Behcet病患者CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞检测

Behcet病存在细胞免疫功能紊乱,主要表现为活化的T淋巴细胞在炎症部位不能清除[1].CD4+CD25+FOXP3+T细胞(Treg)是具有免疫抑制功能的一类T细胞亚群,其激活和增生直接影响到细胞免疫反应的强弱[2].     

Behcet病患者CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞检测

Behcet病存在细胞免疫功能紊乱,主要表现为活化的T淋巴细胞在炎症部位不能清除[1].CD4+CD25+FOXP3+T细胞(Treg)是具有免疫抑制功能的一类T细胞亚群,其激活和增生直接影响到细胞免疫反应的强弱[2].     

伏格特-小柳-原田综合征患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例变化

目的 观察伏格特-小柳-原田（VKH）综合征患者治疗前以及治疗1个月后外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺ T细胞的比例变化。方法 采集15例VKH综合征患者治疗前以及系统的糖皮质激素治疗1个月后的外周血，分离淋巴细胞。采用细胞表面标志物CD4、CD25以及特征性的细胞核内转录因子叉状头/翅膀状螺旋转录因子(FOXP3)的抗体标记CD4⁺CD25⁺调节性T细胞，流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺ T细胞的比例，并与15例以健康志愿者为正常对照组的外周血中的该亚群细胞水平进行比较。结果 外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺ T细胞占CD4⁺细胞的比例，治疗前患者组为（0.30±0.19）%，正常对照组为（1.41±0.52）%，二者比较，差异有统计学意义（t＝7.665，P＜0.01）；治疗1个月后，患者组为（1.28±0.54）%，接近正常对照组。另有2例患者在治疗1个月后外周血中CD4⁺CD25⁺ T细胞比例异常升高。结论 VKH综合征患者外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺ T细胞的比例治疗前显著低于正常对照组，治疗后与正常对照组接近，表明VKH综合征的发病可能与患者外周血中天然性CD4⁺CD25⁺调节性T细胞的比例下降有关。     

葡萄膜炎患者外周血CD4^＋CD25^high调节性T细胞的表达

目的：通过检测葡萄膜炎患者外周血中CD4^＋CD25^high调节性T细胞的表达水平,初步探讨其在葡萄膜炎发病中的作用。 方法：取16例正常健康对照及30例不同类型活动期葡萄膜炎患者,采取抗凝外周血,进行三色免疫荧光染色、流式分析。 结果：葡萄膜炎患者外周血中CD4^＋CD25^highT细胞的百分率与正常健康对照（8.56%±4.22%vs5.72%±3.11%）相比,显著升高（P=0.022）,而且与患者病情严重程度明显相关（P=0.007）。另外CD4^＋CD25^highCTLA4＋T细胞在葡萄膜炎患者外周血中比例较正常对照明显升高（P=0.012）。 结论：葡萄膜炎患者外周血中CD4^＋CD25^highTreg细胞的异常表达可能参与疾病的发生发展,并与疾病的活动密切相关。     

偶发型视网膜色素变性患者CD4+ CD25+调节性T细胞检测

目的 检测偶发型视网膜色素变性(Retinitis Pigmentosa RP)患者外周血中CD4+ CD25+ 调节性T细胞的比例,以观察该病病变过程中是否存在自身免疫因素.方法 临床实验研究.对2007年9月至2009年8月在中山大学附属第三医院眼科抽取3年内病程偶发型RP患者(19例)、3～5年内病程偶发型RP患者(15例)和健康人(22人)外周静脉血.用流式细胞术检测外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例.结果 3年内病程偶发型RP患者外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例(9.41±4.87)%显著低于健康人外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例(13.53±6.28)%,(t=2.795,P<0.05),差异有统计学意义.3～5年内病程偶发型RP患者外周血 CD4+ CD25+ Treg细胞比例(11.17±4.90)%与3年内病程偶发型RP患者及健康人外周血 CD4+ CD25+ Treg细胞比例比较(t值分别为2.795和1.200,P值分别为0.196和2.41,P>0.05),差异无统计学意义.结论 发病早期偶发型RP患者外周血中CD4+ CD25+ Treg存淋巴细胞中所占的比例降低,提示在该病早期存在自身免疫现象,为对该病进行免疫学治疗提供了线索.

