番茄红素及维生素E对燃煤型氟中毒致大鼠睾丸组织中Clusterin蛋白表达的影响及机制

目的研究番茄红素及维生素E对燃煤型氟中毒致大鼠睾丸组织中Clusterin蛋白表达的影响及机制。方法 60只雄性SD大鼠分为低、中、髙氟组、髙氟+维生素E组、髙氟+番茄红素组和对照组,每组10只。染毒组喂饲含不同比例的燃煤型氟中毒病区煤烘玉米的饲料,构建燃煤型氟中毒动物模型,髙氟+维生素E组和髙氟+番茄红素组分别喂饲添加维生素E和番茄红素的病区煤烘玉米配制饲料,对照组给予正常饲料。观察各组大鼠氟斑牙情况;氟离子选择电极法检测大鼠尿和睾丸组织氟含量;HE染色光镜下观察睾丸组织病理学改变;原位缺口末端标记(TUNEL)染色观察生精细胞凋亡情况;免疫组化法检测大鼠睾丸组织中Clusterin蛋白表达。结果与对照组相比,低、中、高氟组大鼠氟斑牙严重程度、尿氟及睾丸组织氟含量、睾丸组织病理学损伤程度和睾丸组织生精细胞凋亡指数均依次增加(P0.05),各氟剂量组上述指标随氟剂量的增大而增大;与高氟组相比,髙氟+维生素E组和髙氟+番茄红素组上述指标明显降低;与对照组相比,低、中、高氟组大鼠Clusterin蛋白水平依次下降(P0.05),各氟剂量组Clusterin蛋白表达水平随氟剂量的增大而下降。与高氟组相比,髙氟+维生素E组和髙氟+番茄红素组Clusterin蛋白水平明显升高。结论燃煤型氟中毒可引起大鼠睾丸组织的性生殖损害,生精细胞凋亡率增加,Clusterin蛋白的表达降低。抗氧化剂可显著降低生殖细胞凋亡率,提高Clusterin蛋白的表达,改善雄性生殖功能的损伤。     

骨保护素配体在燃煤型氟中毒大鼠骨组织中的表达

目的观察骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)在燃煤型氟中毒大鼠骨组织中的表达,(?)讨燃煤型氟中毒对大鼠OPGL表达的影响。方法以SD大鼠为研究对象,按体质量均衡随机分为5组(组内雌雄各半)：高氟组、高氟偏食组、低氟组、低氟偏食组、对照组(实验中所设偏食组为相对于对照组的低钙偏食)。以氟中毒病区煤烘玉米为主要饲料,复制氟中毒动物模型。对其胫骨干骺端进行常规组织切片,HE染色观察组织学改变；用免疫组织化学方法检测OPGL在大鼠胫骨干骺端的表达。氟离子选择电极法测定大鼠牙氟、骨氟。结果①OPGL表达水平：高氟组(118．62±1．27)、高氟偏食组(97．62±1．22)、低氟组(156．25±1．02)、低氟偏食组(145．25±1．25)大鼠干骺端OPGL表达增高,与对照组(189．23±1．25)比较差异有统计学意义(P＜0．05)。高氟偏食组与高氟组、低氟偏食组与低氟组比较,OPGL表达升高且差异有统计学意义(P＜0．05)。②骨病理改变：高氟、低氟组大鼠骨皮质厚度增加、密度增高,骨小梁成骨细胞数轻度增加,湿示成骨活跃：高氟偏食组大鼠胫骨骨皮质密质骨出现松质化。③骨密度：高氟偏食组大鼠骨密度低于对照组(P＜0．05),其余各实验组高于对照组,高氟组、低氟组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．05)。④牙氟、骨氟：各染氟组牙氟、骨氟均高于对照组(P＜0．05)。结论①过量氟造成骨转换增高,氟可通过增强OPGL的表达来加强破骨细胞的活性；②低钙偏食可使氟骨症破骨性骨吸收增强。     

