生长抑素对人球后成纤维细胞增殖的影响

OBJECTIVE: To elucidate the possible mechanism of Somatostatin 14 in the treatment of Graves' ophthalmopathy, thus providing laboratory data with the intent to underpin therapeutic developments. METHODS: The human retro-ocular fibroblasts (HROFb) was cultured and MTT colorimetry assay was used to determine the proliferation of HROFb. RESULTS: MTT colorimetry assay could precisely reflect the proliferation of HROFb. The absorbance was directly proportional to the numbers of the cells (r = 0.996, P < 0.001). Somatostatin 14 could enhance the cell proliferation percentage at lower levels (< 25 nmol/L) and inhibit that at higher levels (> 25 nmol/L). The cell proliferation correlated positively to Somatostatin 14 levels significantly (r = -0.9054, P < 0.001). CONCLUSION: Somatostatin 14 has a dual effect on HROFb.     

高三尖杉酯碱对人眼球后成纤维细胞增殖的影响

为探讨高三尖杉酯碱对人眼球后成纤维细胞 (HROF) )增殖的影响 ,采用体外培养人眼球后成纤维细胞 ,用 MTT比色法测定人眼球后成纤维细胞的增殖程度 ,并观察高三尖杉酯碱对 HROFb生长和增殖的影响。结果显示 :MTT比色法能精确反映 HROFb的增殖程度 ,所测光吸收值与细胞数目成正相关 (r=0 .996 ,P<0 .0 0 1 )。高三尖杉酯碱可抑制 HROFb的增殖 ,细胞抑制率与高三尖杉酯碱浓度呈显著正相关 (r=0 .6 932 ,P<0 .0 0 1 )     

地塞米松、氨甲喋呤对人眼球后成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨地塞米松、氨甲喋呤对人眼球后成纤维细胞增殖的影响。方法：采用体外培养人眼球后成纤维细胞（ＨＲＯＦｂ）,用ＭＴＴ比色法测定ＨＲＯＦｂ增殖程度,并观察了不同浓度地塞米松、氨甲喋呤单独及联合使用对ＨＲＯＦｂ生长、增殖的影响。结果和结论：ＭＴＴ比色法能精确反映ＨＲＯＦｂ的增殖程度,所测定吸收值与细胞数目成正相关（ｒ＝０．９９６,Ｐ＜０．００１）,地塞米松、氨甲喋呤均可抑制ＨＲＯＦｂ的增殖,且随剂     

高三尖杉酯碱对人眼球后成纤维细胞增殖的影响

为探讨高三尖杉酯碱对人眼球后成纤维细胞增殖的影响,采用体外培养人眼球后成纤维细胞,用ＭＴＴ比色法测定人眼球后成纤维细胞的增殖程度,并观察高三尖杉酯碱对ＨＲＯＦｂ生长和增殖的影响。结果显示：ＭＴＴ比色法能精确反映ＨＲＯＦｂ的增殖程度,所测光吸收值与细胞数目成正相关。高三尖杉酯碱可抑制ＨＯＲＦｂ的增殖,细胞抑制率与高三尖杉酯碱浓度呈显著正相关。     

IL-1β对体外人Graves眼病球后成纤维细胞分泌RANTES的影响

目的:探讨IL-1β对人眼球后成纤维细胞(RF)产生趋化因子RANTES的影响及其对外周血淋巴细胞(PBL)的趋化作用。方法:取Graves眼病(GO)患者和斜视患者眼球后结缔组织,胶原酶消化法获得RF,分别以0μg/L、0.04μg/L、0.40μg/L、8.00μg/L、10.00μg/L的IL-1β在RPMI培养基中孵育24h,RT-PCR和ELISA法分别检测RANTESmRNA表达和RF培养上清中RANTES的含量,并观察活性核因子κB抑制剂CAPE对RANTES表达量的影响。采用96微孔板ChemoTXSystem进行趋化实验检测RF产生的RANTES对PBL的趋化作用,并观察鼠抗人RANTES抗体对PBL游走能力的影响。结果:RF在体外几乎不能产生RANTES,经IL-1β刺激之后,RANTES在mRNA和蛋白水平表达都升高,GO患者RF产生RANTES的量明显高于正常对照RF((182.9±14.1)μg/Lvs(77.9±3.8)μg/L,t=16.765,P<0.01),且在一定范围内具有浓度依赖性。CAPE可明显抑制IL1β对RF表达RANTES的诱导效应。经IL1β刺激的RF培养上清可增强PBL的游走能力,此效应可被鼠抗人RANTES抗体所抑制。结论:IL1β诱导RF表达的RANTES参与了GO眶后淋巴细胞浸润,且RANTES的表达可能与NF-κB的激活有关。     

