大鼠神经垂体催产素能神经元内神经分泌颗粒的免疫电镜观察

目的　观察大鼠神经垂体催产素（ＯＴ）能神经元轴突及终末内颗粒囊泡形态学及免疫细胞化学特点。方法　应用电镜包埋后免疫细胞化学方法,对大鼠神经垂体进行ＯＴ免疫染色。结果　在ＯＴ能神经元轴突终末内,可见ＯＴ免疫反应性的致密核芯大颗粒囊泡和无ＯＴ免疫反应性的清亮小泡存在。部分囊泡与轴膜靠近,并可见颗粒囊泡与轴膜融合形成的胞吐现象;在轴突非终末部分,也可见ＯＴ免疫反应性的颗粒囊泡,散在分布轴浆内,还可见无ＯＴ免疫反应性的颗粒囊泡,呈散在或聚集分布,两种囊泡均可位于微管之间。结论　位于轴突和轴突终末内的囊泡,在形态学和ＯＴ免疫染色方面有明显差异,推测它们在功能上也有不同。     

5-羟色胺与免疫系统的关系及其在免疫相关疾病中的作用

5-羟色胺(5-HT)是一种由色氨酸衍生而来的自体活性物质,主要作为神经递质影响神经系统的功能。近年来研究发现,5-HT通过结合表达在免疫细胞上的受体,调节免疫细胞功能,在机体神经免疫调节网络中发挥重要作用。本文主要综述了5-HT在免疫细胞中的合成和储存,对固有免疫应答、适应性免疫应答的影响以及与免疫相关疾病的关系。     

大鼠中缝大核内5-羟色胺样P物质样和亮氨酸脑啡肽样突触结构的免疫电镜观察

用免疫电镜法在大鼠中缝大核内观察到:(1) 5-羟色胺(5-HT)样阳性轴突终末与阴性胞体、阳性和阴性树突以及阴性轴突终末,分别形成轴-体突触、轴-树突触和轴-轴突触;阴性轴突终末与阳性胞体和阳性树突分别形成轴-体和轴-树突触;(2) P物质样(SP样)和亮氨酸脑啡肽(L-Enk)样阳性轴突终末与阳性和阴性的胞体和树突,以及阴性轴突终末与阳性胞体和树突分别形成轴-体突触和轴-树突触,L-Enk样阳性轴突终末之间形成轴-轴突触;(3) 上述5-HT、SP和L-Enk样结构所形成的突触中,阴性轴突终末与阳性树突所形成的轴-树突触最多见;(4) 上述阳性轴突终末内主要含透明圆形小泡。免疫反应产物为电子密度高的物质,主要沉积于膜性细胞器的表面、透明圆形小泡和部分颗粒囊泡内和小泡膜上。     

大鼠神经垂体内后叶加压素神经分泌末梢的GABA能神经支配的免疫电镜证实

为了探讨神经垂体内后叶加压素（ＶＰ）释放的γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）能神经调控，本研究用包埋前ＡＢＣ法结合免疫电镜双标技术，研究了大鼠神经垂体内ＶＰ能神经和ＧＡＢＡ能神经的超微结构分布及其相互联系。先用ＤＡＢ法显示ＧＡＢＡ免疫反应，然后用钼酸铵－ＴＭＢ法显示ＶＰ免疫反应，再用ＤＡＢ－氯化钴稳定后作免疫电镜包埋。电镜观察发现：在神经垂体内ＧＡＢＡ样免疫反应产物呈电子密度高的颗粒状沉淀，定位于神经末梢内的小清亮羹泡周围和线粒体膜上；ＶＰ样免疫反应产物呈电子密度高的不规则形块状或针状散在于神经分泌末梢内。ＧＡＢＡ样神经末梢分布于神经分泌末梢之间或紧贴毛细血管和垂体细胞，可与神经分泌末梢紧密接触甚至形成突触。ＶＰ样神经分泌末梢内含小透亮囊泡和大颗粒囊泡，并可与ＧＡＢＡ样轴突末梢形成突触。在这种情况下，ＧＡＢＡ样轴突为突触前成分，突触前、后膜呈对称性，突触间隙宽度小于２０ｎｍ，内含电子致密物质。以上结果证实，在大鼠神经垂体内ＶＰ释放受到ＧＡＢＡ神经的直接突触调控。     

