氧化苦参碱对HepG2.2.15细胞蛋白酪氨酸激酶活性的影响

目的:探讨氧化苦参碱抗乙肝病毒复制的作用机制。方法:采用HepG2.2.15细胞体外培养,以拉米夫定为对照药物,用ELISA方法检测细胞内总蛋白酪氨酸激酶活性,观察氧化苦参碱对细胞内蛋白酪氨酸激酶活性影响。结果:氧化苦参碱体外对HepG2.2.15细胞内总蛋白酪氨酸激酶抑制率为19.93%;而拉米夫定对蛋白酪氨酸激酶活性抑制率更高,达49.30%。结论:氧化苦参碱具有一定的抑制蛋白酪氨酸激酶活性作用,可能是其抗乙肝病毒复制的作用机制之一。     

左归丸对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2,Bax表达的影响

目的 观察左归丸干预皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响.方法 1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞.实验分为正常对照组,模型组,左归组.Annexin V-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡情况;Real time PCR和Western印迹法检测Bcl-2、Bax的表达变化.结果 胸腺细胞经皮质酮处理后,胸腺细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bcl-2 mRNA表达显著降低;Bax表达显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.01).与模型组比较,左归组胸腺细胞凋亡率降低(P<0.01);Bax mRNA表达降低,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05).结论 左归丸鼠血清能通过调节bcl-2/bax比率的异常变化,抑制胸腺细胞过度凋亡.     

左归丸含药血清对阿尔茨海默病细胞模型雌激素受体表达的影响

目的 左归丸含药血清对阿尔茨海默病(AD)细胞模型对雌激素受体表达的影响.方法 体外培养PC12细胞,以Aβ1～42诱导细胞产生蛋白聚集制作AD细胞模型.MTT法检测不同状态下的细胞的存活情况.Western印迹检测细胞Caspase3、ER1表达情况.结果 与模型组对比,3个干预组均可改善AD细胞模型细胞的损伤;左归...     

左归丸对同种异性骨髓移植小鼠肝组织Wnt信号通路的影响

目的：探讨左归丸对同种异性骨髓移植小鼠肝组织wnt信号通路的影响。方法：建立同种异性骨髓移植小鼠模型,随机分为补肾组和对照组,每组40只,分别给予左归丸汤剂和生理盐水灌胃,给药6个月后处死小鼠,取小鼠肝组织,采用基因芯片技术检测同种异性骨髓移植小鼠肝组织基因表达谱,采用WesternBlot检测β-catenin蛋白表达。结果：补肾组相对于对照组小鼠肝组织Wnt信号通路中上调表达的基因有Wntl、分泌型Frz相关蛋白（secreted frizzled—related sequence protein,sfrp）1、sfrp5,下调表达的基因有Gsk3b、Wnt10a、Rac1、Mapk9、Prkcc、Frat1、Nfatc4、Csnk2b、Ppard等。补肾组比对照组小鼠肝组织中β—catenin蛋白表达明显增强。结论：左归丸可通过激活Wnt信号通路经典途径,游离β-catenin蛋白积累并进入细胞核激活下游靶基因,这可能是“补肾生髓成肝”调控肝再生的重要分子机制之一。     

左归丸对痴呆鼠抗氧化作用及尼氏体的影响

目的 探讨左归丸对痴呆大鼠抗氧化作用及尼氏体的影响.方法 将84只Wistar雄性大鼠随机分成6组:A组腹腔注射生理盐水再脑内海马注射生理盐水,B、C、D、E、F组以D-半乳糖腹腔注射合并B淀粉样蛋白1-40注射海马制备老年性痴呆(AD)动物模型,C、D、E、F组同时分别灌胃抗脑衰胶囊、哈伯因和左归丸[5.4和2.7g/(kg·d)].采用生化法检测各组大鼠脑匀浆过氧化氢酶(CAT)、单胺氧化酶(MAO),尼氏染色观察各组大鼠海马神经元尼氏体及电镜观察各组超微结构变化.结果 灌服后左归丸组均能明显提高AD大鼠脑组织CAT活性、抑制MAO活性(P＜0.05);左归丸治疗组尼氏体溶解明显减少;F组神经纤维结构完好,尼氏体丰富,突触结构尚可.结论 左归丸通过提高抗氧化能力和改善神经元细胞损害对AD大鼠有一定的防治作用.     

