用全染色体涂抹探针进行卵母细胞第一极体荧光原位杂交

【目的】建立用全染色体涂抹探针（WCP）对卵子第一极体进行荧光原位杂交（FISH）检测染色体的方法。【方法】收集单精子卵胞浆内注射（ICSI）中不成熟卵母细胞经体外培养成熟和常规试管婴儿（IVF）中未能成功受精的成熟卵母细胞，活检第一极体，固定后行13、14号染色体的全染色体涂抹探针荧光原位杂交。活检后，一部分卵母细胞固定行FISH以分析卵子自身的13、14号染色体，其余行ICSI受精，观察受精和卵裂情况。【结果】共获得成熟母细胞93个，成功活检85个，成功固定78个，共29个第一极体处于分裂中期，均有FISH结果。卵母细胞体外培养成熟后立即取极体进行固定，90．5％（19／21）的极体处于分裂中期，而取卵后30-48h和72h后活检的第一极体处于分裂中期的比例分别为27．3％（6／22）和11．4％（4／35），3组相比有统计学差异（P〈0．01）。11个卵母细胞同时获得了极体和相对应卵细胞的FISH结果，其中10个极体和相对应的卵细胞分别有1条13，14号染色体，剩余1个卵母细胞的极体有2条14号染色体和1条13号染色体，相对应的卵细胞仅有1条13号染色体，二者互补。活检后行ICSI受精的卵母细胞受精率为78．6％（11／14），优质胚胎率45．5％（5／11）。【结论】全染色体涂抹探针对卵子第一极体进行遗传分析可以有效、准确地推测相对应卵母细胞的染色体构成，从而应用于女性染色体易位患者的植入前遗传诊断。     

小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育

【目的】观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育。【方法】昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞。成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入，观察其受精和胚胎发育情况。【结果】卵子去核存活率为75．9％(362／477)，注核存活率为39．8％(143／359)，D1存活率为38．4％(138／359)。39．9％(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核，其卵裂率为80．7％(46／57)。大部分重构胚发育到2-3细胞停滞，其中2个分裂至4细胞，无囊胚形成。【结论】将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中，可以诱导极体排出，形成2原核 1极体的重构胚胎。重构胚胎大部分发育到2-3细胞即发生停滞，最多到达4细胞期，发育潜能差。     

人卵母细胞的形态对受精及早期胚胎发育的影响

目的：探讨人卵母细胞形态对卵细胞质内单精子注射(ICSI)后的受精以及对随后早期胚胎发育的影响，试图寻找在受精前能预示卵母细胞受精和胚胎发育能力的形态标记。方法：ICSI前依据第一极体和卵周隙的形态以及细胞质有无内容物，对卵母细胞进行分组，比较各组间的受精率和卵裂率以及移植当天的优质胚胎率。结果：不同极体和卵周隙形态的卵母细胞ICSI后受精率有显著差异；无细胞质内容物的卵母细胞其受精后的优质胚胎率显著高于有内容物的卵母细胞。结论：卵母细胞的形态反映了其成熟度；并可以预示ICSI后的受精能力；有无细胞质内容物可能是卵母细胞细胞质成熟度的标记。     

玻璃化冷冻人卵母细胞体外受精－胚胎移植9例临床分析

目的：探讨人卵母细胞玻璃化冷冻在体外受精－胚胎移植（ IVF-ET）中的应用效果。方法行IVF-ET 治疗、因取卵日男方因素无法进行受精的患者9例,对其成熟卵子进行玻璃化冷冻保存,解冻后进行卵胞浆内显微授精（ICSI）,记录卵子复苏、受精、卵裂及移植后妊娠情况。结果9例患者共解冻复苏58枚卵子,复苏率68．2％（58／85）;复苏后进行ICSI的成熟卵子中,受精40枚,形成胚胎34枚,受精率69．0％,卵裂率85．0％。7个移植周期共移植胚胎15枚,临床妊娠3例,临床妊娠率42．9％。结论人卵母细胞玻璃化冷冻可以获得一定的临床妊娠率,在IVF-ET中可作为临床治疗的选择之一。     

