姜黄素对人骨肉瘤细胞株/阿霉素多药耐药逆转作用的实验研究

目的观察姜黄素对多药耐受糖蛋白(P-gp)介导的人骨肉瘤细胞株/阿霉素(U-2OS/ADM)细胞多药耐药(MDR)的逆转作用。方法以阿霉素为诱导药物,人骨肉瘤细胞系U-2OS为诱导对象,采用大剂量冲击法建立人骨肉瘤多药耐药细胞系模型(U-2OS/ADM),采用MTT法检测姜黄素作用于U-2OS/ADM细胞前后对化疗药物的逆转;流式细胞仪检测细胞内罗丹明-123积聚和外排的影响。结果 MTT显示姜黄素20μmol/L能增加不同浓度阿霉素对U-2OS/ADM细胞的抑制作用(P<0.01),且姜黄素对阿霉素为2.0μg/ml时的U-2OS/ADM细胞抑制作用增加幅度达49%。FCM结果显示,姜黄素能增加阿霉素对U-2OS/ADM的细胞毒性作用,且呈剂量依赖关系。结论姜黄素可有效逆转U-2OS/ADM细胞的多药耐药现象的作用。     

MS-275与表阿霉素合用对乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275和表阿霉素联用诱导乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期阻滞和细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7;应用MTT法检测表阿霉素单用以及和MS-275联用对细胞存活率的影响;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot分析P21、P53蛋白表达的差异。结果:MS-275和表阿霉素合用较表阿霉素单用能明显降低乳腺癌细胞的存活率,增加细胞的凋亡率,具有剂量的依赖性。单用表阿霉素可以使P21、P53蛋白上调,MS-275和表阿霉素合用较单用两种蛋白上调更加明显。结论:MS-275和表阿霉素合用较单用能增加对乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒性。其机制可能和MS-275预处理使染色质的构象发生改变,加强了表阿霉素诱导的P21和P53的表达有关。     

5b对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7ADR的耐药逆转作用

目的研究板蓝根活性单体-5b逆转乳腺癌耐药株MCF-7/ADR细胞的作用及逆转机理。方法选取人乳腺癌MCF-7细胞及耐药株MCF-7/ADR细胞作为主要研究细胞,在2种细胞中加入活性单体-5b,采用MTT法观察活性单体-5b对多药耐药(MDR)逆转作用;采用FCM法观察阿霉素对2种细胞的抑制浓度及倍数。结果当活性单体-5b的剂量低于150μmol/L时,其对2种细胞无毒性作用;活性单体-5b能提高MCF-7/ADR细胞的凋亡率;活性单体-5b能增加阿霉素在体内的积累。结论活性单体-5b对MCF-7/ADR细胞的MDR具有一定的逆转作用,是一种有效的乳腺癌化疗增敏剂。     

表阿霉素和阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡研究

目的探究表阿霉素和阿霉素对人肝细胞凋亡的诱导作用,从而为临床治疗上提供可靠的依据。方法选取适量的表阿霉素对人的肝细胞进行相应的培养,同时使用阿霉素也进行同样的细胞培养,用相关的仪器来判断两种药物对细胞凋亡的诱导情况。结果表阿霉素对人体肝癌细胞的凋亡的数量大于阿霉素对人体肝癌细胞的凋亡数量,而且表阿霉素相对于阿霉素来说,对人体产生的副作用较小。结论表阿霉素这种药物对人体的肝癌细胞的凋亡数量更多,有较为显著的效果。     

表阿霉素对乳腺癌患者心电图影响的实验研究

目的考察表阿霉素对乳腺癌患者心电图的影响。方法 60名乳腺癌患者按照年龄分为两组,≤40岁30例为观察组1,>40岁30例为观察组2,均采用以EPI为主的化疗方案,分析造成乳腺癌患者心电图改变的相关因素。结果两组在101～200、201～300、301～400、>400 mg/m2等4种计量指标上有显著性差异(p<0.05);组1心电图异常率为19.9%,组2心电图异常率为60.1%,组2的心电图异常发生率高于组1,两者有显著性差异(p<0.05)。结论 EPI的剂量的多少和患者的年龄都是造成乳腺癌患者心电图发生异常改变的因素。     

