缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏中内质网应激及炎症反应的抑制作用

【摘要】 目的 探讨内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）及相关炎症反应在糖尿病大鼠肾脏损害中的作用及血管紧张素II受体拮抗剂缬沙坦对其的影响。 方法 采用腹腔注射链脲佐菌素方法建立糖尿病肾病大鼠模型。将大鼠随机分为对照组（Con组）、糖尿病组（DM组）、缬沙坦组（DM V组）。缬沙坦组每日灌胃给予缬沙坦（10mg/kg）共6周。应用免疫组化法及Western blot方法检测ERS相关蛋白P-IRE1α、P-JNK及中性粒细胞趋化因子MCP-1的表达及定位，实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测IRE1α、JNK及MCP-1mRNA表达变化。同时观察各组大鼠尿蛋白、BUN、Scr等指标的变化。 结果 与Con组相比，DM组大鼠肾脏病理炎症细胞浸润加重，P-IRE1α、IRE1α、P-JNK、MCP-1蛋白表达上调，IRE1αmRNA、MCP-1mRNA表达水平上调;与DM组相比，DM V组肾脏病理炎症细胞浸润减轻，P-IRE1α、IRE1α、P-JNK、MCP-1蛋白表达下调，IRE1αmRNA、MCP-1mRNA表达水平下调。3组间JNKmRNA及蛋白表达无明显差异。 结论 糖尿病大鼠肾脏中存在内质网应激和炎症反应的激活，缬沙坦可能部分通过抑制内质网应激中的IRE1/JNK/MCP-1通路，减少炎症反应，从而发挥肾脏保护作用。     

芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠心脏IP3Rs/GRP75/VDAC1基因调控的机制研究

目的：探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠线粒体Ca²⁺转运相关基因的调控作用。方法：采用冠状动脉左前降支结扎术建立心肌梗死大鼠模型。术后随机将动物分到模型组、芪苈强心组和卡托普利组；同时设有假手术组作为对照。治疗四周后，通过心脏大体结构观察大鼠心脏梗死范围，HE染色观察大鼠心肌组织病理形态变化；实时荧光(Real-Time)PCR检测大鼠心脏梗死边缘区线粒体Ca²⁺转运相关基因三磷酸肌醇受体2(IP3R2)，葡萄糖调节蛋白75(GRP75)，电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)，线粒体融合蛋白2(Mfn2)，以及线粒体凋亡相关基因B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA表达变化；Western blot检测心肌组织Bcl-2,Bax蛋白表达变化；TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡率。结果：与假手术组相比，模型组大鼠心脏左室前壁呈现大面积梗死区域，心肌组织结构紊乱；线粒体Ca2+转运相关基因IP3R2,GRP75,VDAC1,Mfn2mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)；线粒体凋亡相关分子...     

DMT1在人胎盘绒毛膜癌细胞中表达的实验研究

目的进一步确定二价金属离子转运体1（DMT1）在人胎盘绒毛膜癌细胞（BeWo）中的表达定位,以及缺铁状态下mRNA的表达变化。方法采用免疫细胞化学技术观察DMT1在BeWo细胞中的表达定位,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测DMT1在BeWo细胞缺铁状态下mRNA的表达变化。结果DMT1在BeWo细胞中呈阳性表达,其弥漫性表达定位于细胞质和细胞膜上;DMT1+IRE mRNA 和DMT1-IRE mRNA 的相对表达量随缺铁干预浓度和时间的增加而上调。DMT1+IRE mRNA 的相对表达量高于DMT1-IRE mRNA。结论DMT1 大量表达在BeWo 细胞质和细胞膜上,且表达受机体不同铁水平的调节,说明其在胎盘铁转运过程中发挥重要作用,为进一步探讨胎盘铁转运分子机制提供实验基础。     

