碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖与ALP活性表达的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）以人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶（ALP）活性表达的影响,为bFGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据。方法：采用MTT和ALP活性检测法,观察不同浓度（0．1－10ng/ml)的bFGF第24、48和72小时对5％和10％胎牛血清（FBS）体外培养的第3代人牙周膜细胞（PDLCs）的作用。结果：与对照组比较,①10％FBS,5ng／ml和10ng／ml的bFGF在第24、48、72小时,可显著促进PDLCs的增殖（P＜0．01－0．05）,5％,10ng／ml的bFGF在24、48小时,5ng／ml的bFGF在24小时对PDLCs有显著促增殖作用（P＜0．01）。②10％FBS,1ng／ml的bFGF在48、72小时,5ng／ml的bFGF在24、48、72小时,10ng／mlbFGF在48小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用P＜0．01－0．05）;5％FBS,10ng／ml的bFGF在24、72小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用（P＜0．05）。结论：以上结果提示：在一定的作用时间内一定条件下,5ng／ml和10ng／ml的bFGF可促进人PDLCs的生长和分化。     

人骨形成蛋白－2对人牙髓细胞增殖和分化的影响

目的：探讨骨形成蛋白－2（BMP－2）对体外培养的人牙髓细胞（DPCs）增殖和分化的影响。方法：体外培养人DPCs,分别与不同浓度的BMP－2（50、100、200 ng／mL）共同培养;分别检测各组细胞的增殖情况、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性、钙化结节形成量以及牙本质涎磷蛋白（DSPP）、牙本质基质蛋白－1（DMP－1）各成牙本质相关基因的表达水平。结果：50～200 ng／mL 的BMP－2对DPCs的增殖均无明显促进作用;但是,能呈剂量依赖性地提高细胞的ALP活性、促进钙化结节的形成、上调DSPP和DMP－1 mRNA的表达水平,各浓度BMP－2组均高于对照组（P ＜0．05）。结论：BMP－2对体外培养的人DPCs增殖无明显影响,但可明显促进DPCs的成牙本质细胞方向分化。     

不同生长因子对大鼠牙乳头细胞生物学特性的影响

目的：探讨bFGF＋IGF1、TGFβ1＋BMP4、bFGF＋IGF1＋TGFβ1＋BMP4对体外培养的大鼠牙乳头细胞（rDPCs）增殖、分化的影响并筛选出最佳的组合因子。方法：分离培养、鉴定rDPCs,应用四唑盐（MTT）比色法和酶动力学法分别检测不同组合因子刺激后的第1/4/7/10/14天rDPCs的增殖活性、细胞内总蛋白合成量、碱性磷酸酶（ALP）的分泌水平,应用罗式诊断分析法和放射免疫分析法检测细胞上清液内钙、磷浓度和骨钙素含量。结果：组①bFGF（10ng/mL）＋IGF1（100ng/mL）在P4d能最显著地促进rDPCs的增殖、分化与矿化,并在P10d能显著地升高细胞外液的钙离子、磷离子浓度;组②TGFβ1（5ng/mL）＋BMP4（10ng/mL）在P4d能最大程度地促进rDPCs的分化、矿化并显著促进细胞外液骨钙素的分泌合成,且在P7d能最显著地促进rDPCs内总蛋白的合成（P〈0.05）。结论：bFGF＋IGF1、TGFβ1＋BMP4两组因子均可促进rDPCs的增殖活性和分化潜能,为体外牙齿再生提供实验依据。     

神经生长因子对人牙髓细胞增殖与分化作用的研究

目的 研究神经生长因子对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化作用的影响。方法 组织块法行人牙髓细胞的原代培养后，采用四唑盐比色法和酶动力学方法，测定不同浓度（1、10、100U／mL）的神经生长因子对体外培养的第5-8代人牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的作用。结果 与对照组相比，10U／mL的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖（P〈0．05）；100U／mL的神经生长因子可显著促进碱性磷酸酶的活性（P〈0．01）。结论 不同浓度的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖与分化。     