刚地弓形虫感染对雄性大鼠生殖激素及其受体影响的动态观察北大核心CSCD

目的观察雄性大鼠慢性感染弓形虫后血清及睾丸局部促黄体生成素（LH）、睾酮（T）水平及其受体的动态变化,探讨弓形虫感染对大鼠生精细胞损伤及生精过程的影响。方法选用9～10周龄雄性SD大鼠88只,随机分为对照组和弓形虫感染组。弓形虫感染组大鼠腹腔注射1×10^4个速殖子/只。对照组注射等量生理盐水。于感染前和感染后第3、6、9、12、……和30d两组各取4只大鼠,采用放射免疫法检测大鼠血清LH、T以及睾丸局部T水平的动态变化,采用免疫组化sABC法检测睾丸LH受体（LHR）和T受体（AR）的变化,并对睾丸组织进行病理学观察。结果整个实验期内弓形虫感染组大鼠血清LH[（29．3±3．3）mIU／m1]与对照组[（25．5±2．75）mIU／ml]差异无统计学意义（P〉0．05）;感染组大鼠T水平尤其是睾丸局部T水平在急性期[（238．3±38．9）ng／d1]较对照组[（915．4±119．3）ng／dl]显著下降（P〈0．01）,之后血清T逐渐升高,实验末期恢复至对照组水平（P〉0．05）,睾丸局部T仍维持低水平（P〈0．01）。感染组大鼠的睾丸间质细胞（leydig cell）LHR及AR表达均增强,精母细胞及支持细胞AR表达增强。病理学检查感染组大鼠卡精小管细胞层次混乱,精子细胞及精子减少甚至管腔关闭,至实验末期生精过程末见明显改善。结论雄性大鼠感染弓形虫后导致T水平尤其是睾丸局部T水平迅速降低,睾丸LHR及AR表达增强,导致生精细胞损伤和生精过程阻滞于精母细胞期。     

氟化钠亚慢性染毒对雌性小鼠氧化损伤的研究

目的研究氟化钠亚慢性染毒对雌性小鼠所产生的氧化损伤。方法取雌性小鼠40只,随机分成4组,每组10只。即对照组,氟低剂量组（1mg／L）,氟中剂量组（5mg／L）、氟高剂量组（25mg／L）。经饮用水染毒3个月。计算脏器系数、测量骨组织氟浓度,用试剂盒测定血清中血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。结果染毒过程中各组之间体重差异无统计学意义（P〉0．05）。肝脏脏器系数从高到低依次为对照组、氟低剂量组、氟中剂量组和氟高剂量组（46．56±2．46）、（47．03±6．25）、（45．84±5．90）、（42．19±3．89）,氟高剂量组与对照组相比显著下降,差异有统计学意义（P〈0．05）,其余各脏器系数变化无统计学意义（P〉0．05）。中、高剂量（5．46±0．26）、（5．46±0．33）染氟组股骨脏器系数显著增加,与对照组（4．98±0．25）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。染毒后骨组织中氟浓度显著升高,从低到高依次为对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组（711．37±263．83）、（998．75±254．87）、（1195．21±159．73）、（1957．00±273．19）斗g／g,其中,中、高染氟组与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。氟高剂量组SOD活性（0．77±0．03）U／ml与对照组（0．86±0．07）U／m1比较显著降低（P〈0．05）;氟低剂量组、氟中剂量组、氟高剂量组（7．61±0．86）、（8．65±1．02）、（8．75±1．47）nmol／ml与对照组（4．36±0．36）nmol／ml比较MDA活性均升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论染毒后血清中SOD活力下降,各组MDA水平显著升高,提示存在氧化应激损伤。     

一氧化碳对脂多糖诱导大鼠纹状体炎性反应后的多巴胺能神经元的影响

目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导大鼠纹状体炎性反应2周后，急性一氧化碳（carbonmonoxide，CO）中毒对黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元的影响。方法160只SD雄性大鼠随机分为CO组、LPS组、CO＋LPS组和对照组，观察大鼠在染毒后不同时间点的尾静脉血24h内碳氧血红蛋白（HbCO）浓度变化、行为学改变、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）及OX-42（小胶质细胞标志物）的表达，高效液相色谱（HPLC）分析纹状体DA含量变化。结果染毒鼠均达到持续24hCO重度中毒（HbCO〉50％）。CO＋LPS组大鼠染毒后14、21、28d的30min内平均运动速度和运动距离下降（P〈0．05），小胶质细胞明显增生并异常激活，TH阳性神经元数量分别减少43．2％（P〈0．05）、46．5％（P〈0．05）和63．7％（P〈0．01）；DA分别降低33．0％、39．0％（P〈0．05）和53．6％（P〈0．01）。结论大鼠多巴胺能神经系统发生炎性反应后，将加重急性CO中毒对多巴胺能神经元的损害，增加CO中毒后患帕金森综合征的风险。     

