原癌基因蛋白质 c- met核酶基因对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨原癌基因蛋白质 c- met核酶基因对胃癌细胞生物学行为的影响.方法将含 c- met核酶基因的 U1/met292质粒转染至胃癌肝转移的 SGC- 7901亚系 L2细胞株,检测其对 L2亚系细胞增殖能力、细胞周期、血管内皮生长因子( VEGF)、 c- met蛋白及肝转移能力的影响.结果转染 c- met核酶基因对细胞增殖能力、细胞周期没有明显影响,但同 L2亚系相比,其 VEGF、 c- met蛋白表达明显下降( P< 0.05),其肝转移能力明显减弱( P< 0.05).结论抑制胃癌细胞 c- met的过度表达,将可能起到预防与治疗胃癌细胞肝转移的作用.     

VEGF-C在胃癌组织及胃癌细胞株SGC-7901中的表达及其意义

目的:检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)在胃癌组织及胃癌细胞株SGC-7901中的表达,分析其与肿瘤淋巴结转移的关系.方法:56例胃癌标本和一株恶性程度较高的胃癌细胞株SGC-7901,用免疫组化方法检测VEGF-C在胃癌细胞中的表达及定位情况.结果:56例胃癌标本中有18例VEGF-C呈阳性表达,阳性率32%,SGC-7901胃癌细胞株中VEGF-C强阳性表达;阳性物质主要位于肿瘤细胞胞浆内,在有淋巴结转移的胃癌组织中明显高于无淋巴结转移组织,低分化胃癌中的表达明显高于高、中分化胃癌.结论:VEGF-C的表达与胃癌的分化程度及肿瘤细胞的淋巴结转移密切相关.     

RNA干扰沉默STIL基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨STIL在胃癌中的表达以及沉默STIL基因对胃癌细胞株SGC-7901各生物学活性的影响.方法 采用实时定量PCR（qPCR）法和Western Blot法检测STIL在胃癌及癌旁组织中的表达.构建靶向STIL的SiRNA并转染SGC-7901细胞,以MTT法检测细胞增殖、平板克隆法检测细胞克隆形成,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果 与癌旁组织相比,胃癌组织中STIL在mRNA和蛋白水平表达显著增高.与对照组相比,STIL特异性SiRNA（Si-STIL）转染后,SGC-7901细胞中STIL mRNA表达受到抑制,细胞增殖、克隆形成能力下降,凋亡增加,细胞周期被阻滞于S期.结论 STIL在胃癌组织中高表达,STIL基因沉默可抑制胃癌细胞生长和克隆增殖、抑制有丝分裂期（M期）转换,促进细胞凋亡.     

二甲双胍对胃癌细胞株增生及Cyclin D1表达的影响

目的 观察二甲双胍在体外对人胃癌细胞株SGC-7901生长的作用,并初步探讨其作用机制.方法 体外培养胃癌SGC-7901细胞,MTT法测二甲双胍在不同浓度和不同作用时间对胃癌细胞增生的影响;Western blot法检测二甲双胍对胃癌细胞CycLn D1表达的影响.结果 MTT法结果显示:用不同浓度(50 mmol/L、100 mmol/L)的二甲双胍处理胃癌细胞SGC-7901在24h.48h、72h后,50 mmol/L二甲双胍对于胃癌细胞生长抑制率分别为32.93%、48.64%和61.40%.100 mmol/L二甲双胍对于胃癌细胞生长抑制率分别为35.34%、75.44%和88.30%,不同浓度的二甲双胍对于胃癌细胞生长抑制率与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),100mmoL/L二甲双胍对于胃癌细胞生长抑制与50mmol/L二甲双胍对于胃癌细胞生长抑制率相比具有显著性差异(P<0.05)二甲双胍呈时间、浓度依赖性抑制胃癌细胞的增生.胃癌细胞高表达Cyclin D1,Western blot检测表明二甲双胍能显著降低Cycfin D1蛋白的表达,且呈一定时间、剂量依赖性.结论 二甲双胍可以下调胃癌细胞株SGC-7901 Cycfin D1的表达,抑制胃癌细胞的增生.     