TGF β1和bFGF对鼠口腔黏膜固有层前体细胞的影响

目的探讨转化生长因子B1（TGF-β1）和碱性成纤维细胞因子（bFGF）对大鼠口腔黏膜固有层前体细胞（OMLPPC）的增殖及碱性磷酸酶活性的影响。方法体外扩增培养OMLPPC,利用5ng／mLTGF-β1、10ng／mlbFGF单独及联合作用于OMLPPC,利用MTT方法检测OMLPPC的增殖,利用试剂盒检测其碱性磷酸酶活性,以RT．PCR方法检测各组矿化基因骨钙素（OCN）的表达。结果对细胞的增殖,3d时各组间未见显著性差异;7、14d,bFGF单独作用明显促进细胞的增殖（P〈0．05）,TGF-β1单独作用抑制细胞的增殖（P〈0．05）。TGF-β1＋bFGF组7d时增殖不受影响,14d时增殖变缓。碱性磷酸酶活性检测,对照组及bFGF组各时间点增加均无显著性差异。TGF．131组间7、14d比3d时ALP活性有显著性差异（P〈0．05）。TGF-131＋bFGF组14d时ALP活性显著增强（P〈0．05）。RT—PCR检测OCN结果显示,各组培养14d后,TGF-131组、TGF-β1＋bFGF组表达OCN,对照组、bFGF组未见表达。结论一定浓度的bFGF和TGF-131联合作用,不仅可保证OMLPPCs的增殖,而且能诱导并促进其向矿化方向的分化。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养,MTT方法检测细胞增殖情况;并对细胞进行矿化诱导,检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内,与细胞增殖成正比,而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下,碱性磷酸酶活性明显增加,在联合应用bFGF的情况下,100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同,在一定浓度条件下,低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子（EGF）对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的剂量效应和时间效应。方法：用体外细胞培养技术和噻唑蓝（MTT）比色法，观察不同浓度和不同时间bFGF和EGF对外胚间充质细胞增殖的影响。结果：0.1-100ng/mL bFGF,0.1-10ng/mL EGF对细胞有促增殖作用，并呈浓度依赖性,两种生长因子均在10ng/mL浓度时作用最强，并于培养第5d达到促增殖高峰。结论：bFGF和EGF能促进外胚间充质细胞的增殖。     

骨形态发生蛋白-2与碱性成纤维细胞生长因子在异位和原位成骨中的作用

目的通过骨髓基质细胞（BMSCs）的体外增殖和分化、异位成骨和原位成骨实验来观察骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在成骨过程中的作用。方法分别用含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液体外培养Beagle犬的BMSCs,通过甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定细胞增殖水平,通过测定碱性磷酸酶（ALP）活性观察细胞的分化情况。将BMSCs与多孔磷酸钙（CPC）分别在含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液中复合培养,制成复合材料,一部分植入裸鼠皮下,观察异位成骨情况,另一部分植入Beagle犬的种植体周围骨缺损区,经过荧光标记观察原位成骨情况。结果含有BMP-2+bFGF的培养液促进BMSCs增殖和分化的能力最强。异位成骨情况：BMP-2+bFGF组的成骨量较其他组明显增加,其新骨形成百分比为48.79%±11.31%,高于单一BMP-2组（30.71%±10.85%）和bFGF组（27.33%±9.67%）以及对照组（10.65%±6.05%）。原位成骨术后12周,BMP-2+bFGF组的矿化沉积率高于其他组,其差异有统计学意义（P<0.01）。结论在促进成骨方面,BMP-2和bFGF共同作用优于单一因子。     

KGF对口腔黏膜上皮细胞中增殖相关基因PCNAmRNA的作用

目的：检测不同浓度角质细胞生长因子（KGF）对体外培养的口腔黏膜上皮细胞形态学及对上皮细胞增殖相关基因PCNAmRNA表达的影响。方法：体外培养的口腔黏膜上皮细胞加入含不同浓度KGF（0ng／mL,5ng／rnL,25ng／mL,50ng／mL）的D—KFSM,分别培养12h、24h、48h后观察细胞形态改变并用荧光实时定量检测各组细胞内增殖相关基因PCNAmRNA的表达。结果：①相同时间段实验组较对照组上皮细胞贴壁明显,培养48h实验3组（50ng／mL）较其他组细胞核仁明显;②12h时,实验组较对照组上皮细胞内PCNAmRNA表达增加,但各实验组间PCNAmRNA表达逐渐降低（P〈0．05）;③24h时实验组较对照组PCNAmRNA表达增加,但各实验组间无统计学差异护〉0．05）：④48h时,实验组较对照组PCNAmRNA表达增加,且呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论：外源性KGF可上调口腔黏膜上皮细胞增殖相关基因PCNAmRNA的表达,且在不同时间段、不同浓度调控作用存在差异。     

