头孢米诺等抗菌药物对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及拟杆菌属的体外抗菌活性

目的 比较头孢米诺等抗菌药物对临床分离大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、拟杆菌属的体外抗菌活性.方法 琼脂稀释法测定16种抗菌药物对来自全国15家教学医院的945株大肠埃希菌和588株肺炎克雷伯菌的MIC值以及4种抗菌药物对50株拟杆菌属的MIC值.WHONET 5.4软件进行药敏数据统计分析.结果 1 533株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,不产超广谱β内酰胺酶(extended spectrum beta lactamases,ESBLs)和AmpC 628株,837株仅产ESBLs,68株产AmpC.头孢米诺对不产ESBLs或单产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌敏感率均高于90%,其MIC_(50)较头孢美唑低2～4倍,较头孢西丁低8～16倍;MIC90较头孢美唑低2～8倍,较头孢西丁低8～16倍.对单产ESBLs的菌株,头孢米诺体外抗菌活性优于第三、四代头孢菌素、头孢哌酮/舒巴坦、氨曲南、左氧氟沙星和阿米卡星,劣于碳青霉烯类药物,活性与哌拉丙林/三唑巴坦相仿.但对产AmpC的菌株,头孢米诺的敏感率低于20%.头孢米诺对拟杆菌属的敏感率为90%,高于头孢美唑(50%～70%)和青霉素(0%),活性与甲硝唑相仿.结论 头孢米诺对产ESBLs及非产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌以及拟杆菌属有良好的体外抗菌活性,提示头孢米诺可为临床治疗此类菌株感染提供一种选择.     

头孢米诺的体外抗菌作用研究

目的评价头孢米诺对近期临床分离的肠杆菌科细菌、不发酵糖革兰阴性杆菌和厌氧菌的体外抗菌作用。方法采用琼脂稀释法测定头孢米诺对884株临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和厌氧菌等的体外抗菌作用。结果 316株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中不产酶株96株(30.4%),单产ESBLs菌173株(54.7%),单产AmpC酶菌6株(1.9%)和产ESBLs+AmpC酶菌41株(13.0%)。头孢米诺对上述大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中不产酶和单产ESBLs菌株,以及变形杆菌属和摩根菌属细菌均具有良好的抗菌活性,MIC50和MIC90值大多≤2 mg/L;抗菌活性优于头孢美唑和头孢西丁;头孢米诺对不产酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的抗菌活性亦优于测试的头孢硫脒、头孢呋辛、头孢哌酮-舒巴坦和哌拉西林-他唑巴坦2种酶抑制剂复方,但抗菌活性均不及亚胺培南和美罗培南。头孢米诺对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产AmpC酶菌株的抗菌活性和肠杆菌属、沙雷菌属、枸橼酸杆菌属细菌和铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等不发酵糖革兰阴性杆菌的抗菌活性差;但头孢米诺对梭杆菌属细菌有高度抗菌活性,MIC50和MIC90分别为≤0.06 mg/L和1 mg/L,对其他受试的厌氧菌亦具有良好的抗菌活性。结论头孢米诺对不产酶和单产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,以及变形杆菌属细菌、摩根摩根菌和厌氧菌等均具有良好的抗菌活性。提示头孢米诺可用于上述敏感菌以及厌氧菌所致感染的治疗。     

头孢美唑和头孢西丁对产与非产超广谱β内酰胺酶菌株体外抗菌活性比较

目的测定头孢美唑和头孢西丁对产ESBLs菌株的体外抗菌活性，并与非产ESBLs菌株的体外抗菌活性相比较。方法收集2004年112月华西医院各临床科室分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌520株，采用Kirby-Bauer琼脂扩散法进行体外药敏试验并用表型确证试验检测ESBLs。结果筛选出产ESBLs菌226株，产酶菌检出率为43．5％，其中323株大肠埃希菌的ESBLs检出率为45．8％，197株肺炎克雷伯菌的ESBLs检出率为39．6％。头孢美唑对我院产ESBLs菌株体外抗菌活性优于头孢西丁。结论头霉素类抗生素可作为治疗产ESBLs菌株引起的感染的可选药物，但仍应参考药敏试验结果。我院分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢美唑的敏感性略优于头孢西丁。     

