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1.
采用胎盼蓝染色法,3H-TdR掺入试验和流式细胞计数分析技术研究了c-mycmR-NA帽区反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞系增殖及其c-myc蛋白表达的影响,结果表明:c-myc反义寡脱氧核苷酸能抑制人乳腺癌MCF-7细胞系生长和增殖,这种抑制作用有明显的剂量依赖性,同时也能抑制MCF-7细胞c-myc蛋白的表达。此外,本文对c-myc基因调控细胞增殖及反义核苷酸的可能机制进行了探讨。 相似文献
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采用胎盼蓝染色法,^3H-TdR掺入试验和流式细胞计数分析技术研究了c-myc,mR-NA帽区反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞系增殖及其c-myc蛋白表达的影响,结果表明:c-myc反义寡脱氧核苷酸能抑制人乳腺癌MCF-7细胞系生长和增殖,这种抑制作用有明显的剂量依赖性,同时也能抑帛MCF-7细胞c-myc蛋白的表达。 相似文献
3.
反义c-myc寡脱氧核苷酸抑制血管平滑肌细胞的增殖、迁移和诱导其凋亡作用的研究首都医科大学电镜室马雅銮,王家宁,高天祥经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄发生中,平滑肌细胞的增殖、迁移及凋亡起很重要的作用。c-myc是各种有丝分裂原刺激后的早期反应基因。转... 相似文献
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目的研究反义N-myc基因转染后人神经母细胞瘤细胞在神经生长因子处理后的诱导分化情况,探讨N-myc在神经生长因子诱导分化中的意义。方法用基因重组技术构建表达反义N-myc的逆转录病毒载体。用TransfectamReagent等多种基因转染方法,转染已经基因转染恢复了神经生长因子受体表达的人神经母细胞瘤系,建成表达反义N-myc的转化细胞系。用神经生长因子处理转化细胞系,观察NGF是否能诱导分化。同时用TUNEL原位凋亡检测技术及超微结构技术研究表达反义N-myc的转化细胞系凋亡的情况。结果表达反义N-myc的转化细胞系经单链RNA探针杂交,证实其N-myc的表达明显降低。用神经生长因子处理这些转化细胞系,细胞出现明显的形态学分化。TUNEL技术及超微结构研究表明,经反义N-myc转染的细胞系细胞凋亡增多。结论反义N-myc基因转染能有效抑制N-myc的表达,进而促进神经生长因子诱导人神经母细胞瘤细胞的分化。反义N-myc基因转染能使神经母细胞瘤细胞凋亡增多。 相似文献
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反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制 总被引:2,自引:0,他引:2
研究两个反义核酸(18mer,21mer)对人白血病HL-60细胞中c-myc基因表达的抑制作用。用HL-60活细胞计数,RNA含量的RT-PCR测定和c-myc基因蛋白的免疫组化染色检查,结果:两个反义核苷酸都以抑制HL-60细胞的增殖,增殖抑制率为11-75%。反义核酸还抑制c-mycRNA和Myc蛋白的表达,而对c-myc基因正常表达的红白血病细胞K562的增殖和PHA刺激的人淋巴细胞的增殖 相似文献
6.
刘庭波 《福建医科大学学报》1999,33(4):464-464
c-myc基因是调控细胞增殖与分化的癌基因,在急性白血病细胞株及急性白血病、恶性淋巴瘤患者细胞中出现高表达,是影响这些恶性肿瘤发生、发展的重要基因之一。反义核酸治疗恶性肿瘤在技术上具有高效、简便、不需载体等特点,原理是根据碱基互补,将具有特异序列的反义寡核苷酸导入肿瘤细胞与靶基因上的相应部位结合,抑制和阻断相应基因的转录表达。 目的 应用针对c-myc基因的两个反义核酸15m er和18m er作用于急性白血病细胞株和原代细胞,研究反义核酸对白血病细胞的生长、增殖,c-myc m RNA 表达以及P65 c-myc蛋白表达率的改变,以及对细胞凋亡、分化方面的影响。 方法 采用锥虫蓝染色法测定细胞的拒染率,绘制细胞的生长曲线,用0.8% 甲基纤维素半固体培养法进行克隆形成试验;用流式细胞仪检测在反义核酸作用前后的P65 c-myc 蛋白及凋亡率;用RT-PCR 法检测c-mycm RNA 的表达相对水平;电镜观察凋亡细胞的超微结构;DNA 电泳分析凋亡片段;光镜下瑞特染色、NBT染色观察细胞分化水平,流式细胞仪检测分化抗原表达,同时RT-PCR检测分化细胞的m RNA 表达;MTT 法检测反义核酸与化疗药物对细胞联合作用后对 相似文献
7.