异汉防己碱增强阿霉素诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨异汉防己碱增强阿霉素诱导耐阿霉素乳腺癌细胞系MCF-7/DOX凋亡的效应和机制。方法:采用MTT法检测异汉防己碱、阿霉素及两者联合对MCF-7/DOX细胞增殖的抑制作用,用流式细胞术定量分析MCF-7/DOX细胞的凋亡率,用Westem blot技术检测Bax及Bcl-2表达。结果:异汉防己碱可增强阿霉素对MCF-7/DOX细胞增殖的抑制作用,并可诱导细胞凋亡;异汉防己碱联合阿霉素可上调Bax表达,降低Bcl-2表达。结论:异汉防己碱联合阿霉素是通过上调Bax/Bcl-2比值而增强阿霉素诱导癌细胞凋亡的作用。     

乳腺癌细胞耐药机理及药物逆转的实验研究

目的:探讨乳腺癌早期耐药的机理,并寻求药物耐药逆转的方法。方法:采用流式细胞术检测经低浓度的阿霉素处理后的乳腺癌细胞系MCF7的多药耐药蛋白(MRP)和P糖蛋白(Pgp)表达,探讨耐药发生机制。用MTT比色法检测利多卡因与抗肿瘤药物合用后对抗肿瘤药物的增敏作用。结果:经低浓度阿霉素处理后,MRP表达明显增加,并随时间延长而进一步增加,而Pgp表达无明显增高。利多卡因在本身没有毒性的浓度下(2 mg/m l),与3种化疗药物合用后降低了3种化疗药物的半数抑制浓度,单用药物分别为(76.3±3.63)mg/L、(7.9±1.2)mg/L、(15.6±1.1)mg/L,合用分别为(10.5±2.9)mg/L、(1.97±0.62)mg/L、(3.32±0.8)mg/L,差异显著(P<0.01)。结论:MRP在肿瘤细胞早期耐药性起主要作用。利多卡因作为钙调蛋白阻制剂,在体外能有效逆转MRP引起的多药耐药,为进一步应用于临床提供理论依据。     

紫杉醇与多西紫杉醇分别联合阿霉素治疗乳腺癌的临床分析

目的：比较两种紫衫烷类（紫杉醇、多西紫杉醇）化疗药物分别联合阿霉素治疗乳腺癌患者的疗效及安全性。方法：45例乳腺癌患者随机分为两组,治疗组23例患者给予多西紫杉醇与阿霉素．对照组22例患者给予紫杉醇与阿霉素,每三周一个疗程,共完成4个疗程。结果：研究组与对照组总有效率分别为82．6％和54．5％（P〈0.05）,二者不良反应均无显著性差异（P〉0.05）。结论：多西紫杉醇联合阿霉素治疗对乳腺癌患者疗效明显,值得临床推广使用。     

沉默长链非编码PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响

目的探究沉默长链非编码RNA (lncRNA) PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素(ADM)耐药性的影响。方法 qRTPCR实验检测PCAT-1的mRNA表达水平;通过小RNA干扰技术下调MCF7细胞中PCAT-1的表达,CCK-8和MTT实验检测MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的活性; TUNEL实验检测MCF7/ADM细胞凋亡。结果 PCAT-1在乳腺癌组织和MCF7细胞中的mRNA表达水平明显高于癌旁组织和人乳腺上皮细胞MCF10A。PCAT-1在MCF7/ADM细胞的mRNA表达水平明显高于MCF7细胞。沉默PCAT-1可以促进ADM对MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的抑制作用。沉默PCAT-1能够增强ADM诱导的MCF7/ADM细胞的凋亡。此外,沉默PCAT-1可以促进Bax的表达,抑制Bcl-2和PCNA的表达。结论沉默PCAT-1增强ADM对乳腺癌细胞的毒性作用。     

E-钙黏蛋白与miR-200c在MCF-7/ADR及乳腺癌组织的表达研究

目的探讨乳腺癌耐药株中E-钙黏蛋白（E-cadherin）和miR-200c的表达,以及E-cadherin表达与新辅助化疗疗效的关系。方法应用定量RT-PCR方法检测人乳腺癌细胞株MCF-7和阿霉素耐药株MCF-7/ADR中E-cadherin、Twist1以及miR-200c表达,采用免疫组化法检测82例乳腺癌患者新辅助化疗前组织E-cadherin表达。结果与MCF-7相比,E-cadherin在MCF-7/ADR中表达明显降低（P=0.01）,Twist1在MCF-7/ADR中表达明显升高（P〈0.01）,miR-200c在MCF-7/ADR表达较MCF-7显著下降（P〈0.01）。结论 E-cadherin和miR-200c表达下调参与乳腺癌阿霉素耐药,可能是逆转乳腺癌耐药的潜在治疗靶点。     

