胰岛素样生长因子-1对大鼠结肠平滑肌细胞增殖、凋亡及MAPK通路的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠结肠平滑肌细胞(SMCs)增殖、凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的影响.方法 利用酶解法分离培养Sprague-Dawley大鼠结肠SMCs,进行免疫组化染色鉴定后,将其分为对照组、IGF-1组和IGF-1+ PD98059[细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂]组,分别采用噻唑蓝(MTT)法检测SMCs增殖,流式细胞术AnnexinV-FITC/PI检测SMCs凋亡,Western印迹检测磷酸化ERK、ERK、磷酸化p38MAPK、p38MAPK和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(JNK)、JNK的表达.结果 分离培养的细胞经免疫组化鉴定为结肠SMCs,IGF-1组较对照组细胞增殖增强[(1.786 ±0.271)比(0.998±0.057),P＜0.01],凋亡率降低[(2.59±0.28)％比(20.68±2.48)％,P＜0.01],磷酸化ERK表达增强,磷酸化ERK/ERK比值升高[(42.71±3.74)％比(23.88±2.52％),P均＜0.01];磷酸化p38MAPK、p38MAPK、磷酸化JNK、JNK表达无差异(P均＞0.05).IGF-1+ PD98059组较对照组细胞增殖下降[(0.154±0.021)比(0.998±0.057),P＜0.01],凋亡率升高[(84.31±7.54)％比(20.68±2.48)％,P＜0.01],磷酸化ERK表达减弱,磷酸化ERK/ERK比值降低[(10.47±1.22)％比(23.88±2.52)％,P均＜0.01].结论 IGF-1可能通过激活结肠SMCs MAPK通路中的ERK途径,促进细胞增殖,抑制凋亡,可能与p38MAPK途径和JNK途径无关.     

活化蛋白C对重症急性胰腺炎大鼠丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路对重症急性胰腺炎（SAP）继发严重并发症起早期关键介导作用，相应抑制剂可改善SAP的病情。活化蛋白C（APC）具有改善SAP病情的作用，其具体机制尚未阐明。目的：观察APC对SAP大鼠MAPK信号通路中主要激酶的影响以及后续炎症介质的变化，为临床用药提供理论依据。方法：Sprague．DawleY大鼠诱导SAP模型后即刻静脉注射APC10μg/kg或50μg/kg。以基因芯片检测胰腺组织MAPK信号通路相关基因。以实时定量聚合酶链反应（real-timePCR）和蛋白质印迹法检测胰腺组织该通路中p38MAPK、c-Jun氨基端激酶/应激活化蛋白激酶（JNK/SAPK）、细胞外信号调节激酶（ERK）1/2mRNA、蛋白和磷酸化蛋白水平的表达，同时检测肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β蛋白的表达。结果：与APC治疗组和正常对照组相比，SAP组胰腺组织p38MAPK和JNK2mRNA呈高表达。与SAP组相比，50Ixg/kgAPC治疗组p38MAPK、JNK/SAPK蛋白/磷酸化蛋白表达水平显著降低，ERK1/2蛋白/磷酸化蛋白表达水平显著升高，TNF-α和蛋白表达水平显著降低（P均〈0．05）。APC治疗组p38MAPK、磷酸化ERK1/2和TNF-α蛋白表达水平呈剂量依赖性（P均〈0．05）。结论：APC可抑制SAP大鼠胰腺组织MAPK信号通路内p38MAPK和JNK/SAPK的表达和活化，进而抑制TNF-α和IL-1β的释放，同时上调ERK1/2的表达和活化．从而减轻胰腺组织损伤。     

肿瘤坏死因子受体相关因子5对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及作用机制研究

目的:分析肿瘤坏死因子受体相关因子5(TRAF5)对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养H9c2细胞,以800μmol/L浓度的二氯化钴(CoCl₂)处理细胞建立缺氧诱导心肌细胞损伤模型,采用脂质体转染法将TRAF5过表达质粒(pcDNA-TRAF5)和空载质粒(pcDNA-NC)转染至缺氧诱导的H9c2细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞TRAF5基因表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞中TRAF5、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。结果:与Control组比较,Hypoxic组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达水...     