Abstract：

Objective To detect ratio of CD4+ CD25+ regulatory T cell in blood of the patients with sporadic type retinitis pigmentosa (RP).Methods Experimental Stndy Peripheral blood of 19 sporadic type RP patients with 3 years course, 15 sporadic type RP patients with 5 years course, and 22 healthy people were collected.The ratio of CD4+ CD25+ T cell was determined by flow cytometry.Results The ratio of CD4+ CD25+ T cell in sporadic type RP patients with 3 years course (9.41± 4.87)% was far lower than that in healthy controller (13.53± 6.28)%, t =2.795, P <0.01.There was no significant difference among the ratio in RP patients with 3～5 years course, in RP patients with less than 3 years course or in healthy controllers.Conclusions The ratio of CD4+ CD25+ T cell in the patients of sporadic type RP decreases in the early stage, mentioning autoimmune factor in the onset of the disease, that provides clue for immunological treatment.     

CD4+CD25+调节性T细胞参与大鼠角膜移植免疫耐受的研究

目的 探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导大鼠高危角膜移植免疫耐受时CD4+CD25+调节性T细胞在眼局部及全身的表达情况.方法 本实验采用对照设计,以13只SD大鼠作为供体,26只Wistar大鼠作为受体建立高危穿透性角膜移植模型.所有受体大鼠抽签法随机分为2组,对照组和SEB组分别腹腔注射生理盐水和SEB(75 μg/kg体重),1次/4 d,共3次,末次注射后1 d行右眼穿透性角膜移植术.术后观察大鼠角膜植片的存活时间,并采用免疫荧光染色分析CD4+CD25+T细胞在大鼠角膜植片和虹膜的表达,使用流式细胞学方法分析外周血中的CD4+CD25+T细胞百分数.结果 对照组大鼠角膜植片平均存活时间为(11.63±2.83)d,SEB组为(14.13±0.99)d,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).组织病理学检查可见发生排斥的角膜植片有大量炎性细胞浸润,炎性细胞数量与排斥反应程度呈正相关性.直接免疫荧光染色检查可见术前两组角膜组织均不表达CD4+CD25+T细胞,而术后20 d两组均有表达.虹膜铺片直接免疫荧光染色检查术前对照组未见CD4+CD25+T细胞表达,而SEB组(首次注射SEB后第10天)虹膜片可见CD4+CD25+T细胞表达,术后第20天两组大鼠虹膜铺片均可见CD4+CD25+T细胞表达,并且SEB组阳性细胞数更多.流式细胞学方法分析显示手术前后、对照组大鼠外周血中CD4+CD25+T细胞的百分数无变化,而SEB组呈先升高、后降低的变化趋势.结论 CD4+CD25+调节性T细胞参与超抗原SEB诱导大鼠高危角膜移植术后免疫耐受的形成.     

CD4＋T细胞与非感染性葡萄膜炎

目前认为非感染性葡萄膜炎是由T细胞（主要是CD4＋T细胞）介导的自身免疫性炎症。CD4＋T细胞分为Th1、Th2、Th17和调节性T细胞（Treg）4个亚群,各细胞亚群间通过复杂的细胞因子网络介导自身免疫反应和炎症反应。对各细胞亚群及其在非感染性葡萄膜炎中作用的研究是国内外葡萄膜炎发病机制研究的热点。就CD4＋T细胞各亚群分泌的细胞因子、相互作用及其在非感染性葡萄膜炎中的作用进行综述。     

重视调控眼免疫稳定的调节性T细胞

调节性T细胞是近年来免疫学研究的热点,由于其具有免疫抑制的特点,在多种免疫性疾病的发生发展中发挥免疫调节作用,在眼部的初步研究已发现其参与眼局部免疫微环境的稳定调节,并在角膜移植免疫排斥反应、葡萄膜炎、过敏性结膜炎、感染性眼病以及干眼等疾病中发挥调节作用,有望为免疫性眼病的治疗提供新的手段.

Abstract：

T regulatory cells (Tregs) have been recognized as the hotspot in recent immunology research. Because of the capability of immune suppression, they play an important role in regulating many immune associated diseases. It has been reported that they are involved in stabilizing local immune microenvironment of the eye and regulating many eye diseases such as corneal transplantation immune rejection, uveitis, allergic conjunctivitis, infectious keratitis and dry eye. Treatment with Tregs may provide novel method for immune related eye diseases.     