组织因子对人胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响

目的 构建稳定转染人组织因子(TF)的人胃癌细胞株SGC7901,研究TF对胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响.方法 采用巢式PCR技术自人胎盘组织克隆目的基因TF,应用脂质体介导的转染技术将其导入人胃癌细胞株SGC7901,采用G418筛选稳定表达TF的细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测TF mRNA及蛋白的表达,并进行Transwell实验及划痕实验观察细胞体外侵袭转移能力的变化.结果 经基因测序证实成功构建了稳定、高效表达TF的人胃癌细胞系SGC7901/TF.转染组TF mRNA及TF蛋白表达增高;与阴性对照组及空白对照组相比,转染组细胞的体外侵袭转移能力增强.结论 TF能够增强人胃癌细胞的体外侵袭转移能力.     

miR-622在胃癌细胞中的表达及其功能的研究

目的 研究miR-622在胃癌细胞中的表达,探讨miR-622在胃癌中的生物学功能.方法 采用实时荧光定量PCR检测miR-622在胃癌细胞中的表达,以胃癌细胞SGC-7901和NCI-N87为模型瞬时转染miR-622寡核苷酸前体或抑制体,通过克隆形成、侵袭和划痕实验验证其在胃癌细胞中的功能.结果 荧光定量PCR实验结果表明:miR-622在胃癌细胞SGC-7901中相对表达量为1.29±0.58,而在NCI-N87细胞中相对表达量为10.96±1.02.在SGC-7901细胞中转染了miR-622 寡核苷酸前体,克隆形成率为76％.划痕试验中愈合能力为(11±7)μm,胃癌细胞侵袭能力为(732±3)个,与对照组相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 miR-622能够促进胃癌细胞克隆形成、迁移和侵袭.     

胃癌肝转移的肝切除术

已有很多研究报告了结肠直肠癌肝转移灶肝切除术的益处 ,但对于胃癌肝转移灶的肝切除效果及其指征则很少报道。为此 ,作者收集日本 Kagwa医科大学第一外科于 1986～ 1999年手术的 80 7例胃癌资料 ,其中 78例 (9.6 % )有同时肝转移和 12例 (1.5 % )异时肝转移。在上述 90例中 ,19例施行了初期肝切除术 ,重点对这组病例进行分析 :计男 13例、女 6例 ,平均年龄6 9岁 (5 2～ 79岁 ) ;同时转移者无腹膜布散或远处转移 ,异时转移者无癌肿复发 ,均列为肝切除的指征。胃原发灶均完全切除。总切除率为 2 1.2 % (19/90 ) ,其中同时转移 (16 .6 % (13/…     

双链蛋白聚糖对胃癌细胞生长作用研究

目的:研究双链蛋白聚糖(biglycan,BGN)对人胃癌细胞系SGC-7901的细胞增殖、周期及凋亡等生长作用影响。方法:构建重组质粒pIRES2-EGFP/BGN,转染胃癌细胞株SGC-7901,获得胃癌稳转细胞株SGC-7901/BGN。通过细胞增殖实验(CCK-8法)、平板克隆实验、流式细胞技术,分别检察BGN过表达对SGC-7901细胞增殖、克隆形成、周期及凋亡的影响。结果:SGC-7901/BGN组胃癌细胞较SGC-7901/空载组生长明显抑制(P<0.01),细胞培养板形成的克隆数明显减少[(209.7±12.6)比(326.0±15.1)];同时过表达BGN可促进胃癌细胞的凋亡[(10.7±1.5)%比(5.3±1.1)%],且将细胞周期阻止在G1期[(55.7±2.1)%比(37.6±1.8)%]。结论:胃癌细胞过表达BGN可抑制胃癌细胞的增殖、克隆形成。BGN可能通过将细胞周期阻滞在G1期、诱导细胞凋亡,从而发挥其生长抑制的生物学效应。     

组织因子基因siRNA对胃癌侵袭力的影响

目的：探讨应用RNA 干扰技术抑制胃癌细胞组织因子(TF) 基因表达对胃癌侵袭能力的影响。 方法：构建pSUPER /TF-siRNA重组载体, 并将其转染入胃癌细胞SGC-7901中;RT-PCR和Western blot检测转染前后TF的表达水平;应用Boyden小室检测对胃癌细胞的侵袭能力。 结果：双酶切鉴定重组载体构建成功。RT-PCR和Western blot检测显示pSUPER /TF-siRNA1重组载体明显抑制SGC-7901细胞TF基因的表达(P<0.05)。Boyden小室体外侵袭实验证实, 转染pSUPER/TF-siRNA1 质粒的SGC-7901穿膜细胞均数较其他无干扰组的细胞均数明显减少(P<0.05)。 结论：以TF 基因作为靶点应用RNA 干扰技术抑制其表达可降低胃癌细胞体外侵袭移能力, 故其有望成为胃癌治疗的一个新靶点。     