L-精氨酸对糖尿病大鼠NO-cGMP信号通路的影响

目的探讨L-精氨酸（Arg）对糖尿病（DM）大鼠一氧化氮（NO）-环磷酸鸟苷（cGMP）信号通路的调控作用。方法给大鼠腹腔注射链脲佐菌素制备DM模型，随机分为DM组、L—Arg治疗组及正常对照组；用药12W末处死大鼠，测定3组大鼠血糖、胰岛素含量以及血浆、心肌、肾脏、睾丸组织中NO、cGMP含量和NOS活性。结果DM组大鼠血糖含量较正常对照组显著升高（P〈0．01），而胰岛素水平（P〈0．01）及血浆、心肌、肾脏、睾丸组织NO水平（分别P〈0．01，P〈0．05，P〈0．05，P〈0．01）和血浆、心肌、睾丸组织cGMP含量（分别P〈0．01，P〈0．01，P〈0．05）及血浆、肾脏、睾丸组织一氧化氮合酶（NOS）活性（分别P〈0．01，P〈0．01，P〈0．05）均较正常对照组明显降低；L—Arg可明显降低DM大鼠血糖水平（P〈0．01），增加胰岛素含量（P〈0.01），同时显著增加血浆、心肌、肾脏、睾丸组织NO水平和血浆、心肌、睾丸组织cGMP含量及血浆、睾丸组织NOS活性（均P〈0．01）。结论DM大鼠NO-cGMP信号通路存在缺陷，L—Arg对DM大鼠NO—cGMP信号通路具有调控作用。     

过量摄氟后大鼠肾细胞内钙水平与氧化应激损伤研究

目的 研究过量氟对大鼠肾细胞中游离钙（[Ca^2＋1i）水平的影响与氧化应激的关系。方法 应用饮水加入氟化钠进行大鼠染毒实验，采用Fura-2／AM荧光指示剂测定慢性氟中毒大鼠肾细胞内[Ca^2＋]i浓度的变化，同时测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性和脂质过氧化终产物丙二醛（MDA）生成。结果 过量氟可刺激肾细胞内[Ca^2＋]i浓度增高，高钙加氟组与高钙对照组相比差异有显著意义俨〈0．05），低钙加氟组高于低钙对照组俨〈0．001）；SOD活力水平低钙加氟组低于低钙对照组，差异有显著意义（P〈0．05），MDA生成低钙加氟组高于低钙对照组（P〈0．05）；GSH-Px活力变化不明显。结论 （1）过量氟所致的大鼠细胞内[Ca^2＋]i超载和不同程度的氧化侵袭，可能在氟骨症病理过程中起重要作用；（2）投氟伴随低钙可加重细胞内[Ca^2＋]i超载和氧化侵袭，提示钙营养与氟中毒发病有着重要联系。     

燃煤型氟中毒大鼠血清骨保护素的变化

目的观察燃煤型氟中毒骨病变早期血清骨保护素(OPG)的变化。方法以SD大鼠为实验对象,随机分6组(组内雌雄各半):对照、低氟、中氟加营养、中氟、高氟加营养、高氟组。各染毒组喂饲含不同比例的燃煤型氟中毒病区煤烘玉米的饲料复制燃煤型氟中毒动物模型。分两批以股动脉放血法处死动物,查看氟斑牙,测尿、骨、肾氟,骨密度(BMD),骨Ca、尿Ca,OPG。结果①建成氟中毒动物模型各染毒组均出现氟中毒,对照组正常。中毒严重程度随氟剂量增加而加重;氟剂量相同时,营养好中毒程度轻。②两批各染毒组大鼠血清OPG均升高(P<0.01),且随氟剂量升高而升高(P<0.05或0.01)。结论①血清OPG是反映燃煤型氟中毒骨病变的一个早期指标。②降低摄氟量及改善营养状况,可缓解氟中毒病情。     