头孢美唑对产ESBLs肠杆菌科细菌的体外抗菌作用研究

目的 评价头孢美唑对产ESBLs肠杆菌科细菌的体外抗菌活性.方法 采用琼脂稀释法测定头孢美唑对临床分离大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变形杆菌523株的体外抗菌作用.结果 523株细菌中产ESBLs 294株、产AmpC酶7株、同时产ESBLs和AmpC酶40株,非产ESBLs和AmpC酶182株.头孢美唑对上述4种肠杆菌科细菌中产ESBL-s菌株和非产ESBLs菌株均具有良好的抗菌作用,并较头孢西丁强2～4倍,但较头孢米诺为差.头孢美唑对ESBLLs高度稳定,但对AmpC酶稳定性差,产AmpC酶菌株对其多呈现耐药.头孢美唑对产ESBLs菌株的作用优于受试的半合成青霉素,第一、第二、第三和第四代头孢菌素,亦优于氨苄西林-舒巴坦、头孢哌酮-舒巴坦和哌拉西林-他唑巴坦,但差于亚胺培南、美罗培南和帕尼培南;较受试的氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗菌药略强或相仿.结论 头孢美唑对ESBLs稳定,对产ESBLs菌株和非产ESBLs菌株均具有良好的抗菌作用.提示该药是治疗产ESBLs肠杆菌科细菌所致感染的可选药物之一.     

头孢美唑对肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的体外抗菌活性

目的 :评价头孢美唑对肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的体外抗菌活性。方法 :收集临床标本分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌共 4 2 6株 ,用Kirby Bauer琼脂扩散法作药敏试验 ;用表型确证试验检测超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)。 结果 :4 2 6株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中 ,头孢美唑的抑菌率为 91.1% ,逊于亚胺培南 (10 0 % )、头孢哌酮 舒巴坦 (10 0 % )、哌拉西林 三唑巴坦 (99.5 % )和头孢吡肟 (94 .4 % ) ,明显优于青霉素类抗生素哌拉西林 (48.8% )和第二代头孢菌素头孢呋辛 (6 0 .1% ) ,也优于第三代头孢菌素头孢曲松 (6 2 .9% )、头孢噻肟 (6 4 .8% )、头孢哌酮 (6 5 .7% )和头孢他啶 (88.3% )。 14 2株 (33.3% )菌株经表型确证试验证实为产ESBLs;头孢美唑对产ESBLs株的抑菌率为 87.3%。结论 :头孢美唑对肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的体外抗菌活性优于第二、三代头孢菌素 ,逊于亚胺培南、头孢哌酮 舒巴坦、哌拉西林 三唑巴坦和第四代头孢菌素头孢吡肟。头孢美唑可用于产ESBLs株引起感染的治疗。     

抗菌药物对产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌接种效应的研究

目的研究美罗培南、头孢米诺、哌拉西林-他唑巴坦、头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松7种常见抗生素对产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的接种效应。方法用微量肉汤稀释法测定7种抗生素对22株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌在标准细菌接种量(5×10~5CFU/mL)和高接种菌量(5×10~7CFU/mL)时的MIC。结果随着接种菌量增加,美罗培南和头孢米诺对所有受试菌株的MIC无接种效应;哌拉西林-他唑巴坦对SHV-12型和1株CTX-M-14菌的MIC表现出接种效应;头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松存在接种效应的菌种分别占所有受试菌株的86.4%(19/22)、40.9%(9/22)、10%(22/22)和100%(22/22)。结论对22株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,美罗培南和头孢米诺不存在接种效应,哌拉西林-他唑巴坦对部分基因型ESBLs菌株(SHV-12型和1株CTX-M-14菌株)存在接种效应,头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松存在接种效应。     

