共刺激通路阻断剂在角膜移植排斥治疗中的应用

共刺激通路阻断剂是利用分子生物学方法重组免疫调节分子,人为干预免疫应答,以抑制特异性T细胞免疫反应,在诱导移植耐受和治疗自身免疫性疾病中显示了良好的应用前景。本文针对角膜组织的免疫学特点及共刺激通路阻断剂如CTLA4 Ig、CD4 0Ig、抗CD15 4mAb、CTLA4 FasL在角膜移植排斥治疗中的应用进行综述。     

CD40-CD40配体共刺激通路在甲状腺相关性眼病发病中作用研究进展

甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)是器官特异性自身免疫性疾病,其发病机制涉及T细胞对几种自身抗原的耐受丧失及以T细胞为主的免疫细胞不适当活化。T细胞活化需要识别共刺激信号,其中CD40-CD40L作为T细胞活化的共刺激信号之一,在TAO的发病机制中起重要作用。本文就CD40-CD40L分子细胞学特征、功能及近年关于其在TAO发病机制中的作用研究进展作一综述。     

ICOS共刺激通路参与角膜移植免疫排斥反应的研究

目的研究可诱导共刺激分子（ICOS）共刺激通路与角膜移植急性免疫排斥反应的关系。方法建立大鼠同种异体穿透角膜移植模型,分别于术后7d、14d取植片进行病理学观察,采用RT-PCR法检测植片组织ICOS mRNA的表达情况,免疫组织化学法检测植片组织淋巴细胞ICOS蛋白水平;同时采用流式细胞术检测外周血CD3^＋ICOS^＋T／CD3^＋T的表达情况。均以正常大鼠作为正常对照。结果正常大鼠角膜组织未检测到ICOS蛋白及ICOS mRNA的表达,移植术后植片组织可以检测到ICOS蛋白及ICOS mRNA的表达,且术后14d高于术后7d（P=0．000）;与正常大鼠外周血CD3^＋ICOS^＋T／CD3^＋T的表达相比术后表达皆升高（方差齐性,P=0．156）,且术后14d外周血CD3^＋ICOS^＋T／CD3^＋T的表达高于术后7d的表达（P=0．000）。结论共刺激分子ICOS与角膜移植急性免疫排斥反应密切相关。     

联合阻断共刺激信号对兔新生血管化角膜移植术后免疫排斥反应的影响

目的　通过阻断新生血管化角膜兔模型穿透性角膜移植术后共刺激信号配体和受体的结合,探讨联合阻断共刺激信号对兔高风险角膜移植术后免疫排斥反应的影响。方法　缝线法制作新生血管化角膜兔动物模型,随机数字表法将其分组:对照组、ＭＲ１组、抗Ｂ７-１组、联合处理组,每组１２只。术后裂隙灯显微镜下观察角膜排斥反应排斥情况,并记录各组角膜植片存活时间、制作植片生存曲线,比较其差异;术后４周或免疫排斥反应发生时各组随机选取５只兔模型摘取术眼角膜,对植片行组织病理学检查角膜组织结构改变及炎性细胞浸润情况,通过免疫组织化学方法检测肿瘤坏死因子-α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ-α,ＴＮＦ-α）在角膜植片中的表达。结果　与对照组比较,ＭＲ１组、抗Ｂ７-１组和联合处理组角膜植片均获得了较长的存活时间,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。联合处理组分别与ＭＲ１组和抗Ｂ７-１组比较,生存时间更长,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;ＭＲ１组和抗Ｂ７-１组角膜植片生存时间比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。联合处理组兔角膜植片炎性细胞浸润较其他三组明显减少,ＴＮＦ-α表达平均光密度值显著降低,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;而ＭＲ１组与抗Ｂ７-１组比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　联合应用ＣＤ４０Ｌ和抗Ｂ７-１单克隆抗体阻断共刺激通路受体和配体的结合,比单独应用其中一种抗体能更有效地降低新生血管化角膜兔模型穿透性角膜移植术后植片排斥反应的发生率,延长植片的生存时间,提高植片的存活率。     