燃煤型氟中毒对大鼠中脑黑质神经元的影响

目的观察燃煤型氟中毒大鼠中脑黑质神经元的形态学变化,为地方性氟中毒引起脑损伤的发病机制提供实验依据。方法取SPF级SD大鼠90只,随机分为正常对照组、低氟组（3.3 mg/kg）和高氟组（106 mg/kg）,每组30只,雌雄各半。除对照组食用正常饲料外,其他各组均食用不同配方饲料,复制氟中毒大鼠模型。6个月后采用比色法测定各组大鼠黑质胆碱酯酶活性,然后取中脑黑质进行尼氏染色,TUNEL法细胞凋亡染色及TH免疫组化染色,光镜观察3组大鼠黑质神经元的形态变化,并测量TH阳性反应产物的平均光密度。结果随着染毒剂量的增加主要有：尿氟含量逐渐增多（P〈0.05）;学习记忆能力与胆碱酯酶活性逐渐下降（P〈0.05）;黑质细胞凋亡数量增多（P〈0.05）,TH阳性神经元减少（P〈0.05）。结论燃煤型氟中毒大鼠随染毒剂量的增加中脑黑质TH阳性神经元减少,细胞凋亡数量增多,这些变化可能是氟的神经毒性作用之一。     

氟对大鼠睾丸生殖细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的了解氟对大鼠睾丸生殖细胞增殖功能的影响。方法对雄性大鼠腹腔注射NaF溶液建立氟中毒模型,观察睾丸的病理学、生殖细胞数量及生精功能的改变,免疫组化法测定睾丸生殖细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果高剂量染毒组(20mg/kg)与低剂量染毒组(10mg/kg)大鼠的睾丸生殖细胞数分别为(161.00±16.16)和(268.00±12.13),低于对照组(P<0.05),其生殖细胞PCNA表达率分别为(0.60±0.81)%和(0.71±0.05)%,亦低于对照组(P<0.05);其精子数目、精子活动度比对照组显著降低(P<0.05),精子畸形率比对照组显著升高(P<0.05)。结论氟可能通过抑制PCNA的表达,从而减少生殖细胞的数量,对雄性生殖系统造成损害。     

燃煤污染型氟中毒大鼠肾组织中PURA基因及其蛋白的表达

目的 探讨PURA基因及其蛋白在燃煤污染型氟中毒大鼠肾组织中的表达情况.方法 SD大鼠36只,体质量80-100 g.将大鼠按体质量随机分对照组、加氟组、高氟组,每组12只,雌雄各半.对照组、加氟组和高氟组大鼠分别饲以含氟量为1.5、25.0、60.0 ms/ks的饲料.4个月后,采用RT-PCR技术及免疫组化技术检测大鼠肾组织PURA基因及其蛋白表达水平.结果 加氟组和高氟组大鼠肾组织PIJRA mRNA[(2.74±1.06)、(4.29±2.11)]及蛋白表达[(28 827.91±4801.94)、(61 146.96±4997.55)]均高于对照组[(1.13±0.87)、(7131.95±1524.54),P均<0.05)],高氟组大鼠肾组织PURA mRNA及蛋白表达高于低氟组(P均<0.05).结论 高氟可以导致大鼠肾组织PURA mRNA及蛋白表达水平增强.     

燃煤型氟中毒对大鼠海马齿状回星形胶质细胞的影响

目的探讨燃煤型氟中毒对大鼠海马齿状回星形胶质细胞的影响,为地方性氟中毒引起脑损伤的发病机制提供实验依据。方法取断乳2周的SD大鼠90只（平均体重91.1 g,80～100 g）,按体重随机分为正常对照组、低氟组（3.3mg/kg）、高氟组（106 mg/kg）,每组30只,雌雄各半。除对照组食用正常饲料外,其他各组均食用不同配方饲料,复制氟中毒大鼠模型。模型建立后,取海马组织用常规石蜡切片,行胶质原纤维酸性蛋白免疫组化染色,计数海马齿状回GFAP免疫组化染色阳性反应细胞,并用细胞形态学计量方法测量各阳性反应产物的平均光密度;通过透射电镜观察海马齿状回区星形胶质细胞的细微结构。结果氟中毒组大鼠的主要变化有GFAP免疫组化染色阳性细胞明显多于对照组（P〈0.05）,阳性反应产物平均光密度明显高于对照组（P〈0.05）。结论实验结果提示燃煤型氟中毒大鼠可导致其海马齿状回星形胶质细胞增多;氟可导致大鼠神经发育障碍。     

