苦参碱对人食管癌细胞株Eca-109增殖和凋亡的影响

目的探讨中药提取物苦参碱单体(Matrine)对人食管癌细胞株Eca-109的诱导凋亡和抑制增殖作用。方法体外培养人食管癌细胞株(Eca-109),分别给以不同浓度的苦参碱对体外培养的Eca-109细胞株进行干预。以MTT比色法、Hoechst33342染色法以及流式细胞术测定苦参碱对Eca-109细胞株的诱导凋亡及抑制增殖的作用。结果 MTT实验显示苦参碱可以明显抑制Eca-109细胞株的增殖,流式细胞术检测细胞周期显示G2期细胞明显增多,S期细胞显著减少。结论苦参碱能明显抑制Eca-109细胞株的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与细胞周期阻滞于G2期有关。     

Investigate the Effects of Matrine on the Proliferation and Apoptosis of Human Esophageal Carcinoma Eca-109 Cell Line

目的 探讨中药提取物苦参碱单体(Matrine)对人食管癌细胞株Eca-109的诱导凋亡和抑制增殖作用.方法 体外培养人食管癌细胞株(Eca-109),分别给以不同浓度的苦参碱对体外培养的Eca-109细胞株连行干预.以MTT比色法、Hoechst33342染色法以及流式细胞术测定苦参碱对Eca-109细胞株的诱导凋亡及抑制增殖的作用.结果 MTT实验显示苦参碱可以明显抑制Eca-109细胞株的增殖,流式细胞术检测细胞周期显示G2期细胞明显增多,S期细胞显著减少.结论 苦参碱能明显抑制Eca-109细胞株的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与细胞周期阻滞于G2期有关.     

苦参碱对HL-60细胞增殖与分化影响的实验研究

目的 观察苦参碱对HL-60细胞增殖和分化的影响作用.方法 以HL-60细胞为实验对象, 采用体外培养技术, 通过MTT法测细胞活力、细胞周期分析、细胞凋亡检测、硝基四氮唑蓝(NBT)还原试验、细胞表面分化抗原检测等方法来观察不同浓度苦参碱对HL-60细胞的作用.结果 浓度为 12.5～ 50 μg/ml的苦参碱能明显抑制HL-60细胞的增殖,使细胞周期发生改变,G0/ G1 期细胞增多,S期细胞减少,凋亡细胞明显增多,对NBT的还原能力增强,细胞表面分化抗原CD11b和CD15表达增加.结论 苦参碱对白血病细胞具有一定的抑制增殖、诱导凋亡和诱导分化作用,对白血病的治疗提供有力的实验依据.     

蜈蚣提取液对肝癌Bel-7404细胞体外抗癌作用的研究

目的研究不同浓度蜈蚣提取液(ECP)对肝癌(HCC)Bel-7404细胞株的敏感性。方法通过MTT实验、细胞药物浓度—时间生长曲线研究不同浓度ECP对Bel-7404细胞株的敏感性;利用光学与电子显微镜观察细胞形态及其超微结构变化。结果①MTT法揭示各浓度ECP对人HCC细胞Bel-7404生长均有抑制作用。②细胞生长曲线图显示Bel-7404活细胞数目与ECP浓度及药物作用时间相关。ECP在5 g/L时,Bel-7404活细胞数先增多,48 h后细胞数开始减少;浓度在10 g/L与20 g/L时,用药后24 h活细胞数就显著减少。各组间活细胞数比较有显著性差异(P<0.01)。③光镜下见ECP作用48 h后,浓度低于5 g/L对Bel-7404细胞无明显的抑制作用,浓度在10 g/L以上时,Bel-7404活细胞数减少,细胞形态改变,细胞坏死。电镜下见治疗组细胞密度增高,染色质凝集固缩,染色质边集,核固缩、核碎裂,及凋亡小体的形成。结论①ECP能抑制人HCC细胞Bel-7404的增殖,且抑制作用呈剂量和时间依赖效应;②ECP低浓度有诱导肿瘤细胞凋亡作用,中、高浓度有直接杀肿瘤细胞作用。     

苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及Survivin基因表达的影响

目的:探讨苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制.方法:应用不同浓度的苦参碱作用于人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;RT-PCR和Western blotting分析Survivin基因表达.结果:苦参碱对Hela细胞的体外增殖具有抑制作用,量效关系显著,与对照组比较有统计学差异(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为2.60 g·L-1.经流式细胞仪检测表明,苦参碱能使Hela细胞G0-G1期逐渐增加,G2-M期和S期逐渐减少,并且随着剂量的增加,Hela细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).苦参碱对Hela细胞Survivin 基因表达有一定的抑制作用(P＜0.01),并呈剂量依赖性.结论:苦参碱能有效抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Survivin基因的表达有关.     

苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的干预作用

目的：观察苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法：选择苦参碱为干预药物,以不同浓度梯度作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,采用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果：MTT结果显示,各干预组对HFL-1细胞生长均有显著抑制增殖作用,其强度呈时间-剂量依赖性。苦参碱作用于HFL-1细胞48 h后,各干预组细胞总凋亡率均明显高于对照组（P〈0.05）;与对照组比较,苦参碱各浓度组HFL-1细胞G0/G1期百分率显著上升（P〈0.05）。结论：苦参碱可在一定程度上抑制人胚肺成纤维细胞增殖,并诱导其凋亡。     

苦参碱诱导SMMC-7721细胞分化过程中侵袭转移相关指标的实验研究

目的：研究苦参碱诱导人肝癌SMMC-7721细胞分化过程中对其侵袭转移能力的抑制作用。方法：SMMC-7721细胞体外培养，0．5g/L、0．8g/L、1．0g/L浓度的苦参碱分别处理细胞，通过生长曲线测定、细胞形态观察、细胞粘附试验、运动试验、侵袭试验全面观察苦参碱对该细胞株的生长增殖、形态变化、侵袭转移等各方面的诱导分化作用。结果：经0．8g/L和1．0g/L浓度的苦参碱处理后，SMMC-7721细胞的生长增殖明显减缓，恶性细胞形态逐渐向成熟细胞分化，肿瘤细胞与FN的粘附力、细胞穿膜运动力、对基底膜的降解力等侵袭转移相关指标均受到显著抑制。结论：苦参碱是一种较好的诱导分化剂，不仅抑制细胞的生长增殖，诱导细胞形态分化，而且从细胞的粘附、运动、降解等多环节全面抑制SMMC-7721细胞的侵袭转移能力。     

氧化苦参碱对骨肉瘤U2OS细胞增殖的抑制作用及其机制研究

目的:在分子生物学水平上探讨氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制作用和潜在的作用机制。方法:体外培养骨肉瘤U2OS细胞,用不同浓度梯度的氧化苦参碱处理细胞,光学显微镜观察骨肉瘤细胞形态的变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度氧化苦参碱对U2OS细胞增殖的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI荧光双标流式细胞仪分析OMT处理后的U2OS细胞周期阻滞和凋亡的变化;RT-PCR方法分析凋亡相关分子(p53,bax,Bcl-2)mRNA的表达水平。结果:MTT法结果表明氧化苦参碱能够抑制U2OS细胞的增殖并呈剂量依赖性;光学显微镜下观察到氧化苦参碱处理后的U2OS细胞具有凋亡特征的形态学变化;流式细胞仪检测结果表明氧化苦参碱处理48h后,细胞凋亡率与药物浓度呈正相关;氧化苦参碱还能够诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,并呈现浓度依赖性;RT-PCR检测结果表明氧化苦参碱处理后,U2OS细胞中p53mRNA和bax mRNA的表达水平明显上升,Bcl-2mRNA表达水平明显下降,并呈现一定的剂量依赖关系。结论:氧化苦参碱能够明显抑制骨肉瘤U2OS细胞的增殖,导致细胞周期阻滞并诱导细胞凋亡,具体分子机制可能和p53,Bcl-2,bax等凋亡调控基因相关。     

华蟾素对人肝癌细胞Bel-7402细胞增殖及周期的影响

目的:观察华蟾素注射液对人肝癌Bel-7402细胞增殖及周期的影响.方法:将不同浓度的华蟾素注射液作用于Bel-7402细胞,应用噻唑蓝还原法(MTT比色法)检测华蟾素注射液对Bel-7402细胞增殖的影响;应用流式细胞术(FCM)检测Bel-7402细胞周期分布.结果:华蟾素注射液可以抑制Bel-7402细胞增殖,其抑制作用与作用时间和剂量呈正相关,并可使细胞阻滞于G2/M期.结论:华蟾素注射液能够抑制人肝癌细胞Bel-7402的增殖,并可使细胞阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡.     

苦参碱抗人鼻咽癌CNE2细胞的作用及其机制研究

目的：观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞的作用,并探讨其作用机制。方法：倒置相差显微镜观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞形态的影响;CCK-8法检测苦参碱对CNE2细胞增殖的影响;流式细胞仪分析苦参碱对CNE2细胞周期的影响;Annexin V-FITC／PI法检测苦参碱对CNE2细胞凋亡影响。结果：苦参碱处理后CNE2细胞形态发生改变：细胞皱缩,变小变圆,空泡明显。苦参碱对CNE2细胞具有明显的抑制作用,并呈量效和时效关系。与对照组相比,苦参碱处理后的CNE2细胞G0／G1期比例明显增高,S期、G0／M期比例下降。苦参碱能诱导CNE2细胞的凋亡,其发生率随着药物浓度的增加而增加。结论：苦参碱能抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖,它通过阻滞细胞周期和诱导凋亡来抑制CNE2的增殖。     

