Effects of quercetin on hepatocyte stimulating factor production by mouse peritoneal macrophages

Objective:To study the effects of quercetin on hepatocyte stimulating factor production from mouse peritoneal macrophages.Methods:Hepatocyte stimulating factor was evaluated by the amount of fibrinogen synthesized in Hep3B cvells.Interleukin-6 activity was measured by B9 cell proliferation methyl thiazolyl tetrazolium colorimetric method. Hep3B cell supernatant fibrinogen was quantitated with ELISA.Results:LPS induced the synthesis of hepatocyte stimulating factor in mouse peritoneal macrophages,and hepatocyte stimulating factor promotes the synthesis of fibrinogen from Hep3B cells.Quercetin(5 to 40 μmol/L) inhibited the synthesis of hepatocyte stimulating factor stimulated by LPS.Quercetin(5 to 20 μmol/L) inhibited release of interleukin-6 from mouse peritoneal macrophages induced by 0.5g/L fibrin fibrinogen degradation products.Conclusion:Quercetin inhibits the synthesis of hepatocyte stimulating factor in macrophages.     

放烧复合伤对小鼠巨噬细胞IL-12表达影响的实验研究

目的 探讨放烧复合伤对小鼠腹腔巨噬细胞数量、生长状态和IL－12基因表达影响的时效特点。方法 于不同时相点分离、计数放烧复合伤小鼠（5Gyγ射线全身照射＋15％Ⅲ度烧伤）腹腔巨噬细胞，并观察其生长状态，RT－PCR法检测其IL－12 p35和p40的基因表达水平。结果 ①伤后巨噬细胞数量早期减少，后期恢复；②伤后IL－12 p35表达量降低，而p40表达量增加；③伤后3d是巨噬细胞数量及其IL－12基因表达变动最剧烈的时期。结论 放烧复合伤后IL－12 p35基因表达的降低和IL－12 p40基因表达的增强必将导致IL－12 p70的减少和拮抗剂(p40）2的增加。伤后3d是放烧复合烧救治的关键时期。只有同时检测IL－12 p35和p40才能正确反映放烧复合伤后IL－12的基因表达状况。     

几丁聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成和iNOS活性的影晌

目的研究水溶性几丁聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)生成和一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响,探讨几丁聚糖的免疫调节作用机制。方法采用Griess反应、荧光法分别测定不同剂量(100mg/kg,200mg/kg,300mg/kg)水溶性几丁聚糖作用的小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量、iNOS活性。结果Griess反应结果显示几丁聚糖提高小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量,低、中、高剂量组NO生成量(nmol/L)分别为51.36±12.14,79.25±14.62,86.44±15.27,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);荧光法测定结果显示低、中、高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞iNOS活性[nmol/(well.min)]分别为4.06±0.15,6.81±0.13,7.16±0.12,与对照组比较P<0.01。结论水溶性几丁聚糖能提高小鼠腹腔巨噬细胞iNOS活性,增加NO合成。提示几丁聚糖的免疫调节作用可能与几丁聚糖刺激巨噬细胞NO生成有关。     

双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞表面分子表达及分泌功能的影响

目的　探讨双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞表面分子表达及分泌功能的影响。方法　纯化提取双歧杆菌基因组DNA ,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度。用双歧杆菌DNA (10 μg ml)体外诱导培养小鼠腹腔巨噬细胞 ,流式细胞仪检测小鼠腹腔巨噬细胞MHCⅡ类分子、共刺激分子和粘附分子的表达 ,ELISA法检测培养上清中细胞因子的含量。结果　双歧杆菌DNA组巨噬细胞表达Ia、CD4 0、CD86和CD5 4分子的平均荧光强度分别为 4 3 176± 5 5 6、4 7 6 8± 4 6 5、15 6 4 9± 2 0 6 8和 6 9 37± 4 10高于PBS对照组 15 0 2± 2 31、15 72± 3 2 1、88 5 1± 6 38和 4 8 81± 3 2 1;双歧杆菌DNA组巨噬细胞产生IL 1β的水平为 2 70 12± 31 5 1pg ml高于PBS对照组 138 12± 9 2 4 pg ml;两组之间的差别均具有显著性的意义 (均P <0 0 5 )。结论　双歧杆菌DNA能增强小鼠腹腔巨噬细胞共刺激分子、MHCⅡ类分子和粘附分子的表达 ,增强巨噬细胞IL 1的分泌水平。     

