肌肉特异性糖皮质激素受体基因敲除对慢性肾脏病骨骼肌消耗的影响

目的:内源性糖皮质激素水平异常升高可引起和加重慢性肾脏病(CKD)引起的骨骼肌消耗。本研究观察肌肉特异性糖皮质激素受体基因敲除(MGRKO)对CKD状态下小鼠骨骼肌消耗的影响。方法:采用5/6肾切除制作CKD小鼠模型,以假手术组(CTL组)为对照组。组织病理学检测胫骨前肌横截面积并计算肌纤维面积分布图;荧光定量PCR检测肌肉萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)和肌环指蛋白1(MuRF-1)mRNA水平;Western Blot检测其蛋白表达及Akt/FoxO1信号通路;ELISA方法检测血清皮质酮水平。结果:造模1月后,lox/lox-CKD和MGRKO-CKD小鼠的血尿素氮和皮质酮水平均明显升高;lox/lox-CKD的体重明显下降胫骨前肌湿重明显降低。而MGRKO-CTL和MGRKO-CKD两组间体重无明显差异,胫骨前肌湿重仅轻微降低。组织学观察到lox/lox-CKD胫骨前肌肌纤维明显萎缩,横截面积减少,肌纤维面积分布图明显左移。而MGRKO-CKD组的体重下降不明显,胫骨前肌仍较饱满,肌肉湿重略降低,横截面积略降低,与MGRKO-CTL组比较,肌纤维面积分布图仅轻度左移。荧光定量PCR和Western Blot结果显示lox/lox-CKD组的腓肠肌Atrogin-1和MuRF-1的mRNA和蛋白表达水平显著升高,同时其Akt磷酸化水平(pAkt/Akt)较lox/lox-CTL组显著降低3.1倍,FoxO1磷酸化水平(pFoxO1/FoxO1)较lox/lox-CTL组降低2.3倍;而MGRKO-CKD组的Atrogin-1表达仅轻微上调,MuRF-1则无明显变化;MGRKO-CKD组Atrogin-1蛋白表达水平仅比MGRKO-CTL组升高,同时pAkt/Akt、pFoxO1/FoxO1水平较对照组仅轻微降低。结论:内源性糖皮质激素水平升高在CKD肌肉消耗中发挥重要作用;MGRKO可减轻/阻止CKD状态下的体重下降和肌肉萎缩,下调肌萎缩关键基因Atrogin-1和MuRF-1表达水平;该效应与阻断糖皮质激素影响Akt/FoxO1信号途径有关,抑制糖皮质激素信号通路可能改善CKD肌肉消耗。     

小檗碱对糖尿病db/db小鼠骨骼肌蛋白质代谢的影响及机制研究

目的 探讨小檗碱对糖尿病/胰岛素抵抗模型db/db小鼠骨骼肌蛋白质代谢及肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)表达的影响.方法 db/db小鼠为研究对象,以野生型为对照组.予小檗碱(5 mg·kg-1·d-1)腹腔注射3周,观察体重和食量;3周末处死,分离胫骨前肌和腓肠肌.胫骨前肌冰冻切片行层黏连蛋白免疫组化染色,荧光显微镜下观察并拍照,测量肌纤维横截面积并计算肌纤维面积分布图;同位素[14C]-苯丙氨酸掺入法检测肌肉蛋白合成,[3H]-酪氨酸释放率分析检测肌肉分解代谢;Northern印迹检测腓肠肌Atrogin-1和肌环指蛋白1(MurF-1)转录水平,Western印迹检测蛋白翻译水平.结果 小檗碱能明显降低db/db小鼠血糖水平[(18.55---3.79对26.32±4.02)mmol/L,P＜0.01],降低脂肪重量[(2.75±0.30对3.77±0.52)g,P＜0.05],使胫骨前肌的肌重/胫骨长度比值及肌纤维横截面积下降,肌纤维面积分布图明显左移;小檗碱使野生型j、鼠和db/db小鼠的蛋白质合成率下降18％ ～ 22％;蛋白质分解率升高24％～ 26％,使肌肉特异性的Atrogin-1、MurF-1转录和翻译水平增高,同时使真核转录因子3调节亚基(eIF3-f)蛋白水平降低.结论 小檗碱具有降糖降脂作用,但可引起骨骼肌蛋白质合成下降,促进蛋白质分解代谢,加剧糖尿病的骨骼肌消耗,其机制与上调Atrogin-1和MurF-1表达,同时下调elF3-f有关.     