尾加压素Ⅱ诱导巨噬细胞分泌巨噬细胞集落刺激因子

目的探索尾加压素Ⅱ(UⅡ)能否促进小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞分泌巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF),并探讨相关的信号机制。方法培养小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞,以Real-time PCR法和ELISA法分别检测细胞的M-CSF mRNA和蛋白表达水平,用细胞免疫印迹法检测p38MAPK和ERK的磷酸化水平。结果 UⅡ呈浓度依赖性和时间依赖性促进RAW264.7细胞中M-CSF mRNA和蛋白水平的表达,最大效应时间均为刺激12 h,M-CSF mRNA水平是对照组水平的2.73倍,蛋白表达水平显著高于对照组水平[(50.04±4.28)pg/ml比(20.39±2.75)pg/ml,P0.01],是对照组水平的2.45倍;最大效应浓度均为10-8mol/L和10-7mol/L,以10-8mol/L UⅡ刺激12 h,M-CSF的mRNA和蛋白表达水平较对照组分别增加了97.3%和80.8%。采用UⅡ受体(UT)阻断剂Urantide、ERK阻断剂PD98059和p38MAPK阻断剂SB203580分别预处理细胞后,M-CSF蛋白水平较UⅡ组显著降低,分别为[(45±4.04)pg/ml比(57.47±2.93)pg/ml]、[(42.13±4.28)pg/ml比(57.47±2.93)pg/ml]和[(44±5.34)pg/ml比(57.47±2.93)pg/ml],差异均有统计学意义(均P0.05)。10-8mol/L UⅡ刺激细胞3 min显著促进ERK和p38MAPK蛋白磷酸化,5 min时ERK磷酸化水平达到峰值,至15 min仍持续高值,而p38MAPK在15 min时磷酸化达到峰值;30 min时,两者的磷酸化水平均减弱。结论UⅡ可通过与受体结合活化ERK和p38MAPK信号通路促进RAW264.7细胞中M-CSF的表达。     

吡格列酮对载脂蛋白E~(-/-)小鼠动脉粥样硬化中Toll样受体4/丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨吡格列酮对载脂蛋白E(Apo E)-/-小鼠主动脉粥样硬化病变中Toll样受体4/丝裂原活化蛋白激酶(TLR4/MAPKs)信号通路的影响。方法取8只10周龄雄性C3H小鼠作为对照组,用普通饲料喂养;另取24只同周龄雄性Apo E-/-小鼠用高脂饲料喂养,复制动脉粥样硬化模型成功后按随机数表法分成3组:模型组、吡格列酮低剂量(5 mg·kg-1·d-1)组和高剂量(10 mg·kg-1·d-1)组各8只。干预4周后,HE染色观察主动脉粥样硬化病变情况。应用Western Blot技术检测对照组和干预组动脉粥样硬化中丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2、JNK1/2及p38MAPK磷酸化水平。结果与对照组比较,各组Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化斑块中TLR4表达增强,其中ERK1/2与JNK磷酸化水平明显升高(均为P<0.05),但p38MAPK水平变化不明显(均为P>0.05);与模型组比较,吡咯列酮低剂量组和高剂量组小鼠动脉粥样硬化斑块中ERK1/2与JNK磷酸化水平均降低(ERK1/2:吡咯列酮低剂量组比模型组:0.5037±0.0438比0.8800±0.0436,吡咯列酮高剂量组比模型组:0.3843±0.0236比0.8800±0.0436;JNK:吡咯列酮低剂量组比模型组:0.5037±0.0437比0.7900±0.0308,吡咯列酮高剂量组比模型组:0.3843±0.0237比0.7900±0.0308,均为P<0.05)。结论吡格列酮可能通过影响TLR4/MAPKs/ERK1/2与TLR4/MAPKs/JNK信号通路,延缓动脉粥样硬化的发生与发展。     

丝裂原活化蛋白激酶信号通路对软脂酸培养的肌细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子表达的调控作用