双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞的激活效应

目的探讨双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用,为微生物DNA制剂开发应用于临床提供科学依据.方法纯化提取双歧杆菌基因组DNA,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度.收集双歧杆菌DNA(10μg/ml)体外诱导培养24 h的小鼠腹腔巨噬细胞培养上清,采用ELISA法检测培养上清中TNF-α、IL-12的含量,用Griess试剂检测其NO的含量;FACS检测巨噬细胞的吞噬功能.结果实验组(双歧杆菌DNA组)巨噬细胞产生TNF-α、IL-12及NO的水平分别为120.12±13.21 pg/ml、405.51±51.80 pg/ml和11.12±1.01μmol/L,巨噬细胞吞噬功能的平均荧光强度为28.12±3.58;对照组(PBS组)分别为5.82±1.54 pg/ml、10.17±1.27 pg/ml、2.14±0.28 μmol/L和9.32±1.01,两组间各项指标比较均有显著性差异(均P＜0.01).结论双歧杆菌DNA能激活巨噬细胞,可增强巨噬细胞TNF-α、IL-12及NO产生的水平及吞噬功能.     

双歧杆菌DNA对巨噬细胞MAPK和PKG以及NF-kB的影响

目的 以信号分子MAPK家系、PKC家族和NF-kB为线索探索青春型双歧杆菌的DNA激活巨噬细胞的途径.方法 以激光共聚焦显微镜定量测定小鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2、JNK、p38、PKCα、PKCβⅠ、PKCβⅡ、PKCγ、PKC ε和PKCζ的含量.以细胞免疫化学方法检测巨噬细胞NF-kB的阳性细胞密度.结果 双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2、PKCα和PKCβH的平均荧光强度明显高于对照组(P＜0.01),而JNK、p38、PKCβⅠ、PKCγ、PKC ε和PKCζ的平均荧光强度在两组间则差异无显著性(P＞0.05).双歧杆菌DNA注射组巨噬细胞NF-kB的阳性细胞密度显著高于对照组(P＜0.01).结论 青春型双歧杆菌的DNA可通过活化ERK1/2、PKC α、PKC βⅡ和NF-kB来激活巨噬细胞.     

Effects of quercetin on hepatocyte stimulating factor production by mouse peritoneal macrophases

Objective: To study the effects of quercetin on hepatocyte stimulating factor production from mouse peritoneal macrophages. Methods: Hepatocyte stimulating factor was evaluated by the amount of fibrinogen synthesized in Hep3B cells. Interleukin-6 activity was measured by B9 cell proliferation methyl thiazolyl tetrazolium colorimetric method. Hep3B cell supernatant fibrinogen was quantitated with ELISA. Results: LPS induced the synthesis of hepatocyte stimulating factor in mouse peritoneal macrophages, and hepatocyte stimulating factor promotes the synthesis of fibrinogen from Hep3B cells. Quercetin(5 to 40 μmol/ L)inhibited the synthesis of hepatocyte stimulating factor stimulated by LPS. Quercetin(5 to 20 μmol/ L) inhibited release of interleukin-6 from mouse peritoneal macrophages induced by 0.5 g/ L fibrin fibrinogen degradation products. Conclusion: Quercetin inhibits the synthesis of hepatocyte stimulating factor in macrophages.     

皮质酮对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的 进一步明确天然糖皮质激素对巨噬细胞免疫功能的影响及其时效和量效关系.方法 收集大鼠腹腔巨噬细胞,分别用10～1 000 ng/ml的皮质酮(corticosterone,CORT)刺激,检测细胞的黏附、趋化和吞噬功能;使用ELISA试剂盒检测细胞培养上清中TNF-α的含量.结果 50 ng/ml的皮质酮显著增强巨噬细胞的黏附功能(P＜0.05),10 ng/ml和50 ng/ml的皮质酮刺激细胞后,其趋化功能均显著增加(P＜0.05).同时,50 ng/ml的皮质酮还可显著增强巨噬细胞的吞噬功能(P＜0.05)和促进巨噬细胞分泌TNF-α(P＜0.01),而使用高浓度皮质酮(500 ng/ml和1 000 ng/ml)处理时,巨噬细胞的上述功能增强趋势减弱或无增强;在0.5～5 h范围内,皮质酮处理1 h时细胞的吞噬功能和分泌TNF-α的功能增强最明显,刺激更长时间后其功能的增强趋势逐渐减弱.结论 一定剂量的天然糖皮质激素急性刺激可明显增强免疫功能.     