红景天、红景天苷对小鼠骨骼肌质量的调控作用及机制

目的探讨红景天、红景天苷对小鼠下肢骨骼肌质量和慢肌、快肌表达的影响及作用机制。方法 40只小鼠经过预实验筛选后,选取其中30只分为对照组、红景天组和红景天苷组。检测比目鱼肌、跖肌的骨骼肌湿重及Troponin I-SS(Tn I-SS)、Troponin I-FS(Tn I-FS)、Akt、p-Akt(Ser473)、TβR-Ⅱ的蛋白表达,Atrogin-1和MuRF-1的mRNA表达,分析调控机制。结果各组小鼠体重未见明显差异,肌湿重略有增加,差异无统计学意义。与对照组相比,红景天苷组小鼠比目鱼肌和跖肌中Tn I-SS和Tn I-FS表达增加,使骨骼肌质量得以提升。红景天苷可有效提升Akt及其磷酸化水平,抑制TβR-Ⅱ的表达,抑制Atrogin-1和MuRF-1的mRNA表达。结论红景天苷可促进小鼠骨骼肌Tn I-SS和Tn I-FS表达,从而使骨骼肌质量得以提升;促进蛋白质合成关键因子Akt及其磷酸化的表达,抑制TβR-Ⅱ表达,可能为调控小鼠骨骼肌质量的机制。     

细胞生长中IGF-Ⅰ/PI3K/AKT/mTOR(p70S6K)信号通路与肌萎缩的关系

肌肉质量及功能的维持需要蛋白合成与蛋白降解之间保持平衡,涉及到合成代谢与分解代谢之间保持适当的比例.肌萎缩在许多不同的条件下发生,在肌肥大过程中胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)/磷酸肌醇三激酶(PI3K)/苏氨酸激酶(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)(p70S6K)通路被激活,同时,能抑制转录起始因子(eIF2B)的糖原合成激酶3β(GSK3β)被抑制,及FOXO(Forkhead蛋白分子亚家族之一)的核排斥,使得骨骼肌环指蛋白(MuRF1)和肌内萎缩F-box(atrogin/MAFbx)失活,从而引起蛋白合成的增加;而在肌萎缩过程中,FOXO被AKT磷酸化后便被排斥到细胞核外,若去磷酸化便移位至细胞核内,其去磷酸化和核移位是MuRF1和MAFbx上调所必需的,MuRF1和MAFbx能编码E3泛素连接酶,增加蛋白的降解,进而引起肌萎缩.此外,促细胞因子白介素(IL)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、β2-肾上腺素受体对骨骼肌细胞的增殖与分化也能产生不同的影响.了解这些机制及这些机制之间的相互作用非常重要,因为严重的肌肉质量下降及功能的丧失可能会增加病人的死亡率.     