光照应激对SD大鼠小肠促性腺激素释放激素受体表达的影响

目的:机体遭受各种创伤应激后,常出现各种胃肠道症状,并且已有研究表明大鼠的消化系统广泛分布有促性腺激素释放激素(GnRH)受体免疫反应阳性细胞.文中观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜GnRH受体的分布和表达变化. 方法:建立SD大鼠光照应激模型,24h持续光照,分为短期光照应激(2、3、4、7 d)和长期光照应激(14、21、28d),分别取应激组和相应对照组的小肠组织,采用免疫组化和Western blot技术分析GnRH受体在各时间段大鼠小肠组织中的分布和表达变化. 结果:Western blot结果显示:与对照组相比,持续光照2、3、4、7d后,实验组大鼠小肠GnRH受体表达无明显变化;持续光照14d和21 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体的相对表达量分别约升高了56.5%和59.9%,具有显著性差异(P<0.05);持续光照28 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体的相对表达量约升高了27.8%.但无显著性差异(P>0.05).免疫组织化学显示,GnRH受体在大鼠小肠中的分布未见明显改变,但长期应激后期实验组(14、21、28 d)GnRH受体免疫组化显色较深,说明GnRH受体表达升高,这与Western blot的结果基本一致. 结论:GnRH受体随着光照应激时间的延长,在大鼠小肠中表达量发生改变.提示在光照应激中,GnRH对消化功能具有潜在的生理调节功能.     

缺氧对HCT116肠癌细胞成纤维细胞生长因子21的调节作用

目的观察缺氧模拟物二氯化钴(CoCl_2)对人源HCT116肠癌细胞成纤维细胞生长因子21(FGF21)表达的影响。方法分别用0、50、100和200μmol/L的CoCl_2处理HCT116细胞24 h,同时用200μmol/L的CoCl_2处理HCT116细胞12、48 h,RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中的FGF21 m RNA和蛋白的表达水平;分别用缺氧诱导因子抑制剂2ME2和YC-1,同时加入CoCl_2处理HCT116肠癌细胞24 h,RT-PCR法检测细胞中的FGF21 mRNA;用抗氧化剂NAC和CoCl_2同时处理HCT116肠癌细胞24 h,RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中的FGF21 mRNA和蛋白的表达量。结果随CoCl_2浓度增加和作用时间延长,HCT116细胞FGF21 m RNA相对表达量逐渐降低(P0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,CoCl_2组FGF21蛋白表达水平显著下降(P0.05)。缺氧诱导因子抑制剂处理后,HCT116细胞FGF21 m RNA相对表达量依然降低(P0.05)。抗氧化剂处理后,HCT116细胞FGF21 mRNA和蛋白相对表达量未出现明显降低(P0.05)。结论 CoCl_2对HCT116肠癌细胞FGF21的表达有抑制作用,该作用与缺氧诱导因子无关,而与氧化应激有关。     

血小板源性生长因子诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的信号转导途径研究

①目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径在血小板源性生长因子(PDGF)刺激大鼠心脏成纤维细胞胶原合成中的作用。②方法分离培养新生大鼠心脏成纤维细胞。免疫细胞化学法、Western blot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化。③结果与对照组相比,在PDGF刺激下,大鼠心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达增加,PD98059 25μmol/L预孵育1小时能够抑制PDGF的刺激作用。④结论PDGF能够通过ERK1/2途径调节大鼠心脏成纤维细胞的胶原合成。     

重组变形链球菌V+蛋白的表达和纯化

目的：探讨变形链球菌表面蛋白可变区（V＋）基因在大肠杆菌中高效诱导表达及其表达产物的进一步纯化。方法：将V＋基因以C端融合6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。His6融合表达产物经金属离子（Ni^2 )融体亲和层析分离纯化，SDS－PAGE电泳和Western blot印迹分析表达产物。结果：SDS－PAGE分析确定有与His6融合表达产物（His6-rV )理论相对分子质量一致的诱导表达条带，其表达量占全菌蛋白的20％左右，表达产物以可溶形式存在。进一步纯化目的蛋白，纯度可达90％。Western blot实验表明表达产物具有良好的抗原性。结论：His6融合表达载体可以高效地表达和纯化重组V＋蛋白。     

心脏缺血再灌注损伤后一氧化氮合酶的变化

目的:研究大鼠心脏缺血再灌注损伤(IRI)过程中一氧化氮合酶(NOS)的变化规律及其作用.方法:制作SD大鼠心脏IRI动物模型,用同位素法测定正常及IRI心组织的NOS活性;用Western印迹和逆转录PCR法分析eNOS和iNOS在IRI过程中蛋白和基因表达的变化.结果:心脏eNOS活性、蛋白和mRNA表达水平,在缺血再灌注2～6 h后均增高,3天后降低,21天后逐渐恢复到正常水平.心脏iNOS活性、蛋白和mRNA表达水平,在缺血再灌注12 h后开始表达,3天达高峰,然后逐渐降至正常水平.结论:单纯缺血并不引起NOS活性的明显变化,再灌注损伤使NOS的mRNA表达增加,酶的合成增多,活性增高.     

