神经酰胺诱导人结肠癌细胞凋亡的作用

目的 探讨外源性神经酰胺诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的作用。方法 采用噻唑兰(MTT)显色法、荧光显微镜、电镜观察以及通过免疫组化方法检测Fas、P53的表达情况。结果 神经酰胺对HT-29细胞的生长有明显抑制作用，并可诱导HT-29细胞产生凋亡，并随着神经酰胺浓度的增加，细胞凋亡率逐渐增加；Fas蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现逐渐升高的趋势，p53蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现降低的趋势。结论 神经酰胺能诱导HT-29细胞产生凋亡。     

肌醇六磷酸诱导HT-29细胞凋亡及相关基因表达

目的 研究肌醇六磷酸(IP6)对人结肠癌细胞系(HT-29)的凋亡诱导作用.方法 将不同浓度IP6以不同时间作用于HT-29细胞,运用透射电镜观察IP6对HT-29细胞凋亡作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;钙离子荧光探针(Fura-2/AM)法测定细胞内Ca²⁺浓度变化;RT-PCR法检测细胞内caspase-3 mRNA表达.结果 IP6诱导HT-29细胞发生凋亡的形态学变化为染色体固缩,可见凋亡小体;3.3mmol/L IP6作用6个月HT-29细胞凋亡率为4.4%,细胞内Ca²⁺浓度为38.66 mmol/L,与对照组比较明显升高(P<0.05);各IP6组Caspase-3mRNA表达均升高(P<0.05);IP6诱导HT-29细胞凋亡作用及Ca²⁺、Caspase-3mRNA的表达变化具有时间依赖关系.结论 IP6对HT-29细胞有诱导凋亡作用,其机制可能是通过调节细胞内Ca²⁺浓度及Caspase-3的表达来实现.     

神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的研究

目的探讨外源性神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞的凋亡作用及对Bcl-2家族蛋白基因表达的影响。方法不同浓度C2-神经酰胺处理HT-29细胞,采用Hoechest荧光染色和琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad和Bid基因表达水平。结果C2-神经酰胺诱导HT-29细胞发生核染色质断裂、出现凋亡小体等典型凋亡改变,50μmol/L神经酰胺作用12和24小时凋亡细胞率分别达到64·7%和81·3%。同时神经酰胺使Bax、Bad和Bid基因表达水平增高,使Bcl-2和Bcl-xl基因表达水平减弱,Bcl-2与Bax比值下降,呈现剂量-效应关系。结论外源性神经酰胺能通过上调或下调Bcl-2家族基因表达水平诱导人结肠癌HT-29细胞发生凋亡。     

金雀异黄酮对结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响

目的观察植物雌激素金雀异黄酮(GS)对人结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子生物学作用机制。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测GS对HT-29细胞增殖活力和细胞周期分布的影响;CellDeathELISA和流式细胞术从不同方面检测GS对HT-29细胞凋亡的影响;RT-PCR和Western-blot技术检测GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2和baxmRNA和蛋白质表达的影响。结果与对照组相比,在15~120μmol/L浓度范围内,GS能够抑制HT-29细胞增殖活力;降低S细胞分布比例,将细胞周期滞留在G2/M期;显著性诱导HT-29细胞凋亡(>30μmol/L,P<0.05),并呈现出良好的剂量-效应关系。检测GS对PCNA、bcl-2和bax表达的影响显示,GS能够抑制PCNA和bcl-2mRNA和蛋白质表达,对bax的表达则表现出促进作用。结论GS通过诱导HT-29细胞凋亡而抑制其增殖活力,这些效应与PCNA、bcl-2和bax的表达变化有关。这些资料可为结肠癌的早期预防提供膳食干预新途径,并为临床新药的开发提供新方案。     