氟中毒对仔鼠行为学及脑尼古丁受体的影响

目的 探讨燃煤型氟中毒对仔鼠行为学及脑尼古丁受体的影响及其发生机制。方法SD大鼠随机分为2组,即对照组、高氟组。高氟组以氟病区燃煤烘烤的玉米为主要饲料,来复制氟中毒动物模型,饲养6个月后雌雄合笼,取30d龄仔鼠,用Morris水迷宫方法检测仔鼠行为学变化;比色法测定脑胆碱酯酶活性;蛋白印迹方法测定尼古丁受体蛋白水平;实时荧光定量PCR方法测定尼古丁受体mRNA水平。结果与对照组比较,高氟组仔鼠学习记忆能力、脑胆碱酯酶活性均显著降低,尼古丁受体α3、α4亚单位蛋白和mRNA水平平均降低[（30％及55％）,（8％及14％）;t=3．22,4．34,3．19,2．51],α7亚单位蛋白水平下降（48％,t=6．23）,mRNA水平升高（9％,t=-3.88）。α4、α7亚单位蛋白水平与仔鼠学习记忆能力呈显著相关。结论燃煤型氟中毒仔鼠学习记忆能力降低,可能与尼古丁受体蛋白含量降低及脑胆碱酯酶活性下降有关。     

燃煤污染型氟中毒对人群生化电解质水平的影响

目的　探讨燃煤污染型氟中毒人群与正常人群之间的生化电解质水平有无差异。方法　选择燃煤重度中毒病区 2个村 ,与无室内燃煤氟污染的 2个对照村。每个村检测农民 119～ 12 2人 ,即氟中毒 2 47人 ,无氟中毒农民 2 41人 ,男女各半 ,年龄 35～ 6 0岁。采样测定环境氟水平 ,计算每人每日总摄氟量 ,同时检查氟斑牙 ,右前臂拍 X片诊断氟骨症。应用自动生化分析仪分析血清中 16项生化电解质水平 ,即钾、钠、氯、钙、磷、葡萄糖、尿素氮、尿酸、肌酐、总蛋白、白蛋白、谷草转氨酶、肌酸肌酶、碱性磷酸酶、总胆红素和总胆固醇。以 ANOVA方法进行方差分析。结果　研究结果表明 ,2个氟中毒村每人日总摄氟量为 6 .5 7mg和 8.5 4m g,氟斑牙患病率为92 .86 %与 99.0 2 % ,氟骨症患病率为 14.81%和 14.13% ,2项指标均属正常范围 ,且无氟骨症发生。结论　燃煤污染氟中毒人群与正常人群生化电解质水平均属正常范围。血清碱性磷酸酶活性随氟中毒加重而升高 ,血钾水平随氟中毒加重而升高 ,但是在正常值范围内的轻度改变     