牛蒡子对糖尿病大鼠肾组织基质细胞衍生因子1表达的影响

目的:研究牛蒡子对糖尿病大鼠肾脏基质细胞衍生因子1(SDF-1)表达的影响。方法:建立糖尿病大鼠模型,利用荧光实时定量PCR和Western blot检测经牛蒡子治疗后糖尿病大鼠肾脏组织中SDF-1mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:荧光实时定量PCR结果显示糖尿病大鼠组肾脏组织中SDF-1mRNA(1.499±0.03)明显较正常大鼠组(1.231±0.02)升高,而牛蒡子治疗组大鼠肾脏SDF-1的mRNA(1.27±0.01)较糖尿病大鼠组明显降低,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示牛蒡子治疗组大鼠肾脏中SDF-1蛋白的相对表达量为0.93±0.22,明显低于糖尿病模型组1.60±0.21(P<0.05),与正常组大鼠肾脏表达量接近(0.80±0.13)。结论:牛蒡子能够下调糖尿病大鼠肾脏组织中SDF-1的表达。     

缺血再灌注对大鼠细胞黏附分子和单核细胞趋化蛋白-1表达的影响及硫酸镁的作用

目的：探讨缺血再灌注(I—R)对血小板P—选择素(Ps)、白细胞CDllb及心肌组织单核细胞趋化蛋白—1(MCP—1)基因表达的影响及硫酸镁对I—R损伤的保护作用。方法：建立在体大鼠I—R模型，然后把大鼠随机分成3组：假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I—R组)、硫酸镁组(Mg^2 组)。用流式细胞仪及逆转录聚合酶联反应(RT—PCR)分别测定I—R组大鼠术前、再灌注(R)5、30、60、180、360min血小板Ps和白细胞CDllb表达及心肌组织MCP—l mRNA表达。结果：I—R组血小板Ps表达在R5开始上升，在R60达高峰(P＜0．01)；白细胞CD11b表达显著增高(P＜0．0l及P＜0．05)；心肌组织MCP—l mRNA在R60开始上升，至R360达高峰(P＜0．01)；血清Ca^2 浓度均显著增高(P＜0．0l及P＜0．05)。Mg^2 组血小板Ps、MCP—l mRNA的表达及血清Ca^2 浓度均降低，但对白细胞CDllb的表达无影响。结论：I—R促进大鼠细胞黏附分子、趋化因子的表达；硫酸镁可能通过抑制血小板Ps及心肌组织MCP—l mRNA的表达，降低血清Ca^2 浓度，从而起到心脏保护作用。     

Influence of Iron Supplementation on DMT1 (IRE)-induced Transport of Lead by Brain Barrier Systems in vivo

Objective To investigate the potential involvement of DMT1 (IRE) protein in the brain vascular system in vivo during Pb exposure.
Methods Three groups of male Sprague-Dawley rats were exposed to Pb in drinking water, among which two groups were concurrently administered by oral gavage once every other day as the low and high Fe treatment group, respectively, for 6 weeks. At the same time, the group only supplied with high Fe was also set as a reference. The animals were decapitated, then brain capillary-rich fraction was isolate from cerebral cortex. Western blot method was used to identify protein expression, and RT-PCR to detect the change of the mRNA.
Results Pb exposure significantly increased Pb concentrations in cerebral cortex. Low Fe dose significantly reduced the cortex Pb levels, However, high Fe dose increased the cortex Pb levels. Interestingly, changes of DMT1 (IRE) protein in brain capillary-rich fraction were highly related to the Pb level, but those of DMT1 (IRE) mRNA were not significantly different. Moreover, the consistent changes in the levels of p-ERK1/2 or IRP1 with the changes in the levels of DMT1 (IRE).
Conclusion These results suggest that Pb is transported into the brain through DMT1 (IRE), and the ERK MAPK pathway is involved in DMT1 (IRE)-mediated transport regulation in brain vascular system in vivo.     