目的研究软脂酸对C2C12细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子(PGC-1α)表达的影响,揭示丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路与PGC-1α表达的关系,寻找软脂酸诱导C2C12细胞PGC-1α表达变化的上游调节通路。方法检测软脂酸培养的C2C12细胞PGC-1α、细胞外信号调节激酶(ERK)、jnk氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及其磷酸化蛋白phosp-38MAPK(P-p38MAPK)的表达变化。寻找发生变化的MAPKs信号通路,用筛选到的p38MAPK抑制剂进行干预,分为对照(Con)组、软脂酸(Palmitate)组、p38MAPK抑制剂组和Palmitate+p38MAPK抑制剂组,测定PGC-1α、p38MAPK总蛋白及其P-p38MAPK的表达。结果软脂酸培养的C2C12细胞PGC-1α蛋白表达下降,呈时间依赖性;ERK、phospho-ERK、JNK、phospho-JNK及p38MAPK表达无变化,P-p38MAPK表达升高。用p38MAPK抑制剂干预C2C12细胞,PGC-1α表达在Palmitate组最低,p38MAPK抑制剂组和Palmitate+p38MAPK抑制剂组较Palmitate组升高,p38MAPK抑制剂组最高。结论软脂酸诱导的PGC-1α表达下降可能由p38MAPK信号通路调控。     

莫沙必利对阿司匹林致大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用

研究显示促胃肠动力药物莫沙必利对胃黏膜损伤具有一定的保护作用。目的：研究不同剂量莫沙必利对阿司匹林致大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用及其机制。方法：将50只大鼠随机分为阴性对照组、单纯损伤组以及不同剂量莫沙必利干预组（0．25mg／kg、0．50mg／kg、0．75mg／kg）。干预组大鼠以不同剂量莫沙必利灌胃行预处理,以150mg／kg阿司匹林灌胃制备急性胃黏膜损伤模型。实验第4d,处死大鼠。评估大鼠胃黏膜损伤指数和组织学变化,以免疫组化法检测Occludin蛋白分布,蛋白质印迹法检测Occludin、ZO．1以及磷酸化ERK（p-ERK）、磷酸化JNK（p-JNK）和磷酸化p38（p-p38）蛋白表达。结果：与单纯损伤组相比,各莫沙必利干预组胃黏膜损伤指数均明显降低（P〈0．05）;胃黏膜组织学明显改善;胃黏膜Occludin、ZO-1蛋白表达呈剂量依赖性升高（P〈0．05）;胃黏膜p-ERK、p-p38蛋白表达呈剂量依赖性降低（P〈0．05）;而胃黏膜p-JNK蛋白表达无明显差异。结论：莫沙必利对阿司匹林致大鼠急性胃黏膜损伤具有明显保护作用,其机制可能为降低MAPKs信号通路中ERK和p38蛋白磷酸化程度,并上调胃黏膜紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达,从而改善胃黏膜屏障的功能。     

全反式维A酸抑制细胞内凋亡信号和改善心肌缺血再灌注损伤的研究

目的:探讨全反式维A酸(ATRA)对心肌缺血再灌注(IR)损伤的影响和可能机制。方法:用ATRA对大鼠心肌母细胞株H9c2进行预处理,之后通过缺氧-再氧干预建立体外心肌IR模型。干预后的H9c2细胞用水溶性四唑盐试剂(WST-1)法检测细胞存活率,膜联蛋白Ⅴ流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹检测与细胞凋亡相关的活化胱天蛋白酶-3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达以及促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族信号p38 MAPK(p38)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的磷酸化表达变化。结果 :IR后ATRA0.01μmol/L和1μmol/L处理组H9c2细胞的存活率升高(P<0.01),使IR后H9c2细胞的Bcl-2表达升高(0.78±0.01比1.08±0.02,P<0.01),胱天蛋白酶-3表达降低(1.24±0.03比0.97±0.04,P<0.01)。结论:ATRA提高了IR后H9c2细胞的存活率,抑制了IR后H9c2细胞的凋亡,这种作用可能与MAPKs信号表达下调有关。     

