艾烟可吸入颗粒物对肺腺癌A549细胞凋亡的影响

  目的  探讨PM_2.5暴露对人支气管上皮细胞（16-HBE）炎症反应的影响。  方法  2018年12月选择辽宁省沈阳市黄河北大街为采样地点收集空气中的细颗粒物,用浓度为12.5、25、50和100 μg/mL PM_2.5分别处理16-HBE细胞0、6、12和24 h,采用CCK-8检测16-HBE细胞活性。酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中白介素 – 1（IL-1）、白介素 – 6（IL-6）、肿瘤坏死因子 – α（TNF-α）、基质金属蛋白酶 – 9（MMP-9）的变化水平,荧光探针法检测细胞活性氧（ROS）相对水平,免疫印迹（WB）法检测细胞蛋白核因子E2相关因子2（Nrf2）和核因子 – KB（NF-κB）通路中的IKK和P65的水平。  结果  PM_2.5能够诱导人支气管上皮细胞增殖活性的降低和炎症反应的发生,且具有时间依赖性和剂量依赖性。  结论  PM_2.5暴露通过ROS-Nrf2/Nf-kb信号通路诱导人呼吸道上皮细胞数量的减少和炎症反应的发生。     

青蒿琥酯联合热疗诱导肺腺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨青蒿琥酯联合热疗诱导肺腺癌A549细胞凋亡的线粒体途径作用机制。方法 150μmol/L青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗(43℃,1h)作用A549细胞24h,流式细胞技术检测细胞周期和凋亡率情况。荧光显微镜观察线粒体膜电位变化。免疫组化、western blot检测细胞色素c、Bcl-2和caspase-3表达,CaspACETM检测试剂盒检测活性caspase-3表达。结果 青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗作用A549细胞24h后,G0/G1期细胞数增多,S期和G2/M期细胞数减少(P<0.01);凋亡率分别是16.77%和28.90%(P<0.01)。线粒体膜电位下降率分别为18.05%,50.98%(P<0.01)。细胞色素c蛋白、caspase-3表达增加而Bcl-2蛋白表达减少(P<0.01)。活性caspase-3蛋白水平增加A值分别为0.2641±0.0027,0.3613±0.0019,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,激活线粒体途径可能是诱导凋亡重要作用机制。     

玉米紫色植株色素体外诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的初步研究

[目的]研究玉米紫色植株色素(PMPP)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。[方法]MTT法比较不同浓度的PMPP对体外培养的肺癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,同时应用倒置显微镜观察凋亡细胞的形态学特征。[结果]不同浓度PMPP溶液对A549细胞的增殖均有抑制作用,浓度为50mg/ml时的抑制率最大,约为85.35%。形态学表现为单位视野内细胞数量明显减少,细胞间隙增大,细胞体积明显缩小,细胞失去原有的形态,胞体皱缩变圆,出现膜发泡现象。流式细胞术结果表明,当PMPP浓度为40mg/ml时,处于S期的肿瘤细胞增多,凋亡率为41.52%。[结论]玉米紫色植株色素可通过诱导部分细胞凋亡抑制人肺腺癌A549细胞增殖。     

Orai1和STIM1在姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡中的作用

目的探讨不同浓度姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡中Orai1和STIM1mRNA水平的改变。方法 A549细胞分别暴露于5、10、15、20、25和30μmol/L姜黄素12、24和48 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活力;将不同浓度姜黄素孵育A549细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;real-time PCR确定25μmol/L姜黄素处理24 h后,Orai1和STIM1mRNA表达水平。结果姜黄素对A549细胞的抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性,不同浓度姜黄素处理A549细胞24 h细胞存活率分别为96.5%、95.0%、77.4%、63.9%、57%、39.6%,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。姜黄素处理后,流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P0.05或P0.01)。经姜黄素处理后A549细胞Orai1和STIM1mRNA表达量均明显低于对照组(P0.01)。结论姜黄素可能引起A549细胞Orai1和STIM1 mRNA表达水平发生改变,通过下调Orai1和STIM1mRNA表达量引起细胞凋亡。     