脊髓背角5-羟色胺纤维的来源和超微结构分布——HRP与免疫细胞化学结合法研究和免疫电镜观察

本文用HRP与免疫细胞化学结合法研究和免疫电镜观察进一步证实了脊髓背角内5-羟色胺(5-HT)能末梢的来源及其超微结构特征。结果表明:脊髓背角内5-HT能轴突末梢主要来自延髓中缝大核及腹侧网状结构。脊髓背角内5-HT免疫反应阳性结构见于Ⅰ层及Ⅱ层外带,为细的无髓纤维和有髓纤维。标记末梢与未标记末梢之间主要形成轴-轴突触(标记末梢可为突触前成分,也可是突触后成分),偶尔可见轴-树突触,未见非突触释放的形态学图象。根据其超微结构特征,我们推测脊髓背角内5-HT能系统不是以弥散的非突触方式影响有关结构,而是以突触方式直接或间接影响背角中间神经元的兴奋性,和直接抑制一级传入冲动而发挥其镇痛作用。     

垂体生长激素细胞腺瘤的电镜及免疫电镜观察

24 cases of growth hormone(GH)-producing pituitary adenomas were studied with electron microscopy and immunoelectron microscopy by protein A-gold complex, 6 cases were identified as densely granulated GH adenoma and 15 cases as sparsely granulated GH adenoma, among which 4 cases were proved by immunoelectron microscopy to be containing granules with prolactin(PRL) activity simultaneously. Intracytoplasmic fibrous bodies were often seen in the sparsely granulated cells anyhow, not all those cells with fibrous bodies possess the secretory granules with GH activity, and fibrous bodies were also detected in some PRL cells of certain mixed type adenoma. This suggests that fibrous bodies might not be the specific morphological feature of pituitary growth hormone cell adenomas.     

大鼠腮腺的5-羟色胺免疫组织化学

目的：观察大鼠腮腺内5-HT的分布。方法：免疫组织化学ABC法。结果：大鼠腮腺各级导管的上皮细胞、毛细血管及小血管的内皮细胞均呈5-HT免疫反应阳性。免疫反应物分布于胞质，胞核为阴性反应。结论：大鼠腮腺各级导管上皮细胞内含有5-HT，其存在对腮腺的功能可能有一定调节作用。     

垂体ACTH细胞腺瘤的免疫电镜研究

5 cases of pituitary adenomas associated with Cushing's disease or Nelson's syndrome were studied with electron microscopy and immunoelectron microscopy by using protein A--gold complex. Diversified ultrastructure was displayed in these tumors, among which 4 revealed presence of ACTH positive secretory granules. These granules were round or polyhedric in shape, varied in number, size and electronic density. Bundles of microfilaments could be seen in the tumor cells frequently, which were of the highest diagnostic value. There was no significant difference found in ultrastructure and immunocytochemical reaction of adenomas in Cushing's disease and Nelson's syndrome.     

肺神经内分泌癌的免疫组化与免疫电镜研究

本文应用免疫组化与免疫电镜技术对20例肺神经内分泌癌进行了研究,另6例非神经内分泌癌作为对照。结果表明:嗜铬颗粒蛋白A免疫组化染色19/20例阳性,免疫电镜能够比较特异地标记神经分泌颗粒,具有确诊意义;神经特异性烯醇化酶染色20/20例阳性,非神经内分泌癌3/6例阳性,免疫电镜下无特异性分布,适宜作为诊断的筛选指标;S-100蛋白和5-HT亦可作为诊断之参考。     

大鼠心肌细胞心钠素的免疫电镜定位研究

心钠素是一种由心脏分泌的激素,具有利钠、利尿等多种重要的生理功能。本文应用先进的免疫金技术,在电镜水平上对心钠素在大鼠心肌细胞中的定位和分布进行了探讨。观察结果表明,心钠素分泌颗粒呈圆形,有单位膜包绕,直径约在200-500nm之间,分布于心房肌细胞的肌浆内,尤以核旁最为多见。其次,在肌原纤维间及肌膜下亦可见到。大鼠心钠素与α-人心钠素有完全交叉反应。本文观察结果为今后利用大鼠作为动物模型,深入开展心钠素的研究提供了参考材料。     