葡萄膜炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的表达

目的:通过检测葡萄膜炎患者外周血中CD4+CD25high调节性T细胞的表达水平,初步探讨其在葡萄膜炎发病中的作用。方法:取16例正常健康对照及30例不同类型活动期葡萄膜炎患者,采取抗凝外周血,进行三色免疫荧光染色、流式分析。结果:葡萄膜炎患者外周血中CD4+CD25highT细胞的百分率与正常健康对照(8.56%±4.22%vs5.72%±3.11%)相比,显著升高(P=0.022),而且与患者病情严重程度明显相关(P=0.007)。另外CD4+CD25highCTLA4+T细胞在葡萄膜炎患者外周血中比例较正常对照明显升高(P=0.012)。结论:葡萄膜炎患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞的异常表达可能参与疾病的发生发展,并与疾病的活动密切相关。     

调节性T细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的作用

目的探讨CD4^＋调节性T细胞（Treg）在实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）病程进展中的作用。方法通过IRBP161-180和完全弗氏佐剂皮下免疫,在B10RⅢ小鼠诱导产生EAU,对眼内炎症行临床检查并对其严重程度予以评分。通过免疫磁珠分选EAU恢复期小鼠脾脏CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞和CD4^＋CD25^-T细胞。通过流式细胞术分析脾脏CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞的比例。通过体内过继转移评价Treg的抑制效应。结果小鼠诱导EAU后产生眼内炎症反应。将EAU恢复期小鼠脾细胞、脾CD4＋T细胞或脾CD4^＋CD25^＋T细胞过继转移入正常小鼠继而皮下免疫诱导EAU,眼底检查显示受者小鼠眼内炎症程度明显降低。相反,正常小鼠脾细胞、EAU恢复期脾CD8^＋T细胞或CD4^＋CD25^-T细胞过继转移无此效应。流式细胞分析显示随着EAU的发展,脾内CD4^＋CD25^＋T细胞比例和CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞比例逐步升高,并在恢复期维持较高水平。结论 CD4^＋Treg随着EAU的病程进展数量增多,它们可能参与EAU的自发缓解。     

间充质干细胞对实验性自身免疫性葡萄膜炎眼部CD4+T细胞亚群浸润的影响

目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的治疗效果.方法 Lewis大鼠12只随机分为对照组与治疗组,均为6只大鼠.大鼠单后足及背部6点注射含30 μg光感受器间维生素A类结合蛋白多肽片段R16的乳剂0.2 ml,建立EAU模型,观察各组临床表现.贴壁培养法纯化Wistar大鼠骨髓MSCs.建模后第9～11天,治疗组每日行尾静脉注射浓度为5×106/ml的MSCs悬液1 ml,对照组注射等体积磷酸盐缓冲液.建模后第15天,分离各组大鼠眼部细胞,通过流式细胞仪检测干扰素-γ、白细胞介素-17和叉状头螺旋转录因子3阳性细胞的比例.采用混合线性模型进行重复测量资料的方差分析统计临床评分;独立样本t检验统计流式细胞检测结果.结果 建模后第6天,虹膜血管轻度扩张充血;第9天前房轻度混浊,瞳孔缩小,对光反射消失;第12天前房混浊,瞳孔膜闭,眼底红光反射变暗甚至消失;之后炎症反应逐渐减轻.第11～15天,MSCs治疗组临床评分明显低于对照组,差异有统计学意义(t=2.42、2.21、4.16、5.24、4.03,P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,MSCs治疗可以显著减少眼部CD4-T细胞、Th1细胞和Th17细胞比例以及增加调节性T细胞比例.结论 MSCs治疗可以减轻EAU的临床表现;减少CD4+T细胞向眼部浸润,下调眼部效应性Th1细胞、Th17细胞以及上调调节性T细胞.     

内因性葡萄膜炎患者的T淋巴细胞亚群改变

目的 旨在了解内因性葡萄膜炎患者的外周血Ｔ淋巴细胞亚群改变。方法 应用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ法）检测４５例内因性葡萄膜炎患者的外周血Ｔ淋巴细胞亚群,同期收集３２例健康对照者的外周血作为对照。结果 ４５例葡萄膜炎患者葡萄膜炎患者外周血ＣＤ３＋、ＣＤ８＋细胞数目下降,ＣＤ４＋升高,ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值升高。不同类型的葡萄膜炎患者的Ｔ淋巴细胞亚群数目改变不明显。经局部和／或全身皮质类固醇药物治疗后,部分患者的Ｔ淋巴细胞亚群数目有轻度改变。结论 葡萄膜炎患者体内免疫功能异常,这也为免疫治疗的观察提供了一定依据。     

对自身免疫性葡萄膜炎大鼠调节性T淋巴细胞变化的观察

目的 观察酪氨酸酶相关蛋白(TRP)诱导实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠调节性T淋巴细胞及其相关细胞因子的变化,探讨其可能的免疫机制.方法 Lewis大鼠24只,随机分为实验组(10只)、Freund佐剂组(7只)和空白对照组(7只).TRP 100μg腹腔内注射Lewis大鼠,建立动物模型.注射后第15d取动物外周血流式细胞学三色荧光测CD4 、CD25 、Foxp3阳性细胞比例,ELISA法测血清中IL-10、TGF-β质量浓度行统计学比较.结果 炎症期实验组动物外周血中CD25 细胞比例升高,Foxp3阳性细胞比例明显下降(P＜0.01);血清中IL-10、TGF-β质量浓度下降(P＜0.01).结论 EAU炎症期外周血T淋巴细胞活化;调节性T淋巴细胞(Foxp3阳性细胞)和细胞因子(IL-10、TGF-β)减少致免疫抑制作用减弱,参与了葡萄膜炎的发生和发展.     