蜈蚣提取液对裸鼠移植肝癌治疗作用研究

目的探讨蜈蚣提取液体内对肝癌的治疗作用及其机制。方法建立裸鼠Bel-7404人异位肝癌移植模型,以蜈蚣提取液予以灌服,观察肿瘤生长、裸鼠胸腺与脾质量及肝癌转移情况。结果裸鼠Bel-7404人异位肝癌移植模型成功率100%。蜈蚣提取液对裸鼠Bel-7404移植瘤有明显抑制作用,在移植后第31天,对照组的肿瘤体积为(1 187.5±117.4)mm3,治疗组为(506.1±65.7)mm3;裸鼠处死后,对照组的肿瘤质量为(1 059±125.2)mg,治疗组为(647±122.89)mg,抑制率达38.91%。治疗组胸腺指数为(2.15±0.43)%,脾指数为(10.63±3.7)%,对照组胸腺指数(0.81±0.27)%,脾指数为(7.90±2.58)%,2组比较有显著差异性。结论蜈蚣提取液能抑制裸鼠Bel-7404移植瘤的生长,机制为其能提高荷瘤裸鼠的胸腺指数及脾指数,具有增强裸鼠免疫功能作用。     

绞股蓝总皂苷对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响

目的:探讨绞股蓝总皂苷(gypenosides,Gyp)对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响.方法:采用MTT法检测Gyp对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的增殖抑制作用;单细胞凝胶电泳法检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402 DNA损伤的影响;RT-PCR技术从分子水平上检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用机制.结果:100 ～400 μg· mL-1的Gyp对人肝癌细胞Bel-7402增殖生长有抑制作用,Gyp(182 μg·mL-1)作用4,8,12,16,24 h后,单细胞凝胶电泳观测到DNA损伤,12h时DNA损伤最大,达到(81.15±14.23)％,且有时间依赖性;Gyp组细胞caspase-8大量表达,对照组细胞无表达.结论:Gyp能抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖且促进其凋亡,其作用机制与DNA损伤以及caspase-8的大量表达有关.     

动力素kinectin基因mRNA在7404肝癌细胞株的表达及意义

目的研究动力素作为肝癌相关抗原其在肝癌细胞株中的表达情况,评价其作为分子肿瘤标记以及肿瘤免疫治疗特异性靶位的可能性。方法运用RT-PCR技术检测国内建株的肝癌细胞株BEL-7404 kinectin基因(D2剪接区)mR-NA的表达,并与肝癌组织、相应癌旁肝组织、正常肝组织比较。结果肝癌细胞株BEL-7404中kinectin基因(D2选择剪接区)呈强阳性表达,肝癌组织中也呈较强的阳性表达,癌旁肝组织则表达呈弱阳性。结论 kinectin基因可作为肝癌诊断的辅助分子标记,并具有作为肝癌免疫治疗特异性靶位的潜在价值。     

表没食子儿茶素没食子酸酯逆转多药耐药肝癌细胞株基因表达谱变化

目的:采用基因芯片技术获取表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)逆转肝癌多药耐药(multi-drug resistance,MDR)细胞前后的基因表达谱变化,探讨EGCG的可能耐药逆转作用机制。方法:cDNA微阵列分析EGCG作用肝癌MDR细胞株BEL7404/ADM前后的基因表达谱差异,Western Blot法检测细胞Cyclin G1蛋白表达变化以验证基因芯片分析的结果。结果:相对BEL7404/ADM细胞组,EGCG作用后细胞双荧光通路显著差异基因210个,上调表达38个,下调表达172个。与EGCG可能逆转耐药相关的基因有ABCB10(MDR/TAP),TOP2A,TOP2B,CCNG1上调,ABCB1,MVP,ARHD,HDAC5,GSS,GSTPI,HSPA1B,HSPB7,CDKN1A,RAB11B,RAB9P40下调等。Cyclin G1蛋白表达增加,符合cDNA微阵列基因水平变化。结论:EGCG多基因、多环节、多途径改变参与逆转ADM诱导的肝癌MDR,Western blot与基因芯片分析结果一致。     

白藜芦醇抗肝癌Bel-7402及调节荷瘤鼠IL-8分泌机制的研究

目的：探讨白藜芦醇离体与在体对肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及可能的效应机制。方法：MTT比色法测定Bel-7402细胞生长抑制率,Western blotting测定Bel-7402细胞Bcl-2水平,流式细胞术分析细胞周期,流式细胞染色检测细胞内IL-8,半定量RT-PCR与双抗体夹心ELISA法检测荷瘤小鼠IL-8 mRNA表达与含量。结果：白藜芦醇可以时间-剂量依赖性抑制Bel-7402细胞增殖,诱导凋亡,影响细胞周期分布。此外,白藜芦醇还能剂量依赖性抑制荷瘤小鼠细胞内IL-8产生及其mRNA与蛋白含量。结论：白藜芦醇离体与在体均能发挥有效的抗肝癌生物学活性和免疫调节作用。     