PDGF-AB对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨ＰＤＧＦ－ＡＢ促进伤口愈合的作用机理及其在瘢痕增生中的作用。方法：取体外培养的人正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞（ＨＴＳＦＢ）测定生长曲线,用ＭＴＴ法观察ＰＤＧＦ－ＡＢ对其增殖影响的差异。结果：两种细胞生长曲线存在差异,ＰＤＧＦ－ＡＢ对两种成纤维细胞增殖均有明显刺激作用,且均呈剂量依赖性关系,但作用有差异。结论：ＰＤＧＦ－ＡＢ可能通过刺激成纤维细胞增殖促进伤口愈合,同时在瘢痕增生性疾病中起     

丹参对人尿道狭窄成纤维细胞增殖的影响

目的:观察丹参对人尿道狭窄成纤维细胞(human urethral stricture fibroblasts,HUSF)增殖的影响,为预防及治疗尿道狭窄探寻新的思路及方法。方法:组织块法原代培养人尿道狭窄成纤维细胞,取第4-6代细胞冻存用于实验;将不同剂量的丹参含药血清加入HUSF分别培养24 h、48 h和72 h后,使用四唑盐比色法检测丹参对体外培养HUSF增殖的影响,利用增殖标志基因增生细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫组织化学染色检测丹参对HUSF生长活性的影响,利用流式细胞术检测丹参对HUSF细胞周期的影响。结果:随丹参剂量增加和时间延长,体外培养HUSF的吸光度(OD值)逐步降低(P0.05)。HUSF的PCNA免疫组织化学染色的阳性率随丹参剂量增加而降低(P0.05)。流式细胞仪检测可见,丹参剂量越大,体外培养HUSF被阻断于G1期的细胞数量越多(P0.05)。结论:丹参可显著抑制HUSF的增殖,且抑制效果随丹参剂量及作用时间的增加而增强。     

丹参对人尿道狭窄成纤维细胞增殖的影响

目的:观察丹参对人尿道狭窄成纤维细胞(human urethral stricture fibroblasts,HUSF)增殖的影响,为预防及治疗尿道狭窄探寻新的思路及方法。方法:组织块法原代培养人尿道狭窄成纤维细胞,取第4-6代细胞冻存用于实验;将不同剂量的丹参含药血清加入HUSF分别培养24 h、48 h和72 h后,使用四唑盐比色法检测丹参对体外培养HUSF增殖的影响,利用增殖标志基因增生细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫组织化学染色检测丹参对HUSF生长活性的影响,利用流式细胞术检测丹参对HUSF细胞周期的影响。结果:随丹参剂量增加和时间延长,体外培养HUSF的吸光度(OD值)逐步降低(P<0.05)。HUSF的PCNA免疫组织化学染色的阳性率随丹参剂量增加而降低(P<0.05)。流式细胞仪检测可见,丹参剂量越大,体外培养HUSF被阻断于G1期的细胞数量越多(P<0.05)。结论:丹参可显著抑制HUSF的增殖,且抑制效果随丹参剂量及作用时间的增加而增强。     

积雪草甙对人成纤维细胞增殖的影响

目的研究羟基积雪草甙(madecassoside,Md)对人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFb)的增殖的影响。方法XTT法研究Md对HSFb增殖的影响。结果1)Md在浓度高达200μg/ml时仍未见任何细胞毒性。2)与空白对照组相比,Md对HSFb有明显促进增殖作用(P<0.05)。结论Md在刺激体外培养HSFb增殖有明显的生物活性。     

血竭提取物对人成纤维细胞增殖的影响

目的: 观察血竭提取物对体外培养成纤维细胞增殖的影响,探讨血竭促进创面愈合的机制. 方法: 将血竭经过氯仿、乙酸乙酯、乙醇回流提取得到的3种提取液,分别加入培养液并进行成纤维细胞的培养,MTT法检测不同血竭提取物在不同浓度以及不同时间点对体外培养成纤维细胞增殖的影响, 并绘制最适浓度条件下细胞生长曲线. 利用流式细胞仪分析最适浓度培养条件下成纤维细胞的细胞周期变化. 结果: 血竭乙酸乙酯提取物在0.5～2.0 g/L浓度范围内,促进成纤维细胞增殖,且呈剂量依赖性,在浓度为2.0 g/L时促进作用最为显著,此条件下处于S期的细胞较对照组增加18.3% (P＜0.01). 结论: 血竭乙酸乙酯提取物能显著促进成纤维细胞增殖,可能与血竭促进创面愈合的机制有关.     