左归丸粗提取物对骨髓干细胞转化肝细胞的影响

目的 观察左归丸及其拆方的粗提取物对骨髓干细胞转化肝细胞的影响,为进一步探索左归丸的有效成分奠定实验基础.方法 利用透过性支持物(聚酯TranswellR透明嵌套)建立骨髓干细胞-肝组织细胞共培养体系,采用水煮醇沉方法提取制备左归丸及其拆方粗提取物加入共培养体系.骨髓干细胞与肝细胞共培养7、14、21、28、35d时分别取透过性支持物中的骨髓干细胞爬片用PAS法检测糖原,免疫细胞化学方法(ICC法)检测肝细胞标志物(AFP、CK18、Alb).结果 左归丸及其拆方粗提取物浓度高于1.56 mg/ml时,影响骨髓干细胞的存活,而浓度等于1.56 mg/ml时,共培养条件下骨髓干细胞的糖原、AFP、Alb、CK18的表达量,平行对照各组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 骨髓干细胞对培养条件比较苛刻,一般的中药租提制剂不适于骨髓干细胞-肝细胞共培养体系的实验.     

玄参中苯丙素苷对大鼠肝损伤细胞凋亡的影响

目的:观察玄参中苯丙素苷对大鼠肝损伤细胞凋亡的影响.方法:采用D-氨基半乳糖(D-Gal)造成大鼠急性肝损伤模型,观察玄参中苯丙素苷对此模型肝细胞凋亡及相关基因表达的影响.结果:玄参中苯丙素苷明显抑制模型肝细胞凋亡,上调bcl-2蛋白表达,下调Fas/FasL的表达.结论:玄参中苯丙素苷抗肝损伤细胞凋亡可能与其调控肝细胞凋亡相关基因有关.     

左归丸对去卵巢大鼠股骨中Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察左归丸对去卵巢骨质疏松(OP)模型大鼠股骨中Ⅰ型胶原mRNA表达的影响,探讨左归丸对OP的防治作用机制。方法SPF级4.5月龄SD雌性大鼠,分为三组:正常组39只;假手术组39只;200只采取双侧背部卵巢切除术进行绝经后OP造模。造模21 d后,将去卵巢大鼠随机分为5组:模型组、尼尔雌醇组、左归丸高剂量组、左归丸中剂量组、左归丸低剂量组,每组40只。然后开始灌胃给药,左归丸高、中、低剂量组分别给予ig6.4,3.2,1.6 g/kg剂量的左归丸混悬液灌胃;尼尔雌醇组灌服尼尔雌醇混悬液灌胃;正常组、假手术组和模型组均灌服蒸馏水。于连续给药60、120、180 d后分3批取材,取大鼠左后肢股骨近端1/3部分,采用RT-PCR方法检测骨组织中Ⅰ型胶原mRNA的表达水平。结果去卵巢后,与正常组比较,模型组大鼠股骨中Ⅰ型胶原mRNA水平明显降低(P<0.01);和模型组比较,给药60d、120、180 d的左归丸各剂量组,股骨中Ⅰ型胶原mRNA水平显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论骨组织中Ⅰ型胶原的mRNA表达水平的下调可能是绝经后骨质疏松(PMOP)发生的重要机制之一,左归丸能够上调骨组织中Ⅰ型胶原的mRNA表达,从而有效防治OP。     

商陆抗病毒蛋白体外对HepG2.2.15细胞HBV复制的影响

目的　探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedantiviralprotein ,PAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的活性。方法　以不同浓度的PAP S作用于培养的HepG2 .2 .15细胞 ,采用ELISA、荧光定量PCR法分别检测细胞上清液中的HBsAg、HBeAg及HBVDNA水平的变化 ,并用MTT比色法检测细胞成活率。结果　随着PAP S浓度的增加 ,对HBsAg、HBVDNA的抑制作用亦逐渐增强 ,不同药物剂量组之间差异十分显著 (P <0 .0 1)。PAP S处理后 96h ,PAP S对HBsAg和HBeAg的半数抑制浓度 (ID50 )分别为 6.9μg/ml和 3 .2 μg/ml ,半数中毒浓度 (CD50 )为 2 9.3 μg/ml,治疗指数 (TI) =ID50 /CD50 分别为 4.3和9.3。MTT试验结果显示 ,药物的细胞毒性也呈剂量依赖型 ,倒置显微镜下观察在 5 0 μg/ml～ 10 0 μg/ml剂量组出现部分细胞脱壁和死亡现象。结论　PAP S在体外有直接的抗HBV作用。。     

左归丸、右归丸对肾虚质大鼠海马MEK表达的影响

目的 观察补肾药物对肾虚质大鼠海马MEK表达的调控,探讨其对大鼠记忆学习能力的影响。方法 将40只SD子代鼠按雌雄1∶1比例随机分成空白对照组、肾虚质模型组、左归丸组和右归丸组,运用总蛋白提取,BCA蛋白定量、酶联免疫吸附法测定MEK浓度对比4组子代鼠海马组织内MEK蛋白表达差异,探究肾虚质子代鼠学习记忆能力与MEK间的关系。结果 与空白对照组比较,肾虚质模型组MEK蛋白含量降低(P<0.01),与肾虚质模型组相比,左归丸组、右归丸组MEK蛋白含量升高(P<0.05),左归丸组和右归丸组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 肾虚质大鼠海马MEK蛋白表达下降,左归丸、右归丸可以上调其异常表达,补肾药物可以通过上调中枢神经系统中的MEK表达改善肾虚质导致的学习记忆能力减退。     

