MAGE-3抗原肽致敏DC疫苗抗膀胱癌细胞的体外实验

目的探讨黑色素瘤MAGE-3抗原肽致敏的树突状细胞(DC)疫苗体外抗膀胱癌细胞增殖作用及其分子机制。方法采用Ficoll法从HLA-A2型外周血中分离单核细胞,细胞因子GM-CSF和白细胞介素4(IL-4) 诱导扩增DC细胞后经MAGE-3抗原肽致敏,致敏DC细胞和同型T淋巴细胞共培养法诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。MTT法检测抗原肽致敏DC对T淋巴细胞增殖的影响,CTL对靶细胞BIU-87的杀伤作用。采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡和凋亡相关蛋白变化。结果MAGE-3抗原肽致敏的DC对T淋巴细胞增殖率具有明显提高作用,高于无关抗原致敏DC及未致敏DC。经MAGE-3九肽冲击的DC可有效诱导对MAGE-3阳性细胞BIU-87杀伤的CTL活性,而无关抗原肽及未经抗原肽致敏的DC则不具备其杀伤能力。结论MAGE-3九肽致敏DC能显著促进T淋巴细胞增殖并诱导有效杀伤靶细胞的CTL作用。     

单纯IgG型冷凝集素致聚凝胺配血不合一例

患者 ,男 ,6 0岁。因直肠癌手术申请输血 40 0 ml。定型 :患者与献血员两者 ABO正、反定型一致 ,均为 A型 ,Rh(D)阳性。交叉配血 :1盐水法 :主次侧均未见凝集。 2聚凝胺法 :(室温 15℃左右 ,以下同 ) :主侧 ;次侧 。上述所有凝集管置 37℃水浴 5 m in后 ,凝集均消失。抗体筛选 :1患者血清与自身红细胞 O型谱细胞、供者红细胞同时分别作聚凝胺法 ,抗人球法配合试验 ,结果为 :聚凝胺法室温显示 ,37℃水浴5 min后凝集消失 ;抗人球法则不显示凝集。 2供者血清与 O型谱细胞、供者红细胞同时分别作聚凝胺法、抗人球法配合试验 ,结果均未出…     

抗卵巢癌细胞膜抗体对卵巢癌细胞体外细胞毒性试验及荷瘤小鼠的体内聚集性的实验研究

目的：探讨抗卵巢癌细胞膜抗体作为放射免疫治疗载体的可能性,及对靶细胞体外裸鼠体内杀伤的相对特异性。方法：采用补体介导细胞毒性试验(MTT法)测定抗卵巢癌细胞膜抗体对靶、非靶细胞比毒性;建立BALB／C—mu裸鼠荷人卵巢癌模型,用SPECT显像及病理检查分析^131I标记抗卵巢癌细胞膜抗体在荷人卵巢癌裸鼠的聚集性。结果：抗卵巢癌细胞膜纯化抗体比抗血清对卵巢癌靶细胞显示了更强的细胞毒作用,并且都显示了浓度梯度依赖性。抗卵巢癌细胞膜抗体对靶、非靶细胞比毒性显示了相对特异性,对卵巢癌细胞杀伤率高于非靶细胞(宫颈癌、肝癌、胃癌、O型白细胞)。并且呈时间依赖关系。^131I标记抗卵巢癌细胞膜抗体对荷人卵巢癌裸鼠腹腔注射3d后,肿瘤区即有明显聚集,一直持续至第8天。注射后第8天,行病理检查,肉眼见有局部坏死淤血区;镜下见癌区组织大片状坏死,坏死区可见淋巴细胞浸润。结论：抗卵巢癌细胞膜抗体对体内、体外卵巢癌细胞有相对特异性靶向性,具有作为放射免疫治疗载体的能力。     

抗氧化剂对脐血自然杀伤细胞活性及化学发光的影响

目的:探讨褪黑素,亚硒酸钠,N-乙酰半胱氨酸(NAC)及槲皮素对脐血自然杀伤细胞(NK)活性及化学发光的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)进行NK活性测定;化学发光法进行NK细胞杀伤靶细胞过程中发光强度(CL)的测定.结果:褪黑素1～100μmol/L组,亚硒酸钠0.43～6.96μmol/L组可明显增强脐血单个核细胞对K562细胞的杀伤作用;褪黑素10μmol/L组,亚硒酸钠0.87～3.48μmol/L组,槲皮素6.25μmol/L组可明显增强脐血单个核细胞杀伤K562细胞过程中化学CL.褪黑素,亚硒酸钠,NAC及槲皮素等4种抗氧化剂均使化学发光时间延迟,褪黑素组、槲皮素组出现明显的双峰.结论:抗氧化剂对脐血NK细胞具有免疫调控作用,可能与新生儿出生时存在的氧应激状态有关.     

