炎症病理情况下阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞膜电位影响及其可能机制研究

目的研究炎症病理情况下阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞膜电位及大电导钙敏感钾通道活性的影响。方法通过激光共聚焦显微镜检测DIBAC4（3）标记的大鼠主动脉平滑肌细胞（AsMc）膜电位,观察-＋／-catalase（过氧化氢清除剂）时IL-1β与ASMCs共培养后,阿托伐他汀对膜电位的影响,探讨阿托伐他汀能否逆转IL-1β对血管平滑肌细胞膜电位的影响及其可能机制,以及在炎症情况下阿托伐他汀对BKca单通道活性的影响。结果12h50ng／mlIL-1β的处理使ASMCs细胞膜去极化,100μmol／L阿托伐他汀可以逆转IL-1β引起的ASMCs去极化;12h50ng／mlIL-1β的处理抑制ASMCs细胞膜上BKca通道活性,而100umol／L阿托伐他汀可以逆转IL-1β对BKca通道活性的影响。结论阿托伐他汀可以完全逆转IL-1β引起的ASMCs去极化,BKca通道是形成血管平滑肌细胞膜电位的重要原因。膜电位与心血管疾病密切相关,BKca通道可能是心血管疾病新的药物靶点,阿托伐他汀可能成为直接开放血管平滑肌细胞BKca通道新的药物。     

阿托伐他汀逆转IL-1β对大鼠主动脉平滑肌细胞膜电位影响的机制研究

目的探讨阿托伐他汀逆转IL-1β对大鼠主动脉平滑肌细胞膜电位影响的机制。方法分组情况:对照组、IL-1β处理组、IL-1β+catalase(H_2O_2清除剂)处理组、IL-1β+阿托伐他汀(atorvastatin)处理组、IL-1β+atorvastatin+catalase处理组;过氧化氢检测试剂盒测定各组细胞内H_2O_2水平;以DiBAC4(3)为膜电位荧光标记,通过激光共聚焦显微镜检测各组细胞膜电位;以开放概率NPo为指标,通过单通道膜片钳技术记录各组细胞膜BKca通道活性。结果与对照组比较,IL-1β处理组上调细胞内H_2O_2水平(P0.05);与IL-1β处理组比较,IL-1β+catalase处理组及IL-1β+atorvastatin处理组均下调细胞内H_2O_2水平(P0.05);与IL-1β+atorvastatin处理组比较,IL-1β+atorvastatin+catalase处理组细胞内H_2O_2水平差异无统计学意义(P0.05);与对照组比较,IL-1β处理组下调细胞膜BKca通道开外概率NPo;与IL-1β处理组比较,IL-1β+catalase处理组及IL-1β+atorvastatin处理组均上调细胞膜BKca通道NPo(P0.05);与IL-1β+atorvastatin处理组比较,IL-1β+atorvastatin+catalase处理组细胞膜BKca通道NPo差异无统计学意义(P0.05)。结论阿托伐他汀通过下调大鼠主动脉平滑肌细胞内过氧化氢水平,上调大电导钙敏感钾通道活性,逆转IL-1β对细胞膜电位影响。     

IL-1β通过过氧化氢双相调节大鼠主动脉平滑肌细胞大电导钙敏感钾通道活性研究

目的 观察不同时间点白介素（IL）-1β对大鼠主动脉平滑肌细胞（ASMCs）内过氧化氢（hydrogen peroxide,H₂O₂）浓度及大电导钙敏感钾通道（large conductance Ca2+-activated K+channel,BKCa）活性影响,探讨IL-1β时间依赖双相调节BKCa通道活性机制。 方法 ①分组:生理盐水对照组（saline组）、IL-1β处理30 min组、过氧化氢酶（catalase）+IL-1β处理30 min组、IL-1β处理48 h组、catalase+IL-1β处理48 h组;②检测IL-1β处理大鼠ASMCs不同时间点细胞内H₂O₂水平变化;③运用膜片钳技术,观察各实验组BKCa通道单通道电流开放概率（NPo）变化。 结果 ①与saline组（36.7±7.23）μmol/ml的结果相比较,IL-1β与ASMCs共培养30 min组H₂O₂的水平增至（79.1±8.93）μmol/ml （P<0.01）;共培养48 h组,H₂O₂水平明显上调至（116.4±12.77）μmol/ml （P<0.01）;H₂O₂清除剂catalase可完全逆转IL-1β对H₂O₂影响。②与saline组比较,IL-1β单独处理ASMCs 30 min组NPo明显增加（P<0.05）;加入catalase预处理细胞,与saline组比较NPo无明显变化,与IL-1β单独处理ASMCs 30 min组比较NPo减少（P<0.05）。IL-1β单独处理ASMCs 48 h组,与saline组比较,NPo明显减少（P<0.05）;加入catalase预处理细胞,与saline组比较NPo减少（P<0.05）,同时与IL-1β单独处理ASMCs 48 h组比较NPo增加有统计学意义（P<0.05）。 结论 IL-1β短时间处理ASMCs上调BKCa通道活性,低浓度H₂O₂介导这一过程;长时间处理则下调BKCa通道活性,其机制部分通过高浓度H₂O₂实现;BKCa通道可能是防治冠脉痉挛有前景的药物作用靶点。     