重组腺病毒载体RNA干扰阻断ICOS共刺激通路抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的研究

目的观察携带有报告基因绿色荧光蛋白且表达ICOS-siRNA的重组腺病毒载体Ad-siICOS-EGFP阻断ICOS共刺激通路对角膜移植急性免疫排斥反应的抑制作用。方法取Wistar大鼠(供体)及SD大鼠(受体),建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,将SD大鼠随机分为A、B、C、D4组,每组各20只:A组为单纯角膜移植对照组;B组为Ad-siICOS-EGFP注射组,术后即刻于球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP;C组为Ad-EGFP注射组,术后即刻于球结膜下注射Ad-EGFP;D组为生理盐水注射组,术后即刻于球结膜下注射生理盐水;每眼选择角膜缘1200位、600位两个注射点,每个注射点注射剂量为15μL。术后每天在裂隙灯显微镜下观察排斥反应指数的变化并记录植片的存活时间。各组分别于术后5d随机取10只大鼠,麻醉后取角膜,部分植片行RT-PCR检测,部分角膜冰冻切片行共聚焦显微镜观察。各组其余大鼠进行角膜植片存活时间统计。结果 A组、B组、C组、D组角膜植片平均存活时间分别为(9.800±0.632)d、(14.700±1.418)d、(10.000±1.054)d、(10.100±0.876)d,其中B组存活时间最长,与其余各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);A组、C组、D组各组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。B组及C组角膜植片共聚焦显微镜下可见GFP绿色荧光表达,表达位于角膜植片上皮层及整个角膜基质层;A组、D组角膜植片未见绿色荧光表达。A组、B组、C组、D组植片组织ICOS的PCR产物凝胶电泳条带灰度值比值分别为1.004±0.164、0.621±0.096、0.929±0.134、0.918±0.120,其中B组最低,与其余各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);A组、C组、D组各组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 Ad-siICOS-EGFP可以有效地抑制大鼠植片组织ICOSmRNA及蛋白的表达,从而阻断ICOS共刺激通路;移植术后即刻受体鼠球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP,可以抑制大鼠角膜移植急性免疫排斥反应,延长角膜植片存活时间。     

共刺激分子Tim-1在角膜移植排斥反应中的作用

背景 角膜移植是目前临床上治疗角膜盲可靠且有效的复明手段,角膜移植术后的免疫排斥反应是角膜移植失败的主要原因. 目的 研究共刺激分子Tim-1在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植排斥反应发生和发展过程中的作用.方法 40只清洁级成年雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组、自体角膜移植组和同种异体角膜移植组.正常对照组大鼠未行任何手术,自体角膜移植组分别以Wistar大鼠作为供体和受体施行穿透角膜移植术,而同种异体角膜移植组以SD大鼠角膜作为供体,Wistar大鼠作为受体行穿透角膜移植术,各组供体角膜植片均为3.5mm,植床直径为3.0 mm.分别于术后7d、14d在裂隙灯显微镜下观察术眼角膜炎症反应情况,按照Larkin的标准进行排斥反应评分,计算排斥反应指数（RI）,观察各组角膜植片的平均存活时间和植片存活率.术后7d、14d,3个组各取3只大鼠眼球制备角膜组织切片,分别行组织病理学检查和免疫组织化学检测,观察角膜组织的炎症反应和共刺激分子Tim-1蛋白在角膜组织中的表达;此外分别于术后7d、14d各组取5只大鼠角膜制备组织匀浆,采用实时荧光定量PCR法检测共刺激分子Tim-1 mRNA在大鼠角膜植片中表达量（吸光度,A）的变化.结果 术后7d,自体角膜移植组和同种异体角膜移植组大鼠角膜植片均出现轻度水肿;术后14 d,自体角膜移植组角膜植片水肿消失,植片透明,而同种异体角膜移植组大鼠角膜植片水肿增厚,呈灰白色混浊,可见新生血管形成.自体角膜移植组植片的存活率为100％,同种异体角膜移植组植片存活率为0,平均生存时间为（9.8±1.2）d.组织病理学检查表明,术后7d自体角膜移植组植片基质层可见炎性细胞浸润,但术后14d炎性细胞明显减少;同种异体角膜移植组术后7d植片水肿,基质层可见炎性细胞浸润,术后14 d阳性细胞大量增加,可见新生血管.免疫?     