左归丸促进骨髓形成肝细胞的研究

目的:观察补肾(左归丸)对小鼠骨髓形成肝细胞的影响,揭示"肾生骨髓,髓生肝"的科学内涵.方法:采用交叉性别骨髓移植模型,雌性BALB/c小鼠随机分为补肾组(左归丸)、补气血组(八珍汤)和对照组(生理盐水),接受9.0Gy60Co源γ射线照射后,经尾静脉注射输入同种系雄性小鼠骨髓细胞,骨髓移植后分别给予7g/(kg?d)左归丸、八珍汤、生理盐水灌胃,给药2、4、6mo处死动物,取肝组织标本.通过荧光原位杂交检测肝组织切片雄性性别决定基因Sry与白蛋白mRNA双阳性细胞(雄性骨髓来源的肝细胞),计算各组骨髓转化为肝细胞的阳性细胞率(%).结果:补肾组、补气血组和对照组的阳性细胞率均随着骨髓移植时间的延长而增加,移植后6mo时间点骨髓转化为肝细胞的阳性细胞率(18.25±3.36)与2、4mo时间点(4.00±1.73,4.80±1.30)相比显著升高(P<0.01).同一时间点不同组小鼠骨髓转化为肝细胞的阳性细胞率有显著差异,骨髓移植后2mo时补肾组阳性细胞率(4.00±1.73)高于补气血组(1.20±0.45)和对照组(1.00±0.61)(P<0.01),移植后4mo时补肾组阳性细胞率(4.80±1.30)高于补气血组(1.40±0.55)(P<0.01),移植后6mo时补肾组阳性细胞率(18.25±3.36)高于补气血组(7.20±1.33)和对照组(9.25±1.31)(P<0.01).结论:补肾(左归丸)能够促进骨髓形成肝细胞.补肾促进骨髓形成肝细胞的作用机制可能在于调节全身机能和改善肝脏微环境,有利于骨髓细胞移行至肝脏并转化为肝细胞.     

抗纤软肝颗粒对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒(KXRG)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响。方法:传代培养的HSC-T6(肝星状细胞系)与KXRG(1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml)及其药物血清(5%、10%、20%)共同培养72小时后,应用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪测定HSC细胞周期各时相的DNA含量。结果:KXRG及药物血清均能显著抑制HSC的增殖,使细胞周期阻滞于S期,且2.5mg/ml药物和10%药物血清作用最强(P0.01)。结论:KXRG通过抑制HSC的活化,阻滞其细胞周期的正常进行,进而抑制HSC增殖,从而起到抗肝纤维化的作用。     

季德胜蛇药含药血清对人肝癌细胞Hep-G2增殖和凋亡的影响

目的:探讨季德胜蛇药含药血清对人肝癌细胞Hep-G2增殖和凋亡的影响。方法:采用Hep-G2作为细胞模型。以季德胜蛇药给中国大耳白兔灌胃制备含药血清,以不同浓度的含药兔血清培养Hep-G2,并同时设相应浓度的正常兔血清对照组。应用CCK-8(Cell counting kit-8)法检测Hep-G2增殖状况,应用膜联蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术检测Hep-G2的凋亡情况。结果:12.5%和15%的含药血清作用于细胞12小时和24小时后,对Hep-G2的增殖均有抑制作用(P<0.05),10%和12.5%的药物血清组作用于Hep-G2细胞12小时后,细胞凋亡率均明显高于相应的正常对照组(P<0.01),12.5%含药血清组的凋亡率明显高于10%的含药血清组(P<0.01)。结论:季德胜蛇药血清可抑制Hep-G2细胞增殖,诱导其凋亡。     

HePG2.2.15细胞株中乙型肝炎病毒基因异质性的研究

目的以乙型肝炎病毒(HBV)前C/C基因异质性来探讨在HepG2.2.15细胞体内是否存在HBV准种。方法依据Genebank中HBVayw亚型全基因序列,选择保守区域设计出特异性多聚酶链反应引物,自HepG2.2.15细胞培养上清中扩增HBV前C/C基因序列,克隆入pGEM-TEasy载体,挑选15个克隆测序以比较病毒的变异程度。结果测序结果发现HepG2.2.15细胞HBV前C/C基因存在异质性,碱基序列之间的同源性大于93%,突变类型全部为碱基替换。结论结果提示,长期培养HepG2.2.15细胞内有HBV准种共存,这种细胞模型内HBV异质性现象可能影响其在基因治疗等方面的应用。     