阿托伐他汀通过上调大电导钙敏感钾通道电流影响大鼠主动脉平滑肌细胞膜电位研究

目的探讨阿托伐他汀通过上调大电导钙敏感钾通道(BKca)电流影响大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMCs)膜电位机制。方法浓度分组:生理盐水对照组、阿托伐他汀浓度分别为10、25、50、100、150μmol/L细胞共培养组。应用+/-BKca通道阻断剂iberiotoxin(IBTX,100 nmol/L)时通过激光共聚焦显微镜检测ASMCs膜电位;全细胞膜片钳技术检测ASMCs全细胞钾电流密度(pA/pF)。结果ASMCs与阿托伐他汀共培养后细胞膜电位荧光值下降,呈阿托伐他汀浓度依赖性;与对照组比较,100μmol/L及150μmol/L阿托伐他汀组荧光值下降,有统计学意义(P0.05)。对照组中加入IBTX明显降低pA/pF值(P0.05);与对照组比较,阿托伐他汀共培养组pA/pF值增加,有统计学意义(P0.05);而100μmol/L阿托伐他汀+IBTX组电流密度变化无统计学意义(P0.05)。与100μmol/L阿托伐他汀组比较,100μmol/L阿托伐他汀+IBTX组pA/pF值减小,有统计学意义(P0.05)。结论阿托伐他汀上调BKca通道电流导致ASMCs超极化,进而影响血管平滑肌细胞生物学活性。     

大电导钙激活钾通道β1亚基与高血压

大电导钙激活钾通道（Bkca）广泛地分布于哺乳动物除心肌细胞的各种组织中,包括平滑肌、骨骼肌、神经元、肾脏和内分泌细胞,在平滑肌上尤为丰富。它在维持血管平滑肌细胞静息膜电位,调节平滑肌舒缩方面起着重要作用,并与高血压及降压药物疗效有着不容忽视的联系。平滑肌细胞的BKca通道由两个不同的膜亚基,即形成孔道的α亚基和调节性β1亚基组成。该文拟就β1亚基的分子结构、生理功能及其与高血压及降压药物疗效的关系进行综述。     

大电导钙离子激活钾通道与糖尿病冠状动脉病变

钙离子（Ca^2＋）激活钾通道根据电导大小和药理特性的差异可分为3类：即大电导ca^2＋激活钾通道（BK）、中电导Ca^2＋激活钾通道（IK）和小电导Ca^2＋激活钾通道（SK），其中BK通道因其对血管调节作用较大且分布广泛而备受关注^[1].BK通道广泛存在于兴奋和非兴奋细胞，在血管平滑肌细胞（VSMCs）膜上表达尤为丰富，不仅参与细胞膜电位的。     

氯离子通道与肺动脉血管张力

肺血管张力的变化直接影响着肺循环的压力，具有十分重要的生理和病理生理学意义。血管张力的维持与血管平滑肌细胞膜的离子通道密切相关。肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells，PASMCs)膜上主要分布有四种离子通道如钾、钠、钙及氯离子通道。这些离子通道均参与和决定了平滑肌细胞膜的膜电位，而膜电位不仅是调节钙离子经由电压依赖性(或电压门控)钙通道(voltage-dependent Ca^2 channels，VDC)内流，而且也是影响细胞内库存钙离子释放和平滑肌收缩装置对钙离子敏感性的关键的调节因素。通过调控钙离子的运输和膜电位，离子通道参与了产生和调节血管张力的各个方面。     

大电导钙激活钾通道在高血压病中的研究进展

大电导钙激活钾通道（BKCa）是血管平滑肌细胞（VSMCs）上表达最丰富的钾通道,对维持VSMCs的膜电位及血管收缩和舒张的动态平衡具有重要的调节作用。BKCa通道的激活可使细胞膜发生超极化,从而抑制电压依赖性钙通道的激活和钙离子内流,导致平滑肌舒张。对高血压患者的观察和高血压动物模型的研究发现,高血压血管张力升高时平滑肌细胞膜表面钾离子和钙离子通道表达和功能均发生异常,因此,有人推测高血压是离子通道重构导致平滑肌细胞去极化的结果。本文主要综述近年来BKCa通道在高血压病中的研究进展。     