角膜移植排斥反应的共焦显微镜研究

目的：探讨角膜移植术后免疫排斥反应的共焦显微镜特征,在细胞水平为该症的基础和临床研究提供活体、三维与实时的科学依据。方法：应用NIDEK公司提供的共焦显微镜,对11例（11眼）发生角膜移植免疫排斥反应的患眼角膜在不同时期行三维实时扫描成像,并用计算机作定性与定量分析。结果：角膜移植免疫排斥反应的共焦显微镜呈现如下特征：①上皮排斥线是由较小的炎症细胞与受损的较大的上皮细胞混合形成的结构;②上皮下浸润表现为体积较小、折射率高的炎症细胞的聚集,上皮下神经纤维水肿呈串珠状改变,浅基层细胞水肿;③基质排斥反应可见角膜基质细胞水肿,胞体变形,数量减少,并见炎症细胞浸润,后者于缝线周围较明显;④内皮排斥线则是由较小的明亮的炎症细胞与核固缩胞体形态异常的内皮细胞混合而成,随着内皮排斥线的发展,内皮 细胞数量减少,体积变大呈伪足状;⑤以上排斥反应均见新生血管长入植片,并与血管壁可见游动的炎症细胞。结论：应用共焦显微镜可在活体上为角膜移植术后免疫排斥反应提供早期诊断与鉴别诊断的科学依据,并在细胞水平对排斥反应的触发与转归进行活体的动态观察。     

共刺激通路阻断剂在角膜移植排斥治疗中的应用

共刺激通路阻断剂是利用分子生物学方法重组免疫调节分子，人为干预免疫应答，以抑制特异性T细胞免疫反应，在诱导移植耐受和治疗自身免疫性疾病中显示了良好的应用前景。本针对角膜组织的免疫学特点及共刺激通路阻断剂如CTLA4-Ig、CD40Ig、抗CD154mAb、CTLA4-FasL在角膜移植排斥治疗中的应用进行综述。     

细胞因子在角膜移植排斥反应中的作用

细胞因子是目前生命科学领域研究的热点之一。与角膜移植有密切关系的免疫赦免及前房相关免疫偏离中均有多种细胞因子的参与。本文就眼内,特别是角膜中细胞因子的作用方式、来源、功能及与角膜移植排斥反应密切相关的细胞因子、基于细胞因子或其受体的免疫治疗进行综述。     

异种角膜移植抗排斥的研究进展

异种角膜移植术由于角膜供体来源广、取材易,可以解决多种角膜疾病,如角膜严重瘢痕变性、圆锥变形等,但术后强烈的免疫排斥反应严重阻碍此项技术的发展,现就其免疫排斥反应的机制及相应预防措施做一综述如下。     

Inhibition of murine corneal allograft rejection by treatment with antibodies to CD80 and CD86

The purpose of this study was to investigate the role of CD80 and CD86 costimulatory molecules in corneal allograft rejection. Anti-CD80 and anti-CD86 monoclonal antibodies (mAbs) were administered after orthotopic corneal allograft transplantation. Graft rejection was observed by biomicroscopy. Population and localization of CD80(+)and CD86(+)cells in the cornea, cervical lymph nodes, and spleen were examined by flow cytometry and immunohistochemistry. The combined use of anti-CD80 and anti-CD86 mAbs was effective in prolonging corneal allograft survival. In the untreated mice bearing rejected graft, many CD86(+)and CD80(+)cells were found around the host-graft junctional area in the cornea, and CD86(high)cells were found in the cervical lymph node and spleen. In contrast, few CD86(+)or CD80(+)cells were observed in the cornea, cervical lymph node, and spleen from the mice treated with anti-CD80/CD86 mAbs. These results demonstrated a significant role of CD80 and CD86 costimulatory molecules in corneal allograft rejection.     

调节性T细胞在角膜移植排斥反应中的研究进展

角膜移植术是治疗终末期角膜疾病的常用方式,虽然角膜移植的成功率较其它器官移植高,但是术后排斥仍然是手术失败的主要原因。器官移植后排斥反应高度依赖于免疫细胞向淋巴组织或炎症部位的定向迁移和归巢,并受粘附分子和趋化因子的调控。调节性T细胞在免疫调节中起着关键性作用,通过诱导免疫耐受维持内环境稳定,在器官移植排斥反应、自身免疫性疾病及肿瘤相关研究中发挥重要作用。本篇综述主要介绍调节性T细胞参与眼部免疫耐受的相关研究,着重阐述调节性T细胞在角膜移植排斥过程中的作用、机制和应用。     

Immunology of corneal allograft rejection. Associated human leucocyte populations

Human serum samples and peripheral blood mononuclear leucocytes (PBML) were collected from ten corneal transplant recipients over a two-year period at intervals before and after surgery, and during and after episodes of immunologic (rejection) reaction. Serum was monitored for the development of antibodies to histocompatibility antigens and PBML were stained with a panel of monoclonal reagents specific for T cell and for monocyte populations using indirect immunofluorescence. Patients who demonstrated an elevation in the Leu 2a+ (suppressor/cytotoxic) T cell population following an immunologic reaction ultimately accepted their grafts, whereas patients whose Leu 2a+ population was unaffected developed irreversible graft clouding. Additionally, a direct positive correlation between the development of elevated levels of lymphocytotoxic antibodies and helper T cells was noted in some patients during immunologic reactions. Neither DR-positive nor monocyte population changes demonstrated any consistent correlation with rejection episodes or final graft outcome.     