用MCF-7细胞检测有机磷农药拟雌激素样活性

目的 观察常用有机磷农药对MCF-7细胞增殖以及对雌激素受体基因和pS2基因表达的影响。方法 选用乐果、乙酰甲胺磷、久效磷、马拉硫磷、对硫磷、对氧磷6种有机磷农药进行MCF-7人乳腺癌细胞增殖实验和转录活化实验。结果 6种有机磷农药不能诱导MCF-7人乳腺癌细胞增殖,但乐果却能使pS2基因表达上调。结论 乐果可能具有拟雌激素样活性,且引起pS2基因表达上调不通过雌激素受体介导。     

乳腺癌耐受蛋白的表达与5-氟尿嘧啶耐受的相关性研究

目的 筛选乳腺癌耐受蛋白(BCRP)介导的耐受药物,探讨BCRP的表达与耐受药物的相关性.方法 采用已成功建立的BCRP表达细胞模型,经细胞存活实验(MTr法)筛选出BCRP介导的耐受药物,并利用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内残留耐受药物的相对含量;运用荧光定量逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法(IHC)检测140例临床乳腺癌组织标本中BCRP的表达,同时利用MrIT法研究临床组织标本对耐受药物的化学敏感性;采用单项方差统计学检验方法分析临床乳腺癌组织中BCRP的表达与药物耐受的相关性.结果 MTT实验结果显示,细胞对5.氟尿嘧啶(5-Fu)的耐药指数随着BCRP表达的升高而增加,达到10.58倍(P＜0.05,n=3).HPLC实验证实BCRP的表达与细胞内残留的5-Fu呈显著的负相关性(r=-0.897,P＜0.05).140例临床乳腺癌组织标本中,BCRP阳性表达率为33%(47/140).BCRP阳性表达的乳腺癌组织对5-Fu的耐药指数是正常癌旁组织的7-12倍,BCRP的表达与5-Fu的耐受具有正相关性(R2=0.8124,P＜0.01).结论 BCRP的表达与5-Fu的药物耐受具有显著的相关性,研究结果有助于BCRP阳性;表达的乳腺癌病人化疗方案的制订和优化.     

来曲唑与三苯氧胺对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP生长及耐药的影响

目的:研究来曲唑(letrozole,LTZ)与三苯氧胺(tamoxifen,TAM)对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP生长及耐药的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,比较不同浓度的LTZ、TAM、LTZ+TAM对SKOV3/DDP细胞生长及对顺铂(cisplatin,DDP)耐药的逆转作用。结果:①不同浓度(1×10-9mol/L～1×10-4mol/L)LTZ或低浓度(1×10-9mol/L～1×10-7mol/L)TAM对SKOV3/DDP细胞生长无抑制,不能逆转DDP引发的耐药。高浓度(1×10-6mol/L～1×10-4mol/L)TAM能抑制SKOV3/DDP细胞的生长且能逆转DDP引发的耐药,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②1×10-6mol/L TAM与各浓度(1×10-9mol/L～1×10-4mol/L)LTZ联合用药,对该细胞的生长抑制作用及逆转DDP引发的耐药较单用1×10-6mol/L TAM无明显增强,差异无统计学意义(P>0.05);(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)TAM与各浓度(1×10-9 mol/L～1×10-4 mol/L)LTZ联合用药,在LTZ为(1×10-6 mol/L～1×10-4 mol/L)时,两药联合对该细胞的生长抑制作用与单用TAM(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)及组间相比差异有统计学意义(P<0.01);在LTZ为(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)时,两药联合逆转DDP引发的耐药与单用TAM(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)逆转及组间相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:高浓度TAM可以逆转SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药性;高浓度LTZ与TAM联合可使TAM逆转SK-OV3/DDP细胞对DDP耐药的作用增强。     