全国10所教学医院产ESBLs和质粒AmpC酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的研究

目的研究全国10所教学医院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中同时产ESBLs及质粒型AmpC酶菌株的比率及其基因型特点,比较不同地区间的差别。方法收集来自中国不同地区的10所教学医院2003年度产ESBLs的大肠埃希菌90株和肺炎克雷伯菌61株,用等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点;接合试验证实酶基因有无可转移性;采用多重聚合酶链反应(MPCR)及序列分析确定质粒AmpC酶的基因型。结果武汉、南京、济南等地产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌所占比率相近,均在50%左右;北京产ESBLs大肠埃希菌所占比率低于肺炎克雷伯菌;其他各城市产ESBLs大肠埃希菌所占比率均略高于肺炎克雷伯菌。在产ESBLs菌株中24.4%大肠埃希菌和19.4%肺炎克雷伯菌对头孢西丁耐药。除沈阳无对头孢西丁耐药菌株外,其他医院均存在对头孢西丁耐药株。产ESBLs菌株基因型主要为CTX—M型,其中以CTX-M-9组最为常见,其次为CTX-M-1组。在同时产ESBLs和AmpC的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,且均为CTX-M/ DHA-1型(多为CTX-M-9/DHA-1型)。3株同时产ESBLs和AmpC肺炎克雷伯菌的接合子PCR结果与其供体菌完全相同。结论参与本研究的各所教学医院产ESBLs菌株基因型主要为CTX-M-9组,在同时产ESBLs和AmpC酶的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,多为CTX-M-9/DHA-1型,该酶可通过质粒传播。     

头孢匹肟和亚胺培南对肠杆菌属和产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌稳定性的研究

目的调查2001～2003年头孢匹肟、亚胺培南对临床分离的肠杆菌属、产ESBLs肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌的体外抗菌活性的变化,以了解头孢匹肟、亚胺培南两种抗生素的稳定性.方法采用Vitek-32全自动微生物分析仪GNS-120药敏卡测定头孢匹肟、亚胺培南等10种抗生素对699株临床分离株的最低抑菌浓度(MIC),同时检测肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌产ESBLs的检出率.结果三年中,对于肠杆菌属细菌,头孢他啶、头孢曲松的体外抗菌活性有下降的趋势,而亚胺培南、头孢匹肟、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦的活性较为稳定.2001～2003年产ESBLs大肠埃希菌的检出率为20.9～36.8%,上升较快,产ESBLs肺炎克雷伯菌的检出率为16.7%～28.8%.头孢曲松、庆大霉素、环丙沙星、头孢匹肟、头孢他啶、氨曲南对ESBLs阳性菌抑菌浓度明显高于ESBLs阴性菌,而亚胺培南对两组的抑菌浓度没有明显差异.结论对于肠杆菌属细菌和产ESBLs肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌,亚胺培南、头孢匹肟与喹诺酮类、氨基糖苷类、磺胺类等抗生素相比有较强的抗菌活性,且稳定性高,喹诺酮类与氨基糖苷类抗生素交叉耐药明显,且有上升的趋势.     

改良的纸片表型筛选法用于AmpC酶的检测

目的 建立并评价一种检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶的新方法.方法 采用改良的纸片表型筛选法,以头孢西丁三维试验和多重PCR法作为对照,对临床分离的耐第三代头孢菌素的164株大肠埃希菌和40株肺炎克雷伯菌进行AmpC酶的检测.结果 164株大肠埃希菌中,改良的纸片表型筛选法检出8株产AmpC酶的阳性菌株（8/164,4.88%）,其中有2株同时产ESBLs酶;40株肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶菌株,但检出2株（2/40,5.00%）诱导产AmpC酶菌株.头孢西丁三维试验在大肠埃希菌中检出AmpC酶阳性菌株8株（8/164,4.88%）,在肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶株.多重PCR法检出大肠埃希菌AmpC酶耐药基因阳性9株（9/164,5.49%）,肺炎克雷伯菌阳性2株（2/40,5.00%）.结论 改良的纸片表型筛选法可用于检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶和诱导产酶株,并可同时检测产ESBLs酶菌株,该法操作简便、结果可靠、无需特殊仪器,可在普通临床实验室应用.     

