猪苓多糖,乙型肝炎疫苗和卡介苗对外周血单个核细胞免疫活性…

猪苓多糖联合乙型肝炎疫苗和潘生丁联合卡介苗用于治疗慢性乙型肝炎，经观察认为它们在抑制乙型肝炎病毒复制方面有较好的疗效；但其作用机理不清。本实验试图通过观察上述药物对正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）免疫杀伤活性的影响，探索其发挥作用的机理。结果表明：猪苓多糖和卡介苗体外可增强正常人ＰＢＭＣ中免疫细胞的杀伤活性，提高ＰＢＭＣ细胞上白细胞介素－２受体的表达并促进其分泌白细胞介素－２。因此认为上述作用是     

乙型肝炎病毒感染对外周血单个核细胞分泌功能的影响

目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)感染后外周血单个核细胞(PBMC)分泌功能的动态变化,为病毒免疫实验提供参考。方法:分离健康人PBMC,分为空白对照组和病毒干预组。空白对照组PBMC正常培养,病毒干预组PBMC加入HepG 2.2.15培养上清液中浓缩的HBV共培养。分别在培养4 h、8 h、12 h、24 h、36 h、48 h后收集培养上清液进行细胞因子(CK)检测。观察细胞因子随时间变化曲线,分析病毒刺激对PBMC分泌功能的影响。结果:病毒干预后IL-2的含量随时间变化呈上升趋势,其余各因子含量随时间变化呈先上升后下降趋势,IL-4、IL-17A、IFN-γ、TNF-ɑ分泌高峰在8 h, IL-6分泌高峰在36 h, IL-10分泌高峰在24 h;空白对照组PBMC中IL-4、IFN-γ各时间点含量高于病毒干预组(P<0.05),IL-6、TNF-ɑ各时间点含量低于病毒干预组(P<0.05);IL-2、IL-10、IL-17A、含量除个别时间点均低于病毒干预组(P<0.05)。结论:病毒刺激后各细胞因子的分泌高峰不同,可根据各自分泌特点选择恰当的研究时间点;HB...     

不同浓度甲氨蝶呤对外周血单个核细胞表达和分泌白细胞介素-17的影响

目的 体外观察不同浓度的甲氨蝶呤(MTX)对外周血单个核细胞(PBMCs)表达和分泌白细胞介素(IL)-17的影响,探究MTX有效治疗类风湿关节炎(RA)的可能机制.方法 分离RA患者和健康人PBMCs,予不同浓度MTX预处理,抗人CD3和抗人CD28刺激后,37 ℃体积分数为0.05的CO2培养箱培养.分别于培养的不同阶段收集细胞或上清液,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析IL-17mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中IL-17的浓度;荧光抗体标记细胞表面抗原CD4和胞内蛋白 IL-17,流式细胞仪分析CD4+IL-17+细胞的比例.结果 比较采用两两配对t检验或独立样本t检验.结果 浓度为0.1、1.0、5.0、25.0μg/ml MTX组IL-17mRNA/GAPDH比值分别为(0.58±0.09、0.48±0.11、0.50±0.09、0.51±0.14),与无药抗体组(0.76±0.08)组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.01);IL-17分泌水平则分别为(121±54)、(104±45)、(90±36)、(115±41)pg/ml,与无药抗体组(370±187)pg/ml组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.01);MTX处理组CD4+IL-17+细胞比例的平均值下降,但统计学检验差异无统计学意义(P＜0.05).结论 MTX可以有效抑制PBMCs合成和分泌IL-17,而且在一定的剂量下可发挥显著作用,加大剂量并不能增强该作用.     

重组酵母乙型肝炎疫苗和DNA疫苗交互免疫研究

目的 为更有效地激发对乙型肝炎表面抗原体液免疫和细胞免疫反应,更有效地防治乙型肝炎。方法 以重组酵母乙型肝炎疫苗和HBs-DNA疫苗作为初次免疫,再分别以DNA疫苗和重组酵母乙型肝炎疫苗交互加强免疫,于加强免疫后2周以ELISA检测抗-HBs,乳酸脱氢酶法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。 结果 先用重组酵母乙型肝炎疫苗免疫,再用HBs-DNA疫苗加强时抗体A值为0.38,效靶比为100:1时,CTL值为36％;先用HBs-DNA疫苗免疫,再用重组酵母乙肝疫苗免疫时抗体A值为0.32,CTL值为27％。两次重组酵母乙型肝炎疫苗免疫后的抗体A值为0.48,CTL反应值为1.5％;两次HBs-DNA疫苗免疫后A值为0.24,CTL反应值为68％。 结论 乙型肝炎表面抗原能增强DNA疫苗的抗体反应,DNA疫苗能增强重组酵母乙型肝炎疫苗的CTL反应,两者交互免疫可得到更好的免疫效果。     