大鼠下丘脑第三脑室周催产素样神经元与脑脊液关系的电镜研究

本研究用高浓度戊二醛灌注固定、包埋前ABC免疫酶染色方法,显示了大鼠下丘脑第三脑室周与脑脊液密切相关的室管膜内及室管膜下OT-LI神经元丛。结果发现:在室旁核后大细胞亚核水平,第三脑室腔的顶及底部常有一些OT-LI轴突终末突入第三脑室腔,与脑脊液相接触,其纤维来源不明;透射电镜下见:这些OT-LI轴突终末附于室管膜细胞之上或夹行于微绒毛之间,常与第三脑室室管膜形成一种类似突触的连接,绝大多数OT-LI轴突终末内含有大量线粒体,其轴突包膜均呈节段性增厚。在视前区至室间孔水平的第三脑室底部,可见到OT-LI神经元胞体突入室管膜细胞间,似部分与脑脊液直接接触,透射电镜下见此类OT-LI神经细胞仅隔一层极薄的室管膜细胞浆与脑脊液相接触。在第三脑室侧壁室管膜下常有较密集的室管膜下神经元树突丛,透射电镜下常见到紧贴室管膜下走行的OT-LI树突,而且往往有轴突与之形成轴-树突触。上述结果提示,室管膜下的OT-LI神经元及树突可能既接受脑脊液中各种信息物质的调控又受到一些传入神经轴突终末的突触性传入控制而实施其分泌活动;突入脑室腔的OT-LI辅突可能是脑脊液中OT的产生途径之一。     

正中隆起内NT能神经元的SP能神经支配的免疫电镜双标研究

应用包埋前免疫电镜PAP双标技术,对大鼠下丘脑正中隆起内的神经紧张素(neurotensin,NT)和P物质(substance P,SP)的分布进行了超微结构研究。先用DAB法显示SP免疫反应,然后用钼酸-TMB法显示NT免疫反应,再经DAB-氯化钴稳定后作免疫电镜包埋。电镜观察发现:在正中隆起内SP免疫反应呈电子密度高的颗粒状或絮状沉淀,广泛分布于轴突内的小清亮囊泡周围和基质内;NT免疫反应产物则为电子密度高的针状或块状,散在分布于胞体、树突和轴突内。含SP的轴突可接受免疫反应阴性轴突的传入性突触,也可与阴性树突形成传出性轴-树突触;含NT的树突和胞体均可接受阴性轴突的传入性突触。此外,SP阳性轴突末梢还可与NT阳性神经元的树突棘形成对称性轴-棘突触及与NT阳性轴突形成对称性轴-轴突触。实验结果表明:大鼠正中隆起内的NT能神经元接受SP能神经的支配,为下丘脑神经内分泌的突触调控提供了新的超微结构依据。     

大鼠脊髓背角的GABA能神经末梢来源及其突触联系──HRP追踪与免疫细胞化学结合法研究及免疫电镜观察

本文用ＨＲＰ追踪与免疫细胞化学结合法和免疫电镜技术研究了脊髓背角的ＧＡＢＡ神经元的分布、ＧＡＢＡ能末梢的来源及其超微结构联系。结果表明：在脊髓背角Ⅰ～Ⅵ层内均有ＧＡＢＡ神经元胞体和纤维分布，其中Ⅰ～Ⅲ层较为密集，在后外侧束内也存在ＧＡＢＡ能纤维及胞体。脊髓背角的ＧＡＢＡ能神经末梢有３个来源：①延髓的大缝核、隐缝核、苍白缝核及腹侧网状结构的ＧＡＢＡ能神经元；②脊髓固有的ＧＡＢＡ能神经元；③脊神经节的ＧＡＢＡ能神经元。ＧＡＢＡ能末梢可作为突触前成分或突触后成分与未标记末梢形成轴－树突触，也可同时作为突触前、后成分而形成轴－树型自调节突触。结果提示突触前的ＧＡＢＡ能末梢可能对脊髓背角内的其它神经元起抑制和脱抑制作用；同时背角内ＧＡＢＡ能神经元还接受其它神经元的调控。     