燃煤污染型氟中毒大鼠学习记忆能力及胆碱酯酶活性改变

目的 观察燃煤污染型氟中毒大鼠学习记忆能力的变化,探讨其发生机制.方法 健康SD大鼠48只,按染氟剂量分为对照、低氟、高氟3组.低氟组、高氟组大鼠以燃煤型地方病氟中毒重病区燃煤烘烤的当地玉米为主要饲料,复制氟中毒大鼠模型,实验期为3、6个月,各8只大鼠.实验结束时用Morris水迷宫方法检测大鼠行为学变化,并用比色法测定脑组织乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性.结果 染氟剂量对逃避潜伏期时间、第7天穿过平台次数、逗留平台象限时间有明显影响(F值分别为29.29、6.47、6.50,P均<0.01):染氟时间对第7天穿过平台次数和逗留平台象限时间有明显影响(F值分别为16.11、45.59,P均<0.01);染氟剂量和时间对第7天穿过平台次数和逗留平台象限时间有交互作用(F值分别为4.67、5.68,P<0.05或<0.01).3个月时,高氟组大鼠逃避潜伏期时间[(14.71±4.85)s]较对照组[(9.28±4.22)s]明显增加(P<0.05);6个月时,低氟组、高氟组大鼠逃避潜伏期时间[(12.42±8.03)、(17.48±8.05)s]较对照组[(7.04±3.29)s]延长(P均<0.05),高氟组第7天穿过平台次数[(1.62±0.87)次]和逗留平台象限时间[(16.70±5.02)s]较对照组[(3.53±1.67)次、(23.33±5.35)s]降低(P均<0.05).染氟剂量对乙酰胆碱酯酶与丁酰胆碱酯酶活性均有明显影响(F值分别为12.83、13.27,P均<0.01);染氟时间对丁酰胆碱酯酶活性有明显影响(F=16.26,P<0.01).3个月时,低氟组丁酰胆碱酯酶活性[(0.55±0.12)kU/g]明显低于对照组[(0.73±0.10)kU/g,P<0.05],高氟组乙酰胆碱酯酶[(0.62±0.42)kU/g]和丁酰胆碱酯酶活性[(0.58±0.10)kU/g]均明显低于对照组[(1.41±0.52)、(0.73±0.10)kU/g,P均<0.05].胆碱酯酶活性与逃避潜伏期时间呈负相关(r=-0.68,P<0.01),胆碱酯酶活性与逗留平台象限时间呈正相关(r=0.57,P<0.01).结论 燃煤污染型慢性氟中毒大鼠学习记忆能力减退,可能与脑组织胆碱酯酶活性下降有关,二者间有量效关系.     

燃煤污染型氟中毒流行特点及氟安全阈值研究

目的　查明我国燃煤污染型氟中毒的环境流行特征 ,确定煤炭氟的安全阈值 ,为氟的环境风险评价提供科学依据。方法　现场调查和资料分析相结合。结果　燃煤污染型氟中毒的流行与地球化学环境密切相关 ,但高氟煤炭的存在是其流行的决定因素。病区居民氟斑牙患病率与煤炭氟含量之间存在线性函数关系 (r =0 .943 2 ,P <0 .0 1) ,去掉 5 %的氟斑牙诊断误差和模糊判定因素等 ,煤炭氟的安全阈值为 2 5 0 mg/kg。结论　煤炭氟含量应作为煤炭资源开采与否的一个指标。对于燃煤污染型氟中毒病人应早发现、早诊断、早治疗 ,其防治应把治病与治穷结合起来     

贵州省龙里县民主乡地方性氟中毒流行病学调查

目的　探讨高寒地区燃煤污染型地氟病流行特征及影响因素。方法　按国家统一调查及检测方法进行。结果　调查点居民日人均总摄氟量为 6～ 8mg,其中 5 0 %以上由辣椒摄入。调查点总摄氟量及尿氟等远未达到贵州西北重病区的水平 ,但病情平行。与我省西北重病区比较 ,调查点居民氟骨症有以下特点 :无混合型和软化型 ;疏松型中无中度以上患者 ,疏松型中女性与男性患者无显著性差异。结论　燃煤污染型地氟病区辣椒摄氟途径将成为主要流行环节。高寒潮湿加重地氟病对机体的危害。饮食结构对氟骨症有重要影响     

氟中毒大鼠骨骼X线动态观察及硒的影响

目的 观察氟中毒大鼠骨Ｘ线改变及硒的影响。方法 ２个组Ｗｉｓｔａｒ大鼠饮１．５８和２．６３ｍｍｏｌ／Ｌ氟水；２个组鼠饮氟水加饲２．０ｍｇ／ｋｇ硒饲料。每２个月用钼靶Ｘ线摄骨片共计６次。实验１４个月时测血、尿、骨氟。结果 氟中毒大鼠血、尿骨氟升高。骨Ｘ改变以骨盆骨结构异常出现最早，其次为腰椎、尾骨；前、后肢改变晚且较少；前肢显现骨间膜骨化，且晚于骨结构改变。实验８个月发性早期氟骨症征象。氟加硒大鼠血     