Foxo1及泛素溶酶体系统在慢性肾脏病致骨骼肌萎缩作用中的初步观察

 目的 观察终末期肾病患者骨骼肌萎缩表现,并初步探讨腹直肌中转录因子Foxo1及泛素溶酶体系统活性变化与骨骼肌萎缩的关系。方法 对慢性肾脏病(CKD)5期的22例尿毒症患者在腹膜透析置管术中行腹直肌活检。并将8例诊断为子宫腺肌病并拟行经腹全子宫切除术患者及6例确诊为腹壁疝并拟行腹壁疝修补术患者设为对照组,于手术时留取少许腹直肌标本。观察肌纤维形态、计算肌纤维横截面积,并检测Foxo1及泛素溶酶体系统标志物Atrogin-1及MuRF1的mRNA和蛋白的表达情况。结果 CKD组患者腹直肌肌纤维的横截面面积较对照组明显缩小(P<0.01),CKD组Foxo1、Atrogin-1及MuRF1的mRNA含量及蛋白表达量均较对照组明显增加(P<0.05),而p-Foxo1蛋白表达量较对照组降低(P<0.05)。结论 CKD患者存在肌萎缩现象,推测其与Foxo1表达上调、磷酸化程度降低以及泛素溶酶体系统活性亢进有关。     

Irisin通过激活AMPK促进C2C12细胞葡萄糖摄取

目的研究鸢尾素(irisin)对C2C12细胞葡萄糖摄取的影响及机制。方法将C2C12细胞分为:Control组,不同浓度的irisin组(分为0.1μg/ml,0.3μg/ml和1μg/ml组),高糖/高脂(HG/HF)处理组,HG/HF+不同浓度的irisin组(分为0.1μg/ml,0.3μg/ml和1μg/ml组),Control+Scramble siRNA组,HG/HF+AMPKα2 siRNA组,HG/HF+scramble siRNA组,HG/HF+scramble siRNA+irisin组,HG/HF+AMPKα2 siRNA+irisin组。采用荧光葡萄糖(2-NBDG)检测细胞的葡萄糖摄取;Western blot检测细胞葡萄糖转运体4(GLUT4)转位情况和AMPK磷酸化水平。结果 (1)与Control组相比,HG/HF组C2C12细胞葡萄糖摄取降低(P0.05),不管是否经过高糖处理,Irisin均增加C2C12细胞葡萄糖摄取(P0.05或P0.01)。与Control组相比,HG/HF降低鼠骨骼肌细胞膜GLUT4表达(P0.01),Irisin显著增加HG/HF孵育骨骼肌细胞细胞膜GLUT4表达(P0.01);(2)与Control组相比,HG/HF降低C2C12细胞细胞膜AMPK磷酸化水平(P0.05),在Control组及HG/HF组,Irisin显著增加骨骼肌细胞AMPK的磷酸化水平(P0.05);(3)与HG/HF+scramble siRNA+irisin组相比,HG/HF+AMPKα2 siRNA+irisin转染组细胞葡萄糖摄取及细胞表面GLUT4表达均显著减少(P0.05或P0.01)。结论 Irisin通过激活AMPK促进小鼠骨骼肌细胞葡萄糖摄取。     

二陈汤合桃红四物汤含药血清对ox-LDL诱导内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的观察二陈汤合桃红四物汤含药血清对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞损伤的保护作用并探讨其可能的机制。方法培养EA.hy926细胞,随机分为对照组、ox-LDL组、干预组、抑制剂组。流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞上清液中TNF-α和IL-6水平显著升高(P0.01),细胞内MDA含量显著升高(P0.01),SOD活性明显降低(P0.05),上清液中NO水平显著降低(P0.01),活性氧(ROS)含量和细胞凋亡率明显升高,PI3K、eNOS蛋白表达水平和AKT蛋白磷酸化水平显著降低(P0.01)。与ox-LDL组比较,干预组细胞上清液中TNF-α和IL-6水平显著降低(P0.01),细胞内MDA含量显著降低(P0.01),SOD活性明显升高(P0.05),上清液中NO水平显著升高(P0.01),ROS含量和细胞凋亡率明显降低,PI3K、eNOS蛋白表达水平和AKT蛋白磷酸化水平显著升高(P 0.01)。与干预组比较,抑制剂组细胞上清液中TNF-α和IL-6水平显著升高(P0.01),细胞内MDA含量显著升高(P0.01)、SOD活性明显降低(P0.05),上清液中NO水平明显降低(P0.05),细胞内ROS含量升高,PI3K、eNOS蛋白表达水平和AKT蛋白磷酸化水平显著降低(P0.01)。结论二陈汤合桃红四物汤含药血清能有效保护ox-LDL诱导的内皮细胞损伤,其机制可能与激活PI3K/AKT/eNOS信号通路有关。     