致敏红细胞Rh血型系统的六种鉴定方法比较

目的:探讨红细胞上的致敏抗体对各种Rh血型系统检测方法的影响.方法:105例新生儿溶血病患儿红细胞被分别用抗球蛋白法、凝聚胺法、盐水法、微柱凝胶法(Rh血型系统测定型)以及抗血清加微柱凝胶法、盐水法加微柱凝胶法(IgG型)进行Rh血型系统检测,同时在45℃抗体释放后再检测.结果:72例直接抗人球蛋白试验阴性患儿的Rh系统血型69例6种方法所获结果一致,3例结果不一致;33例直接抗人球蛋白试验阳性患儿的Rh系统血型21例结果不一致.45℃抗体释放后测定的结果一致,盐水法和微柱凝胶法抗体释放前后的结果一致.结论:红细胞上的致敏抗体达到一定数量可影响抗球蛋白法、凝聚胺法、抗血清加微柱凝胶法和盐水法加微柱凝胶法,而盐水法和微柱凝胶法则影响不大,是一种较好的检测方法.     

老年糖尿病患者血清sIL—2R水平和T细胞亚群的变化

分别采用抗致敏的红细胞花环法和双抗体夹心法对７０例老年２型糖尿病患者血Ｔ细胞亚群和可溶性白介素２受体进行了测定。发现患者Ｔ细胞亚群,ＣＤ４,ＣＤ４／ＣＤ８明显降低,ＣＤ８明显升高,与对照组比较Ｐ〈０．０１,而ｓＩＬ－２Ｒ水平与对照组比较Ｐ〈０．０１且与Ｔ细胞亚群ＣＤ４,ＣＤ４／ＣＤ８成负相关,与ＣＤ８成正相关;     

抗人H型红细胞单克隆杂交瘤株的建立

SRBC-A_2单克隆杂交细胞株是用O型人红细胞上的H抗原免疫BALB/C小鼠,取脾脏的B淋巴细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合而形成单克隆细胞,经过7次有限稀释,取得此细胞株。该株分泌抗H抗体,与O型红细胞发生特异性凝集,与AB型发生极微弱凝集,与Oh(孟买型)不发生凝集反应。     

独特型瘤苗诱导免疫细胞对卵巢癌作用的体外实验研究

目的：研究卵巢癌抗独特型抗体诱导免疫效应细胞对卵巢癌的作用，探讨抗独特型抗体的免疫学特性。方法：用卵巢癌抗独特型抗体６Ｂ１１免疫杂交一代小鼠ＢＣＦ１，免疫部位为皮下多点，共免疫３次，间隔３周，对照组用正常鼠ＩｇＧ进行免疫，方法同上。于末次免疫后７天处死小鼠，取脾脏淋巴细胞作为效应细胞，与靶细胞ＳＫＯＶ３（卵巢浆乳癌细胞系）以不同比例混合，体外培养，观察效靶细胞的相互作用，用单盲法记数靶细胞活死比。结果：（１）培养１２小时后，效应细胞向靶细胞移动，２４小时后形成以靶细胞为中心的花环，４８～７２小时后形成以靶细胞为中心的细胞团，靶细胞灰暗，部分细胞内可见颗粒状物质；（２）靶细胞在培养２４、４８、７２小时的活死比明显低于对照组，效靶比为１００∶１至２５∶１时，靶细胞活死比最低。结论：６Ｂ１１免疫小鼠的脾淋巴细胞对ＳＫＯＶ３有特异性趋化和杀伤作用，作为免疫原能够诱导抗卵巢癌细胞免疫反应。     