不同浓度SDF1、bFGF、IL-8对骨髓间充质干细胞的趋化作用

目的:研究比较不同趋化因子[骨髓基质细胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1,SDF-1）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）和白介素8（interleukin-8,IL-8）]在多个浓度下对骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的趋化作用。方法:实验分为3组,即SDF1组、bFGF组、IL-8组,每组因子浓度为0 （对照浓度）、10、50、100、200、400 ng/mL（实验浓度）。抽取SD大鼠骨髓,分离培养BMSCs,利用Transwell小室研究不同浓度SDF1、bFGF、IL-8对BMSCs的趋化作用,获得3种因子趋化BMSCs的最佳浓度。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与0 ng/mL（对照浓度）组相比,3种因子均可趋化BMSCs（P<0.05）; 50、100、400 ng/mL浓度下,SDF1对BMSCs的趋化作用显著高于bFGF（P<0.05）;200 ng/mL浓度下,SDF1对BMSCs的趋化作用强于IL-8;SDF1及IL-8对BMSCc趋化作用的最佳浓度均为100 ng/mL,bFGF的最佳浓度为200 ng/mL。结论:SDF-1、bFGF、IL-8均可趋化BMSCs,SDF-1与IL-8的趋化效果更佳。     

氯化镧对体外培养的犬骨髓基质细胞增殖的影响

目的:观察3种浓度的氯化镧(LaCl3,La3+)对体外培养的犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的影响。方法:用5.564×102、5.564、5.564×10-2μg/mL3种浓度的La3+干预第3代BMSCs,设空白对照组和50ng/mLBMP-2干预的阳性对照组。通过MTT法、碱性磷酸酶半定量检测分析La3+对BMSCs的影响。结果:5.564μg/mL La3+干预组BMSCs在第6、7天表现出较高的生长趋势;碱性磷酸酶半定量检测发现5.564μg/mL La3+干预组OD值均数明显高于另两个实验组均数(P<0.05)。结论:5.564μg/mL浓度的La3+可促进BMSCs增殖。     

鸢尾素对大鼠骨髓间充质干细胞 Sost基因表达及成骨分化的影响

目的探究鸢尾素（Irisin）对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）Sost基因表达及成骨分化的影响。 方法设置Irisin不同浓度组（0、80、100、120 ng/mL）,细胞计数试剂盒（CCK-8）法选择Irisin的最佳实验浓度。用含有Irisin的培养液培养大鼠BMSC设置为实验组,对照组为单纯培养液培养,3、7、14 d进行茜素红、von Kossa钙盐染色;3、10 d采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western bolt检测成骨相关基因mRNA及蛋白表达。分别采用单因素方差分析和t检验对数据进行统计分析。 结果（1）培养3 d时,100 ng/mL的Irisin促进大鼠BMSC增殖的效果明显（OD=0.951）,与对照组相比差异有统计学意义（F=102.52,P<0.05）;（2）实验组染色深度、钙结节大小和数量都明显高于对照组;（3）与对照组相比,实验组Sost mRNA及其蛋白表达水平明显下降,ALP、Lrp5、BMP2、Smad1的mRNA及其蛋白表达水平明显增高,差异均有统计学意义（P<0.001）。 结论（1）Irisin可抑制Sost基因的表达;（2）Irisin可在体外促进大鼠BMSC增殖和成骨分化;（3）Wnt和BMP信号通路可能在Irisin促进大鼠BMSC成骨分化中发挥作用。     