The effects of sex on brain iron status in rats

Objective:Iron plays essential roles in the human body.Studies have shown that iron is distributed differently in male and female Rats in liver,spleen,bone marrow,kidney,heart.However,the effects of sex on iron distribution in central nervous system are not well established.Methods:To explore the effects of the above mentioned,in this study,female and male Sprague Dawley rats were used at 4 months of age.The synthesis of ferritin light chain(FTL),transferrin receptor1(TfR1),ferroportin 1(FPN1),divalent metal transporter 1(DMT1)in the cortex,hippocampus,striatum,cerebellum,and olfactory bulb was determined by Western blot analysis.Results:The results showed that the levels of FTL protein in the cortex,hippocampus,striatum,cerebellum,and olfactory bulb were higher in female rats than in male rats,but the levels of TfR1 protein were lower in female rats than in male rats.There was no significant change in FPN1 and DMT1 expression in brain.Conclusions:These data suggest that sex have effects on brain iron status.Iron is distributed differently in central nervous system in male and female rats.However,the precise mechanisms need further study.     

电针“委中”穴对腰多裂肌损伤大鼠铁代谢的调节

目的观察多时间点大鼠多裂肌损伤后铁代谢相关蛋白的变化规律,探讨不同干预时间条件下电针"委中"穴对多裂肌损伤性腰痛的治疗作用。方法 SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、电针组,每组30只,各组再分为1 d、2 d、3 d、5 d、7 d 5个亚组,每个亚组6只。采用注射0.5%布比卡因(bupivacaine, BPVC)的方法造模,电针组电针双侧"委中"穴(1次/d),正常组、模型组不进行电针干预。分别于治疗的1 d、2 d、3 d、5 d、7 d取材。采用HE染色观察造模前后多裂肌形态变化;采用生化法检测多裂肌组织总铁含量变化;采用Western blot法检测铁蛋白重链(ferritin heavy chain1, FTH1)含量;采用Real-time PCR法检测多裂肌膜蛋白转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1, Tfr1)、二价金属转运蛋白1(divalent metal transporter 1, DMT1)mRNA的表达。结果 HE染色结果显示,模型组相较于正常组可见肌纤维断裂、坏死并伴有炎性细胞浸润;与同时间点模型组相比,电针组受损肌纤维可见明显改善。生化法检测结果显示,与同时间点正常组相比,模型组、电针组总铁含量升高(P<0.01);Western blot、Real-time PCR检测结果提示模型组FTH1蛋白表达低于正常组(P<0.05或P<0.01),而Tfr1与DMT1 mRNA表达均高于正常组(P<0.05或P<0.01);与同时间点模型组相比,电针1 d、2 d、3 d、5 d组FTH1蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01),而电针2 d、3 d、5 d、7 d组Tfr1 m RNA和电针1 d、2 d、3 d、5 d组DMT1 mRNA表达均降低(P<0.05或P<0.01);各模型组间比较发现,模型2 d组FTH1蛋白表达最低(P<0.05),而模型2 d、3 d组Tfr1 mRNA表达较高(P<0.05),模型3 d组DMT1 mRNA表达最高(P<0.05);各电针组比较结果显示,FTH1蛋白在电针2 d组最高(P<0.05),电针3 d、5 d、7 d组Tfr1 mRNA表达较低(P<0.05),电针3 d组DMT1 mRNA表达较高(P<0.05)。结论在BPVC致多裂肌损伤模型中,局部受损多裂肌发生铁代谢紊乱,且在急性损伤期较典型。电针"委中"穴能促进损伤多裂肌的修复,其机制可能与调节多裂肌铁代谢、减轻组织过氧化损伤相关,并且在电针持续干预3 d后显著促进对铁代谢紊乱水平的调节。     