Fas／FasL抗原在葡萄膜炎患者外周血T淋巴细胞上的表达

目的评价和探讨Fas/FasL抗原在葡萄膜炎患者外周血T淋巴细胞上的表达及其可能存在的意义.方法采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)及三色荧光双标记细胞免疫荧光染色技术对26例Behcet病、17例Vogt-小柳原田综合征患者、25例特发性前葡萄膜炎患者及43例正常人外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞表面Fas和FasL的表达进行检测.结果Behcet病、Vogt-小柳原田综合征和特发性前葡萄膜炎患者CD4+T细胞Fas的表达阳性率分别为(25.70±7.32)%、(19.60±11.02)%、(20.81±7.40)%,均显著高于正常对照组[(14.02±6.30)%],而FasL的表达阳性率与正常对照组比较,差异无显著性意义.Behcet病和Vogt-小柳原田综合征患者CD8+T细胞Fas的表达阳性率分别为(9.47±6.97)%,(6.84±5.53)%,均显著高于正常对照组[(3.47±2.75)%];特发性前葡萄膜炎患者CD8+T细胞Fas的表达阳性率[(5.34±3.08)%]与正常对照组[(3.47±2.75)%]比较,差异无显著性意义.Behcet病和Vogt-小柳原田综合征患者CD8+T细胞FasL的表达阳性率分别为(3.66±2.16)%、(4.05±1.38)%,与正常对照组[(3.09±2.04)%]比较,差异无显著性意义;特发性前葡萄膜炎患者CD8+T细胞FasL的表达阳性率[(1.58±0.93)%]低于正常对照组[(3.09±2.04)%].结论葡萄膜炎患者CD4+T细胞和CD8+T细胞Fas的表达阳性率高于正常对照组,而FasL的表达阳性率相对不足,提示这些活化的Fas+T淋巴细胞不能通过Fas/FasL系统介导的凋亡途径被清除,此可能是葡萄膜炎患者体内大量活化的淋巴细胞长期存在和炎症持续存在及复发的重要原因.     

间充质干细胞对异体角膜移植大鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞水平的影响

目的探讨静脉输注间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对角膜移植大鼠CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的影响。方法将12只Wistar大鼠双眼角膜作为供体角膜植片,24只Lewis大鼠右眼作为受体植床制作大鼠异体角膜移植动物模型,24只Lewis模型大鼠随机分为对照组和治疗组,每组12只。治疗组造模后尾静脉注射MSC(5×106mL-1)1mL,对照组给予等体积的PBS。术后4d开始裂隙灯观察。术后10d处死大鼠,应用RT-PCR检测脾脏单个核细胞Foxp3 mRNA的表达;采用流式细胞仪检测脾脏中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg占CD4+ T细胞的比例。结果术后10d治疗组临床评分为(4.00±0.63)分,显著低于对照组(5.67±1.37)分(P<0.05)。治疗组大鼠脾脏中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg的比例为(6.25±0.35)%,较对照组(5.45±0.38)%明显升高(P<0.05)。治疗组脾脏单个核细胞Foxp3 mRNA的相对表达量为5.65±0.45,与对照组的2.13±0.74相比显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MSC可能通过上调CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg参与诱导前房相关免疫偏离,有效预防并治疗角膜移植免疫排斥反应。     

CD4＋CD25＋调节性T细胞在Graves眼病患者外周血中的表达

目的：通过检测CIM’CD25’调节性T细胞在Graves眼病患者外周血中的表达,以观察该病患者外周血中CIM’C1~25’调节性T细胞的变化规律。方法：临床实验研究。采用流式细胞术检测对Graves病不伴有眼征患者组（53例）,Graves眼病患者组（51例）,正常对照组（51例）的外周静脉血CD4’CD25’Treg细胞比例进行检测。结果：与正常对照组比较,Graves病不伴有眼征患者组Treg水平下降（P〈0．01）;与正常对照组比较,Graves眼病患者组外周血Treg水平显著下降（P〈0．01）;Graves眼病患者组外周血Treg数量明显低于Graves病不伴有眼征患者组（P〈0．01）。结论：Graves眼病患者外周血中CIM’CD25’Treg在淋巴细胞中所占的比例降低,存在自身免疫调节紊乱。可能是其机体细胞免疫抑制受损的重要机制,为对该疾病进行免疫学治疗提供了新线索。     