E试验检测氨苄西林-舒巴坦、克林霉素和头孢哌酮的体外抗菌活性

目的了解氨苄西林-舒巴坦、克林霉素、头孢哌酮对目前社区及住院患者常见临床分离菌的体外抗菌活性。方法采用E试验测定3种抗菌药物对待测菌株的MIC。结果对氨苄西林-舒巴坦,MSSA、粪肠球菌、A群链球菌、流感嗜血杆菌、青霉素敏感肺炎链球菌(PSSP)、卡他莫拉菌和厌氧菌(拟杆菌属10株、痤疮丙酸杆菌2株、迟缓真杆菌1株、无害梭杆菌1株、消化链球菌2株)100%敏感,非产ESBLs肺炎克雷伯菌和非产ESBLs大肠埃希菌(NESBL-ECO)分别为86.7%和53.3%敏感,鲍曼不动杆菌和屎肠球菌分别为23.3%和25.0%敏感。对克林霉素、MSSA、厌氧菌、PSSP和A群链球菌敏感率分别为60.0%、31.2%、30.0%和10.0%。对头孢哌酮、非产ESBLs大肠埃希菌、MSSA和非产ESBLs肺炎克雷伯菌为96.7%～100%敏感,铜绿假单胞菌40%敏感,鲍曼不动杆菌未见敏感菌株。结论氨苄西林-舒巴坦对MSSA、粪肠球菌、A群链球菌、非产ESBLs肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌、PSSP、卡他莫拉菌和厌氧菌的体外抗菌活性较好。MSSA对克林霉素的敏感率为60.0%,其他所研究的细菌敏感率较低。头孢哌酮对MSSA、非产ESBLs大肠埃希菌、非产ESBLs肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性好。这3种抗菌药物可经验用于社区获得性感染治疗。     

产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分布及耐药性分析

目的调查分析院内产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌临床分布及耐药情况。方法收集浏阳市中医医院2007年1月至2010年1月临床分离到的大肠埃希菌401株和肺炎克雷伯菌319株,采用纸片扩散法(K-B)对分离株进行抗菌药物敏感试验和ESBLs筛选和确证试验,并对其临床分布及耐药情况进行统计分析。结果 720株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,产超广谱β-内酰胺酶阳性率为37.9%;其中大肠埃希菌阳性率为42.1%;肺炎克雷伯菌阳性率为32.6%。产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均对第3代头孢菌素和单环β-酰胺类抗菌药物呈现高度耐药性,对氨基糖苷类、氟喹诺酮类、磺胺类抗菌药物也存在较高耐药性,但是对亚胺培南敏感。结论该院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的检出率高并呈多重耐药性,这些产ESBLs菌分布在不同病区的各种标本中,临床应及时掌握它们的临床分布及耐药特点,合理的应用抗菌药物、控制ESBLs菌株的传播和流行。     

产超广谱β-内酰胺酶细菌的耐药性研究

目的 了解我院产超广谱β-内酰胺酶(ESBIs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对临床常用抗菌药物的耐药情况,为临床治疗和控制ESBLs菌的感染提供依据.方法 采用VITEK全自动微生物分析仪进行细菌鉴定,KB纸片法测定11种抗菌药物的药敏,双纸片协同法检测ESBLs.结果 从2005年1月-2005年12月住院患者送检的标本中分离出大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌704株,其中大肠埃希菌282株,肺炎克雷伯菌422株.产ESBLs菌357株,非产ESBLs菌347株,总检出率为50.7%(357/704),其中产ESBLs肺炎克雷伯杆菌211株,检出率为50.0%(211/422),产ESBLs大肠埃希菌146株,检出率为51.77%(146/282).产ESBLs菌与非产ESBLs菌对亚胺培南100%敏感,除大肠埃希菌对哌拉西林胞唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦外,产ESBLs细菌对其他9种抗菌药物的耐药率均明显高于非产ESBLs细菌(P＜0.0236-P＜0.005之间).结论 产ESBLs菌对常用抗菌药物耐药率较高,碳烯霉烯类是治疗产ESBLs菌严重感染的首选药物.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌药敏分析

目的 了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的分离率及其耐药情况,为临床治疗提供依据.方法 收集2007年1月至2009年12月临床送检患者标本分离出的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌,采用常规生化方法和梅里埃API20E系统鉴定、纸片扩散确证试验检测ESBLs,药敏试验采用纸片扩散法.结果 281株大肠埃希菌和174株肺炎克雷伯菌确证试验产ESBLs阳性率分别为36.2%和40.9%,产ESBLs菌对β-内酰胺类抗菌药高度耐药,对阿米卡星、头孢西丁、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉维酸、替卡西林/克拉维酸耐药性在5.4%～25.6%,对环丙沙星、复方新诺明和庆大霉素耐药率较高,为65.1%～88.9%,未发现耐亚胺培南产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌.结论 产ESBLs菌的问题日益严重,临床及时了解它们的耐药特点和变化趋势,对合理应用抗菌药物、延缓细菌耐药性的产生,控制播散菌株的流行具有十分重要的意义.     