白细胞介素-15对脐血和成人外周血单个核细胞抗肿瘤活性的影响

目的：探讨白细胞介素—15(1L—15)对脐血单个核细胞(CBMNC)和成人外周血单个核细胞(PBMNC)抗肿瘤活性的影响。方法：采用MTT法分别检测静止的CBMNC和PBMNC对K562和HL—60细胞株的杀伤活性、经不同浓度的IL—15及不同效靶比条件下激活的CBMNC和PBMNC抗瘤活性，采用ELISA法测定培养上清中IFN—r及TNF—a水平，采用APAAP检测CD56、CD16表面抗原。结果：①静止CBMNC抗肿瘤活性显著低于PBMNC，经IL—15活化后，脐血NK活性显著增强，可达成人水平，脐血LAK活性显著高于成人血LAK活性。②活化后培养上清中的IFN—r及TNF—a水平均显著增强，但脐血培养上清中两种细胞因子的水平仍低于成人血。③活化前后脐血NK细胞CD56表达显著增强。结论：IL—15能显著提高CBMNC的抗肿瘤活性，为今后优选IL—15活化脐血进行肿瘤过继免疫治疗提供了理论依据。     

幽门螺杆菌ureI核酸疫苗免疫活性的初步研究

目的 观察幽门螺杆菌ureI核酸疫苗诱导C57BL/6小鼠产生体液免疫应答及细胞免疫应答水平.方法 重组质粒pcDNA3.1(+)/ureI、空质粒pcDNA3.1(+)及PBS分别肌注免疫C57BL/6小鼠.ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平以及脾淋巴细胞培养上清中IL-4和IFN-γ含量,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应,PCR和免疫荧光组化法检测ureI基因和蛋白表达.结果 pcDNA3.1(+)/ureI能够诱导小鼠产生特异性IgG抗体,该组小鼠脾淋巴细胞经UreI重组蛋白刺激后,其刺激指数和培养上清中IL-4、IFN-γ含量明显升高; ureI基因可在小鼠肌细胞中有效表达.结论 pcDNA3.1(+)/ureI核酸疫苗能刺激C57BL/6小鼠产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研究该疫苗的免疫保护作用奠定了基础.     

乙型肝炎e抗原对外周血单核细胞Toll样受体2表达的影响

目的 探讨HBeAg对外周血单核细胞表面Toll样受体2(TLR2)表达的影响.方法 对68例慢性乙型肝炎(CHB)患者(其中HBeAg与HBV DNA刚性37例,HBeAg阴性、HBVDNA阳性14例,HBeAg与HBV DNA阴性17例)和16名健康人的外周血肝素抗凝,加入Pam3CSK4在37℃、5%CO2条件下刺激3 h,用特异性TLR2单克隆抗体标记,经流式细胞仪检测CD14+细胞表面TLR2表达的百分率;比较刺激前后各组之间的差异.定量检测HBV DNA和血清HBV标志物,分析TLR2表达水平与HBeAg、HBV DNA的关系.用HBeAg与健康人及HBeAg阴性CHB患者的抗凝血在37℃、5%CO2条件下共培养6 h,用流式细胞仪定量分析HBeAg刺激后CD14+细胞表面TLR2的表达水平. 结果 HBeAg阳性CHB患者外周血CD14+细胞TLR2的表达率为47.57%±21.40%,明显低于健康对照组(76.51%±7.46%)和HBeAg阴性组(HBV DNA阳性组为73.2%±14.2%、HBV DNA阴性组为75.2%±11.3%,P<0.05);TLR2的表达水平在HBeAg阴性的HBV DNA阳性或阴性CHB患者组与健康对照组的差异无统计学意义.HBeAg阳性CHB患者外周血单核细胞经Pam3CSK4刺激后,TLR2的表达率明显升高,大部分患者TLR2的表达水平能够达到健康人或HBeAg阴性患者未经配体刺激的水平.健康人或HBeAg阴性CHB患者的外周血与HBeAg共孵育6 h后,CD14+细胞表面TLR2表达水平较HBeAg刺激前明显下降(P<0.05).结论 HBeAg阳性的CHB患者外周血CD14+细胞TLR2的表达水平明显低于HBeAg阴性患者和健康人,HBeAg能够抑制CD14+细胞TLR2的表达,提示HBeAg能够引起CHB患者外周血单核细胞表面TLR2表达的下调,这可能是HBV持续感染的重要因素之一;CHB患者HBVDNA水平可能不影响单核细胞表面TLR2的表达;Pam3CSK4可以明显提高HBeAg阳性CHB患者单核细胞表面TLR2的表达水平,TLR2配体有可能成为CHB免疫治疗的一个潜在靶位.     