MCF-7耐米托蒽醌细胞株甲基化结合蛋白表达

目的研究乳腺癌细胞(MCF-7)经米托蒽醌诱导耐药后其甲基化结合蛋白(Methyl-DNA-binding protein,MBD)的表达变化, 并分析在MCF-7细胞经诱导产生多药耐药性中与甲基化结合蛋白的关系。方法利用耐米托蒽醌的MCF-7耐药株, 并用未染毒的野生型MCF-7为对照,通过蛋白印迹法检测不同浓度米托蒽醌处理的细胞组乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)和甲基化结合蛋白MBD1、MBD2及MBD4的蛋白表达水平。结果跟野生型MCF-7比较, 随着染毒浓度的增大, 乳腺癌耐药蛋白BCRP的表达逐渐增加, 而MBD1、MBD2、MBD4的表达均呈降低趋势, 且MBD4的降低尤为明显, 与对照组比较, 其MBD4蛋白表达水平分别为(0.910±0.049)、(0.835±0.065)、(0.708±0.082)、(0.660±0.145)(P<0.05)。结论在米托蒽醌诱导产生耐药的MCF-7细胞株中, MBDs的表达, 尤其是MBD4, 有可能参与了肿瘤耐药的形成。     

Effects of retinoic acid isomers on apoptosis and enzymatic antioxidant system in human breast cancer cells

Retinoic acids (RAs) modulate growth, differentiation, and apoptosis in normal, pre-malignant & malignant cells. In the present study, the effects of RA isomers (all-trans RA, 13-cis RA, and 9-cis RA) on the cell signal transduction of human breast cancer cells have been studied. The relationship between RAs and an enzymatic antioxidant system was also determined. Estrogen-receptor (ER) positive MCF-7 and ER-negative MDA-MB-231 human breast cancer cells were treated with different doses of each RA isomers, all-trans RA, 13-cis RA, or 9-cis RA. Treatment of RA isomers inhibited cell viability and induced apoptosis of MCF-7 cells as a result of increased caspase activity in cytoplasm and cytochrome C released from mitochondria. All-trans RA was the most effective RA isomer in both cell growth inhibition and induction of apoptosis in MCF-7 cells. However, no significant effect of RA isomers was observed on the cell growth or apoptosis in ER-negative MDA-MB-231 cells. In addition, activities of antioxidant enzymes such as catalase and glutathione peroxidase were decreased effectively after treatment of RA in MCF-7 cells, whereas SOD activity was rarely affected. Thus, the present data suggest that all-trans RA is the most potential inducer of apoptosis and modulator of antioxidant enzymes among RA isomers in MCF-7 human breast cancer cells.     

雌二醇与不同孕激素联合对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨雌二醇/孕激素联合方案对人乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7/PGRMC1(WT-12)增殖的影响。方法 MCF-7细胞,用表达PGRMC1的质粒稳定转染到MCF-7细胞,使其成为MCF-7/WT-12乳腺癌细胞。雌二醇浓度(10-10M,10-12M,10-14M)与孕酮、合成孕激素安宫黄体酮、炔诺酮序贯联合加入上述两种人乳腺癌细胞进行培养6天,MTT法分别测定MCF-7、MCF-7/WT-12肿瘤细胞的生长增殖情况。结果单纯雌二醇在高浓度10-10M下,明显刺激细胞生长,这种生长不受加入各种孕激素的影响。单纯雌二醇在低浓度下10-12M、10-14M下对MCF-7及MCF-7/WT-12细胞刺激增殖作用轻微或没有明显刺激细胞增殖的作用,然而,加用炔诺酮则可激发细胞明显的增殖反应,而增加安宫黄体酮和孕酮则显示中性作用,无激发反应。MCF-7/WT-12细胞的增殖反应更明显。结论雌二醇在表达孕激素受体膜组分1(progesterone receptor membrane component 1,PGRMC1)的MCF-7细胞中能明显诱发细胞增殖的增加,且表现为剂量依赖性。在低的雌二醇浓度下,某些孕激素可能启动了一种强增殖信号。关于HRT低剂量雌二醇致乳腺癌风险增加的可能性,可能与用某些特殊的孕激素有关。     

枸橼酸芬太尼对人乳腺癌MCF-7细胞MMP-2及MMP-9表达的影响

目的:探讨枸橼酸芬太尼对人乳腺癌MCF-7细胞MMP-2和MMP-9表达的影响。方法:以MCF-7细胞为对象,分别加入0、0.000 1、0.01、1μmol/L的枸橼酸芬太尼干预48 h,RT-PCR检测MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果:MCF-7细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达随着枸橼酸芬太尼浓度的增加而减少,0.01及1μmol/L枸橼酸芬太尼组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。枸橼酸芬太尼呈浓度依赖性抑制MCF-7细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达,各浓度实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:芬太尼可抑制MCF-7细胞MMP-2及MMP-9的表达,该作用可能是芬太尼降低人乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的分子机制之一。