In Vitro Activity of Mezlocillin and Its Related Compounds Against Aerobic and Anaerobic Bacteria

A total of 900 clinical isolates of aerobic (462 isolates) and anaerobic (438 isolates) bacteria were tested against mezlocillin in comparison with other penicillins, and the aerobes were also tested against cephalothin, cefoxitin, and cefamandole. Among penicillins, mezlocillin was the most effective against Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella species, Pseudomonas aeruginosa, and Bacteroides fragilis. Mezlocillin was more effective than cephalothin against Klebsiella pneumoniae.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的耐药性研究

目的了解我院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌对临床常用抗生素的耐药情况，为临床治疗和控制ESBLs菌感染提供依据。方法从2003．1-2005．3我院住院部各科室患者送检的标本中分离出肺炎克雷伯菌和太肠埃希氏菌共229份（同一患者同一菌株只入选一次），其中肺炎克雷伯菌59例，大肠杆菌170例，采用Microscan-walkaway96全自动微生物分析仪NC21板进行细菌鉴定及12种抗菌药物的药敏测定，抑酶剂增强纸片法进行ESBL检测。结果产ESBLs菌56株，非产ESBLs菌173株，总检出率为28．14％（56／229），其中产ESBLs肺炎克雷伯杆菌12株，检出率为20．34％（12／59），产ESBLs大肠杆菌44株，检出率为25．88％（44／170）。产ESBLs菌与非产ESBLs菌对亚胺培南100％敏感。除亚胺培南、哌拉西林／他巴唑坦、阿米卡星外，产ESBLs菌对其他9种抗菌药物的耐药率均高于非产ESBL菌，其中，对阿莫西林、氨曲南、头孢曲松、头孢他啶均100％耐药。产ESBLs菌对喹诺酮类抗生素环丙沙星的耐药率为69．6％，作为产ESBL菌感染用药应慎重考虑。结论产ESBLs菌对常用抗生素耐药率较高．碳烯青霉素类抗生素亚胺培南是治疗产ESBL细菌感染的首选药物。     

耐头孢西丁肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶的检测及耐药基因分析

目的 了解浙江省台州地区肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC -内酰胺酶产生情况及AmpC酶的耐药基因型别特征。 方法 采用VITEK-AMS60全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按CLSI推荐的确证试验检测ESBLs,采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产AmpC酶阳性菌株,通过酶粗提物三维试验确证产AmpC酶,并经PCR测序等实验分析该菌株的基因型。 结果 在对头孢西丁不敏感的86株肺炎克雷伯菌中,ESBLs和AmpC酶检出率分别为88.37%和77.91%;以同产ESBLs和AmpC酶为主要形式,占47.67%,单产ESBLs和单产AmpC酶分别占40.70%和30.23%;AmpC酶阳性菌株的耐药基因型:62株为DHA-1型、5株为ACT-1型。 结论 台州地区肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶检出率较高,AmpC酶以DHA-1型为主。     

磷霉素氨丁三醇对尿标本中肠杆菌科细菌体外抗菌活性研究

目的了解磷霉素氨丁三醇对尿标本中肠杆菌科细菌的体外抗菌活性,指导临床合理用药。方法采用ATB系统对中段尿标本分离的1185株肠杆菌科细菌进行鉴定,纸片扩散法进行药敏试验和ESBI．S的检测,结果按CLSI2012年版标准判断;应用WHONET5．6软件分析病原菌的分布及耐药情况。结果1185株肠杆菌科细菌对磷霉素氨丁三醇的敏感率为90．8％,其中大肠埃希菌929株（78．4％）、肺炎克雷伯菌124株（10．5％）和奇异变形杆菌69株（5．8％）对磷霉素氨丁三醇的敏感率分别为93．1％、88．7％和79．7％。住院患者尿标本分离的肠杆菌科细菌对磷霉素氨丁三醇的敏感率低于门诊患者（87．0％对92．7％）。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌ESBLs的检出率分别为54．4％、38．7％和23．2％。产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对磷霉素氨丁三醇的敏感率分别为89．5％和87．5％。结论尿标本培养获得的肠杆菌科细菌以大肠埃希菌为主,磷霉素氨丁三醇对尿标本分离的产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的肠杆细菌科细菌具有良好的体外抗菌活性,可作为临床经验用药之一。     