氟对大鼠骨组织3-磷酸肌醇激酶和蛋白激酶B1表达的影响

目的 观察慢性氟中毒对大鼠骨组织中3-磷酸肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B1(Akt1)蛋白和mRNA表达的影响,探讨PI3K/Akt信号通路在氟骨症发病机制中的作用.方法 将36只SD大鼠按性别和体质量随机分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组12只.对照组自由饮用自来水(含氟量<0.5 mg/L),低、高氟组大鼠分别饮用氟化钠(NaF)配制的含氟量为5.0、50.0 mg/L的自来水.实验6个月后处死大鼠,收集血清,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测骨钙素(BGP)、组织蛋白酶K(Cath-K).取大鼠股骨下段,用免疫组织化学方法和实时荧光定量PCR法检测骨组织中PI3K、Akt1蛋白和mRNA的表达.结果 各组大鼠血清BGP、Cath-K 水平比较,差异有统计学意义(F值分别为73.45、39.36,P均<0.05).与对照组[(0.15±0.03)μg/L、(18.32±2.27)pmol/L]比较,低、高氟组血清BGP[(1.99±0.62)、(2.38±0.16)μg/L]、Cath-K[(89.07±19.66)、(110.16±9.81)pmol/L]明显升高(P均<0.05),且高氟组明显高于低氟组(P均<0.05).各组大鼠骨组织PI3K、Akt1蛋白和mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(F值分别为178.16、118.08,38.81、52.31,P均<0.05).与对照组(181.55±4.24、188.46±2.18,3.84±1.69、4.33±0.89)比较,低、高氟组大鼠骨组织PI3K(171.66±2.85、154.12±4.15,11.31±4.18、20.54±6.68)、Akt1蛋白和mRNA表达(177.47±3.16、156.42±3.18.12.52±3.13、19.43±5.36)明显增高(P均<0.05),且高氟组明显高于低氟组(P均<0.05).结论 血清BGP、Cath-K可作为慢性氟中毒骨病变的代谢指标.氟可导致大鼠骨组织中PI3K、Akt1蛋白和mRNA表达水平增高,PI3K/Akt 信号通路可能参与了氟引起的骨骼损伤机制.

Abstract：

Objective To observe the expression of phosphoinositide 3-kinase(PI3K) and protein kinase B1 (Akt1) in PI3K/Akt signaling pathway in rat bones with fluorosis, and to reveal the mechanisms of the skeletal fluorosis. Methods Thirty-six SD rats were randomly divided into 3 groups (control group, low-dose fluorosis group, high-dose fluorosis group) and 12 rats were in each group according to body weight. The rats were fed with different concentrations of fluoride (NaF) to establish fluorosis models. Controls were fed with tap water( < 0.5 mg/L), experimental animals in low- or high-dose groups were fed with water containing NaF 5.0,50.0 mg/L, respectively. Rats were sacrificed after 6 months of treating with fluoride and the serum was kept for testing the bone metabolic markers of none gla protein(BGP) and cathepsin K(Cath-K) by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), the proteins and mRNA levels of PI3K and Akt1 in rat bones were detected by immunohistochemistry and real time PCR, respectively. Results Each group of serum BGP and Cath-k were compared, the difference was statistically significant(F = 73.45,39.36, all P < 0.05). The contents of BGP[(1.99 ± 0.62), (2.38 ± 0.16)μg/L] and Cath-K [(89.07 ± 19.66), (110.16 ± 9.81)pmol/L] in the low-and high-dose fluorosis groups were higher than those in the control group[(0.15 ± 0.03)μg/L,( 18.32 ± 2.27)pmol/L], and the high fluorosis group was obviously higher than the low fluorosis group (all P < 0.05). Each group of serum PI3K and Akt1 protein and mRNA were compared, the difference was statistically significant(F- 178.16,118.08,38.81,52.31, all P< 0.05). Compared to the control group (181.55 ± 4.24,188.46 ± 2.18,3.84 ± 1.69,4.33 ± 0.89), the protein and mRNA expressions of PI3K(171.66 ± 2.85,154.12 ± 4.15,11.31 ± 4.18,20.54 ± 6.68), Akt1(177.47 ± 3.16,156.42 ± 3.18,12.52 ± 3.13,19.43 ± 5.36) were higher in the low- and high-dose fluorosis groups (all P < 0.05), and the high fluorosis group was obviously higher than the low fluorosis group (all P < 0.05). Conclusions BGP and Cath-K contents could be used as bone metabolic indices in the endemic fluorosis disease. Fluoride can increase the expression of PI3K and Akt1 mRNA and protein in bone tissue of fluorosis rats, and PI3K/Akt1 signaling pathway may be involved in the pathogenesis of bone injury caused by fluoride.