不同来源精子卵细胞浆内单精子注射（ICSI）初探

目的 探讨不同来源精子卵细胞浆内单精子注射(ICSI)的受精、卵裂及妊娠情况。方法 对2004年2～7月接受ICSI治疗的不孕患者20周期资料进行回顾性分析。结果 在20周期中，回收卵子201个，自然受精26个中，只有1个卵子受精并分裂成胚胎；卵细胞浆内单精子注射(ICSI)185个，其中MⅡ期卵子128个，无极体47个，ICSI后存活卵子62个，两原核受精卵子62个，受精率49％，卵裂率90％，妊娠率30％。结论 ICSI的操作直接影响胚胎质量，随着ICSI技术的不断成熟和完善，在治疗男性不育和不明原因不育中起到积极作用。     

经皮穿刺附睾取精行ICSI治疗梗阻性无精子症的效果

目的探讨经皮穿刺附睾取精（PESA）结合卵细胞浆内单精子注射（ICSI）治疗梗阻性无精子症的有效性和安全性。方法对48例梗阻性无精子症病人进行PESA。女方常规超促排卵治疗以获取卵子,选择成熟的卵母细胞行ICSI。结果48例病人共接受60个周期的治疗,除1例病人第3个周期行附睾切开取精外,其余均行PESA取精成功。共取卵636个,553个成熟卵子行ICSI,426个卵子正常受精,正常受精率77．0％;获得412个胚胎,卵裂率96．7％;优质胚胎265个,优质胚胎率64．3％。每个治疗周期移植胚胎2～3个,21例获得临床妊娠,周期临床妊娠率为35．0％。结论PESA结合ICSI能有效地治疗梗阻性无精子症引起的男性不育症。     

浅谈性染色体异常及真两性畸形

人体性别的决定，主要由遗传物质的载体-染色体来控制的。细胞中的染色体可分为两类，即常染色体和性染色体。正常人的体细胞中染色体有23对，其中正常染色体有22对，性染色体1对(女性为XX，男性为XY)，凡是进行有性生殖的生物体，在从原始的生殖细胞发展到成熟的生殖细胞(精子或卵细胞)的过程中，都要进行减数分裂。女性新生儿卵巢内含有15万～50万个初级卵泡。至青春期，成批的初级卵泡开始发育，排卵时，初级卵泡完成了第一次减数分裂，形成了次级卵母细胞和第一极体；排卵后，次级卵母细胞开始第二次减数分裂，但未全部完成停留在成熟分裂的中期，直到日后次级卵母细胞与精子相遇时，才完成第二次减数分裂，捧出第二极体，而成为成熟的卵细胞。     

ICSI在常规体外受精失败后卵子再受精中的应用

目的探讨卵细胞浆内单精子注射（ICSI）技术在常规体外受精失败后卵子再受精中的有效性。方法在12个体外受精失败周期中应用ICSI对未受精的MⅡ期卵子进行再受精,将获得的优质胚胎冷冻保存,选择适当时机复温后移植,移植前均行胚胎辅助孵化。结果106个未受精的成熟卵子接受ICSI,注射后92个卵子存活。其中75个卵子正常受精,受精率为70.8%（75/106）;12个卵子出现三原核或单原核。69个正常受精卵发生分裂,卵裂率为92.0%（69/75）。最后获得优质胚胎58个,冻融后共移植胚胎38个,其中1个周期的7个冻融胚胎均破碎而未移植,其余11个周期均有可供移植的胚胎。1例孕3月时流产,1例单胎临床妊娠分娩出正常婴儿,临床妊娠率为18.2%。结论ICSI使常规体外受精失败的卵子再受精,配合胚胎冻融及辅助孵化技术实现临床妊娠,具有一定的应用价值。     