IgM＋IgG型抗-E引起新生儿溶血病1例

目的对出生1．5d有贫血和黄疸症状的新生儿进行血型血清学试验,为临床进一步的诊断、治疗提供依据。方法对患儿进行ABO、Rh血型鉴定、红细胞直接抗人球蛋白试验、血清抗体特异性鉴定、红细胞抗体放散试验;对患儿母亲进行ABO、Rh血型鉴定、血清抗体特异性及效价测定。结果患儿ABO血型为O型,Rh表型为DccEE,红细胞直接抗人球蛋白试验凝集强度4＋,血清和红细胞放散液中均检出IgG抗-E抗体;母亲ABO血型为O型,Rh表型为DCCee,血清中检出IgM和IgG混合型抗-E抗体。其中IgM抗-E的效价为32,IgG抗-E的效价为128。结论该患儿和母亲ABO血型相同,但有2个Rh抗原不同;母亲血清中检出的高效价抗-E抗体和患儿血清及红细胞放散液中检出的抗体特异性一致,该患儿可确诊为免疫性抗-E抗体引起的新生儿溶血病。     

原发性肝细胞癌患者外用血T细胞亚群、自然杀伤细胞、抗体依赖细胞毒效应改变及其临床意义

作者应用单克隆抗体荧光标记流式细胞仪分析系统、微量脱氢酶释放法对121例原发性肝细胞癌(HCC)病人外周血T细胞亚群、自然杀伤细胞(NK)、抗体依赖细胞毒(ADCC)活性、淋巴细胞转化率和花环形成率进行了测定,HCC病人T细胞亚群有明显变化,Th细胞减少和Ts细胞增加。NK、ADCC活性     

新生豚鼠胸腺T、B淋巴细胞、吞噬细胞的定量与动态研究

采用木瓜蛋白酶处理的兔红细胞花环形成试验和兔抗豚鼠免疫球蛋白标记的免疫微球花环形成试验及乳胶颗粒吞噬试验分别测定了2～4用龄豚鼠胸腺的T淋巴细胞、B淋巴细胞和吞噬细胞。结果显出:T淋巴细胞和B淋巴细胞分别占胸腺细胞的69～78％和0.7～2.6％。胸腺吞噬细胞含量甚少。胸腺T、B淋巴细胞总数随动物周龄、胸腺重量的增加而增加。第2～3周龄平均每日增加T细胞4029万、B细胞14万;第3～4周龄平均每日增加T细胞4986万、B细胞71万。第3～4周龄比第2～3周龄动物平均每日多增加T、B淋巴细胞各57万。     

肺癌可溶性抗原致敏的DC诱导CTL特异性杀伤肺癌细胞的实验研究

目的 通过对负载人肺癌GLC-82细胞可溶性抗原的树突状细胞（DC）体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）对肺癌细胞的杀伤研究，为以DC为基础的肺癌免疫瘤苗的临床应用提供一定的实验依据。方法 通过用3MKCl提取法和弱酸洗脱法获得人肺腺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽，用GLC-82细胞抗原多肽冲击致敏从人外周血单核细胞（PBMC）中用GM-CSF、IL-4和TNF—α体外诱导扩增并经鉴定的DC；利用负载GLC～82细胞抗原多肽的DC，刺激同种异体外周血T淋巴细胞活化增殖，诱导产生具有识别肺癌细胞抗原的特异性CTL；进一步探讨该CTL对GLC-82，肺癌CALU-6和人红白血病K562细胞的体外杀伤效应。结果 人PBMC体外经7d诱导出的DC，经光镜、电镜、免疫组化证实具有典型的树突状细胞特性；经GLC-82抗原致敏的DC诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CTL，诱导激活的CTL与靶细胞共育时镜下发现CTL靠近并聚集在肿瘤细胞周围，致使肿瘤细胞发生凋亡和坏死。结论肺癌可溶性蛋白抗原能活化致敏DC，无需明确肿瘤特异抗原，获取方法简便可行；联合应用GM—CSF、IL-4和TNF—α诱导人PBMC中的单核细胞，能诱导出功能较强的DC；致敏DC能强烈刺激初始型同种异体T淋巴细胞增殖产生CD8^＋表达增加的CTL;激活的CTL对肺癌靶细胞发挥高效而特异的细胞毒效应，对非肺组织瘤靶细胞也具有非特异性杀伤效应。     