MMP-9ASODN对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响及其机制初步探讨

目的 探讨基质金属蛋白酶-9反义寡核苷酸(MMP-9ASODN)对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其机制.方法 MTT法检测MMP-9ASODN转染对A549细胞生长增殖的影响;流式细胞术检测MMP-9ASODN转染对A549细胞周期和凋亡比率的影响;RT-PCR法与Western blot法分别检测MMP-9ASODN转染对A549细胞内MMP-9mRNA及蛋白表达的影响.结果 在一定范围内,MMP-9ASODN对A549细胞生长抑制呈浓度和时间依赖性,反叉寡核苷酸浓度为600 nmo/L作用48 h时其抑制作用最明显;MMP-9ASODN转染A549细胞48 h后G1期细胞数明显增多,S期细胞数明显减少,G2期细胞数则无明显变化,其凋亡百分比明显升高;与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);细胞内MMP-9mRNA及其蛋白的相对表达量明显低于对照组(P＜0.01).结论 MMP-9ASODN转染能够有效能够抑制肺腺癌A549细胞的增殖同时诱导其凋亡,其机制可能是通过下调MMP-9mRNA及蛋白的表达.     

二十碳五烯酸联合依托泊苷对人肺腺癌A-549细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究二十碳五烯酸(EPA)联合依托泊苷对人肺腺癌A-549细胞株增殖与凋亡的影响.方法 分别用终浓度为40 μg/ml EPA、10 μg/ml依托泊苷、40 μg/ml EPA+ 10μg/ml依托泊苷、20μg/ml依托泊苷、40 μg/ml EPA+ 20μg/ml依托泊苷孵育A-549细胞,采用MTT法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭双染法、吖啶橙/溴化乙锭双染法及流式细胞术研究细胞增殖抑制率、细胞形态学及凋亡情况.结果 EPA联合依托泊苷对A-549细胞的增殖抑制率显著高于依托泊苷单独的作用(P均＜0.05).细胞荧光染色显示:EPA联合依托白苷组的凋亡细胞数量多于依托泊苷单独作用组.EPA联合依托泊苷组的S期及G2/M期细胞显著多于依托泊苷单独作用的细胞(P均＜0.05).结论 EPA可能具有增强依托泊苷抑制人肺腺癌A-549细胞增殖、促进A-549细胞凋亡的作用.     

纳米/微米SiO2颗粒致肺腺癌A549细胞 炎性反应因子的变化

摘要:目的　探讨纳米/微米SiO2颗粒单独及复合暴露对A549细胞的炎性反应的影响。方法　采用体外细胞培养的方式,建立人肺腺癌细胞A549与纳米/微米SiO2单独、复合暴露模型。以染毒浓度为6.25、25.0及100 μg/ml分别为实验的低、中、高剂量组,一次性染毒24 h后,通过ELISA法检测细胞上清液中炎性反应因子IL-6、IL-8及TNF-α水平的变化。结果　各低、中、高剂量下,纳米/微米单独或复合暴露均可引起A549细胞上清液中炎性反应因子IL-6、IL-8及TNF-α水平升高,且存在剂量-反应关系（P＜0.05）。3个指标总体均呈现单独暴露组之间纳米组细胞上清液中炎性反应水平高于同剂量微米组（P＜0.05）;两种粒径纳米SiO2颗粒相比,同浓度30 nm组对细胞炎性损伤作用较50 nm组高（P＜0.05）;复合暴露组细胞炎性反应水平高于同剂量单独暴露组（P＜0.05）的趋势。结论　纳米/微米SiO2颗粒单独或复合暴露均可引起人肺腺癌细胞A549内炎性反应因子的释放,产生炎性损伤。     