卵母细胞第一极体形态对受精结局的影响

目的：分析人类卵母细胞第一极体的形态与卵母细胞的受精率、卵裂和发育潜能的关系。方法行卵胞浆内单精子注射技术治疗的63周期765枚卵母细胞,观察MⅡ期卵母细胞第一极体,并根据第一极体形态将卵子分为圆或椭圆（A组）,形态碎片化（B组）,极体巨大、卵周隙大（C组）等3组。统计卵母细胞的正常与异常受精率、卵裂率和优质胚胎率,分析第一极体形态与卵母细胞受精和发育的关系。结果 A、B两组卵母细胞的正常受精率、卵裂率、优质胚胎率明显高于C组,B组与A组相比,卵母细胞的正常与异常受精率、卵裂率没有明显差异,但优质胚胎率显著降低。结论卵母细胞第一极体与卵母细胞的受精和发育潜能相关。第一极体形态可能作为评价人类卵母细胞发育潜能的可能指标。     

常规IVF不受精周期行补救卵母细胞单精子注射

 【目的】探讨常规体外受精胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET）不受精时,应用卵母细胞单精子显微注射（intracytoplasmic sperm injection,ICSI）技术进行补救授精的临床意义。【方法】2001年8月～2005年8月,在499个常规IVF-ET周期中有25个周期完全不受精,进行补救ICSI,并与同期实施的179个正常ICSI周期进行比较。【结果】补救ICSI组与正常ICSI组比较,HCG日平均血清雌二醇水平、每个成熟卵泡平均血清雌二醇量、每个周期的获卵数无明显差别,补救ICSI受精率为57.7%,低于正常ICSI组（67.8%）,补救ICSI组平均每个周期获得胚胎数（7.8±3.9）比正常ICSI（10.0±4.9）组少,且有统计学意义（P〈0.01）。补救ICSI组≥4细胞的胚胎占总胚胎数的54.5%,低于正常ICSI组（87.5%）,有统计学意义（P〈0.01）。正常ICSI组妊娠率为38.5%,补救ICSI组无一例妊娠。补救ICSI组中有8例在下一周期行ICSI,有2例妊娠并分娩2个健康女婴。【结论】补救ICSI虽可以避免取消IVF周期，但其受精率和妊娠率低，其临床应用价值还有待于进一步探讨。对于常规IVF不受精的患者，再次治疗时可考虑行ICSI助孕。     

不同体外受精周期所获生殖泡期卵母细胞体外 成熟后结果比较

 【目的】 研究对比体外受精-单精子卵胞浆内注射(IVF-ICSI)周期所获生殖泡期(GV)不成熟卵母细胞以及体外成熟(IVM)周期所获GV期卵母细胞体外培养成熟后的胚胎发育情况&#65377;【方法】 163个IVF-ICSI周期中所获987个成熟卵为Ⅰ组,所获GV期卵进行体外培养后成熟的132个卵为Ⅱ组, 另有37个IVM周期中所获GV期卵体外培养后成熟的235个卵为Ⅲ组&#65377;对3组均进行ICSI,并对其受精率&#65380;卵裂率及胚胎发育进行比较&#65377;【结果】 Ⅰ组的受精率&#65380;卵裂率以及优质胚胎率均显著高于Ⅱ组及Ⅲ组(分别为84.9%,98.1%和61.6%;72.0%,90.5%和22.1%; 75.3%,94.4%和25.1%)&#65377;Ⅰ组的胚胎卵裂球数目及胚胎形态评分均显著优于Ⅱ组及Ⅲ组(P < 0.05);Ⅱ组与Ⅲ组相比差异无统计学意义&#65377; 【结论】 体内成熟卵形成的胚胎形态好于生殖泡期卵体外培养成熟者,IVF-ICSI周期的生殖泡期不成熟卵形成的胚胎形态学上与IVM周期的类似&#65377;     

小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育

[目的]观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育.[方法]昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞.成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入,观察其受精和胚胎发育情况.[结果]卵子去核存活率为75.9%(362/477),注核存活率为39.8%(143/359),D1存活率为38.4%(138/359).39.9%(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核,其卵裂率为80.7%(46/57).大部分重构胚发育到2～3细胞停滞,其中2个分裂至4细胞,无囊胚形成.[结论]将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中,可以诱导极体排出,形成2原核 1极体的重构胚胎.重构胚胎大部分发育到2～3细胞即发生停滞,最多到达4细胞期,发育潜能差.     