人参皂苷 Rh2抗白血病多药耐药细胞 K562/VCR作用研究

目的 通过观察人参皂苷 Rh2对人白血病多药耐药 (MDR) 细胞 K562/VCR 生长、凋亡的作用和逆转耐药的情况,探索该药在抗人白血病 MDR 方面的应用价值。方法 将人参皂苷Rh2与 K562、K562/VCR 细胞共培养 48 h 后采用 MTT法分析其对细胞生长的抑制率;将其与 K562/VCR 细胞于 37 ℃ 孵育 30 min 后,采用 Annexin V 和 PI 双染法在流式细胞仪上检测细胞凋亡情况;并观察其对 K562/VCR 细胞摄取柔红霉素 (DNR) 能力及细胞表面 P-糖蛋白 (P-gp) 表达的影响;在 DNR 与 K562/VCR 培养体系中加入不同质量浓度人参皂苷Rh2,孵育 48 h 后观察人参皂苷Rh2对 K562/VCR细胞耐药的逆转情况。结果 人参皂苷Rh2 可明显抑制 K562 和 K562/VCR 细胞的生长,并呈量效关系,人参皂苷Rh2对 K562 和 K562/VCR 的半数抑制浓度 (IC50) 分别为44.5、59.4 μg/mL。K562/VCR 经人参皂苷Rh2 在 37 ℃ 作用 30 min 后,细胞的凋亡明显增加,随人参皂苷Rh2质量浓度的增加,凋亡细胞的比例明显增加［人参皂苷 Rh2 300 μg/mL,Annexin V+ 细胞 (51.5±6.9)%］。K562 细胞经长春新碱 (VCR) 诱导耐药后,P-gp 表达率明显提高 (从 4.28% 到 93.80%),DNR 摄取率减少,25 μg/mL 以上质量浓度的人参皂苷Rh2即可明显提高 K562/VCR 对 DNR 的摄取,但 P-gp 的表达无明显改变。同时,它可明显提高 DNR 对 K562/VCR 的杀伤率,50 μg/mL 人参皂苷 Rh2 可使 K562/VCR 对 DNR 的敏感性提高到原来的 6.30 倍。 结论 人参皂苷 Rh2 能抑制 K562/VCR 细胞生长,诱导其凋亡,还可以逆转 K562/VCR 的耐药,是一种具有广阔开发前景的抗白血病药物。     

D-氨基酸氧化酶/D-丙氨酸系统杀伤K562e细胞的作用机制探讨

目的:探讨D-氨基酸氧化酶( DAAO)/D-丙氨酸(D-Ala)系统用作自杀基因治疗白血病的作用机制. 方法:[ HT5"SS〗以D-Ala杀伤稳定表达DAAO和绿荧光蛋白(GFP)的高致瘤性K562e单克隆细胞K DfGd、KDfGC,应用MTT法检测细胞存活率,并用酚红氧化法测定培养上清H2O 2和Lowry法测定细胞蛋白数量,流式细胞仪测定细胞GFP的荧光强度.结果:在25 mmol/L D-Ala作用下24 h即可完全杀死KDfGd细胞,当 D-Ala为20 mmol/L时延长作用时间至48 h,杀伤率由64％增加至96.8％,而D -Ala≤15 mmol/L时杀伤率增加不明显.低于20 mmol/L,D-Ala 对K562e几乎无杀伤作用.培养上清的H2O2变化与杀伤转基因细胞作用相一致.结论:DAAO/D-Ala系统可能是通过产生H2O2发挥杀伤转基因K562e白血病细胞的作用 .     