IRE1-XBP1通路调控肝巨噬细胞极性的机制研究

目的：分离、培养 LEWIS 大鼠肝脏肝巨噬细胞（KCs），观察肌醇酶1-X 盒连接蛋白1（IRE1-XBP1）通路活性改变对KCs 功能的调控的作用机制。方法（1）采取Ⅳ型胶原酶消化肝脏联合非连续梯度离心法分离 Lewis 大鼠 KCs ；（2）鉴定后的KCs 分为4组：XBP1沉默组（XBP1-shRNA 组）、错义序列沉默对照组（Ctrl-shRNA 组）；Adv-XBP1过表达组（AdV-XBP1组）、错义序列过表达对照组（Ctrl-AdV 组）；（3）实时荧光定量 PCR（RT-PCR）检测各组 KCs 中 XBP1、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17转录水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 JAK1、JAK2、STAT1及 STAT3的蛋白表达水平；（4）流式细胞术（FCM ）及激光共聚焦检测各组 KCs 表型的变化情况；（5）分离大鼠脾脏淋巴细胞，尼龙毛柱过滤纯化 T 细胞，与上述各组 KCs 共培养，Brdu 渗入法检测T 细胞增殖情况；（6） Annexin V ／PI 法 FCM 观察 T 淋巴细胞凋亡情况；（7）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测上清液中 IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17及 IL-10水平。结果（1）RT-PCR 结果显示，XBP1-shRNA 组中 XBP1的表达量较对照组显著降低，而在 Adv-XBP1组则明显上调（P＜0．05）；（2）FCM 发现，XBP1-shRNA 组中 M HC-Ⅱ、CD86、CD40的表达明显低于对照组，而 CD204和CD206的表达则显著高于对照组；而在 Adv-XBP1组，则呈相反趋势；（3）Western blot 检测发现 XBP1-shRNA 组中 JAK1、JAK2、STAT1和 STAT3的蛋白表达及其磷酸化水平均受到抑制，而在 Adv-XBP1组则上述蛋白的表达及磷酸化水平得到显著增强；（4）Brdu 发现抑制 KCs 中 IRE1-XBP1活性后 T 细胞增殖受到明显抑制，凋亡增加，促炎细胞因子分泌减少，抗炎细胞因子分泌增加（P＜0．05），而上调 KCs 中 IRE1-XBP1活性后 T 细胞增殖则明显增强，凋亡明显减少，促炎细胞因子分泌增加，抗炎细胞因子分泌减少（P＜0．05）。结论 KCs 中 IRE1-XBP1通路活性变化可以转化 KCs 的极性状态，并通过调节 JAK-STAT 家族成员表达，调控 KCs 自分泌细胞因子的组成成分；KCs 中 IRE1-XBP1通路活性变化可以影响共培养初始 T 淋巴细胞的增殖分化、凋亡及相关细胞因子的分泌。     

淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病转基因模型小鼠大脑皮质DM T1表达的影响

目的：探讨淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默症（AD）APPswe／PS1ΔE9双转基因小鼠模型大脑皮质二价金属离子转运蛋白1（DM T1）表达的影响。方法将APPswe／PS1ΔE9双转基因小鼠60只,分为模型组、淫羊藿组、黄芪组、葛根组、复方组、去铁胺（DFO ）组,C57BL／6J小鼠作为健康对照组。用药结束后,取各组小鼠脑组织,分别采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR（RT‐PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠大脑皮质DMT1的表达情况。结果免疫组织化学结果显示：阴性对照未见DM T1阳性细胞。与健康对照组相比,模型组DM T1的表达增高;与模型组相比,复方组和DFO组DM T1的表达降低（P＜0．05）;DFO组与复方组DM T1的表达无明显差异。RT‐PCR结果、Western blot结果与免疫组织化学结果相一致。结论淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以下调AD模型小鼠大脑皮质DM T1的表达,从而抑制小鼠脑铁超载,缓解铁超载带来的中枢神经系统功能衰退。     