高危角膜移植排斥反应的预防和治疗进展

高危角膜移植术后免疫排斥反应是影响角膜移植成败的首要因素,因此,免疫抑制剂在高危角膜移植排斥反应中的应用占有不可替代的地位。然而,在应用过程中出现许多局部和全身不良反应,为了提高角膜移植成功率,国内外专家、学者在剂型、用药途径以及联合用药方面都做了卓著的研究; 同时在基因工程方面也有可观的进步。本文就高危角膜移植排斥反应的预防和治疗方面做一综述。     

白细胞介素-34在大鼠角膜移植排斥反应中的作用机制

目的　探讨白细胞介素-34（interleukin-34,IL-34）在大鼠角膜移植术后的表达情况以及在免疫排斥反应中的作用。方法　以SD大鼠为供体、Wistar大鼠为受体建立角膜移植实验模型。Wistar大鼠60只按照随机数字表法随机分为3组,B组为自体角膜移植组,C、D组行同种异体角膜移植术。另取10只为正常对照组（A组）。术后B、C组术眼滴泰利必妥眼液,D组术眼滴典必殊眼液。术后各组分别取10只大鼠判断四组角膜植片的存活情况并作生存分析。其余大鼠于术后14 d取术眼角膜植片,行组织病理学、免疫组织化学及RT-PCR检测。结果　生存分析结果提示,A组和B组角膜不发生排斥反应,D组角膜存活时间为（26.00±0.97）d,远高于C组（10.00±1.55）d（P<0.001）。HE染色结果显示,C组角膜组织各层有大量炎性细胞浸润以及新生血管形成,D组仅有少量炎性细胞、新生血管。免疫组织化学结果提示,IL-34蛋白在C组的表达量（0.089 4±0.005 6）明显高于A组（0.037 7±0.002 3）、B组（0.068 4±0.004 4）和D组（0.044 5±0.004 5）的表达量（F=145.21,P＜0.01）,且主要集中在上皮层和基质层。RT-PCR结果提示,IL-34、IL-1β、TNF-α、IL-17A的mRNA 在C组角膜组织中表达水平明显高于A组、B组和D组（均为P<0.05）。结论　IL-34参与了大鼠角膜移植术后的排斥反应,而典必殊可能通过抑制IL-34的表达及相关的信号通路,延缓排斥反应的进展。     

雷公藤多甙滴眼液防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的观察雷公藤多甙(TⅡ)滴眼液局部应用对角膜移植免疫排斥反应的影响.方法建立大鼠角膜移植模型,随机分组A,B,C组为SD大鼠-Wistar大鼠组间同种异体角膜移植,SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,其中A组为空白对照组、B组为0.02%TⅡ滴眼液组、C组为0.03%TⅡ滴眼液组,另设D组为SD大鼠同种间对照组、E组为SD大鼠自体对照组.用裂隙灯显微镜记录及比较各组移植排斥指数(RI),包括角膜植片透明度、水肿度、新生血管程度,并比较角膜排斥发生时间.结果术后各组移植排斥指数及发生角膜移植排斥时间,A组与B组、A组与C组、B组与C组比较均有显著性差异,P＜0.05;D组和E组两对照组之间比较P＞0.05,无显著性差异.结论TⅡ滴眼液可有效地防治角膜移植免疫排斥反应,0.03%比0.02%TⅡ滴眼液更有效.     