FasL、B7-1联合基因修饰的胃癌细胞诱导抗胃癌主动免疫的研究

目的 探讨FasL、B7-1联合基因转移是否具有协同的抗肿瘤效应。方法 采用重组腺病毒载体将FasL、B7-1基因导入人胃癌细胞SGC-7901,G418阳性克隆筛选,流式细胞分析,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),显示FasL和B7-1的表达,并且通过Hoechst33342染色检测胃癌细胞凋亡;将携带 FasL和 B7-1基因的胃癌细胞(命名为 SGC-7901/FB-11)接种于 C57BL/6小鼠背部皮下,观测其致瘤性能;SGC-7901/FB-11致敏的小鼠对野生型瘤细胞是否具有免疫保护作用;用SGC-7901和 SGC-7901/FB-11细胞分别经腹腔免疫小鼠,得到腹腔浸润淋巴细胞及致敏脾细胞,MTT法检测其体外杀伤实验。结果 FasL和B7-1基因在胃癌细胞中获得高表达并可诱导胃癌细胞的凋亡,双基因转染的胃癌细胞的致瘤性明显下降;SGC-7901/FB-11诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对SGC-7901的杀伤活性显著高于野生型SGC-7901诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活性(P<0.05);SGC-7901/FB-11诱导的 CTL对 SGC-7901/FB-11的杀伤率显著高于对野生型 SGC-7901的杀伤率(P<0.05)。结论 FasL促进胃癌细胞凋亡,B7-1促进抗胃癌CTL的增殖、活化,在效应阶段两基因发挥着重要的协同作用。     

LncRNA RP5-919F19在胃癌组织中的表达及其与胃癌侵袭转移的相关性

目的研究长非编码RNA(long non-coding RNA, Lnc RNA)RP5-919F19在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移的相关性。方法收集临沂市中心医院2020年1月到2022年1月手术取下的非肿瘤胃黏膜(距癌组织3 cm以上)和胃腺癌组织。应用TRIzol试剂盒提取细胞和组织总RNA, 应用反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA, 应用实时定量PCR试剂盒进行定量分析。应用SGC-7901和AGS人胃癌细胞, 构建RP5-919F19敲减和过表达模型, 应用CCK-8实验确认细胞增殖能力, 应用Transwell侵袭实验确认胃癌细胞的侵袭能力。结果对79例胃癌组织和癌旁正常组织中RP5-919F19表达检测, 发现RP5-919F19在胃癌组织中的相对表达量为1.51±0.05, 明显高于癌旁正常组织的0.82±0.04(P<0.05)。对不同病理情况患者的RP5-919F19水平进行对比分析, 分析结果显示患者不同TNM分期、是否出现远处转移、淋巴结转移和不同浸润深度患者的RP5-919F19表达差异存在统计学意义(P<0.05), 不同肿瘤大小、年龄和性...     

过表达癌胚抗原相关黏附分子6抑制胃癌细胞的凋亡与失巢凋亡

目的:探讨过表达癌胚抗原相关黏附分子6(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6,CEACAM6)对胃癌细胞凋亡与失巢凋亡的影响。方法:构建CEACAM6真核过表达载体转染胃癌细胞SGC-7901和MKN-45,使其CEACAM6过表达,qRT-PCR、Western印迹验证过表达效果,免疫荧光定位CEACAM6;流式细胞仪检测过表达CEACAM6后胃癌细胞凋亡的变化,失巢凋亡检测其失巢凋亡的变化。结果:转染CEACAM6后,胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的CEACAM6分别过表达了30 000倍和4 000倍;在胃癌细胞SGC-7901中凋亡与失巢凋亡分别下降了46.2%和53.8%,在MKN-45中凋亡与失巢凋亡分别下降了71.7%和74.6%。结论:过表达CEACAM6抑制胃癌细胞的凋亡和失巢凋亡,CEACAM6通过抑制胃癌细胞凋亡和失巢凋亡的途径参与胃癌细胞的恶性生长过程。     