白细胞介素对Graves眼病患者眼眶成纤维细胞的作用

目的 观察白细胞介素对Graves眼病(GO)患者与正常入眼眶成纤维细胞(OFs)的作用。方法取5例GO患者与4例正常对照者眼眶结缔组织与眼外肌的OFs进行培养,分别在其中加入不同浓度的白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6),用四甲基偶氮唑盐(MTT)法与放射免疫法检测GO患者与正常人OFs的增殖及分泌透明质酸(HA)的情况。结果IL-1在5、50、500 U／ml时,均能刺激OFs的增殖和HA的分泌,且当为500 U／ml时,对GO患者OFs的刺激作用强度大于对正常人OFs;IL-2与IL-6在500 U／ml时能刺激OFs的增殖和HA的分泌。结论白细胞介素(IL-1、IL-2、IL-6)能刺激OFs的增殖和HA的分泌。白细胞介素的异常可能是GO的发病机制之一。     

细胞因子和泌乳素对体外培养的人球后成纤维细胞表面ICAM-1表达的影响

目的：通过研究细胞因子和泌乳素（ＰＲＬ）对球后成纤维细胞（ＲＦｓ）表面细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达的影响,进一步了解甲状腺相关眼病（ＴＡＯ）的发病机理,以探索新的防治途径。方法：将体外培养的正常人ＲＦｓ与ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦＮ－α和ＰＲＬ孵育７２ｈ,利用直接免疫荧光技术和流式细胞仪检测其表面ＩＣＡＭ－１表达的情况。结果：正常人ＲＦｓ中只有极少数细胞自发并较弱地表达ＩＣＡＭ－１,基础状态下的阳性百分数为（３．４９±１．９９）,平均荧光强度为（４４．８４±２０．５９）;而ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦＮ－α能以剂量依赖方式显著增强ＩＣＡＭ－１的表达（Ｐ＜０．０５）。ＰＲＬ不仅可以直接刺激ＲＦｓ表面ＩＣＡＭ－１的表达（Ｐ＜０．０５）,其剂量相关曲线呈双相型,还能拮抗或协同ＩＦＮ－γ（１００ｕ／ｍｌ）、ＩＦＮ－α（１０００ｕ／ｍｌ）或ＩＬ－４（２．５ｎｇ／ｍｌ）的诱导作用。结论：ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦ－α和ＰＲＬ对正常人ＲＦｓ表面ＩＣＡＭ－１的表达有明显的调节作用,它们可能是启动或加重ＴＡＯ自身免疫反应的重要因素。     

MTT法探讨改良五黄油对人皮肤成纤维细胞增殖的抑制作用

目的 MTT法探讨改良五黄油对人皮肤成纤维细胞增殖的抑制作用,为烧伤创面外用药物五黄油的改良目的之一--抑制瘢痕增生,寻求确切有效的实验依据.方法 倒置显微镜下观察细胞形态学变化.MTT比色法检测不同终浓度(0.10、0.15、0.20、0.25、0.30g/ml)改良五黄油作用下增殖状态下成纤维细胞72h后对细胞增殖的抑制程度,主要指标,细胞形态,吸光度(A)值.结果 倒置显微镜下可见空白对照组成纤维细胞大小均匀,生长密集,改良五黄油实验组和五黄油对照组细胞生长及形态明显改变,增殖缓慢,生长差,贴壁能力减弱.MTT比色法结果表示:0.10～0.30g/ml浓度药物作用人成纤维细胞,其增殖抑制程度与改良五黄油的浓度存在正相关性;与五黄油相对照,改良五黄油增殖抑制率以0.30g/ml浓度最显著(P＜0.01).结论 体外抑制人成纤维细胞增殖,改良五黄油比五黄油更有效.     

硫酸软骨素A对NIH－3T3鼠成纤维细胞及人皮肤成纤维细胞增殖的影响

用ＭＴＴ法检测了硫酸软骨素Ａ（４－硫酸软骨素，ＣＳ－Ａ）对ＮＩＨ－３Ｔ３鼠成纤维细胞和人皮肤成纤维细胞存活与增殖的影响。发现所侧ＯＤ值随ＣＳ－Ａ浓度的增高而增大，两者呈正相关（３Ｔ３鼠成纤维细胞：ｒ＝０．８１５４，Ｐ＜０．０５；人皮肤成纤维细胞：ｒ＝０．９１５，Ｐ＜０．０１），表明ＣＳ－Ａ对这两类成纤维细胞的存活和增殖有促进作用。采用ＰＡＰ和ＡＢＣ免疫细胞化学染色，观察到两类细胞的胞膜上有ＣＳ分布，提示ＣＳ可能参与膜结构的组成，对细胞－细胞与细胞－基质之间的相互作用有重要意义；为进一步探讨硫酸软骨素在肝纤维化中的作用提供了可靠的实验依据。     