Blockade of CD40-CD154 costimulatory pathway promotes survival of allogeneic corneal transplants

PURPOSE: To determine the effect of systemic anti-CD154 monoclonal antibody on the survival of orthotopic murine corneal transplants. METHODS: BALB/c mice were used as recipients of syngeneic, multiple minor histocompatability (H)-disparate, or major histocompatibility complex MHC-mismatched corneal transplants. Recipient beds were either avascular (normal risk) or neovascularized (high risk). Mice were randomized to receive either anti-CD154 antibody or control immunoglobulin by intraperitoneal injection at surgery and once weekly after surgery. After orthotopic corneal transplantation, all grafts were evaluated for signs of rejection by slit lamp biomicroscopy over 8 weeks. The high-risk transplants were continuously observed until week 18 after the therapy was discontinued at week 8. Allospecific delayed-type hypersensitivity (DTH) was evaluated after transplantation in high-risk graft recipients. Frequency of interferon (IFN)-gamma-secreting T cells in the hosts was measured by enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay. RESULTS: In normal-risk transplantation, the 8-week survival rate improved from 25% in control mice to 88% in anti-CD154-treated hosts of minor H-disparate grafts (P = 0.0087) and from 78% in control mice to 100% in anti-CD154-treated recipients of MHC-mismatched transplants (P = 0.177). Of particular significance, in high-risk transplantation, anti-CD154 therapy dramatically enhanced the survival of both minor H- and MHC-disparate corneal transplants to 100% (P = 0.0001) and 92% (P = 0.0002), respectively. In addition, the anti-CD154-treated mice did not exhibit allospecific immunity. However, termination of anti-CD154 led to some loss in graft survival, especially among high-risk minor H-disparate grafts. The frequency of IFN-gamma-producing T cells was significantly reduced in anti-CD154-treated hosts. CONCLUSIONS: Continuous suppression of the CD40-CD154 costimulatory pathway promotes the acceptance of corneal transplants, regardless of the degree of allodisparity or preoperative risk. The beneficial effect of anti-CD154 treatment may be due in part to inhibition of Th1-mediated responses.     

角膜上皮在大鼠穿透角膜移植排斥反应中的作用

目的研究角膜上皮在大鼠穿透角膜移植排斥反应中的作用。方法近交系F344和Wistar大鼠为研究对象，建立穿透角膜移植模型。实验动物随机分为6组，分别为保留供体上皮、去除供体上皮和保留受体上皮的同基因及异基因组。术后观察排斥发生时间，并行苏木精-伊红染色及VEGF、CD4、CD8、RT1B的免疫组织化学染色。结果同基因移植组均未发生排斥反应，去除供体上皮组VEGF表达较保留供受体上皮组增多（P〈0．01）。异基因组均发生排斥反应，保留受体上皮组植片存活时间较其他两组延长（P〈0．01）；植片中CD4、CD8和RT1B抗原的表达亦较其他两组少（P〈0．01）。结论上皮在诱导排斥反应发生中具有重要作用，保留受体上皮可以明显延长穿透角膜移植植片的存活时间。     

纤维介素蛋白2（FGL-2）在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

目的　研究纤维介素蛋白２（ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ-ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ２,ＦＧＬ-２）在大鼠角膜移植排斥反应发生发展过程中的作用及糖皮质激素对其表达的影响。方法　６０只成年雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为正常对照组、自体角膜移植组、同种异体角膜移植组和糖皮质激素组。正常对照组大鼠未行任何手术,自体角膜移植组、同种异体角膜移植组及糖皮质激素组均行穿透性角膜移植术。术后裂隙灯显微镜下观察术眼角膜炎性反应情况,按照Ｌａｒｋｉｎ的标准进行排斥反应评分,计算排斥反应指数,并在术后９ｄ和１４ｄ分别取眼球制备角膜组织切片,行组织病理学检查和免疫组织化学检测,观察角膜组织的炎性反应和ＦＧＬ-２在角膜组织中的表达;采用实时荧光定量ＰＣＲ法检测ＦＧＬ-２ｍＲＮＡ在大鼠角膜植片中的相对表达量。结果　术后９ｄ内各组角膜植片均出现不同程度的水肿、混浊及新生血管生长。同种异体角膜移植组大鼠平均在角膜移植术后９．８ｄ发生排斥反应并获病理学支持;自体角膜移植组和糖皮质激素组大鼠术后排斥反应计分均未达到诊断标准。免疫组织化学结果显示,不同时间点同种异体角膜移植组炎性细胞明显多于自体角膜移植组和糖皮质激素组。术后３组手术干预组角膜ＦＧＬ-２ｍＲＮＡ的表达均增加,在术后９ｄ和１４ｄ时同种异体角膜移植组均较自体角膜移植组和糖皮质激素组高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＦＧＬ-２可能参与角膜移植免疫排斥反应,糖皮质激素可能通过降低其表达发挥抗排斥作用。