氯离子通道与肺动脉血管张力

肺血管张力的变化直接影响着肺循环的压力,具有十分重要的生理和病理生理学意义。血管张力的维持与血管平滑肌细胞膜的离子通道密切相关。肺动脉平滑肌细胞(pul monary artery smoothmuscle cells,PASMCs)膜上主要分布有四种离子通道[1]如钾、钠、钙及氯离子通道。这些离子通道均参与和决定了平滑肌细胞膜的膜电位,而膜电位不仅是调节钙离子经由电压依赖性(或电压门控)钙通道(voltage-dependent Ca2+channels,VDC)内流,而且也是影响细胞内库存钙离子释放和平滑肌收缩装置对钙离子敏感性的关键的调节因素。通过调控钙离子的运输和膜电位,…     

钾离子通道活性与缺氧性肺动脉高压

钾离子通道活性与缺氧性肺动脉高压肖欣荣陈文彬近年来，人们认识到，在影响血管张力的各种综合因素中，来自血管平滑肌细胞（ＳＭＣｓ）内在的电生理活动发挥着十分重要的作用。如钾通道的开放，促使细胞膜电位增加，细胞膜超极化，从而使血管平滑肌兴奋性下降，血管张力...     

PGE2对气道平滑肌细胞分泌和凋亡影响的研究

目的前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）通过调控气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells,ASMCs）的迁移、分泌、增殖功能,对哮喘气道重塑有关键性影响。研究PGE2对ASMCs凋亡及其分泌白介素4（interleukin 4,IL-4）、白介素10（interleukin 10,IL-10）和γ-干扰素（interferon-γ,IFN-γ）的影响,对阐明PGE2通过调控ASMCs分泌Th1/Th2细胞因子对气道炎症发挥作用机制有重要意义。方法用大鼠气道平滑肌细胞株与终浓度为10-9～10-6的PGE2共培养24h,分6组,共4个浓度梯度。用AnnexinV-EGFP/PI双染细胞凋亡检测试剂盒在流式细胞仪测定凋亡率,同时用IL-4、IL-10和IFN-γELISA试剂盒在酶标仪检测其浓度。每4个复孔为1组,实验重复2次,数据为8孔的平均值。结果应用不同浓度的PGE2后ASMCs各组细胞凋亡率与对照组相比无明显变化。但IL分泌与PGE2有显著的量效关系,IL-4和IL-10随PGE2浓度下降而分泌量显著下降,但IFN-γ随PGE2浓度下降而分泌量呈升高趋势,两者呈分离现象（空白对照、阴性对照、10-9PGE2、10-8PGE2、10-7PGE2、10-6PGE2组,IL-4分别为6.77±1.58、9.24±2.45、38.17±11.33、29.27±11.12、26.05±9.49、21.11±7.21;IL-10为4.8±1.06、6.35±2.11、71.89±12.03、43.68±11.25、28.89±8.75、24.31±6.67;IFN-γ为2.17±1.97、3.25±1.48、10.63±4.75、13.4±5.57、15.47±6.16、19.54±6.35）。结论 PGE2能调控ASMCs分泌细胞因子,随着浓度梯度增加能促进Th1型细胞因子IFN-γ分泌,同时抑制Th2型细胞因子IL-4、IL-10分泌,但对ASMCs凋亡无显著影响。认为在正常状态下PGE2的分泌与维持气道内Th1/Th2的平衡有关。     