抗菌肽merecidin通过ERK/mTOR 信号通路对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨抗菌肽merecidin通过ERK/mTOR 信号通路对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 实验分为对照组Control、抗菌肽Merecidin干预组和雷帕霉素Rapamycin干预组。通过CCK-8 法检测A549细胞的增殖能力,通过流式细胞术检测A549细胞凋亡和周期,通过平板划痕试验和Transwell检测A549细胞的迁移和侵袭能力,通过 Western blot 法检测A549细胞中MAPK1、MEK2、mTOR、PRAS40、EIF4EBP1 磷酸化蛋白的表达量。结果 抗菌肽merecidin能够明显抑制A549的增殖能力,处理24 h后的 IC50值为10.01 μmol /L(P<0.05)。与control组比较,抗菌肽merecidin处理后促进细胞凋亡(P<0.05),阻滞细胞周期于S期(P<0.05),细胞的迁移及侵袭能力均降低(P<0.05)。同时抗菌肽merecidin可抑制p-MAPK1和p-MEK2蛋白的表达,并且降低了mTOR、PRAS40和EIF4EBP1 的磷酸化水平(P<0.05)。结论 抗菌肽merecidin可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,该作用可能与其抑制ERK/mTOR通路有关。     

蓖麻毒素引起HeLa细胞凋亡和细胞周期G_2/M期阻滞

目的　蓖麻毒素与HeLa细胞共培养 ,观察蓖麻毒素引起细胞毒性死亡规律及对细胞周期的影响。方法　噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞毒性 ,流式细胞分析仪分析细胞周期。结果　 10 -3μmol·L-1蓖麻毒素即可引起HeLa细胞死亡 ,随着蓖麻毒素浓度的升高 ,其细胞毒性增大 ,10 μmol·L-1蓖麻毒素与细胞作用 2 4h ,其细胞存活率为 39 6 %。 0 0 5 μmol·L-1蓖麻毒素可引起HeLa细胞发生典型的细胞凋亡 ,主要表现为细胞核染色质浓缩 ,碎裂 ,形成新月状核或膜包裹核染色质的凋亡小体。结论　 0 0 5 μmol·L-1蓖麻毒素对细胞周期G0 /G1期无影响 ,但对G2 /M有影响。作用 2 4h ,G2 /M期细胞从对照组的13 86± 0 48%上升至 33 15± 0 45 % ,细胞周期阻滞在G2 /M期。     

蓖麻毒素引起HeLa细胞凋亡和细胞周期G2／M期阻滞

目的蓖麻毒素与HeLa细胞共培养,观察蓖麻毒素引起细胞毒性死亡规律及对细胞周期的影响.方法噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞毒性,流式细胞分析仪分析细胞周期.结果10-3μmol@L-1蓖麻毒素即可引起HeLa细胞死亡,随着蓖麻毒素浓度的升高,其细胞毒性增大,10μmol@L-1蓖麻毒素与细胞作用24h,其细胞存活率为39.6%.0.05μmol@L-1蓖麻毒素可引起HeLa细胞发生典型的细胞凋亡,主要表现为细胞核染色质浓缩,碎裂,形成新月状核或膜包裹核染色质的凋亡小体.结论0.05μmol@L-1蓖麻毒素对细胞周期G0/G1期无影响,但对G2/M有影响.作用24h,G2/M期细胞从对照组的13.86±0.48%上升至33.15±0.45%,细胞周期阻滞在G2/M期.     

非诺贝特对人肺腺癌A549细胞迁移侵袭能力的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特对人肺癌A549细胞生长、迁移侵袭能力的影响及其可能机制。方法体外培养人肺癌A549细胞,分别用0、12.5、25、50、75、100μmol/L非诺贝特处理细胞,阴性对照组为0μmol/L非诺贝特浓度组;MTT法检测不同药物浓度作用下肺癌A549细胞的生长抑制情况;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测非诺贝特对肺癌A549细胞迁移及侵袭运动能力的影响,RT-PCR法检测A549细胞中PPARα(Peroxisome Proliferator-Activated Receptors alpha)、MMP-2(Matrix Metalloproteinase-2)、MMP-9、Timp-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1)、Timp-2m RNA的表达情况。结果非诺贝特能够抑制A549细胞生长,呈时间-剂量关系(P0.05);细胞划痕实验及Transwell侵袭实验结果显示非诺贝特能够降低A549细胞的迁移侵袭能力;RT-PCR结果提示非诺贝特能够上调PPARα、Timp-1、Timp-2m RAN表达,下调MMP-2、MMP-9 m RNA表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论非诺贝特能够抑制肺癌A549细胞生长、迁移及侵袭能力,其机制可能与PPARα、MMPs、Timps有关。     