人眶后成纤维细胞和皮肤成纤维细胞超微结构的比较

目的：为解释甲状腺相关眼病的器官特异性,建立体外人眶后成纤维细胞（ＲＦ）和皮肤成纤维细胞（ＤＦ）的培养方法,并在形态和超微结构上比较两种细胞的差异。方法：采用扫描电镜和透射电镜技术进行观察比较。结果：ＲＦ除生长速度较慢,光镜下细胞多形性和胞浆富颗粒性与ＤＦ不同外,其在扫描电镜和透射电镜下的超微结构间未见明显差异。结论：不同组织来源的成纤维细胞具有不同的生物活性,推测可能与其不同的表现型有关。     

阿魏酸钠抑制心肌成纤维细胞增殖的作用及机制

目的:研究阿魏酸钠(SF)对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用及其机制。方法:培养新生鼠心肌成纤维细胞分为3组:对照组、AngⅡ(10-7mol/L)组和AngⅡ+SF组。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期改变;免疫荧光法检测TGFβ1蛋白表达。结果:AngⅡ作用24h后MTTOD值显著高于对照组(P<0.01)。不同浓度SF(0.04mg/ml,0.08mg/ml,0.16mg/ml)组MTTOD值均显著低于AngⅡ组(P<0.01),呈剂量依赖性。AngⅡ组S期细胞百分率明显高于对照组,G0/G1期细胞百分率则明显低于对照组(P<0.01)。AngⅡ+SF组S期细胞百分率显著低于AngⅡ组,G0/G1期细胞百分率显著高于AngⅡ组(P<0.01),且呈剂量依赖性。AngⅡ组TGFβ1蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),AngⅡ+SF组显著低于AngⅡ组(P<0.01)。结论:阿魏酸钠可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其效应呈现剂量依赖性,作用机制与降低TGFβ1蛋白表达有关。     

平突散系列复方对CD40L刺激后人球后成纤维细胞的MMP和TIMP表达的影响

背景　尽管目前关于甲状腺相关性眼病（TAO）在基础和临床研究方面已取得了一些进展,同时积累了一定量的关于发病机制的材料和证据,但目前国内外关于TAO的研究仍然很少,临床仍缺少有效的治疗方法和药物。与此同时,在传统中医领域,中医药辨证治疗TAO疗效肯定、不良反应少且复发率低,但其作用机制不明确,药物作用靶点不明。目的　观察CD40L对人球后成纤维细胞（RFs）表面基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP-2、MMP组织抑制剂（TIMP）-1、TIMP-2表达的影响以及平突散系列中药复方的干预效果。方法　2016年9月选取35只SPF级SD雄性大鼠用于制备泻火平突散、活血平突散、养目平突散含药血清。实验中所用的人眼球后结缔组织来源于2例眼创伤患者（2014年取材于郑州大学第一附属医院眼科）,体外培养RFs成功后,随机分为7组,其中空白组：给予正常培养液;血清组：给予含10%正常大鼠血清的培养液;CD40L组：给予含100 ng/ml CD40L的培养液;CD40L+血清组的培养液：给予含100 ng/ml CD40L和10%正常大鼠血清的培养液;泻火平突散组：给予含有100 ng/ml CD40L和10%含药血清的培养液;活血平突散组：给予含有100 ng/ml CD40L与10%含药血清的培养液;养目平突散组：给予含有100 ng/ml CD40L与10%含药血清的培养液。免疫细胞化学染色法检测各组MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的表达。结果　CD40L组MMP-1、MMP-2活性低于空白组,CD40L+血清组MMP-1、MMP-2活性低于血清组（P<0.05）;泻火平突散、活血平突散、养目平突散组MMP-1、MMP-2活性高于CD40L+血清组（P<0.05）;养目平突散组MMP-1、MMP-2活性高于泻火平突散组、活血平突散组（P<0.05）。CD40L组TIMP-1、TIMP-2活性高于空白组,CD40L+血清组TIMP-1、TIMP-2活性高于血清组（P<0.05）;泻火平突散、活血平突散、养目平突散组TIMP-1、TIMP-2活性低于CD40L+血清组（P<0.05）;养目平突散组TIMP-1、TIMP-2活性低于泻火平突散组、活血平突散组（P<0.05）。CD40L组MMP-1/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2低于空白组,CD40L+血清组MMP-1/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2低于血清组（P<0.05）;泻火平突散、活血平突散、养目平突散组MMP-1/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2高于CD40L+血清组（P<0.05）;养目平突散组MMP-1/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2高于泻火平突散组、活血平突散组（P<0.05）。结论　平突散系列复方可能通过阻断CD40-CD40L共刺激信号通路导致MMP/TIMP的失衡,而达到治疗TAO的目的。