肌肉萎缩蛋白Fbox-1基因沉默对糖皮质激素作用下肌管萎缩的影响

目的:研究糖皮质激素地塞米松(dexamethasone,DEX)对体外培养肌管的形态、蛋白质合成/分解代谢及肌肉萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)的表达,Atrogin-1基因沉默是否可减轻肌管萎缩.方法:体外培养小鼠肌纤维细胞株C2C12细胞并分化为肌管后,用DEX处理48h,同位素3H-酪氨酸掺入法检测蛋白合成,3H-酪氨酸释放率检测蛋白分解代谢;荧光显微镜观察肌管形态并拍照;Northern blot检测Atrogin-1 mRNA水平;应用小分子干扰RNA片段(siRNA)技术使Atrogin-1基因沉默后,观察DEX作用下肌管形态的改变.结果:DEX 5μmol/L作用后,肌管酪氨酸(tyrosine)掺入率下降17.4%,同时tyrosine释放率升高24.7%,使肌管形态变细、萎缩;剂量依赖性地升高Atroign-1蛋白表达水平,使Atroign-1 mRNA表达升高3倍;Atrogin-1基因沉默可改善DEX引起的肌管萎缩. 结论:DEX促进肌管蛋白质分解代谢,并抑制蛋白合成代谢,导致肌肉萎缩;Atrogin-1基因沉默可改善DEX引起的肌肉萎缩,Atrogin-1基因可能是逆转肌肉消耗性营养不良的有效靶点.     

NLRP3炎症小体在ICU获得性衰弱大鼠呼吸肌和下肢肌中的表达

目的探讨重症监护室获得性衰弱(ICU-AW)大鼠吸肌和下肢肌组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达及作用。 方法将40只健康雄性SD大鼠完全随机分为对照组(sham组)和实验组(脓毒血症组),采用盲肠结扎穿孔术在实验组大鼠中构建ICU-AW模型,对照组仅行开腹暴露盲肠手术;造模96 h后收集大鼠腓肠肌和膈肌标本,采用HE染色观察病理学变化并计算肌纤维横截面积,采用qRT-PCR和western blot的方法检测大鼠腓肠肌和膈肌中Atrogin-1、MuRF1、NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达。 结果盲肠结扎穿孔术96 h后,大鼠腓肠肌和膈肌纤维排列较对照组疏松,肌纤维横截面积较对照组明显减少(P<0.05),Atrogin-1、MuRF1基因和蛋白表达量较对照组明显升高(P<0.05);ICU-AW大鼠腓肠肌和膈肌中NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18基因和蛋白表达量较对照组明显升高(P<0.05)。 结论盲肠结扎穿孔术制备的脓毒血症模型中,吸肌和下肢肌溶解参与ICU-AW的发生,NLRP3炎症小体相关信号通路参与上述过程。     

磷酸化丝氨酶/苏氨酸蛋白激酶B与吲哚美辛诱导胃黏膜损伤的关系探讨

目的 探讨抗凋亡信号蛋白磷酸化丝氨酸,苏氨酸蛋白激酶B(AKT)表达水平与吲哚美辛诱导胃黏膜损伤的关系.方法 采用免疫印迹法检测吲哚美辛处理后的C57BL/6小鼠胃黏膜组织和大鼠胃黏膜细胞(RGM-1)中抗凋亡信号蛋白磷酸化AKT表达水平的变化.结果 吲哚美辛处理后的小鼠胃黏膜组织呈现典型的胃溃疡病理形态变化;和对照组相比,经吲哚美辛处理后的小鼠胃黏膜组织和大鼠胃黏膜细胞RGM-1中抗凋亡信号蛋白磷酸化AKT表达水平均明显降低.结论 抗凋亡信号蛋白磷酸化AKT表达水平降低可能是吲哚美辛诱导的胃黏膜损伤的一种新的机制.     