母亲血清乙型肝炎表面抗原、e抗原滴度与新生儿接种乙型肝炎疫苗免疫失败的关系

目的 研究孕妇血清乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）滴度与其新生儿接种乙型肝炎（乙肝）疫苗发生免疫失败的关系,探讨能否用孕妇血清HBsAg、HBeAg滴度代替血清HBV DNA浓度来衡量新生儿接种乙肝疫苗后发生免疫失败的危险性。方法 178例HB-sAg、HBeAg双阳性母亲的新生儿接种乙肝疫苗后,随访至24月龄,32例发生免疫失败,用斑点杂交法检测孕妇临产前血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA浓度、用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定孕妇HBsAg和HBeAg浓度,研究孕妇HBsAg、HBeAg的滴度与其新生儿接种疫苗发生免疫失败的关系,并与孕妇血清HBV DNA浓度与其新生儿发生免疫的关系相比较。结果 随着母亲血清HB-sAg、HBeAg滴度的升高,其新生儿发生免疫失败的危险性升高,当孕妇血清HBsAg滴度≥1:1000、HBeAg≥1:100时,分别有26.3%、31.4%的新生儿发生乙型疫苗免疫失败,与当孕妇血清HBV DNA浓度≥125pg/ml,新生儿发生免疫失败的危险性相当。结论 孕妇血清HBsAg、HBeAg高滴度与其新生儿接种疫苗发生免疫失败有密切联系,孕妇血清HBsAg滴度≥1:1000、HBeAg滴度≥1：100能够代替血清HBV DNA浓度≥125pg/ml作为衡量孕妇的乙肝高传染性的指标来预测新生儿发生免疫失败的危险性。     

慢性血吸虫病对乙型肝炎疫苗保护性免疫的影响

目的 研究慢性血吸虫病患者对乙型肝炎（乙肝）疫苗保护性免疫的影响。 方法 随机筛选无乙肝病毒感染的慢性血吸虫病患者（实验组）24例,健康志愿者（对照组）26例。分别收集实验组和对照组接种乙肝疫苗前后血清,用ELISA法检测两组接种前后血清乙肝病毒表面抗体（抗-HBs）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-2（IL-2）的水平。 结果 接种乙肝疫苗前实验组和对照组抗-HBs平均吸光度（A值）分别为0.134和0.150。接种后,实验组血清抗-Hbs 平均A值为0.217, 转阳率为17%,与接种前相比差异无统计学意义（P > 0.05);对照组抗-Hbs平均A值为1.210, 转阳率为92%,与接种前相比差异有显著的统计学意义（P < 0.01）。 实验组接种乙肝疫苗前血清IL-2和TNF-α平均水平均明显高于对照组,接种后两组血清IL-2和TNF-α平均水平均升高,但与接种前相比差异无统计学意义（P >0.05)。 结论 慢性血吸虫病患者对乙肝疫苗的免疫应答水平低下。     

INFLUENCE OF STEROID HORMONES ON PROLIFERATION OF PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELLS IN PATIENTS WITH RHEUMATOID ARTHRITIS