Effects of dimethyl sulfoxide on asymmetric division and cytokinesis in mouse oocytes

Objective:To observe the effect of DMSO on mouse oocyte meiotic maturation.Results:In DMSO-treated oocytes,we observed abnormal MII oocytes that contained large polar bodies,including 2-celllike MII oocytes,during in vitro maturation.Oocyte polarization did not occur,due to the absence of actin cap formation and spindle migration.These features are among the primary causes of abnormal symmetric division;however,analysis of the mRNA expression levels of genes related to asymmetric division revealed no significant difference in the expression of these factors between the 3%DMSO-treated group and the control group.After each"blastomere"of the 2-cell-like MII stage oocytes was injected by one sperm head respectively,the oocytes still possessed the ability to extrude the second polar body from each"blastomere"and to begin cleavage.However,MII oocytes with large polar bodies developed to the blastocyst stage after intracytoplasmic sperm injection(ICSI).Furthermore,other permeable cryoprotectants,such as ethylene glycol and glycerol,also caused asymmetric division failure.Conclusions:Permeable cryoprotectants,such as DMSO,ethylene glycol,and glycerol,affect asymmetric division.DMSO disrupts cytokinesis completion by inhibiting cortical reorganization and polarization.Oocytes that undergo symmetric division maintain the ability to begin cleavage after ICSI.     

第一极体不能精确定位人卵母细胞纺锤体

目的 观测人卵母细胞纺锤体的确切位置，从而指导今后的生殖医学临床工作。方法 应用纺锤体成像系统观测体外成熟及体内成熟组人卵母细胞纺锤体，测量卵子中心、纺锤体与第一极体之间形成的角度。比较两组结果的差异。结果 体外成熟组纺锤体与第一极体形成角度和体内成熟组存在显著差异(P=0．006)。结论 人卵母细胞的位置并不能准确定位卵母细胞纺锤体的位置。体外成熟组纺锤体与第一极体形成的角度要明显小于体内成熟组。应用纺锤体成像系统可以安全、有效地观察人卵母细胞纺锤体。     

卵胞浆内单精子显微注射技术的临床应用

目的:探讨采用卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)治疗少、弱、畸精子不育症的临床效果。方法:对36例少、弱、畸精子症不育者共计44个ICSI治疗周期进行了回顾性分析。结果:44个ICSI治疗周期共取卵450个,MⅡ期卵母细胞353个,MⅡ期卵母细胞正常受精率83%,卵裂率89.5%,临床妊娠15例,周期临床妊娠率为34%。结论:ICSI对少、弱、畸精子不育症是一种有效的治疗方法。     

Spindle and Chromosome Analysis of Non-Fertilized Oocytes from Conventional in vitro FertiliTation for Non-Male Factor Infertiliy： Significance of Rescue ICSI？

Objective To determine whether rescue intracytoplasmic sperm injection (ICSI) is associated with improved outcomes for non-male factor infertility. Methods The changes of micro-structure, including meiotic spindle and chromosome distribution, sperm penetration, as well as oocyte activation were compared in IVF (in vitro fertilization) fertilization failure (IVF FF) patients, ICSI patients with non-fertilized oocytes (ICSI NF) and oocytes in vitro maturation (IVM). Results A total of 164 unfertilized oocytes (93 oocytes in IVF and 71 oocytes in ICSI) and 56 IVM oocytes were available for this study. The abnormality of spindle and chromosomes was significantly higher in IVF FF group than that in ICSI NF group or IVM group (abnormal spindle rates were 80.6%, 64.8% and 57.1%, respectively; abnormal chromosome rates were 91.4%, 80.3% and 75.0%, respectively). No sperm penetration after IVF and sperm expulsion after ICSI were 78.5% and 40.8%, respectively. Activation failure occurred in 16.1% of the IVF FF cases and 49.3% of ICSI NF oocytes. Conclusion Rescue ICSI of fertilization-failed oocytes fails to lead outcome improvement due to the internal defects of oocytes.     