糖原诱出小鼠腹腔巨噬细胞的形态学及细胞化学研究

本实验用电镜及定量细胞化学技术证明糖原诱出的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)体积增大,皱折和伪足增多。细胞质中吞噬体和溶酶体增多。酸性磷酸酶(AcPase)、非特性酯酶(ANAE)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性增强,而5核苷酸酶(5Nase)活性则与对照组无明显差别。     

小鼠腹腔巨噬细胞与树突状细胞协同抗瘤效应

目的 :观察巨噬细胞 (Mφ)与树突状细胞 (dendriticcell,DC)对H2 2肝细胞瘤、CT2 6结肠腺癌小鼠协同抗肿瘤免疫作用。方法 :腹腔荷H2 2 (1× 10 6)昆明鼠随机均分成 :①H2 2组、②H2 2 +Mφ组、③H2 2 +DC组、④H2 2 +Mφ +DC组 ,按组别腹腔分别注入Mφ和 (或 )H2 2脉冲致敏DC ;腹腔荷CT2 6 (1× 10 4)BALB/C小鼠以双向有序二因素检测 (9格方格表 )设计 ,治疗鼠同时注射相应数量的Mφ和CT2 6脉冲致敏DC ,每鼠的Mφ和DC呈不同组合。 1周后均强化 1次 ,所注入数量同第 1次。结果 :H2 2组小鼠 38d内均死亡 ,死亡的中位时间为 2 9d ;而H2 2 +Mφ组和H2 2 +DC组均死亡 3只 ,死亡的中位时间分别为 37d ,36d ;H2 2 +Mφ +DC组在实验观察 6 0d内 ,未出现腹水 ,无一死亡 ;荷瘤一段时间后 ,前 3组小鼠静脉血粒细胞 /淋巴细胞比值进行性增大 ,免疫细胞数量减少。荷CT2 6小鼠生存时间行免疫治疗比未免疫治疗延长 ,单用DC或Mφ呈疗效 剂量依赖性 ,高剂量Mφ和DC合用与DC或Mφ单用疗效差异无显著性。结论 :DC、Mφ细胞均能提高机体抗瘤能力和生存期 ,有明确的量效关系 ;DC抗原递呈功能明显大于Mφ ;DC、Mφ的协同抗瘤作用随不同瘤细胞株而有差异     

三氯化钐、三氯化镨对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的：探讨小剂量三氯化钐（ Ｓｍ Ｃｌ３）,三氯化镨（ Ｐｒ Ｃｌ３）对小鼠腹腔巨噬细胞（ Ｐ Ｍ ）形态结构及功能的影响。方法：选用雄性昆明小鼠,分别腹腔注射给予 ００５ ｍ ｇ·ｋｇ－ １,０５ ｍ ｇ·ｋｇ－ １ Ｓｍ Ｃｌ３和 Ｐｒ Ｃｌ３,连续７ ｄ。采用定量酶细胞化学、凝集素亲合细胞化学、透射电镜、扫描电镜及吞噬实验观察 Ｐ Ｍ 的结构和功能变化。结果：两种剂量 Ｓｍ Ｃｌ３ 、 Ｐｒ Ｃｌ３ 均使 Ｐ Ｍ 的酸性磷酸酶（ Ａ Ｃ Ｐ）、α 醋酸萘酚酯酶（ Ａ Ｎ Ａ Ｅ）含量明显增加;刀豆蛋白 Ａ 受体（ Ｃｏｎ Ａ Ｒ）数目增多,吞噬中性红能力增强。电镜下 Ｐ Ｍ 胞质内溶酶体增多,表面皱褶及微绒毛增多。结论：小剂量 Ｓｍ Ｃｌ３、 Ｐｒ Ｃｌ３ 对小鼠 Ｐ Ｍ 的形态结构和功能有明显的促进作用。     

肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞细胞因子的研究

目的：研究肺泡巨噬细胞（ＡＭ）释放的细胞因子在肺纤维化中的作用。方法：采用７ＴＤ１细胞增殖反应测定法和微量滤膜法趋化实验，动态观察了博莱霉素（ＢＬＭ）肺纤维化大鼠ＡＭ释放白细胞介素－６（ＩＬ－６）及白细胞介素－８（ＩＬ－８）的变化。结果：①灌注后第１天，ＩＬ－６开始增加，于第２８天达高峰（Ｐ＜０．０１）。②灌注后第１天，ＩＬ－８即增高，第３天达高峰（Ｐ＜０．０１），第７天开始下降，逐渐降至对照组水平。结论：ＡＭ在ＢＬＭ致小鼠肺纤维化模型中被激活，并于体外自发释放ＩＬ－６及ＩＬ－８，提示细胞因子参与该模型中肺损伤及肺纤维化的发生与发展。     

P物质对过敏小鼠腹腔巨噬细胞蛋白酶激活受体表达的影响

目的:探讨P物质(substance P,SP)对过敏小鼠腹腔灌洗液中巨噬细胞表面蛋白酶激活受体(protease activated receptors,PARs)表达的影响?方法:通过腹腔注射鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立过敏小鼠模型,再根据腹腔注射的SP的浓度将小鼠分为生理盐水组?0.2?2.0?20.0和200.0 μg/ml SP组,每组6只,同时每组均设有未致敏的对照组?最后一次激发3 h后处死小鼠,取腹腔灌洗液细胞经固定,用流式细胞仪检测巨噬细胞表面PARs的表达?结果:过敏组小鼠腹腔灌洗液中巨噬细胞表面PARs的表达水平较正常组明显降低(P < 0.01),而不同浓度的SP组之间无统计学差异(P > 0.05)?结论:SP对小鼠腹腔巨噬细胞PARs表达无影响,但过敏原可影响巨噬细胞表面PARs的表达?     

腹腔镜手术时不同腹腔环境对大鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的 探讨腹腔镜手术时不同腹腔环境下腹腔免疫功能的改变.方法 将32只大鼠雄性SD大鼠随机分为四组:开腹组,无气腹组,CO2气腹组和N2气腹组,每组8只.模拟开腹手术和相应腹腔镜手术时的气腹环境,时间为1小时,于48小时后从大鼠的腹腔中分离出巨噬细胞.RT-PCR检测腹腔巨噬细胞分泌iNOS mRNA、TNF-α mRNA及IL-1 β mRNA的表达.结果 术后四组相比较,腹腔巨噬细胞数四组间无统计学差异(P＞0.05);开腹组腹腔巨噬细胞iNOS mRNA、TNF-α mRNA及IL-1 βmRNA的表达最低(P＜0.01〉; CO2气腹组居中(P＜0.01);无气腹组和N2气腹组较高(P＜0.01);无气腹组和N2气腹组间无明显统计学差异(P＞0.05).结论 CO2气腹对腹腔免疫功能的抑制作用小于开腹组,但大于无气腹组或N2气腹组.     

豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬钩端螺旋体的机制研究

目的 研究豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬钩端螺旋体毒力株的机制,探讨天然免疫在钩端螺旋体病发病机制中的作用。方法 提取豚鼠腹腔巨噬细胞,感染1 h前分别加入细胞微丝阻断剂cytochalasin D、微管阻断剂colchicine和PI3K信号通路阻断剂LY294002,同时设立不含阻断剂的对照组,1 h后检测细胞活性。与致病性问号钩体赖型Lai株共同孵育3 h后,激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞吞噬钩体的形态学特征,流式细胞术检测各组吞噬率。结果 对照组巨噬细胞对钩体的吞噬率为（38.98±0.91）%;cytochalasin D组、colchicine组和LY294002组的吞噬率分别为（23.99±1.40）%、（40.81±0.91）%和（39.64±3.56）%;cytochalasin D组吞噬率明显低于对照组（P<0.05）;colchicine组和LY294002组与对照组比较差异无统计学意义（均P>0.05）。结论 微丝参与了豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬毒力钩体的过程,微管在吞噬过程中不起关键作用,微丝的变化不依赖PI3K信号通路。     