蛋白酪氨酸激酶在IL-1β和TNF-α诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MAPKs活化中的作用

目的　比较类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis,RA)与骨关节炎 (osteoarthritis,OA)成纤维样滑膜细胞 (fibroblast likesynoviocytes,FLS)蛋白酪氨酸磷酸化状态的差异 ;探讨RAFLS中 ,蛋白酪氨酸激酶 (proteintyrosinekinase,PTK)在IL 1β和TNF α作用下有丝分裂原活化蛋白激酶 (mito genactivatedproteinkinase ,MAPKs)活化中的作用。 方法　滑膜细胞原代培养 ,流式细胞仪鉴定滑膜细胞型别 ,提取蛋白进行SDS PAGE单相电泳和ICE PAGE双相电泳分离后 ,用Westernblots检测FLS蛋白磷酸化的状态。结果　滑膜细胞培养至第三代时 ,CD3、CD14、CD2 0、CD11b、vonWillebrandfactor阳性细胞比例小于 1% ;RAFLS蛋白酪氨酸磷酸化程度是OAFLS的 4～ 6倍 ;IL 1β和TNF α可以瞬时引起RAFLS蛋白酪氨酸磷酸化程度增加 ,并在短时间内激活MAPKs(ERK2 ,JNK2 和p38为主 ) :genistein对ERK2 活化抑制作用显著 ,而对于JNK2 、p38,活化的抑制则较弱。 结论　原代培养的滑膜细胞当传代至第三代时即可以获得型别均一的成纤维样滑膜细胞 ;RAFLS蛋白酪氨酸磷酸化状态较OAFLS明显增高 ;IL 1β和TNF α可以瞬时引起RAFLS蛋白酪氨酸磷酸化程度增加 ,激活MAPKs通路 (EPK2 、JNK2 、p38) ,两种因子诱导MAPKs活化过程中PTK依赖途径和PTK非     

瑞巴派特对阿司匹林所致人结肠癌细胞株Caco-2损伤的保护作用及其机制探讨

背景:随着胶囊内镜的问世,非甾体消炎药(NSAIDs)引起的小肠损伤日益受到重视。虽然有多种用于防治NSAIDs相关胃黏膜损伤的药物,但对于NSAIDs相关小肠黏膜损伤,至今仍缺乏有效的防治措施。目的:探讨瑞巴派特对阿司匹林所致人结肠癌细胞株Caco-2损伤的保护作用及其可能机制。方法:以经阿司匹林10 mmol/L处理的Caco-2细胞作为阿司匹林组,经阿司匹林联合不同浓度(0.1、0.5、1.0 mmol/L)瑞巴派特处理的Caco-2细胞作为瑞巴派特组,同时设立阴性对照组。采用MTT实验检测细胞增殖抑制情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;采用Transwell实验检测细胞通透性;采用蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白occludin、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、p38、p-p38、c-Jun氨基端激酶(JNK)、p-JNK表达。结果:瑞巴派特0.1、0.5、1.0 mmol/L组Caco-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、细胞通透性均显著低于阿司匹林组(P0.05),且随瑞巴派特浓度升高而逐渐降低(P0.05)。倒置相差显微镜观察显示,阿司匹林可诱导Caco-2细胞损伤,而瑞巴派特可减轻阿司匹林引起的细胞损伤。与阿司匹林组相比,瑞巴派特0.1、0.5、1.0 mmol/L组occludin、ZO-1、p-JNK表达显著升高(P0.05),p-p38、p-ERK1/2表达显著降低(P0.05),变化均呈瑞巴派特浓度依赖性(P0.05)。结论:瑞巴派特可能通过调节MAPK信号通路(抑制p38、ERK1/2磷酸化,促进JNK磷酸化),使紧密连接蛋白表达上调、细胞通透性降低,从而防治阿司匹林所致Caco-2细胞损伤。     