Sex steroids are believed to modulate the immune system in rheumatoidarthritis (RA). Since receptors for sex steroids are presenton T-lymphocytes, which are thought to play a major role inthe pathogenesis of RA, it is suggested that gonadal steroidscan mediate their immunomodulating effect directly on T-lymphocytes.Recently a specific method for activating T-lymphocytes withimmobilized anti-CD3 monoclonal antibodies was described. Weinvestigated the influence of oestradiol, progesterone, testosteroneand cortisol on lymphocytes stimulated by anti-CD3 mAb and PHAof postmenopausal women, comparing female patients with rheumatoidarthritis and age-matched control patients. The results showthat oestradiol, progesterone and testosterone do not influencelymphocyte proliferation when stimulated with anti-CD3 mAb orphytohaemagglutinin (PHA). Cortisol, however, can suppress lymphocyteproliferation even at physiological concentrations in both patientswith RA and controls. Inhibition of proliferation by cortisolis dose-related and has no significant correlation with RA diseaseactivity. This inhibition differs individually and might explainthe often variable response to corticosteroids in vivo. KEY WORDS: Rheumatoid arthritis, T-Lymphocyte, Oestradiol, Progesterone, Testosterone, Cortisol, PHA, Anti-CD3 mAb     

国产胸腺肽对健康人PBMC膜白细胞介素2受体和HLA-DR抗原表达的影响

用生物素-链霉亲和素系统免疫细胞化学和流式细胞仪检测mIL-2R和HLA作为考核胸腺肽体外活性的指标,结果表明,25～100μg/ml胸腺肽在体外明显提高mIL-2R和HLA-DR表达率,提示胸腺肽具有激活淋巴细胞的功能,为胸腺肽治疗慢性肝炎的机理提供了理论基础。     

肝炎病人血清、外周血单个核细胞和肝脏中GBV-C/HGV复制中间体的研究

目的:关于GBV-C/HGV组织亲和性的研究尚无结论性资料。我们研究27例肝炎病人血清、外周血单个核细胞(PBMCs)及肝脏中GBV-C/HGV正链及负链RNA(复制中间体)的存在状况。方法:应用逆转录-巢式多聚酶链反应技术检测GBV-C/HGV正、负链RNA。结果:27例病人血清中21例病人血清、7例PBMCs、10例肝组织中检测到GBV-C/HGV正链RNA,其中2例单一GBV-C/HGV感染者肝组织中检测到负链RNA,在27例病人血清及PBMCs中均未检测到负链RNA。结论:提示GBV-C/HGV是一种嗜肝病毒,肝脏可能是其复制的主要场所之一,但GBV-C/HGV与HCV混合感染时,在PBMCs及肝脏中尚未发现该病毒复制的证据。     

TT病毒感染的肝炎患者外周血单个核细胞中TT病毒复制的研究及克隆测序

目的 了解TTV阳性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)TTV DNA存在及复制情况。方法 采用巢式PCR技术和绿豆芽核酸酶消化方法研究其存在及复制情况,并克隆测序分析证实。结果 16例TTV阳性肝炎患者PBMC中有14例TTV DNA阳性,并同时用绿豆芽核酸酶消化所提取的PBMC DNA,有2例为TTV DNA阳性。这3个序列与日本株和中国株相应位置核苷酸序列同源性大于95％以上(95～98％)。结论 我们在国内外首次报道TTVDNA可在TTV阳性肝炎患者PBMC中存在及复制,表明肝细胞并非为TTV感染和复制的唯一场所。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ存在情况及有其临床意义，方法 应用套式ＰＣＲ检测４６例急性丙型肝炎（丙型肝炎以下简称丙肝）和４２例慢性丙型肝炎患者血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。结果 慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙型患者（Ｐ〈０．００１），急，慢性丙型肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性     

METHOTREXATE ACTION IN RHEUMATOID ARTHRITIS: STIMULATION OF CYTOKINE INHIBITOR AND INHIBITION OF CHEMOKINE PRODUCTION BY PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELLS

This open label study examines whether methotrexate (MTX) treatmentmodulates ex vivo synthesis of interleukin-1 receptor antagonist(IL-lra), soluble tumour necrosis factor receptors(sTNFR p55and p75), interleukin-1ß (IL-1ß), tumournecrosis factor     

MOBILIZATION OF PHILADELPHIA-NEGATIVE PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELLS IN CHRONIC MYELOID LEUKAEMIA USING HYDROXYUREA AND G-CSF (FILGRASTIM)