异汉防己碱增强阿霉素诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨异汉防己碱增强阿霉素诱导耐阿霉素乳腺癌细胞系MCF-7/DOX凋亡的效应和机制。方法:采用MTT法检测异汉防己碱、阿霉素及两者联合对MCF-7/DOX细胞增殖的抑制作用,用流式细胞术定量分析MCF-7/DOX细胞的凋亡率,用Westem blot技术检测Bax及Bcl-2表达。结果:异汉防己碱可增强阿霉素对MCF-7/DOX细胞增殖的抑制作用,并可诱导细胞凋亡;异汉防己碱联合阿霉素可上调Bax表达,降低Bcl-2表达。结论:异汉防己碱联合阿霉素是通过上调Bax/Bcl-2比值而增强阿霉素诱导癌细胞凋亡的作用。     

丁酸诱导结肠癌细胞凋亡机制的实验研究

目的:探讨膳食纤维在结肠中的酵解产物丁酸(butyrate)诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制.方法:人传代结肠癌细胞株SW1116经不同浓度(0、2、3、4、7和10 mmol/L)丁酸处理后,在不同时段(6、24、48和72 h)分别收集细胞,用RT-PCR和Western Blotting检测肿瘤细胞bcl-2和bax基因及其蛋白表达的变化,并用流式细胞仪和荧光定量法分别测定其p53蛋白浓度和caspase-3活性的变化.结果:实验过程中,肿瘤细胞的bcl-2 mRNA及其蛋白均无表达,但随着培养液中丁酸浓度的不断增加和培养时间的延长,其bax mRNA及其蛋白的表达则逐渐增强,同时伴有p53蛋白浓度和caspase-3活性的增加.结论:丁酸以p53依赖方式通过上调肿瘤细胞bax mRNA及其蛋白的表达而诱导SW1116细胞凋亡.     

石蒜碱通过Mek/Erk信号通路诱导自噬抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨石蒜碱对肝癌细胞增殖及自噬的影响,并分析其机制。方法 采用CCK-8法分析石蒜碱对肝癌细胞增殖的抑制作用,MDC 染色法检测石蒜碱对HepG-2细胞自噬的影响,Western blot检测石蒜碱对HepG-2细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3 II、Mek/Erk信号通路关键因子Mek、Erk蛋白的影响,运用自噬抑制剂（3-MA）研究自噬对细胞增殖的影响。数据通过用SPSS 19.0进行统计分析。结果 CCK-8结果提示石蒜碱对肝癌HepG-2细胞的增长具有抑制作用（F=87.362,P<0.001）;MDC 染色法显示石蒜碱促进自噬小泡的形成。Western blot结果显示石蒜碱上调Beclin-1、LC3 II水平抑制自噬,下调Mek、Erk2磷酸化水平（p-Mek、p-Erk2）抑制HepG-2细胞增殖,差异均有统计学意义（F=25.571, P<0.001;F=315.002,P<0.001;F=35.481,P<0.001;F=150.103,P<0.001）;与100μmol/L石蒜碱组相比,3-MA+石蒜碱组LC3II蛋白水平明显下调,p-Mek、p-Erk2蛋白水平明显上调（t=5.988,P=0.004;t=2.883,P=0.045;t=4.157,P=0.014）。结论 一定浓度的石蒜碱能抑制肝癌HepG-2细胞增殖,可能与调控Mek/Erk信号通路诱发自噬有关。     

重复加热对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨连续10d加热后残留的HepG2细胞的凋亡率改变及Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达变化。方法HepG2细胞经43℃加热,每次80m in,2次/d,共10个循环后,检测其细胞凋亡率、Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达。结果热处理前、后HepG2细胞的凋亡率分别为(9.0%±0.8%)、(5.8%±1.3%)(P<0.05);热处理后HepG2细胞的Bax基因/蛋白的表达无明显变化,但Bc l-2基因/蛋白的表达增强,且Bc l-2/Bax比值的增加。结论热处理后HepG2细胞的凋亡率降低与其Bc l-2基因/蛋白的强表达及Bc l-2/Bax比值的增加有关。     