人参皂苷Rg3对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的观察人参皂苷Rg3对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响,并探讨其机制。方法取处于对数生长期的MDA-MB-231,加入不同终浓度（50、100、200、400、600μmol/L）人参皂苷Rg3,以不加人参皂苷Rg3为对照。MTT法检测细胞生长情况;Western blot法检测细胞中细胞周期蛋白E（Cyclin E）及细胞分裂周期蛋白25A（CDC25A）表达水平。结果低浓度（≤200μmol/L）的人参皂苷Rg3可促进MDA-MB-231增殖,高浓度（≥400μmol/L）的人参皂苷Rg3则抑制其增殖。与对照细胞比较,低浓度人参皂苷Rg3处理的细胞中Cyclin E及CDC25A的表达增高,高浓度处理者Cyclin E及CDC25A的表达下降（P均〈0.01）。结论高浓度人参皂苷Rg3在体外对乳腺癌细胞的生长具有抑制作用,其机制可能与抑制细胞周期关键蛋白Cyclin E及CDC25A的表达有关。     

血管内皮生长因子对培养内皮细胞增殖和移行的影响

目的　研究低氧培养心肌细胞分泌出的血管内皮生长因子 (VEGF)蛋白对培养内皮细胞增殖和移行的影响。方法　将培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)分为 4组 :正常对照组 ,低氧培养组 ,含VEGF的低氧培养心肌细胞分泌液组 (分泌液组 ) ,分泌液 +低氧培养组。分别采用流式细胞仪、免疫组织化学等方法检测VEGF对HUVECs细胞周期、增殖细胞核抗原表达、氚一亮氨酸掺入量及HUVECs移行的影响。结果　VEGF增加正常培养和低氧培养HUVECs由静止期 DNA合成前期向DNA合成期的转换 ,使DNA合成期及DNA合成后期 分裂期细胞数增加 ,从而促进HUVECs增殖 ,并使常氧和低氧培养HUVECs增殖细胞核抗原的表达、氚一亮氨酸掺入量及移行细胞数目增加。低氧抑制HUVECs的增殖和移行 ,VEGF可拮抗低氧对HUVECs增殖、移行的抑制作用。结论　低氧培养心肌细胞分泌出的VEGF蛋白不仅增加常氧培养HUVECs增殖、移行 ,而且能够拮抗低氧的抑制作用     

人参皂苷Rg3对小鼠肝癌血管形成的影响

目的：探讨人参皂苷Rg3抑制人肝癌组织血管生成的机制。方法：①选用昆明种小鼠6只（雌雄各半,供传代用）,昆明种小鼠140只（雌雄各半）按体重随机分为正常对照组（20只）,肝癌模型组（30只）,人参皂苷R船组（30只）,5-FU（5-氟尿嘧啶）组（30只）,人参皂苷Rg3联合5-FU组（30只）。采用小鼠肝癌细胞株H22肝内注射建立小鼠移植性肝癌模型的方法,将小鼠肝癌细胞株H22肝内注射24h后,人参皂苷Rg3组小鼠灌胃给药,5-FU组腹腔内注射给药,人参皂苷Rg3联合5-FU组小鼠灌胃和腹腔内注射给药,连续10d后处死各组全部小鼠并留取标本进行检测。②免疫组织化学染色观察各组小鼠肝组织血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：5-FU组、人参皂苷Rg2组、人参皂苷Rg3联合5-FU组小鼠肝癌组织VEGF表达水平均低于肝癌模型组（均P〈0．05）;人参皂苷Rg3组和人参皂苷Rg3联合5-FU纽小鼠肝癌组织VEGF表达水平均低于5-FU组（均P〈0．05）;人参皂苷Rg3联合5-FU组小鼠肝癌组织VEGF表达水平与人参皂苷Rg3组比较,差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：人参皂苷Rg3可抑制肝癌细胞血管生成,其可能机制是抑制VEGF表达。     