SLE血清中的淋巴细胞毒性因子(lymphocytotoxin)(LCT)

作者检查了48例 SLE 患者血清(109份血清)及20例正常人(20份血清)的淋巴细胞毒性因子、抗DNA 抗体、补体C_3与C_4成分。淋巴细胞毒性因子测定是按 Terasaki 法,以5名健康人之淋巴细胞为抗原(靶细胞),被杀伤的死细胞超过80%者为阳性。结果     

Western Blotting测定血清抗组蛋白亚成份抗体

近10年来,国外发现抗组蛋白抗体(AHA)与系统性红斑狼疮及药物狼疮等疾病有关。本文报告Western Blotting技术从分子水平测定抗组蛋白抗体亚成份的方法。一、材料和方法: 1.组蛋白抗原购自美国。 2.ELISA测定血清IgM和IgG AHA:以组蛋白抗原5mg/L100ul包板,血清作1:100倍稀释,每孔加100ul,辣根过氧化酶(HRP)标记IgM(IgG)行     

ABO血型反定型梯型微板法的探讨

目的建立梯型微板法ABO血型反定型检测方法。方法随机抽取A、B、O、AB型血样各10份,采用混合血样倍比稀释,确定凝集与非凝集灰区值,根据已确定的最佳条件和灰区值进行相关分析。结果结果重复性符合率100％,灵敏度可达到与试管法相同效价的检出能力,准确性达99．9％,脂血血样抗干扰试验一次判读正确率100％,溶血标本对结果判读无影响。结论梯形微板法能够很好地完成普通血样ABO反定型的检测,对弱凝集血样检测的灵敏度也很高。     

低离子/抗人球蛋白式微柱凝胶法测定O型孕妇产前血型IgG抗A(B)效价与分析

目的 探讨低离子/抗人球蛋白(LISS/Coombs)卡式微柱凝胶法(MOT)测定O型孕妇产前血型IgG抗A(B)效价的临床意义.方法 采用卡式MGT对配偶血型为非O型Rh(D)阳性的1154例O型Rh(D)阳性孕妇,进行产前血型IgG抗A(B)效价测定,并进行跟踪观察.结果 1154例孕妇中,血型IgG抗A(B)效价测定≥1:64者占72.36%(835/1154),其中母-婴血型O/AB(抗A)组、O/A组、O/B组和O/AB(抗B)组的IgG抗A(B)效价的阳性率分别为80.90%、72.48%、66.45%和65.73%,阳性率O/AB(抗A)组>O/a组>O/B组(P<0.05),O/AB(抗A)组>O/AB(抗B)组(P<0.05);25例发生溶血的新生儿母亲的血型IgG抗A(B)效价,产前最后一次测定效价均≥1:256.结论 卡式MGT动态检测O型孕妇产前血型IgG抗A(B)抗体效价,对预防新生儿母婴血型不合引起的溶血病有指导意义.     

抗人食管癌单克隆抗体和争光霉素A_6结合物的制备及其对食管癌细胞的细胞毒作用

研究目的探索食管癌导向化疗的途径研究设计用异双功能基试剂SPDP联接抗人食管癌单抗和争光霉素A_6,然后用MTT法测定该结合物对食管癌细胞的特异性细胞毒作用。研究单位新乡医学院基础医学部处理方法采用MTT法,通过测定细胞代谢活性来反映单抗—A_6结合物对食管癌细胞的特异性杀伤作用。靶细胞为食管癌细胞Eca8714,非靶细胞为宫颈癌细胞HL,设有结合物组和对照组(游离A_6)。结果结合物对食管癌细胞的杀伤率比游离争光霉素强10倍。0.1μM时即显示杀伤癌细胞活性。首次发现争光霉素A_6对宫颈癌细胞HL的杀伤率明显高于对食管癌细胞Eca8714的杀伤率。结论单抗和争光霉素A_6的结合物显示出较好的特异性细胞毒作用.为食管癌导向化疗迈出了有益的探索性的一步。     

人外周血E花环及EA_γ花环阳性细胞的酸性α醋酸萘酯酯酶染色类型

本文采用Gupta等介绍的EAγ花环形成法和酯酶染色双标记的方法对正常人外周血淋巴细胞ANAE颗粒类型与细胞表面标志的关系进行了初步探索。结果表明,用E花环分离的淋巴细胞(T细胞)中99.6％为ANAE阳性,EAγ阳性的T细胞中77％在ANAE染色上呈“分散颗粒型”,所以,“分散颗粒型”T细胞可以被认为主要代表Tr细胞。但是,EAγ~+细胞仍有23％呈“斑状颗粒型”,EAγ~-细胞也有8.3％呈“分散颗粒型”。因此,著者认为MAγ~+细胞和“分散颗粒型”细胞可能都不是均质的群体。