛奶粉的检出率（1.08%）。结论 陕西省婴幼儿食品存在阪崎肠杆菌污染,婴幼儿辅助食品、0～6个月婴幼儿食品以及羊奶粉中阪崎肠杆菌污染更为严重,需引起监管部门重视,加强监督和管理。     

Development of a High-Resolution Melting-Based Approach for Efficient Differentiation Among Bacillus cereus Group Isolates

Abstract Strains belonging to Bacillus cereus Group include six different species, among which are Bacillus thuringiensis, Bacillus weihenstephanensis, and Bacillus cereus sensu stricto, a causative agent of food poisoning. Sequence of the panC-housekeeping gene is used for B. cereus Group affiliation to seven major phylogenetic groups (I-VII) with different ecological niches and variations in thermal growth range and spore heat resistance of B. cereus Group microorganisms varies among phylogenetic groups. We assigned a selection of B. cereus sensu stricto strains related to food poisoning from the Spanish cultivar Collection (Valencia) to Group IV strains based on panC gene sequence. Thermal inactivation assays revealed variability of spore heat resistance within these Group IV strains. Adequate food sanitizing treatments therefore require fast and reliable identification of particular strains. In the present study, feasibility of genotyping via high-resolution melting (HRM) analysis was examined. HRM analysis of amplified polymorphic 16S-23 intergenic spacer region (ISR) region proved to be discriminatory for B. cereus sensu stricto strain typing, while two other polymorphic regions within the bacterial rRNA operon allowed differentiation between Bacillus species, demonstrating its applicability for discrimination on the species and strain level within B. cereus Group.     

Bacillus cereus nosocomial infection from reused towels in Japan

It was noticed that there was an increase in Bacillus cereus nosocomial infections in the summer from 2000 to 2005. In 2005, five bloodstream infections occurred in five patients related to catheter use. The causative strains were distinct from each other and belonged to novel multilocus sequence types (ST): ST365, ST366, ST367 and ST368. Two ST365 strains from two patients were further distinguished by pulsed-field gel electrophoresis. B. cereus contamination was observed with reused (dried and steamed) towels (>10(6)cfu/towel) and washing machines in hospital linen rooms. B. cereus strains from towels belonged to ST167, ST365, ST380 and ST382, and a proportion of these were the same, or similar, to strains from patients. All the hospital strains of B. cereus were distinct from those from food-poisoning strains (ST26, ST142, ST381). Ciprofloxacin resistance was observed only in hospital strains. Neither emetic toxin nor cytotoxin K gene, usually present in food poisoning strains, were found in the hospital strains, except for one patient isolate. The data suggest that specific B. cereus strains are circulating within a hospital, with genotypes, antibiotic susceptibilities and virulence gene patterns generally distinct from those of food poisoning, and that in Japan, towels are an important source of contamination, especially in summer.