Preimplantation genetic diagnosis of chromosomal abnormalities by multicolour fluorescence in situ hybridisation

Preimplantation genetic diagnosis (PGD) is an early diagnosis of genetic disorders, prior to the onset of pregnancy. PGD incorporates the latest techniques in assisted reproduction and molecular genetics. Embryos or oocytes are biopsied during culture in vitro and genetic analysis is carried out on the blastomeres or polar bodies. Embryos shown to be free of the genetic disease under investigation are transferred to the uterus. Multicolour fluorescence in situ hybridisation (FISH) is used to diagnose numerical and certain structural abnormalities of chromosomes in the embryo. The common probes used are for chromosomes 13, 18, 21, X and Y. FISH can also be used for PGD of translocations, when one of the parents is a carrier. PGD was carried out recently in 4 cases using multicolour FISH. In one of the embryos, trisomy 18 was detected. Tetraploidy was seen in another embryo. Only chromosomally normal embryos were transferred back to the uterus. Care has to be taken while interpreting FISH signals as the signal may be split, diffused, superimposed or in a different focus.     

人MⅡ期卵母细胞极体及原核期形态分级对预测胚胎发育潜能的研究

目的对人MⅡ期卯母细胞的第一微体和D1双原核期的原核、核仁及胞浆进行形态分级,以预测胚胎发育潜能。方法以2009年6月-2012年6月在广西医科大学第一附属医院生殖医学研究中心接受卵胞浆内单精子硅微注射（ICS1）助孕治疗的269对不育夫妇（共269个移植周期）为研究对象。对所有获得的MⅡ期卵母细胞第一极体进行形态观察和分级,同时将D1双原核期的受精卵进行形态分级,分别比较其受精率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎种植率及临床妊娠率。结果根据所移植的胚胎来自不同级别第一极体的MⅡ期卵和不同原核等级分为B组和C组,分别为102例和98例,其余为A组（69例）。移植来源于1～2级第一极体的MⅡ期卵母细胞且D1双原核期为Z1～Z2级的胚胎其受精牢、卵裂牢、种植率、优胚率及临床妊娠率均较高。结论人MⅡ期卵母细胞第一极体和D1双原核期受精卵的等级越高,胚胎发育的潜能就越好。从而提高ICSI的胚胎种植率及临床妊娠率。     

A live birth of activated one-day-old unfertilized oocyte for a patient who experienced repeatedly near-total fertilization failure after intracytoplasmic sperm injection

Total or near-total fertilization failure after intracytoplasmic sperm injection (ICSI) is a rare event, but it occurs repeatedly because of sperm defects in activating oocyte. The case presents a successful pregnancy and live birth after calcium ionophore A23187 (A23187) activation on one-day-old unfertilized oocytes in a patient whose husband suffered oligoasthenoteratozoospermia, and who had experienced repeated near-total fertilization failure after ICSI. In the second ICSI cycle, only one oocyte was fertilized while nine were unfertilized. Oocyte activation with A23187 were performed on the one-day-old unfertilized oocytes after ICSI and resulted in fertilization and embryo transfer. A clinical pregnancy was achieved and a healthy baby was born. To our knowledge, this is the first reported case of a healthy birth after oocyte activation on the one-day-old unfertilized oocyte. This indicates that “rescue oocyte activation” on one-day-old unfertilized oocytes after ICSI may be helpful for preventing total or near-total fertilization failure after ICSI.

     

体外受精-胚胎移植成熟卵的影响因素分析

目的探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）/卵泡浆内单精子显微注射（ICSI）周期中成熟卵的影响因素及与妊娠结局的关系。方法对IVF/ICSI的112个周期进行回顾性分析,按照获成熟卵的数量分为3组,A组：1-4个,B组：5-10个,C组：≥11个,分析其与妊娠结局的关系。结果 IVF/ICSI周期中所获MII卵数量变异的65.4%是由年龄、BMI、不孕年限、HCG日和采卵日的E2、P的水平起主要决定作用。BMI、HCG日E2及采卵日P水平越高的患者获得的MII卵数量越多且差异有统计学意义（P〈0.05）。尽管MII卵在A组的年龄显著高于C组,C组的妊娠率最高,A组最低,但三组间的妊娠率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 IVF/ICSI周期所获成熟卵数量与BMI、HCG日E2及采卵日P水平密切相关,但其不影响新鲜周期的妊娠结局。