PIAS3过表达对肺腺癌细胞A549增殖的影响及意义

目的：探索活化型信号转导子和转录激活子3蛋白抑制剂(PIAS3)对肺腺癌A549细胞增殖的影响及相关意义,为进一步研究利用辐射应答基因启动子驱动的PIAS3腺相关病毒载体联合放射治疗肺腺癌提供基础。方法：利用MTT比色试验和克隆形成率实验检测转染pCMV-Sport6-PIAS3后对肺腺癌细胞A549存活和增殖的影响;利用免疫荧光染色实验检测共转染pCMV-Sport6-PIAS3、PRC-CMV、PRC-STAT3及PRC-STAT3-CT后对p-STAT3入核的影响。结果：PIAS3过表达导致A549细胞生长显著抑制,克隆形成能力显著降低;免疫荧光染色实验结果表明,转染pCMV-Sport6-PIAS3后,STAT3入核被显著抑制,通过共转染表达STAT3和STAT3-CT后,STAT3入核仍显著受到抑制。结论：PIAS3过表达可抑制STAT3的入核,继而阻断其功能,从而降低肺腺癌细胞A549的生长和增殖能力。     

白藜芦醇抑制IGF-I促人肺腺癌A549细胞增殖作用及其机制的研究

目的观察白藜芦醇对IGF-I介导人肺腺癌细胞增殖的影响及其IGF-I受体、AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2的表达变化。方法应用MTT方法测定细胞增殖,采用RT-PCR检测IGF-I受体mRNA表达,并应用免疫印迹方法检测AKT、p-AKT及ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果不同浓度IGF-I(2.5～15nM)可显著促进A549细胞增殖(F=22.321,P=0.011),白藜芦醇(6.25～50μM)与10nMIGF-I共作用于A549细胞,均可抑制IGF-I的促A549细胞增殖作用(F=11.211,P=0.032),其中尤以25μM、50μM白藜芦醇的抑制增殖作用显著(P=0.034;P=0.012),并且,白藜芦醇可有效降低IGF-I受体mRNA表达以及降低IGF-I增强的AKT及ERK1/2磷酸化。结论白藜芦醇能够抑制IGF-I介导的A549肺癌细胞增殖,其作用机制可能与白藜芦醇降低A549肺癌细胞IGF-I受体mRNA表达及AKT、ERK1/2磷酸化相关。     

沙利度胺联合顺铂对A549肺腺癌细胞株的体外实验

目的观察沙利度胺与顺铂（DDP）联合应用对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响,观察沙利度胺对肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的影响。方法采用PI单染法流式细胞检测细胞凋亡率;采用免疫细胞化学方法检测沙利度胺处理后肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的变化。结果在一定浓度范围内,沙利度胺联合DDP处理组细胞凋亡率明显高于单药组;沙利度胺（7.5mg/L）作用于人肺腺癌A549细胞后,处理组的VEGF、BFGF蛋白表达与未加药组比较差异显著。结论沙利度胺DDP联合,可增加A549人肺腺癌细胞的凋亡率;沙利度胺可抑制A549人肺腺癌细胞VEGF、BFGF的蛋白表达。     

女性肺腺癌中细胞周期素D1表达及意义

目的 探讨细胞周期素D1(cyclin D1)在女性肺腺癌中的表达及意义.方法 应用免疫印迹(western blot)法检测135例女性肺腺癌组织和癌旁正常组织中cyclin D1的阳性表达率.结果 女性肺腺癌组织中cyclin D1的阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P＜0.05).肿瘤直径＞3 cm组cyclin D1表达率高于直径≤3 cm组(P＜0.05).cyclin D1的阳性表达与年龄、肿瘤分化、肿瘤生长部位无显著性关联.结论 女性肺腺癌组织中存在cyclin D1的过表达,提示cyclin D1有可能是肺腺癌的潜在预报因子.     