青少年高血压的研究进展

随着人们生活和行为方式的改变,高血压发病明显呈年轻化趋势。在青少年时期识别高血压病高危人群有助于早期进行有效干预和治疗,降低未来高血压的发生率及其严重性。现试从青少年高血压的诊断、发病因素、特点、治疗策略等方面的研究进展作一综述。     

Morbidity in cardiovascular diseases in immigrants in Sweden

INTRODUCTION: Although immigration to Sweden has increased in the last few decades, the incidence rates of cardiovascular disease and coronary heart disease in immigrants are unknown. The aim of the present study is to estimate whether place of birth affects the incidence rates of cardiovascular disease and coronary heart disease. MATERIAL AND METHODS: The study was designed as a follow-up study on morbidity in cardiovascular disease and coronary heart disease between 1 January 1997 and 31 December 1998, including three and a half million persons with age range 35-64 years, of whom 550 000 were born abroad, from the database MigMed consisting of the whole Swedish population. Incidence rates and relative risks were estimated by indirect standardization and a proportional hazard model. RESULTS: The age-adjusted risk of coronary heart disease was higher in most foreign-born groups than in Swedes. For example, in nine of 12 male groups, the relative risks varied between 1.1 and 2.2, and in seven of 12 female groups, the relative risks varied between 1.4 and 2.5. When also adjusting for level of education and employment status, the risks were still high, but on a lower level. CONCLUSIONS: Foreign-born people possess an over-risk of cardiovascular or coronary heart disease(CVD/CHD) compared with Swedish-born persons, also when level of education and employment status are taken into account.     

C·肉毒杀鼠素(冻干剂)应用研究

目的为研究C·肉毒杀鼠索对杀灭达乌尔黄鼠(简称黄鼠)的大面积应用情况和对家畜、家禽的毒害作用,进行了C·肉毒杀鼠素的应用研究.方法大面积投毒采用ES-2药饵撒播机[1],间隔约80m进行条投.羊、鸡采用直接灌胃.结果大面积应用的灭鼠率为83.72%.对羊、鸡最高剂量分别为500万MLD、150万MLD,均未出现中毒现象.结论 C·肉毒杀鼠素是较为理想的草原大面积杀灭黄鼠的理想、首选药物.     

Pulmonary sporotrichosis in Oklahoma in susceptibilities in vitro

Six cases of pulmonary sporotichosis were observed in 2 institutions in Oklahoma City, Okla. Three of the patients were treated with iodides with or without surgery. Although one patient required a second course of iodides, the patients have remained well after at least 34 months of follow-up. Three patients treated with amphotericin B, single course as well as multiple courses, and other antifungal agents (hydroxystilbamidine and miconazole) have all relapsed. These cases and a reviewed of more than 40 cases of pulmonary sporotrichosis susceptibilities of Sporothrix schenckii that we observed in vitro suggest that amphotericin B is not an effective agent for the treatment of pulmonary sporotrichosis. It is our opinion that the treatment of choice for pulmonary sporotrichosis is a supersaturated solution of potassium iodide. If the patient is allergic to the medication or fails to respond, then a combination of amphotericin B plus flucytosine may be tried.     

高龄老年高血压的临床研究进展

随着社会老龄化进程的加快,80岁以上高龄老人的绝对数量以及占总人口的比例均在增加,如何提高高龄老年高血压的防治水平备受关注。现试从高龄老年高血压的临床特点、治疗策略等方面的临床研究进展作一综述。