辅助性T细胞17与葡萄膜炎关系的研究进展

辅助性T细胞(T helper cell,Th)17是一类近年来发现的CD4+Th细胞新亚型,由天然T细胞前体分化而来,具有独立的分化和调节机制,并大量产生白介素(interleukin,IL)-17、IL-6和肿瘤坏死因子-α,而不产生干扰素-γ和IL-4.Th17细胞在自身免疫性疾病以及感染性疾病的发生、发展、转归过程中有重要作用.在眼科与Behcet病、Vogt-小柳原田病等葡萄膜炎的发生及发展均相关.     

PDR患者外周血CD4+CD25+T细胞和相关基因FOXP3的变化及临床意义

目的：探讨增殖性糖尿病视网膜病（ proliferative diabetic retinopathy,PDR）患者外周血CD4＋CD25＋T细胞及相关基因FOXP3表达变化意义,观察其在PDR发病中的临床意义。
　　方法：采用流式细胞术检测PDR患者及正常对照外周血CD4＋CD25＋T细胞比例,Q－PCR测PDR患者、糖尿病和正常人中 FOXP3, IL－17和CTLA－4的 mRNA 表达,并用Wilcoxon秩和检验和直线相关分析法分析PDR患者糖化血红蛋白、年龄、血脂、肾功能的临床资料及它们之间相关度。
　　结果：PDR患者CD4＋T细胞降低,CD4＋CD25＋T无显著差异,FOXP3和CTLA－4在PDR中下降, IL－17增高。 CD4＋T细胞与年龄相关,CD4＋CD25＋T与患者的血肌酐存在正相关性,CD4＋CD25＋T细胞水平与年龄、糖化血红蛋白、血脂、血肌酐（ Cr）、尿素氮（ BUN）均无明显相关性。 PDR患者糖化血红蛋白、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白均高于正常值。
　　结论：CD4＋CD25＋T细胞可能参与PDR的发病机制,并且血脂异常提示PDR可能与血脂相关。     

白细胞介素-23受体过表达对实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的初步探讨白细胞介素(IL)-23受体(IL-23R)过表达对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)模型小鼠辅助性T细胞17 (Th17细胞)/调节性T细胞(Treg细胞)平衡的影响。方法 8周龄雌性C57BL/6J小鼠12只, 随机分为LV-Ctrl组、LV-IL-23R组, 每组各6只。两组小鼠经尾静脉分别注射LV-Ctrl、LV-IL-23R慢病毒;注射后7 d采用光感受器间维生素A类结合蛋白1-20主动免疫构建EAU小鼠模型。免疫后13 d开始, 每2天使用间接检眼镜观察小鼠眼底并进行临床评分。免疫后30 d, 苏木精-伊红染色观察小鼠视网膜组织病理学改变。酶联免疫吸附测定检测两组小鼠血清中IL-17水平;流式细胞仪检测Th17细胞和Treg细胞比例;实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-23R、IL-17、维甲酸相关孤儿受体γt (RORγt)、IL-10和叉头状转录因子p3 (Foxp3) mRNA相对表达量。组间比较采用重复测量方差分析、独立样本Mann-WhitneyU检验和独立样本t检验。结果与LV-Ctrl组比较, LV-IL-23R组小鼠视网膜炎症反应更重。免疫后13 ...     

CD4+CD25+调节性T细胞在Graves眼病患者外周血中的表达

目的:通过检测CD4+CD25+调节性T细胞在Graves眼病患者外周血中的表达,以观察该病患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化规律。方法:临床实验研究。采用流式细胞术检测对Graves病不伴有眼征患者组(53例),Graves眼病患者组(51例),正常对照组(51例)的外周静脉血CD4+CD25+Treg细胞比例进行检测。结果:与正常对照组比较,Graves病不伴有眼征患者组Treg水平下降(P<0.01);与正常对照组比较,Graves眼病患者组外周血Treg水平显著下降(P<0.01);Graves眼病患者组外周血Treg数量明显低于Graves病不伴有眼征患者组(P<0.01)。结论:Graves眼病患者外周血中CD4+CD25+Treg在淋巴细胞中所占的比例降低,存在自身免疫调节紊乱。可能是其机体细胞免疫抑制受损的重要机制,为对该疾病进行免疫学治疗提供了新线索。