碳酸酐酶Ⅸ在直肠癌中的表达及其与血管内皮生长因子和肝转移关系

目的 检测缺氧标记物碳酸酐酶Ⅸ(CA-Ⅸ)在128例直肠癌不同部位组织中的表达,探讨它与直肠癌肝转移及与血管内皮生长因子(VEGF)的关系,了解其对直肠癌细胞体外生长能力的影响.方法 以CA-Ⅸ和VEGF为研究对象,应用蛋白免疫印迹方法检测两者在正常直肠组织,直肠腺瘤,直肠癌患者原发癌灶、系膜组织、肝转移组织中的差异性表达,判断它们作为直肠癌和直肠癌转移相关因子的意义.观察CA广谱抑制剂乙酰唑胺对体外直肠癌细胞生长能力的影响.结果有肝转移的直肠癌患者原发灶中VEGF和CA-Ⅸ阳性率均为83.3%,高于正常直肠组织(16.7%和0%)、直肠腺瘤(16.7%和36.7%)和无肝转移直肠原发癌灶(72.1%和65.4%)(P<0.01),肝转移直肠癌患者系膜组织中VEGF和CA-Ⅸ阳性率也高于无肝转移患者,但差异无统计学意义(P>0.05),VEGF与CA-Ⅸ表达和肝转移发生无明显相关.乙酰唑胺能提高不同浓度5-氟尿嘧啶(5-Fu)体外对直肠癌细胞的杀伤能力(P<0.05).结论 CA-Ⅸ在直肠癌组织中高表达,对直肠癌细胞生长增殖有促进作用,但不宜作为诊断肝转移的独立因子.     

胃癌中微小RNA表达谱及miR-429表达水平的研究

目的 检测胃癌组织及胃癌细胞中微小RNA (miRNA)表达谱,并测定胃癌组织及胃癌细胞中miR-429的表达水平.方法 采用基因芯片技术检测胃癌组织、癌旁正常胃组织标本及胃癌细胞株( SGC-7901)、正常人胃上皮细胞(GES-1)中miRNAs的表达.挑选基因芯片结果中胃癌组织表达显著下调的miR-429,并采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测7例正常胃组织、52例胃癌组织、胃癌细胞SGC-7901、GES-1中miR-429的表达.结果 基因芯片结果表明,胃癌组织中有23个miRNA上调,如miR-21、miR-30b等,31个下调如miR-429、miR-200等.qRT-PCR检测显示,miR-429在胃癌组织中下降约63.4％ (P＜0.01),在胃癌细胞株SGC7901中下降约76.2％(P＜0.01).结论 miR-429在胃癌组织中表达显著下调,可能作为胃癌特异性miRNA,在胃癌的发生发展过程中有重要作用.     

Fbxw7过表达促进mTOR降解并抑制胃癌细胞迁移的研究

目的探究Fbxw7过表达对胃癌细胞SGC-7901迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法在胃癌细胞SGC-7901中转染pcDNA3.1-Fbxw7,然后利用实时荧光定量PCR检测Fbxw7 mRNA的表达,通过transwell法检测细胞迁移和侵袭,通过蛋白质免疫印迹检测mTOR的表达。结果与对照组细胞比较,转染了pcDNA3.1-Fbxw7后,SGC-7901细胞中Fbxw7 mRNA的表达水平明显升高,细胞迁移和侵袭能力下降,并且mTOR的表达水平也明显变低。结论过表达Fbxw7能够抑制胃癌细胞的侵袭和迁移,并且能促进mTOR的降解,提示Fbxw7可能通过对mTOR信号通路的调控影响胃癌细胞的转移能力。     

抑制HO-1基因表达对人胃癌细胞系SGC-7901的影响

目的：通过构建shRNA沉默HO-1基因,研究抑制HO-1基因表达对胃癌细胞系SGC-7901的影响。方法：构建靶向HO-1基因的shRNA干扰质粒转染人胃癌细胞系SGC-7901,荧光共聚焦显微镜下观察转染效率;应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、细胞免疫化学法分别在基因、蛋白质水平检测HO-1基因的抑制效果;应用MTT法检测HO-1基因沉默后胃癌细胞的生长情况。结果：与对照组比较,shRNA在基因、蛋白质水平特异地抑制了胃癌细胞SGC-7901中HO-1的表达,抑制率分别为62.4%、67.6%;HO-1的表达被抑制后,胃癌细胞SGC-7901生长受抑制（P〈0.05）。结论：shRNA-HO-1可有效抑制胃癌细胞中HO-1的表达;HO-1的沉默表达可抑制肿瘤细胞生长。     

胃癌肝转移31例外科治疗体会

目的 探讨胃癌肝转移的外科治疗效果.方法 对我院1997年10月～2006年10月收治的原发性胃癌338例中伴肝转移的31例的临床资料进行回顾性分析.对其中施行同时性胃癌肝转移灶切除术(切除组)的19例和仅行胃癌根治术而未行肝转移灶切除术(未切除组)的12例的术后生存时间进行对比.结果 全组除1例术后死于肝功能衰竭外,其余30例均获得随访.胃癌肝转移灶切除术后1年、3年和5年生存率分别为83.3%、44.4%和33.3%;未切除组术后1年生存率为50.0%,3年及5年生存率为0.两组术后生存时间有显著性差异(P＜0.05).切除组病例中有68.4%在肿瘤和周围肝组织间形成纤维假膜.结论 假包膜形成是有利的预后因素.对于胃癌肝转移病人,特别是有假包膜形成者采用外科治疗预后更好.     