大鼠弓状核内神经紧张素能和P物质能阳性结构的免疫电镜双标记研究

用包埋前免疫电镜双标记技术研究大鼠下丘脑内的神经紧张素(NT)和P物质(SP)分布的超微结构。证实在弓状核内存在NT样和SP样免疫反应阳性的胞体、树突和轴突。NT样和SP样免疫反应阳性的树突和轴突均可接受免疫反应阴性结构的非对称性传入突触。SP样免疫反应阳性轴突终末除可与免疫反应阴性的树突和胞体形成对称性传出突触外, 还可与NT样免疫反应阳性胞体形成对称性轴-体突触。本研究首次直接证实大鼠弓状核内的NT能神经元接受SP能神经的支配。     

大鼠脊髓后角内甲啡肽标记及非标记结构与C纤维间关系的免疫电镜研究

向大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素导致一级传入纤维中的Ｃ纤维变性后，用免疫电镜技术在大鼠脊髓后角浅层内观察到：（１）大量含甲啡肽的轴突终末与未标记树突（或棘）形成对称性（少数为非对称性）突触；（２）含甲啡肽的轴突终未与变性终末共同会聚于同一甲啡肽阴性树突；（３）少量含甲啡肽轴突终末与变性终末间形成轴－轴突触或接触；（４）变性终末与含甲啡肽的树突形成非对称性轴－树突触；（５）甲啡肽阴性轴突终末与变性终末会聚于同一未标记树突并与变性终末间形成轴－轴突触或接触．以上结果表明，在脊髓后角内，脑啡肽除主要以突触后抑制方式调节Ｃ纤维传入外，也可通过轴－轴突触或接触对Ｃ纤维传入进行突触前抑制；非甲啡肽能神经元也能对Ｃ纤维传入进行突出后又突触前抑制．此外，Ｃ纤维在脊髓后角内可通过兴奋性轴－树突触直接影响甲啡肽能中间神经元的活性．     

神经垂体内儿茶酚胺能神经与肽能神经相互关系的电镜研究

为了探明神经垂体内神经激素释放的调节机制,本文采用免疫组织化学和化学损毁相结合的方法,在电镜水平分别显示神经垂体内的后叶加压素(VP)能神经和儿茶酚胺(CA)能神经,观察它们的分布和相互关系。结果发现:大鼠神经垂体内不仅有广泛的VP神经终末分布,而且存在着因6-OHDA损毁所致溃变的CA能神经终末。CA能神经终末与垂体细胞和小胶质细胞之间存在着密切关系,甚至可建立突触样连接。CA能终扣与VP能终扣可建立轴-轴突触。在这种情况下,含CA的神经终末为突触前成分,含VP的神经终末为突触后成分。上述结果为神经垂体内神经激素释放的调节机制首次提供了超微结构证据。     

IMMUNOELECTRON MICROSCOPIC STUDY OF THYROID MICROSOMAL ANTIGEN

Using human IgG F(ab')₂ prepared from pooled sera containing a high titer of thyroid microsomal antibody (TMAb), localization of thyroid microsomal antigen (TMAg) was studied electron microscopically in dissociated follicular cells obtained from 25 thyroids of patients with Basedow's disease. Twenty out of the 25 cases were positive for serum-TMAb. In 18 of these cases, the reaction product for spontaneous membrane-bound IgG was demonstrated only on the apical plasma membrane of a small number of follicular cells, but was not observed anywhere in 5 cases without serum-TMAb. After masking the spontaneous membrane-bound IgG with anti-human IgG-goat IgG Fab, deposits of the reaction product disappeared or were significantly decreased. After the masking, all cases incubated in the above-mentioned TMAb-positive IgG F(ab')₂ showed an intense reaction product located linearly on the apical plasma membrane of a large number of follicular cells, but not on the lateral and basal plasma membrane and in the cytoplasm. On the other hand, after the masking, the control group incubated in human IgG F(ab')₂ from a normal subject revealed the same result as that in the group with masked spontaneous membrane-bound IgG. These findings indicate that TMAg is located only on the apical plasma membrane of follicular cells. ACTA PATHOL JPN 38 : 1141 -1148, 1988.