热应激作用下人肺腺癌A549细胞中HSP70B’的动态表达

[目的]探讨热休克蛋白70B’（HSP70B’）的产生条件，分析HSP70B’在人肺腺癌A549细胞中的表达特征。[方法]采用Western-blot方法检测正常培养细胞（37℃）和不同温度（38、39、40、41、42、43、44、45℃）下热应激1h；选择HSP70B’表达最高的温度42℃，应激1h后恢复培养（37℃，5％CO2）不同时间（0、3、6、9、12、15、18、24h）；在42℃应激不同时间（0、20、40、60、80、100、120、140、180min）恢复培养6h的肺腺癌A549细胞中HSP70B’蛋白的表达水平。[结果]HSP70B’在正常状态的A549细胞中不表达；在不同应激温度作用下，HSP70B’在39℃开始表达，在42℃时表达量达到最高水平；细胞维持42℃应激后恢复培养不同时间作用下，HSP70B’表达在恢复培养6h后达最高，恢复培养24h后降到最低水平；在42℃应激不同时间后均恢复培养6h作用下，热应激60min时HSP70B’表达最高。[结论]肺腺癌细胞株A549细胞中HSP70B’产生的最优条件是42℃应激60min后37℃恢复培养6h。HSP70B’在热应激后的A549细胞中迅速表达，其在细胞热应激中的作用及意义有待进一步研究。     

肉桂醛对肺癌细胞A549具有体外抑制作用

目的探讨肉桂醛对肺癌细胞株A549的生长抑制作用。方法采用噻唑蓝比色法检测肉桂醛对体外培养的人肺癌细胞系A-549细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度。结果肉桂醛能抑制人肺癌细胞系A-549细胞增殖,且呈剂量依赖性,IC50值为0.36mg/ml。结论在体外,肉桂醛对肺癌细胞株A549具有明显抗肿瘤活性。     

脂多糖促进肺癌A549细胞表达HMGB1

目的 探讨脂多糖（LPS）促进肺癌A549细胞表达高迁移率族蛋白B1（HMGB1）机制及意义。方法 体外培养肺癌A549细胞,分组：A组（对照组）,B组（100 ng/ml LPS）,C组（150 ng/ml LPS）,D组（200ng/ml LPS）,培养12 h、24 h、48 h、72 h后,Western blot检测肺癌A549细胞HMGB1蛋白表达,ELISA检测细胞上清液HMGB1浓度。结果 Western blot、ELISA检测示HMGBl蛋白表达及浓度在A、B、C、D四组中逐渐增强（P〈0.05）;培养12 h、24 h、48 h、72 h有显著差异（P〈0.05）。结论 LPS促进肺癌A549细胞表达HMGB1,有时间-量效关系,为临床防治肺癌提供了新思维。     

秦皮甲素对人肺癌细胞A549凋亡影响

目的 探讨秦皮甲素对肺癌细胞A549增殖、凋亡的影响及机制.方法 人肺癌细胞A549分为对照组、阳性对照组(5-Fu 0.77 mmol/L)、秦皮甲素0.4、0.8、1.6 mmol/L组,四甲基偶氮噻唑蓝比色法检测肺癌细胞A549的增殖率,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,免疫印迹法检测Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达改变.结果 秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC₅₀为0.4 mmol/L;降低线粒体膜电位并诱导凋亡;与对照组比较,人肺癌细胞A549经秦皮甲素1.6 mmol/L组处理后,S期细胞比例[(20.35±0.26)%]升高,G2/M期细胞比例[(25.46±0.17)%]降低;与对照组比较,秦皮甲素1.6 mmol/L组细胞凋亡率(29.15%)明显升高,Bax 和 Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达受到抑制,呈剂量-效应关系.结论 秦皮甲素可以通过线粒体途径诱导人肺癌细胞A549凋亡.