右美托咪定对心肌收缩蛋白表达的影响

目的 研究右美托咪定(DEX)对心肌细胞收缩相关蛋白表达的影响及其分子机制。 方法 在50 ml/L浓度氧环境下培养H9C2细胞,建立心肌低氧损伤模型。实验分为对照组、低氧组、低氧+DEX (0.01 μmol/ml、1 μmol/ml、100 μmol/ml)组。除对照组培养在正常细胞环境中外,其余四组培养在低氧环境下,且其中三组按要求添加相应浓度的DEX。细胞存活率和细胞凋亡水平分别采用MTT法和流式细胞仪进行检测,采用ELISA试剂盒检测细胞培养液中心肌酶谱蛋白cTnI、LDH和CK-MB的漏出量,Western blot法检测H9C2细胞中titin、β-MHC、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达。 结果 低氧条件成功诱导心肌细胞缺氧损伤。低氧组细胞较对照组存活率低、凋亡增加、细胞培养液中cTnI、LDH和CK-MB蛋白水平增加;低氧+ DEX (0.01 μmol/ml、1 μmol/ml、100 μmol/ml)组较低氧组,细胞存活率增加、凋亡减少,cTnI、LDH和CK-MB蛋白水平降低,p-PI3K和p-Akt蛋白表达增加,β-MHC和titin蛋白表达降低,且随着DEX剂量增加,变化更显著。 结论 在低氧损伤心肌细胞中,DEX能抑制收缩相关蛋白表达,可能与PI3K/Akt信号通路有关,是否与激活PI3K/Akt信号通络相关,还有待进一步研究。     

β-榄香烯对肾癌786-0细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察β-榄香烯对肾癌786-0细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法使用不同浓度β-榄香烯作用于786-0细胞24 h,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,W estern b lot法检测细胞内磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）及总Akt。结果随β-榄香烯浓度增大,细胞存活率逐渐降低,细胞凋亡率明显增加,细胞内p-Akt表达水平逐渐降低,均呈一定浓度依赖性（P均〈0.05）。结论β-榄香烯可诱导肾癌细胞凋亡,其机制可能为抑制PI3K/Akt通路活性。     

缺氧预处理提高骨髓基质细胞促进血管新生能力

目的 研究缺氧对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)表达血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及促进血管新生能力的影响。方法 将BMSCs置于缺氧环境下培养24h后，研究其VEGF表达的变化。将急性心肌梗死大鼠随机分为3组。未处理组在梗死后4w移植未经缺氧处理的BMSCs；缺氧组将经缺氧预处理的BMSCs注射到心肌梗死区；对照组仅注射无血清的培养液。在梗死后6w取各组标本观察梗死区及周围VEGF的表达和血管新生状况。结果 体外培养的BMSCs经缺氧预处理后VEGF的表达明显增加。缺氧组和未处理组梗死区及周围VEGF的表达和毛细血管密度较对照组明显增加。缺氧组VEGF的表达和毛细血管密度又较未处理组明显增加。结论 体外缺氧可诱导BMSCs高表达VEGF。BMSCs移植后促进梗死区及周围VEGF的表达，对血管新生有积极作用。移植前缺氧预处理使BMSCs促进缺血心肌组织表达更多的VEGF从而提高其促进血管新生作用。     

冬凌甲草素在体外促进成骨分化和抑制破骨形成及其机制研究

目的研究冬凌甲草素对成骨细胞分化和破骨细胞形成的作用及分子机制。 方法从SD大鼠股骨和胫骨中分离出骨髓间充质干细胞和骨髓单核细胞,培养于含10%胎牛血清的α-MEM培养基,细胞80%~90%汇合后采用不同浓度的冬凌甲草素（0、1、2、3、4 μM）进行分组干预,CCK-8法及活死染色检测不同浓度的冬凌甲草素对间充质干细胞及骨髓单核细胞活力的影响;通过碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红染色、ALP活性的测定以及TRAP染色检测冬凌甲草素对成骨和破骨分化的影响;qRT-PCR检测wnt1、β-catenin、Runx2、ALP、collage-1(col-1)、骨钙蛋白(OCN)、TRAP、c-Fos、NFATc1和CTSK的表达;Western-blot及免疫荧光检测wnt1、β-catenin、ALP、col-1、OCN、Runx2、核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）、GSK-3β、p-GSK-3β的表达。 结果（1）与对照组比较,冬凌甲草素（2 μM）具有促进间充质干细胞向成骨细胞分化和提高ALP活性的作用;（2）冬凌甲草素可以促进wnt1、β-catenin、Runx2的表达,在加入Wnt/β-catenin/TCF通路选择性拮抗剂ICG-001后,成骨相关标志物表达下降。（3）冬凌甲草素可以促进OPG而抑制RANKL的表达。（4）冬凌甲草素可以直接或间接抑制破骨相关基因TRAP,NFATc1和c-Fos的表达。 结论冬凌甲草素可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干向成骨细胞分化,同时,它还可能抑制RANKL介导的破骨细胞的形成。     