过氧化氢上调白细胞介素1β诱导人肺上皮细胞表达环氧合酶2

目的探讨过氧化氢(H2O2)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导人肺上皮细胞(HPEC)环氧合酶2(COX-2)表达的影响.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法和酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定IL-1β、H2O2或二者联合干预后HPEC COX-2 mRNA表达量及前列腺素E2(PGE2)释放量的变化, 以不加任何试剂的细胞为对照组.结果 (1)COX-2 mRNA表达量1、5、10 mg/L 的IL-1β处理组COX-2 mRNA表达量分别为(143.1±7.2)%、(179.9±9.0)%、(190.0±9.5)%,对照组为(32.9±1.7)%,1、5、10 mg/L 的IL-1β处理组与对照组比较差异有显著性(P均<0.05); (2)培养基上清液PGE2浓度5、10 mg/L 的IL-1β处理组培养基上清液PGE2浓度分别为 (20.86±5.23)×10-6 g/L、(31.16±2.64)×10-6 g/L,对照组为(10.49±0.36)×10-6 g/L, 5、10 mg/L 的IL-1β处理组与对照组比较差异有显著性(P<0.05);(3) COX-2 mRNA表达量 0.10、0.25、0.50 mmol/L 的H2O2和IL-1β共处理组COX-2 mRNA表达量分别为 (149.2±7.5)%、(189.6±9.5)%、(239.1±12.0)%, IL-1β单独处理组为(66.1±3.7)%, 对照组为(41.6±2.1)%, 0.10、0.25、0.50 mmol/L 的H2O2和IL-1β共处理组与IL-1β单独处理组比较,差异有显著性 (P<0.05); (4)培养基上清液PGE2浓度0.10、0.25、0.50 mmol/L的H2O2和IL-1β共处理组,培养基上清液PGE2浓度分别为 (27.01±5.16)×10-6 g/L、(32.79±3.01)×10-6 g/L、(41.13±3.41)×10-6 g/L,对照组为(10.49±0.36)×10-6 g/L,0.10、0.25、0.50 mmol/L的H2O2和IL-1β共处理组与对照组比较差异有显著性(P<0.05).0.25、0.50 mmol/L的 H2O2和IL-1β共处理组PGE2浓度均与IL-1β单独处理组[(20.86±5.23)×10-6 g/L]比较差异有显著性 (P<0.05). 结论过氧化氢上调IL-1β对HPEC COX-2的诱导表达,其调节机制可能发生在转录水平.     

硫化氢／胱硫醚-γ-裂解酶体系与高血压

内源性硫化氢（H2S）是继一氧化氮和一氧化碳之后发现的第三种气体信号分子，与胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）作为一个整体在高血压调节中发挥着重要的作用。它通过直接作用于KATp通道、减少细胞外Ca^2＋的内流及促进内皮细胞释放内皮超极化因子、与一氧化氮协同作用等方式来舒张血管平滑肌，改善血管舒张功能；同时，还可抑制血管平滑肌细胞增殖，促进其凋亡，改善血管重构。因此，深入研究H2S／CSE体系在高血压调节中的作用，具有重要的理论和临床意义。     

074 雌激素作用于血管平滑肌的"大钾离子通道"

[英]/Silberberg SD…//Science．-1999，285．-1859～1860 女性在绝经期前心血管病的发病率明显低于男性，这在很大程度上是血液中雌激素的作用。一方面，雌激素与血管内皮细胞和血管平滑肌细胞内的某种受体结合，结合后的复合物改变基因的表达，其结果是保护血管免受损伤和减少动脉粥样硬化的发生；另一方面，雌激素直接作用于血管壁，迅速引起血管扩张。 血管平滑肌细胞膜上有一种可由Ca2+激活的大容量传导K+通道(又称为大K+通道)。它与骨胳肌细胞膜上的K+通道不同，具有很强的传导性，并且二者结构也有差异。它除具有与骨胳肌相同的电压依赖性K+通道(亚单位α)外，还具有肌胳肌K+通道缺乏的亚单位β。亚单位β具有与Ca2+结合部位，所以这种大K+通道受电压和细胞内Ca2+浓度双重调控。亚单位β对大K+通道具有重要影响，血管平滑肌细胞内很低Ca2+浓度即可激活大K+通道。Valverde等发现雌激素直接激活这种大K+通道，使Ca2+通道关闭，Ca2+内流停止，血管平滑肌松弛，从而发挥快速调节血管张力的作用，但雌激素不能增强仅由亚单位α构成的K+通道的活性。还发现与血清白蛋白结合的雌激素虽不能穿越细胞膜，仍可激活大K+通道，由此证实雌激素在细胞外发挥作用。雌激素可激活存在于人工重构细胞膜上的大K+通道，说明大K+通道是雌激素的受体。用荧光标记雌激素并与人类胚胎肾脏细胞结合，结果同时具有亚单位α、β的大K+通道发出的荧光远比仅具有亚单位α的普通K+通道明亮。上述研究证实，雌激素与大K+通道的外置位点(即β亚单位)结合，只有当亚单位β存在时才能明显提高通道活性。 血管平滑肌细胞膜上跨膜电压改变的程度决定着平滑肌细胞收缩的程度。当膜内电位升高(去极化)时，电压依赖性的Ca2+通道激活，Ca2+内流，平滑肌细胞收缩。这一过程能够被选择性K+通道的开放所逆转。肌细胞内K+外流的增加使细胞内电压负值上升，使Ca2+通道关闭，肌细胞松弛。大K+通道的开放能够抑制Ca2+通道，并受雌激素的影响。这一发现对于合理设计防治心血管疾病的新药奠定了基础。 (李玉阳摘 赵子彦校)     