低剂量辐射诱导小鼠睾丸细胞中IRE1α和XBP1 mRNA及其蛋白的表达

目的：检测小鼠睾丸细胞中肌醇需求酶1α（IRE1α）和X盒结合蛋白1（XBP1）mRNA和蛋白的表达,探讨IRE1-XBP1通路激活在低剂量辐射（LDR）诱导小鼠睾丸细胞内质网应激中的作用。方法：50只健康雄性ICR小鼠,随机分为10组,经75 mGy X射线全身照射后不同时间（0、3、6、12和24h）及不同剂量（0、50、75、100和200 mGy）X射线照射后12 h处死,分别采用实时定量PCR法和Western blotting法检测小鼠睾丸细胞中IRE1α、Total-XBP1（T-XBP1）和Spliced-XBP1（S-XBP1）mRNA表达水平及蛋白表达强度。结果：75 mGy X射线照射后0~24 h,小鼠睾丸细胞中IRE1α、T-XBP1和S-XBP1 mRNA（除了3 h时T-XBP1和S-XBP1 mRNA）表达水平均随时间延长而升高,并在6 h时达到峰值,而后逐渐降低;与0 h组比较,6、12和24 h组IRE1α mRNA、6和12 h组T-XBP1 mRNA及S-XBP1 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）。与0 h组比较,不同时间组IRE1α和S-XBP1蛋白表达强度升高,6和12 h组IRE1α蛋白表达强度升高最明显,24 h组S-XBP1蛋白表达强度升高最明显,而T-XBP1蛋白表达强度稍有降低。0~200 mGy照射后12 h,小鼠睾丸细胞中IRE1α、T-XBP1和S-XBP1 mRNA表达水平升高,75 mGyX射线照射后升高达峰值后逐渐降低,甚至降至0 mGy以下;与0 mGy组比较,75和200 mGy组小鼠睾丸细胞中IRE1α、75 mGy组小鼠睾丸细胞中T-XBP1和S-XBP1mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。与0 mGy组比较,75 mGy组IRE1α和S-XBP1蛋白表达强度升高,75和200 mGy组小鼠睾丸细胞中S-XBP1蛋白表达强度升高最明显,而T-XBP1蛋白表达强度无明显变化。结论：LDR可诱导小鼠睾丸细胞中IRE1α和S-XBP1 mRNA表达水平和蛋白表达强度增加,从而激活内质网应激中的IRE1-XBP1信号通路。     

依布硒林减轻DMT1诱导的铁死亡在实验性大鼠蛛网膜下腔出血中的研究

目的 观察大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后二价金属离子转运体(divalent metal transportor 1,DMT1)的表达变化及铁死亡情况,探讨依布硒林可能通过抑制DMT1的表达减轻铁死亡,从而对SAH后早期脑损伤起保护作用.方法 血管内穿刺法构建SD大鼠SAH模型,免疫荧光检测脑皮质中DMT1、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)表达定位,Western blot检测脑皮质中SAH后72 h内各时间点及侧脑室注射依布硒林后DMT1、GPX4的表达变化,检测细胞内铁沉积情况、铁含量、脂质过氧化物产物丙二醛(malonaldehyde,MDA)等铁死亡指标,以及大鼠脑水肿和神经功能学评分变化.结果 免疫荧光检测结果显示DMT1、GPX4表达于大鼠脑皮质神经元胞质内.Western blot检测结果显示,与假手术组相比,DMT1表达先升高,24 h降低后再次升高,48、72 h仍增高(P＜0.01);而SAH后GPX4的表达降低,24 h显著降低(P＜0.01),随后48、72 h继续降低(P＜0.01).与SAH组、溶剂组相比,依布硒林2 mg/kg组中DMT1降低(P＜0.01);依布硒林4 mg/kg干预后DMT1表达降低显著(P＜0.01),GPX4表达增高显著(P＜0.01).与SAH组、溶剂组相比,依布硒林4 mg/kg组中细胞内铁沉积减少,铁含量、MDA减少(P＜0.01);GSH含量、GPX4活性增加(P＜0.01).神经功能学评分、脑水肿得到改善(P＜0.01).结论 依布硒林可能通过抑制DMT1的表达减少铁向胞内转运继而减轻铁死亡,从而对SAH后早期脑损伤起保护作用.     

心肌肥大相关蛋白YAP在大鼠糖尿病心肌病中的表达

目的:观察Hippo信号通路效应蛋白YAP在糖尿病大鼠心肌肥大中的改变,分析可能的作用机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为2组,每组6只。正常对照组:大鼠正常饮水饮食喂养12周;糖尿病心肌病组:大鼠腹腔注射STZ（55 mg/kg）复制糖尿病模型,以血糖≥ 16.7 mmo1/L,持续1周确定造模成功,继续饲养12周。测定大鼠空腹血糖水平和体质量;心室内插管检测左心室动力学变化,称量心脏质量计算心体比;荧光定量PCR检测心肌肥大相关基因心房钠尿肽和脑利钠肽mRNA表达,Western blot法检测YAP和p-YAP蛋白表达改变。结果:与正常对照组相比,糖尿病组大鼠心体比增加,左心室舒张末压增高,左心室发展压、左心室内压最大上升和下降速率及左心室做功均降低;心肌肥大相关基因心房钠尿肽和脑利钠肽mRNA表达增加;YAP蛋白表达增加,p-YAP/YAP比值降低（P<0.05~P<0.01）。结论:糖尿病可诱导心肌肥大,其机制可能与增加Hippo信号通路效应蛋白YAP的表达,降低其磷酸化水平有关。