肌醇六磷酸诱导人结肠癌细胞系HT-29细胞分化的实验研究

目的使用不同浓度的肌醇六磷酸(IP6)作用于人结肠癌细胞系HT-29,观察IP6对癌细胞分化的影响,并对其机制进行探讨。方法将不同浓度的IP6(对照,1.8mmol/L,3.3mmol/L)作用HT-29细胞不同时间(1d,3d,5d),分别进行如下研究:(1)使用透射电镜观察细胞超微结构的改变;(2)测定碱性磷酸酶比活性;(3)应用RT-PCR法检测细胞内c-Myc基因的表达;(4)使用免疫细胞化学法检测细胞内Rb蛋白的表达。结果(1)3.3mmol/LIP6持续作用后,透射电镜下可以观察到细胞结构发生改变,出现核固缩、细胞器丰富、微绒毛增多等分化趋势;(2)IP6作用HT-29细胞后,碱性磷酸酶比活性明显增强;(3)RT-PCR结果显示,与对照组相比,各浓度IP6均能使细胞内c-Myc mRNA的表达减少(P<0.05);(4)IP6能够上调Rb蛋白的表达(P<0.05)。结论IP6能够促使HT-29细胞向正常细胞转化。IP6可能通过上调Rb蛋白的表达,下调c-Myc蛋白的表达,阻滞细胞周期,诱导细胞分化而发挥其抗肿瘤作用。     

氡染毒诱导小鼠肺组织细胞凋亡的机制研究

目的 研究氡诱发小鼠肺细胞凋亡的机制。方法 建立氡染毒小鼠模型,将小鼠分为氡吸入染毒不同剂量组(0.02、30和60WLM)和不同时间段组(24h、30d和90d);采用TUNEL法检测小鼠肺组织细胞凋亡程度;采用免疫组化法,检测各组肺组织p53蛋白及Bcl-2/Bax表达情况。结果 与对照组相比,氡吸入染毒组小鼠肺组织随着剂量的增加和染毒后时间的延续凋亡细胞逐渐增多;免疫组化结果显示,随着染毒剂量的增加和染毒后随着时间的延续,小鼠肺组织中的p53蛋白表达量明显升高,在染毒后30d和90d时达到峰值;Bcl-2/Bax值则明显下降。结论 氡染毒诱发小鼠肺细胞凋亡与p53和Bcl-2/Bax通路密切相关。     

鞘氨醇对人结肠癌细胞的抑制作用

目的 研究鞘氨醇对人结肠癌细胞的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)、细胞核分裂指数和3H-TdR掺入试验方法，所设剂量鞘氨醇分别为0，0．82，1．63，3．125，6．25，12．5μmol／L，以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照。结果 鞘氨醇对HT-29细胞的生长有明显抑制作用。在MTT试验中，不同浓度鞘氨醇对HT-29细胞的7d抑制率分别为18％，45％，72％，87％和89％；在核分裂指数试验中，随着鞘氨醇剂量的增高，其核分裂指数明显降低；在^3H-TdR掺入试验中。可见随着鞘氨醇剂量的增高，^3H-TdR掺入到HT-29细胞中明显的减少，与阴性对照组相比有显著性差异。结论 鞘氨醇对HT-29细胞的生长增殖有明显抑制作用，这可能是鞘磷脂抑制结肠癌的机制之一。     

C_2-神经酰胺所致HT-29细胞凋亡中线粒体的变化

目的探讨外源性C2-神经酰胺所致HT-29细胞凋亡中线粒体的变化。方法C2-神经酰胺作用人结肠癌HT-29细胞,采用透射电镜观察细胞线粒体超微结构的变化;采用Mitochondrial Apoptosis Detection Kit和流式细胞仪检测细胞凋亡时线粒体损伤及其膜电位的变化。结果C2-神经酰胺作用HT-29细胞24h,线粒体发生空泡化、变性、嵴肿胀或消失等形态学改变;此时荧光显微镜下可观察到线粒体聚集,发出红色荧光,而正常细胞线粒体发出绿色荧光。C2-神经酰胺作用细胞6h,线粒体膜电位即开始降低,呈时间-剂量-效应关系;结论线粒体参与C2-神经酰胺诱导HT-29细胞凋亡作用。     