Mechanisms of pseudolaric acid B-induced apoptosis in Bel-7402 cell lines

Previous studies have shown that pseudolaric acid B (PB) would cause apoptosis in human tumor cell lines. However, the mechanisms of PB induced apoptosis are still unclear. In the present study, the mechanisms of PB induced apoptosis in the human hepatocellular carcinoma Bel-7402 cell line were investigated by measuring cell viability, rate of apoptosis, cell cycle, detecting DNA fragmentation, and measuring caspase-3 activation. The results indicated that PB inhibited Bel-7402 cell viability and induced cell death by causing DNA fragmentation, up regulating the early and late apoptotic rates, activating caspase-3 protein, and detaining the cell cycle in the G2/M phases. Additionally, PB-induced apoptosis was a dose- and time-dependent manner. These observations suggest that PB-induced apoptosis occurs through a caspase-dependent pathway and detains the cell cycle in the G2/M phase.     

蛇葡萄素的血管生成抑制作用

目的:探讨蛇葡萄素对内皮细胞及肿瘤细胞的生长及其血管生成的影响。方法:体外用MTT法对牛主动脉内皮细胞进行增殖抑制实验;用ELISA法、免疫组化染色法以及流式细胞仪观察蛇葡萄素对人肝癌细胞Bel-7402分泌VEGF、bFGF的抑制作用;体内观察蛇葡萄素对人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的抑制作用。结果:蛇葡萄素对牛主动脉内皮细胞的增殖在6.4~51.2μg/m l呈现浓度依赖性抑制作用,IC50=22.0±4.0μg/m l。ELISA法测定结果显示,12.8μg/m l、25.6μg/m l、38.4μg/m l蛇葡萄素对肝癌Bel-7402细胞分泌VEGF的抑制率分别为14.2%、40.0%及49.6%。免疫组化染色结果显示,12.8μg/m l以上的蛇葡萄素能使细胞体积缩小,分泌VEGF、bFGF明显减少。流式细胞仪检测VEGF、bFGF结果,25.6μg/m l及38.4μg/m l蛇葡萄素对VGEF的抑制率分别为32.2%及57.4%,对bFGF的抑制率分别为54.9%及62.6%。蛇葡萄素浓度为100、150、200 mg/kg时对人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的抑制率分别可达24.3%、41.4%及45.7%。结论:蛇葡萄素在体外能有效抑制内皮细胞增殖及人肝癌Bel-7402细胞分泌VEGF和bFGF,具有抑制血管生成的作用;体内能有效抑制人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的生长,提示蛇葡萄素也许可作为一个肿瘤血管生成抑制剂用于肿瘤防治。     

余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡机制的研究

目的:探讨余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404产生凋亡的机制。方法:采用PI和Hoechst33342双染色法流式检测对人肝癌细胞株BEL-7404各周期的影响;细胞荧光免疫染色法和Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果:PI和Hoechst33342双染色法分析结果表明,余甘子叶化学成分没食子酸作用BEL-7404细胞72 h后,G2/M期细胞数增多,呈现细胞阻滞现象,并伴有大量的细胞凋亡。荧光免疫染色显示,药物作用人肝癌细胞株BEL-7404 72 h后Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达则降低。Western blot法实验亦显示Bax蛋白表达升高。结论:余甘子叶化学成分没食子酸能阻滞G2/M期细胞,并通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase,最终导致细胞死亡,可能是其诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡的分子机制之一。     

苦参碱对肝癌化疗乙肝病毒活动状态的影响

目的:研究肝癌化疗对乙肝活动状态的影响及苦参碱的作用。方法:检测89例肝癌患者的血清乙型肝炎病毒标记物及其HBV DNA定量,分为两组,均采用GP方案(吉西他滨+顺铂)化疗,单纯化疗者42例,联合苦参碱者47例,化疗期间、化疗后8周监测HBV DNA及标志物、肝功能。结果:化疗后HBV DNA量较化疗前增加(P<0.01),乙肝病毒再激活与肝炎活动相关,联用苦参碱可减轻肝功能损害,与单纯化疗组相比,差异有显著性,但对降低血清HBVDNA载量作用不明显。结论:肝癌化疗可引起乙肝病毒再激活,并导致肝炎活动,苦参碱能保护肝细胞,改善肝功能,对乙肝病毒再激活引起的肝损害有保护作用,但抗病毒作用不明显。