白细胞介素12对抗原诱导小鼠过敏性气道反应的调节作用

目的:探讨气道内应用白细胞介素12(IL-12)对抗原诱导的过敏性气道反应的影响.方法:C57BL/6小鼠以卵白蛋白(OVA)免疫建立哮喘模型,在主动免疫及抗原激发阶段气道内应用IL-12,观察肺泡灌洗液细胞成分、肺部淋巴细胞产生细胞因子、外周血IgE水平变化.结果:(1)致敏阶段应用IL-12可明显抑制嗜酸粒细胞浸润和肺淋巴细胞分泌IL-5,降低血浆总IgE和抗原特异性IgE的水平;(2)抗原激发阶段应用IL-12,可明显抑制嗜酸粒细胞的浸润,抑制肺淋巴细胞产生IL-4、IL-5及增强其产生IFN-γ,但对抗原特异性IgE水平则无明显影响;(3)当在致敏和激发阶段均应用IL-12时,可明显抑制肺淋巴细胞产生IL-4、IL-5,增强IFN-γ的产生,抑制气道内嗜酸粒细胞的浸润以及血浆中IgE水平的升高.结论:气道内应用IL-12对抗原诱导的气道过敏性炎症有明显的调节作用,并与应用时机有关;为气道应用IL-12免疫治疗支气管哮喘提供了实验依据.     

内毒素和IFN-γ对巨噬细胞的体外调变作用

目的 探讨内毒素（LPS）和INF－γ对巨噬细胞免疫调节功能的影响。方法 LPS或IFN－γ体外处理小鼠腹腔原代巨噬细胞后，采用混合细胞培养结合^H-TdR掺入法，研究巨噬细胞对ConA介导的脾淋巴细胞增殖反应的影响。结果 LPS和IFN－γ作为刺激剂在体外实验中，可以明显地增强与巨噬细胞混合培养的脾脏淋巴细胞的增殖反应。结论 LPS IFN－γ可以体外调变巨噬细胞，影响巨噬细胞的免疫调节功能。     

云芝多糖对叔丁基脂氢过氧化物所致腹腔巨噬细胞损伤的保护作用的特点

采用MTT法测定巨噬细胞的存活率，研究了小鼠腹腔注射云芝多糖（PSK）对腹腔巨噬细胞所受叔了基脂红过氧化物（tbOOH）损伤的保护作用的特点。结果显示，小鼠腹腔注射PSK对tbOOH造成的巨噬细胞损伤具有明显的保护作用。保护作用的效果与注射的次数无关，而与注射后取细胞的时间及注射的剂量有关，并在一定时间和剂量范围内呈现饱和性。体外将PSK与巨噬细胞共同温育，未发现其对巨噬细胞有保护作用。     

大黄影响φIL-1及TNF产生的体外观察

本文观察了灌服大黄醇提膏后的大鼠血清以及大黄素、大黄多糖对巨噬细胞(M)白细胞介素Ⅰ(IL—1)及肿瘤坏死因子(TNF)产生的影响.发现含大黄血清以及大黄素可抑制 MIL—1及 TNF 的产生,其抑制作用与剂量有关。大黄能抑制炎症因子的产生,可能是其治疗慢性肾炎及延缓慢性肾衰进展的又一作用机理。     

Effect of Reduqing () on endotoxin-lnduced production of tissue factor and cytokines in human whole blood) on endotoxin-lnduced production of tissue factor and cytokines in human whole blood

Objective: To study the effect of Reduqing (RDQ) Injection on the lipopolysaccharide (LPS)-induced tissue factor and cytokine production in whole blood. Methods: Heparinized human blood was incubated with LPS in the presence or absence of RDQ. The plasma concentrations of TNF-α, IL-1β, IL-6, and IL-8 were measured by enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) and the monocyte tissue factor activity was measured by a one-stage tissue factor induced plasma clotting time assay. Results: RDQ was found to diminish the LPS-induced increase of TNF-α, IL-1β and IL-6 in plasma but did not completely abolish their production. In contrast to the effect on these cytokines, RDQ caused further increase of the plasma level of IL-8 and the monocyte TF activity in the presence of LPS. Conclusions: In the in vitro whole blood assay system used in this study, the decrease of LPS-induced production of TNF-α, IL-1β, and IL-6 was similar to a previousin vivo study on the effect of RDQ on the production of these cytokines in response to two-time LPS injection in rabbits, while the increase of IL-8 and TF production was contradictory to the previous in vivo study. Potential reasons contributing to the differences are discussed.