A relatively simple and non-toxic out-patient-based regimen for the mobilization of Philadelphia-negative (Ph − ve) mononuclear cells in chronic myeloid leukaemia (CML) was evaluated in 10 patients, nine in stable chronic phase and one in accelerated phase. They received oral hydroxyurea at a mean dose of 3.5 g/m² daily for 7 d, followed by 300 μg of G-CSF daily until the last day of harvesting. In the nine chronic-phase patients the mean number of days from the end of hydroxyurea to the commencement of harvesting was 14.5 (range 10–18). The patient in accelerated phase recovered and was harvested after 6 d. The mean number of aphereses performed was 3.4. Adequate numbers of stem cells were obtained in 9/10 patients judged by our usual criteria. Side-effects were mild in comparison to published intravenous schedules. No patients lost their hair. Five (50%) patients required admission with neutropenic fever which responded to antibiotics in all cases. Four (40%) patients developed a transient rash and four (40%) experienced mild oral mucositis. This level of toxicity enabled half of the patients to be treated entirely on an out-patient basis. The harvest products were analysed for cells belonging to the leukaemic clone by conventional cytogenetics, FISH and PCR. All were PCR positive. The mean Ph positivities by cytogenetics and FISH were comparable at 18.1% and 15% respectively. Half the patients had >% normal metaphases. We conclude that this approach is comparable in efficacy to published intravenous regimens and significantly less toxic. It can be safely used at diagnosis before interferon therapy commences.     

细粒棘球蚴囊液对外周血淋巴细胞的影响

目的研究细粒棘球蚴囊液对健康人外周血单个核细胞(PBMC)及JurkatT淋巴细胞等的影响。方法PBMC及JurkatT淋巴细胞用含不同浓度(1000、100和10μg/ml)囊液的DMEM培养基培养5d后,台盼蓝染色检测细胞活力。用含植物血凝素(PHA)的DMEM培养基培养PBMC,以MTT法观察PBMC增殖情况,用流式细胞仪检测CD4+、CD8+细胞数量及CD4+/CD8+值,用原位末端标记法和Hoechst33258荧光染色法检测PBMC细胞凋亡。结果各浓度囊液对PBMC和JurkatT淋巴细胞未显示出毒性作用。囊液不影响PHA对PBMC的增殖功能。在1000μg/ml囊液组CD4+、CD8+细胞数量与空白对照组(CD4+72.08±4.10,CD8+29.32±2.62)相比,CD4+(49.32±8.32)显著减少(P<0.05),CD8+数量(32.02±6.57)略增加(P>0.05),CD4+/CD8+比值减少。未见细胞凋亡现象。结论细粒棘球蚴囊液对外周血单个核细胞的生长无抑制作用,但可以使CD4+、CD8+细胞的数量和比例改变,向Th2免疫抑制方向转变。     

肾移植排斥反应外周血CD28、CD40共刺激通路相关分子的表达

目的探讨肾移植受者外周血T细胞CD28和CD40共刺激通路相关分子的表达及其与排斥反应的关系。方法采用流式细胞仪检测了42例肾移植受者外周血CD28、CTLA4、CD40及CD40L分子在CD4     

ON THE STABILITY IN VITRO OF BIOACTIVE HUMAN ADRENOCORTICOTROPHIN IN BLOOD AND PLASMA

The disappearance in vitro of ACTH from whole human blood and plasma held at 22 degrees C has been monitored using a dispersed adrenal cell bioassay and an unextracted radioimmunoassay. In three normal subjects after a metyrapone test and two patients with Addison's disease, endogenous bioactive ACTH levels were unchanged for at least 1 h in blood and 2 h in plasma. Moreover greater than 50% of the bioactive plasma ACTH was still present in the plasma samples from the patients with Addison's disease after 24 h incubation at ambient temperatures. Human pituitary ACTH (1-39), spiked into plasma from dexamethasone suppressed subjects to give a concentration of 250 ng/l, was stable by bioassay for at least 2 h. No loss of biological activity was observed on subjecting plasma from a patient with Addison's disease or spiked plasma to two cycles of thawing at 37 degrees C and freezing at -70 degrees C or thawing at 20 degrees C and freezing at -20 degrees C. Some loss of bioactivity (20%) occurred on subjecting the patient's, but not ACTH-spiked plasma to four cycles of thawing at 20 degrees C/freezing at -20 degrees C. We conclude that bioactive ACTH (endogenous or exogenous) may be more stable in vitro in human blood and plasma than has been previously thought. If our studies can be confirmed in a larger series then it may be that conditions for handling blood specimens for ACTH assays could be reappraised.