肺动脉平滑肌细胞缺氧感受与反应

肺动脉平滑肌缺氧感觉与反应是近年研究缺氧性肺血管收缩反应机制的一个热点，缺氧可减少肺动脉平滑肌细胞胞内活性氧产生，一方面可使细胞膜上刈通道关闭，膜电位降低，导致电压依赖性钙离子通道的开放，使胞浆内钙离子浓度升高、细胞收缩；另一面可激活垲氧诱导因子－１（ＨＩＦ－１），使其进入核内妄动低氧反应基因，引发平滑肌细胞一系列反应，如血管活性物质的生成及细胞收缩反应等。本就近几年国外有关研究进展作一综述。     

Na+/H+交换体与血管平滑肌细胞增殖

Na+ / H+ 交换体是存在于真核细胞的一种膜蛋白 ,调节细胞内 p H、Na+ 浓度 （p Hi、 [Na+ ]i） ,在血管平滑肌增生性疾病如高血压、血管成形术后等情况下活性增高 ,通过使细胞内碱化及细胞内 Na+浓度升高 ,起促进细胞增殖、减少细胞凋亡作用 ,从而促进血管平滑肌细胞增殖 ;多种血管活性因子通过激活 Na+ / H+交换体引起血管平滑肌细胞增殖 ,故推测 Na+ / H+交换体抑制剂在治疗血管平滑肌细胞增生性疾病中有广泛应用前景     

ERK信号通路在组胺诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖中的调控作用

目的本研究旨在探讨细胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated kinase,ERK）信号通路在组胺诱导的大鼠气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells,ASMCs）增殖中的调控作用。方法以体外分离、培养的ASMCs为研究对象,加入不同浓度组胺（histanmine,Hist）和PD98059对其进行处理,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）微量比色法检测Hist及ERK信号通路对ASMCs增殖的影响,Western blot检测ERK1／2、磷酸化ERK1／2（phosphorylated-ERK1／2,p-ERK1／2）蛋白的表达,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定ASMCs核内NF—κB水平,并对各组进行比较。结果低浓度和高浓度的Hist均能不同程度刺激ASMCs增殖,100μmol／L时细胞存活率达201．3％;Hist组ASMCs增殖反应与对照组相比显著增加,而Hist＋PD980059组ASMCs的增殖反应显著低于Hist组;Hist组ASMCs中的p-ERK1／2蛋白表达较正常对照组明显增强,在加入PD980059后Hist诱导的活化ERK1／2相对于Hist组表达显著下降;Hist处理组NF—κB吸光度值显著高于对照组,Hist＋PD98059组NF—κB吸光度值较Hist处理组显著降低。结论Hist可显著诱导ASMCs增殖,ERK信号通道在此调控中起重要作用,而且还可能参与ASMCs中Hist诱导的NF—κB活化。     

大电导钙激活钾通道结构与功能调节及其在疾病中的作用

正大电导钙激活钾通道(big-conductance Ca~(2+)-activated K+channel,BK通道)广泛表达于各种组织中,其激活具有钙和电压依赖性。激活血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)BK通道可引起膜电位超极化,舒张血管。BK通道由4个BK-α亚基和4个调节亚基组成,其中调节亚基包括β亚基(BK-β)或γ亚基(BK-γ)。研究表明,BK-β1亚基和     

肺动脉平滑肌细胞缺氧感受与反应

肺动脉平滑肌缺氧感受与反应是近年研究缺氧性肺血管收缩反应机制的一个热点,缺氧可减少肺动脉平滑肌细胞胞内活性氧产生,一方面可使细胞膜上钾通道关闭,膜电位降低,导致电压依赖性钙离子通道的开放,使胞浆内钙离子浓度升高、细胞收缩;另一面可激活缺氧诱导因子-1(HIF-1),使其进入核内启动低氧反应基因,引发平滑肌细胞一系列反应,如血管活性物质的生成及细胞收缩反应等。本文就近几年国外有关研究进展作一综述。     

内源性硫化氢在心血管疾病中的作用

硫化氢（H2S）作为一种有毒气体，人类认识和研究其作用已有300多年历史。直到上世纪90年代中期，人们发现包括人类在内的哺乳动物可代谢生成气体分子H2S，对神经系统特别是海马的功能具有调节作用，并可以调节消化道和血管平滑肌的张力，而其作用特点有别于另外两种气体信号分子NO及CO。最近研究证实，内源性H2S直接作用于KATP，通道实现对血管的调节作用；