蛋白激酶C-核因子κB信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨蛋白激酶C(PKC) 核因子κB(NF κB)信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞 (HPASMCs)增殖和血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法　体外培养HPASMCs ,用工具药PKC激活剂 12 肉豆蔻酰 13 乙酸佛波酯 (PMA)和NF κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC) ,将HPASMCs分为对照组、PMA组和PMA PDTC组在常氧和缺氧条件下培养。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测VEGFmRNA表达 ,Westernblot法检测VEGF和NF κB的抑制蛋白IκBα蛋白表达 ,免疫细胞化学法检测NF κBp6 5的表达和定位 ,流式细胞术检测细胞周期时相分布。结果　( 1)NF κBp6 5胞核染色阳性率、IκBα蛋白相对表达量及细胞周期G2 /M % :常氧或缺氧PMA组与相应对照组、PMA PDTC组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 5 ) ;缺氧PMA组与常氧PMA组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。 ( 2 )VEGFmRNA和蛋白表达 :常氧对照组、PMA组、PMA PDTC组组间差异均无显著性 (P均 >0 0 5 ) ;缺氧PMA组均高于缺氧对照组、缺氧PMA PDTC组、常氧PMA组 ,差异均有显著性 (P均 <0 0 5 )。 ( 3)缺氧PMA组NF κB胞核染色阳性率、VEGF蛋白相对表达量、G2 /M %之间均呈正相关 (r =0 5 87～ 0 710 ,P均 <0 0 5 )。结论　常氧培养HPASMCs存在PKC NF κB信号转导通道 ;     

低氧诱导星形胶质细胞血管内皮生长因子表达

目的探讨低氧环境对体外培养的胎鼠大脑星形胶质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用孕16d的SD胎鼠大脑组织培养星形胶质细胞,实验分为正常组(正常培养,5%CO_2,95%空气,37℃,绝对湿度)和低氧组(低氧培养,5%CO_2,2%O_2,93%N_2,37℃、绝对湿度)。MTT实验观察细胞经2、4、6、8、10h低氧培养后细胞增殖情况,免疫荧光染色观察细胞经4、8、12、24、32h低氧培养后VEGF表达的变化。结果低氧组胶质细胞增殖除6h与正常组无差异外,2、4、8、10h较正常组均明显增高,差异有统计学意义(P0.05);低氧组8、12h VEGF表达明显高于正常组,24、32h VFGF表达明显低于正常组(P0.05)。结论低氧培养短期可促进星形胶质细胞增殖,VEGF表达升高,长期低氧可至星形胶质细胞损伤,VEGF表达下降。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达的影响

目的研究糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉山皮细胞血管内皮生长凼子（VEGF）mRNA及蛋白表达的影响，探讨AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株ECV304用BSA及小同浓度的AGEs孵育24h及400mg／L的AGEs孵育0、12、24及36h，采用原位杂交及Westem blot方法检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果人脐静脉内皮细胞在100、200及400mg／LAGEs孵育24h后，VEGFmRNA及蛋白表达均显著高于BSA对照组（P〈0．05），在用400mg／LAGEs分别孵育12．24及36h后，各组内皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达量也明显高于0h对照组（P〈O．05）。结论AGEs可增加人脐静脉内皮细胞VEGF mRNA及蛋白的表达，且与浓度和时间呈正相关。