糖基化终末产物对小鼠骨髓间充质干细胞增殖及相关基因P27、cyclinD1 的影响

目的:探讨糖基化终末产物(AGEs)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖能力以及相关基因P27、cyclinD1的影响。方法:全骨髓法培养小鼠骨髓间充质干细胞;成骨、成脂诱导骨髓间充质细胞,对其进行干细胞鉴定;将培养出的骨髓间充质干细胞与不同浓度的AGEs 共培养,MTT检测不同浓度下骨髓间充质干细胞增殖的改变;实时定量聚合酶链反应(Real time PCR)检测AGEs刺激后P27、cyclin D1表达的改变。结果:小鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导21 d后茜素红染色出现钙化结节;成脂诱导21 d后油红O染色出现脂滴;MTT显示不同浓度的AGEs(10、50、100、200 mg/L)均能抑制BMSCs的增殖差异有统计学意义(P<0.05),且随着浓度的增加抑制越明显;Real time PCR结果显示:AGEs(50 mg/L)刺激3 d后P27 mRNA的表达水平较对照组升高,cyclinD1 mRNA的表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AGEs能抑制小鼠骨髓间充质干细胞的增殖并能改变P27 、cyclinD1 mRNA的表达。     

碱性成纤维生长因子促进牙龈间充质干细胞增殖作用的研究

目的:体外研究碱性成纤维生长因子(bFGF)促进牙龈间充质干细胞(GMSCs)增殖的作用.方法:酶消化法获得原代GMSCs,克隆化培养后进行干细胞鉴定.取第4代GMSCs,以含有10％胎牛血清的α-MEM作为基础培养基,分别加入0、0.5、1、5、10、20 ng/ml 5种不同浓度bFGF培养1～9 d,用CCK-8法检测细胞增殖.结果:GMSCs可以通过酶消化法获得,具有干细胞特性;0.5～20 ng/ml的bFGF均能促进GMSCs的增殖,在0.5～ 10 ng/ml范围内促增殖作用随浓度增加和培养时间延长而增强.结论:bFGF对GMSCs增殖能力具有浓度依赖性和时间依赖性促进作用.     

重组人结缔组织生长因子对牙髓细胞增殖与成牙本质分化的影响

目的：研究重组人结缔组织生长因子（recombinant connective tissue growth factor, rCTGF）对牙髓细胞（human dental pulp cells,hDPCs）增殖及分化的影响。方法：利用不同浓度（0、1、10、100 ng/mL）rCTGF分别处理牙髓细胞,CCK8法检测牙髓细胞增殖情况;茜素红染色和半定量试验检测细胞矿化结节的形成变化,qRT-PCR测定成牙本质分化相关基因DMP-1、DSPP和OC的表达情况,Western 免疫印迹法测定rCTGF刺激牙髓细胞后,ERK1/2信号通路的磷酸化水平。采用SAS 9.3软件包对数据进行统计学分析。结果：高浓度的rCTGF（100 ng/mL）可以促进牙髓细胞增殖;经矿化诱导后,10 ng/mL rCTGF促进牙髓细胞矿化结节形成的效果最好,钙盐沉积量最明显（P<0.05）,成牙本质分化相关基因DMP-1、DSPP的表达显著上调（P<0.05）。Western 免疫印迹结果显示,10 ng/mL rCTGF刺激牙髓细胞后,p-ERK1/2蛋白的表达升高。结论：rCTGF可能通过激活ERK1/2信号通路,促进牙髓细胞的增殖与分化。     

bFGF促进hMSCs向脂肪分化过程中PPAR-γ2的表达

目的:观察人碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)在人间充质干细胞(human mesenchymal stemcells,hMSCs)向脂肪细胞方向分化过程中,对人过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(peroxisome proliferator-activated receptor-γ2,PPAR-γ2)表达的影响。方法:全骨髓培养法原代培养人骨髓hMSCs,培养至第三代,按增殖期及分化期是否加入了bFGF4ng/mL和脂肪诱导剂(罗格列酮5μmol/L+胰岛素10μg/mL),将细胞分为6组,并在诱导分化前1天及分化第3天以RT-PCR检测PPAR-γ2和葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)mRNA的表达情况,诱导分化28d时油红O染色观察细胞分化程度,并进行统计学分析。结果:hMSCs在未诱导情况下不表达PPAR-γ2,在脂肪诱导剂的作用下表达PPAR-γ2,在bFGF作用下在诱导前就已表达PPAR-γ2;油红O染色观察MSCs经脂肪诱导剂诱导分化后胞浆内形成大量脂滴。结论:bFGF能促进人骨髓hMSCs向脂肪细胞方向分化。