对头孢吡肟敏感的疑似产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和克雷伯菌属的分子生物学特征

目的 了解初筛试验疑似产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)但确证试验未能确认,而对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属中的ESBLs和质粒介导的AmpC酶.方法 纸片扩散法检测18株细菌对常用抗菌药物的敏感性;PCR及多重PCR法检测细菌中的ESBLs和质粒AmpC酶基因;质粒转移接合试验检测耐药质粒的可传递性;细菌基因间重复一致序列(ERIC)-PCR法检测供体大肠埃希菌和受体E.coli J53及其接合子的同源性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)对11株大肠埃希菌和6株肺炎克雷伯菌进行同源性分析.结果 18株细菌均为2005年1月至12月期间上海华山医院临床分离的菌株,其中大肠埃希菌11株,肺炎克雷伯菌6株,产酸克雷伯菌1株,按常规方法对细菌进行重新鉴定和药敏试验.18株细菌经美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的ESBLs初筛试验结果均为ESBLs产生可疑菌株,但确证试验未能确认;所有菌株的头孢吡肟抑菌圈直径均在18 mm以上,显示敏感.PCR检测结果显示,11株大肠埃希菌中有9株产CIT型质粒AmpC酶,DNA测序及序列比对结果证实为CMY-2型AmpC酶,未发现TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、SFO等广谱或ESBLs;6株肺炎克雷伯菌中有5株产DHA型质粒AmpC酶,DNA测序及序列比对结果证实为DHA-1型AmpC酶;5株产DHA-1型AmpC酶的肺炎克雷伯菌株中,4株同时伴有广谱或ESBLs:其中2株产SHV-11型广谱酶,另2株分别产CTX-M-14型ESBLs和SHV-62型ESBLs;1株产酸克雷伯菌亦单产DHA-1型AmpC酶;质粒转移接合试验结果表明,携带耐药基因的质粒可从供体菌转移至敏感细胞中;PFGE结果显示,6株肺炎克雷伯菌的谱型各不相同,而11株大肠埃希菌可分为5种谱型,其中B型包含7株细菌,这7株细菌均产生质粒介导的CMY-2型AmpC酶,并分离自外科病房,提示可能存在克隆菌株的流行传播.结论在确证试验未能确认的疑似产ESBLs中,对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌主要产生质粒介导的AmpC酶,但尚有少数菌株同时伴有产ESBLs.对同时产生ESBLs和AmpC酶的菌株,临床微生物实验室必须报告这些菌株对头孢吡肟耐药.     

焦磷酸测序检测产ESBLs革兰阴性菌的SHV基因型

目的探讨一种快速、准确检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性菌的ESBLs基因分型方法。方法双纸片法确定产ESBLs的临床分离菌,聚合酶链反应(PCR)扩增ESBLs的SHV基因片段,用焦磷酸测序技术对29株成都市区临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌进行SHV基因分型研究,检测SHV基因片段中编码35位氨基酸和编码43位氨基酸位点的基因多态性。同时,采用纸片扩散法进行药物敏感性试验。结果焦磷酸测序发现,本地区分离出的29株产ESBLs临床分离菌有21株扩增出SHV基因片段,且在43位氨基酸密码子均没有多态性,35位密码子有基因多态性,核苷酸由T突变为A,亮氨酸变为谷氨酰胺,突变发生率达到42.9%(9/21)。29株产ESBLs的菌株对亚胺培南全部敏感;对头孢西丁、头孢吡肟、头孢他啶耐药率分别为:大肠埃希菌29.4%、11.8%、41.2%;肺炎克雷伯菌50.0%、8.3%、33.3%;对氨苄西林、哌拉西林、头孢唑啉、头孢呋辛和复方磺胺甲口恶唑的耐药性较高,均达到75%以上,对其他药物均有不同程度的耐药性。结论焦磷酸测序技术可快速对临床分离菌产生的ESBLs耐药基因分型,具有准确、快速、实时和高通量等优点。