γ-生育三烯酚对人结肠癌HT-29细胞中DNA损伤作用的研究

目的探讨γ-生育三烯酚对结肠癌细胞中DNA的损伤作用。方法γ-生育三烯酚与结肠癌HT-29细胞共培养，采用单细胞电泳法检测γ-生育三烯酚对HT-29细胞中DNA的损伤程度。结果γ-生育三烯酚对人结肠癌细胞株HT-29细胞中DNA分子有较大程度的损伤，且与处理的浓度存在一定的相关性。结论卜生育三烯酚对结肠癌细胞具有很强的细胞毒作用，在γ-生育三烯酚作用下HT-29细胞的DNA断裂损伤增加，可能就是γ-生育三烯酚抗肿瘤效应的重要作用机制之一。     

海马硬化型颞叶癫痫患者神经细胞凋亡的研究

目的探讨海马硬化型颞叶癫痫患者海马神经细胞的凋亡及凋亡相关基因的表达。方法癫痫组为15例颞叶癫痫患者手术切除的颞叶病灶,对照组为6例脑外伤内减压术中切除的颞叶脑组织,应用HE染色、原位末端标记（TUNEL）染色及免疫组织化学染色等方法来检测神经细胞凋亡状态及凋亡相关基因bcl-2、bax及半胱氨酸蛋白酶（caspase）-3蛋白的表达。结果对照组及癫痫组HE染色均未发现凋亡的神经细胞;TUNEL染色对照组未见阳性细胞,而癫痫组发现较多的染色阳性细胞,100个染色细胞中阳性细胞数为（4．39±2．04）个。免疫组织化学染色结果表明,对照组患者脑组织内bcl-2蛋白无表达,癫痫组15例均可见bcl-2蛋白表达明显增强[100个染色细胞中阳性细胞数为（6．72±3．36）个],两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;bax蛋白在癫痫组与对照组中均轻微表达,两组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组有2例检测到caspase-3蛋白的表达,而癫痫组有14例caspase-3蛋白表达明显,100个染色细胞中阳性细胞数分别为（1．07±0．43）,（9．54±3．68）个,两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论神经细胞凋亡是导致海马硬化的重要原因,bcl-2、caspase-3参与了这一过程并发挥了重要作用。     

Induction of apoptosis in HT-29 colon cancer cells by phloretin

Phloretin, which is present in apples and pears, has been found to inhibit the growth of several cancer cells and induce apoptosis of B16 melanoma and HL60 human leukemia cells. The present study examined whether and how phloretin induces apoptosis of HT-29 human colon cancer cells. Phloretin (0-100 micromol/L) substantially decreased viable cell number and induced apoptosis of HT-29 cells in a dose-dependent manner. Western blot analysis of total cell lysates revealed that phloretin increased the protein levels of Bax but had no effect on Bcl-2. In addition, phloretin induced cleavage of caspase-8, -9, -7, and -3 and poly(ADP-ribose) polymerase. Furthermore, phloretin increased the levels of cytochrome c and Smac/Diablo in the cytosol. The present results indicate that phloretin inhibits HT-29 cell growth by inducing apoptosis, which may be mediated through changes in mitochondrial membrane permeability and activation of the caspase pathways.     

二甲基甲酰胺致人肝细胞凋亡及其对Bcl-2及Bax和Caspase-3表达的影响

目的 初步探讨二甲基甲酰胺(DMF)对正常成人肝细胞的致凋亡作用和对Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响.方法 以终浓度为0、50、100、150、200mmol/L的DMF作用于正常成人肝细胞12 h后,应用流式细胞术和western blotting法检测细胞凋亡率及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的变化.结果 与阴性对照组比较,各DMF剂量组凋亡率明显上升,差异有统计学意义(P＜0.01).随着染毒剂量的增加,肝细胞凋亡率上升,呈现剂量-反应关系.且染毒后随着DMF剂量的增加,Bcl-2表达水平下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,Bax 表达水平无明显变化,Bcl-2/Bax比值随着DMF剂量增加而下降,200mmol/L剂量组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).在DMF150、200mmol/L剂量组可见到Caspase-3切割活化.结论 DMF可诱导肝细胞发生凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax比值表达下调、Caspase-3发生切割活化有关.