复方银杏叶胶囊对大鼠肝损伤的防护作用

目的：观察复方银杏叶胶囊（CGB）的保肝作用。方法：采用大鼠免疫性肝损伤模型，比较CGB与银杏叶提取物（GB）对大鼠肝脏功能保护作用。结果：CGB高、中刺量组大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBil），与模型组比较，差异均有显著性意义（P〈0．05或P〈0．01）；GB组大鼠血清ALT、ALP、TBil与模型组比较，差异均有显著性意义（P〈0．05或P〈0．01），但AST与模型组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：CGB与GB均有改善免疫性肝损伤大鼠肝功能效应，但CGB作用优于CB。     

清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)的增殖与凋亡以及清肝活血方的调节作用。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分为空白对照组、模型对照组以及清肝活血方高、中、低剂量组,采用复合因素制备酒精性肝纤维化动物模型。观察清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠肝功能、病理、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)以及HSC增殖与凋亡的影响。结果:清肝活血方各剂量组能显著降低酒精性肝纤维化大鼠血清ALT、AST水平(P<0.05);清肝活血方高剂量组能显著降低血清γ-GT水平(P<0.05);各药物组均能在不同程度上减轻肝脏炎症和纤维化,减少肝组织α-SMA的表达(P<0.05),抑制HSC增殖并提高HSC的凋亡率。结论:清肝活血方能有效改善酒精性肝纤维化大鼠肝功能,减轻纤维化程度。其作用机制可能是通过抑制HSC的增殖并促进活化HSC凋亡实现的。     

氧化苦参碱对慢性HBV携带者外周血树突状细胞及细胞因子的影响

目的：研究氧化苦参碱对慢性乙型肝炎病毒（ HBV ）携带者外周血树突状细胞及细胞因子的影响。方法：分离60例慢性HBV携带者外周血单核细胞后在诱导培养树突状细胞过程中治疗组加入氧化苦参碱,对照组不加,每组各30例,然后提取两组成熟的树突状细胞,计数后采用双标记流式细胞分析技术检测其活性,再用表位多肽刺激后,和自体淋巴细胞共育,分别检测IL-2和IFN-γ（ Th1分泌）及IL-4和IL-10（ Th2分泌）。结果：治疗组其树突状细胞数目增多,共刺激分子CD1a、 CD80、 CD86明显高于对照组（P＜0.05）。与自体淋巴细胞共育后产生的IL-2、 IFN-γ明显高于对照组（P＜0.05）; IL-4、 IL-10与对照组差异无显著性意义（P＞0.05）。结论：氧化苦参碱可增多、增强HBV携带者外周血树突状细胞的活性,当其与自体淋巴细胞共育时,可增强Th1类细胞因子的表达,对Th2类细胞因子无明显影响。     

膈下逐瘀汤加减方对人肝癌细胞bax、bcl-2、P53基因表达调控的影响

目的：探讨膈下逐瘀汤加减方（GXZY）时人肝癌细胞bax、bcl-2、P53基因表达调控的影响。方法：制备5组试验血清：不合药物血清（无药血清组），阳性对照药物复方斑蝥胶囊含药血清（阳性血清组）和GXZY低、中、高浓度含药血清（5％血清组、10％血清组、15％血清组）。检测各组药物血清及对照血清对sMMC-7721细胞增殖、细胞周期、肝癌相关基因（bax、bcl-2、P53）表达的影响。结果：GXZY各血清组与阳性血清组抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖、调控癌基因与抑癌基因、促进癌细胞凋亡均具有显著统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），其中GXZY高浓度血清组的作用优于阳性血清组。结论：膈下逐瘀汤加减方能够抑制人肝癌细胞增殖，促进细胞凋亡。     

转基因肝星状细胞株对肝细胞生长的支持作用

目的 探讨转基因肝星状细胞株CFSC／HGF对大鼠肝细胞生长的支持作用。方法将大鼠原代肝细胞培养于稳定表达肝细胞生长因子(HGF)的肝星状细胞株CFSC／HGF所构建的饲养层上,连续动态观察肝细胞的形态、超微结构、白蛋白分泌、尿素合成以及吲哚氰绿摄取排泌功能的变化,同时与传统胶原贴壁培养的肝细胞进行比较,并通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HGF受体c-Met表达的变化。结果共培养的肝细胞体外培养至7～10d时细胞增殖、白蛋白分泌及尿素合成达到峰值,以后逐渐下降,至35d时仍保持一定的存活和功能。与传统胶原上培养的肝细胞相比,其寿命、形态和功能的维持时间明显延长;RT-PCR结果显示,与CFSC／HGF饲养层细胞共培养1周后,肝细胞表面c-Met表达上调2．23倍。结论转基因肝星状细胞株CFSC／HGF对肝细胞较长时间内保持高活性、高密度的生长有显著的支持作用,CFSC／HGF诱导的肝细胞表面c-Met表达上调可能参与了该支持作用。