4-1 BBL在不同分化胃癌细胞株上的表达

目的 观察共刺激分子4-1 BBL在人胃高分化腺癌细胞株MKN-28、人胃中分化腺癌细胞株SGC-7901、人胃低分化腺癌细胞株BGC-823、人胃黏液腺癌细胞株MGC-803上的表达.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学法检测以上4种胃癌细胞株4-1 BBL mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测人淋巴细胞对不同胃癌细胞的体外杀伤活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测人淋巴细胞与不同胃癌细胞共培养上清液中自细胞介素(IL)-2、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量.结果 RT-PCR结果示4-1 BBL mRNA表达从高到低依次为MKN-28(46.63%)、SGC-7901(37.13%)、BGC.823(20.43%)、MGC-803(14.14%).免疫细胞化学结果示4-1 BBL着色程度由深到浅依次为MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803.MTT结果示不同时段不同效靶比下人淋巴细胞对胃癌细胞的体外杀伤活性由高到低为MKN-28、SGC-7901、BGC-23、MGC-803.ELISA结果示不同效靶比下人淋巴细胞与胃癌细胞共培养48 h上清液中IL-2、TNF-α的含量由高到低为MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803.而IL-10的含量由高到低为MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-28.结论 人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803中4-1 BBL基因在蛋白和mRNA水平均有表达,且胃癌细胞株的分化程度越高4-1BBL表达水平越高.淋巴细胞对高表达4-1 BBL胃癌细胞株的杀伤力较高,而且4-1 BBL可能通过促进细胞因子TNF-α、IL-2和细胞抑制因子IL-10的产生调节肿瘤免疫.     

人胃癌细胞原位移植裸鼠原发灶与肝转移灶体外化疗药敏性差异

目的：比较人胃癌原位移植裸鼠肝转移模型原发灶、肝转移灶肿瘤细胞对化疗药物敏感性。 方法：将裸鼠皮下传代的SGC-7901细胞株实体瘤组织块移植于裸鼠胃壁,建立人胃癌裸鼠原位移植模型,待其发生肝转移后取胃原发灶、肝转移灶肿瘤细胞,SRB法检测肿瘤细胞对氟尿嘧啶（5-FU）,顺铂（CDDP）,奥沙利铂（L-OHP）,表阿霉素（eADM）,丝裂霉素（MMC）,长春新碱（VCR）,氨甲喋呤（MTX）7种化疗药物的体外敏感性。 结果：成功建立裸鼠原位移植胃癌转移模型,肿瘤原位移植成瘤率100%,肝转移率75%;7种药物中L-OHP,VCR对原发灶肿瘤细胞的抑制率高于肝转移灶,而eADM,MMC对肝转移灶肿瘤细胞的抑制率高于原发灶（均P<0.05）;5-FU,L-OHP,MTX对原发灶与肝转移灶的抑制率具正相关性（r=0.5203;0.4424;0.3851,均P<0.05）。 结论：胃癌原位移植动物的原发灶和肝转移灶细胞的对化疗药物药敏性存在差异,以原发灶药敏检测结果指导针对肝转移灶的治疗可能是不准确的。     

胃癌肝转移肝切除的预后分析

目的分析胃癌肝转移后实施肝切除患者的预后因素。方法对1996~2003年间实施肝切除的45例胃癌肝转移患者的临床资料进行回顾性研究,分析临床病理学指标与患者生存期之间的关系。结果45例接受肝切除的患者有2例死于术后严重并发症。获得随访的39例患者的1,3,5年的总体生存率分别为54%,32%和21%。中位生存时间为29.5月,6例患者存活时间超过5年。胃周淋巴结转移、侵袭深度、辅助化疗、肝脏转移灶数目以及胃癌患者的组织学分级均与患者生存期之间存在不同程度的相关。但年龄、性别、肝脏转移灶的最大直径以及是否进行肝脏介入治疗与患者的生存期之间未见相关性。结论无腹腔淋巴结广泛转移的胃癌肝转移后实施肝切除术可以延长患者的生存期。