为研究硫代磷酸修饰的反义cmyc寡脱氧核苷酸(ODN)对血管平滑肌细胞(SMC)的增殖、迁移及凋亡的影响。应用脂质体分别介导硫代磷酸修饰的反义cmycODN、正义cmycODN和错配cmycODN进入体外培养的大鼠主动脉SMC内,观察其对SMC细胞cmyc表达、增殖、迁移和凋亡的影响。结果:①反义ODN降低cmyc蛋白的表达。②反义cmycODN抑制SMC增殖、迁移,并诱导SMC凋亡。而正义ODN及错配ODN则无上述作用。结果提示:应用反义技术抑制cmyc表达在防治经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)术后再狭窄中具有潜在作用。 相似文献
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目的:探讨在体外c-myc反义核酸是否可通过阻断人脑胶质瘤细胞中c-myc基因的表达而抑制细胞增殖并诱导分化.方法:人工合成与c-mycmRNA起始码及其后四个密码子互补的寡聚脱氧核苷酸(简称反义核酸)片段,用它处理培养的BT325细胞,观察它对细胞增殖的影响.同时用免疫细胞化学方法检测细胞中Myc蛋白的水平以及能反映胶质瘤细胞分化的S-100和GFAP两种蛋白的水平,分析这些指标的变化.结果:发现4umol/L的c-myc反义核酸明显抑制BT325细胞的增殖和Myc蛋白的合成,且后者发生在加入反义核酸后1h,并持续24h以上,而细胞增殖受抑制要到第5日才明显.从第2日到第5日细胞中S-100和GFAP染色明显加深,反映细胞有分化趋势.用同样长度的无关序列寡聚脱氧核苷酸作对照,则未见上述变化,表明c-myc反义核酸的作用是序列特异性的.结论:c-myc反义核酸可特异地抑制BT325细胞中Myc蛋白的合成和细胞增殖,并能诱导其分化. 相似文献
9.
目的:研究反义癌基因与抑癌基因联合抑制肝癌细胞生长的效果。方法:利用基因重组方法构建携带p16基因、p53基因的融合表达载体(pcDNA16 ̄53),利用基因合成仪体外合成N-ras、C-myc反义寡核苷酸、并将N-ras,C-myc反义寡核苷酸与pcDNA16 ̄53融合表达载体转染到人肝癌细胞系SMMC7721细胞中,观察肝癌细胞生长情况及软琼脂集落形成能力。结果:联合治疗组肝癌细胞增殖速度最慢 相似文献
10.
C—myc反义寡聚脱氧核苷酸抑制人脑胶质瘤细胞系BT325Myc蛋… 总被引:1,自引:0,他引:1
探讨在体外c-myc反义核酸是否可通过阻断人脑胶质瘤细胞中c-myc基因的表达而抑制细胞增殖并诱导分化,方法:人工合成与c-mycmRNA起始码及其后四个密码子互补的寡聚脱氧核苷酸(简称反义核酸)片段,用它处理培养的BT325细胞,观察它以细胞增殖的影响,同时用免疫细胞化学方法检测细胞中Myc蛋白的水平以及能反映胶质瘤细胞分化的S-100和GFAP两种蛋白的水平,分析这些指标的变化,结果:发现4μ 相似文献
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腺病毒介导的反义c-myc选择性诱导肿瘤细胞G1期阻滞和凋亡的研究 总被引:9,自引:0,他引:9
目的 构建介导反义c-myc的重组腺病毒,研究其对人肺腺癌细胞的细胞周期,增殖和凋亡的影响。方法 将c-myc基因反向克隆于穿梭质粒载体pAdCMV中,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组产生编码反义c-myc的重组腺病毒。体外观察和检测重组腺病毒感染人肺腺癌细胞系GLC-82和SPC-A-1以及人胚肺二倍体细胞2BS后,细胞周期的改变,凋亡的发生和相关基因表达的变化;体内观察对肿瘤 相似文献
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目的探讨c-myc的反义寡核苷酸抑制培养大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法 贴壁法培养血 管平滑肌细胞,将不同浓度的反义及正义寡核苷酸加入培养液,观察对血管平滑肌细胞增殖的作用。结果5μg/ml c-myc的反义寡核苷酸加入培养液后第 5、7天抑制血管平滑肌细胞增殖,15μg/ml c-myc的反义寡核苷酸加入培养液 后第3、5、7天抑制血管平滑肌细胞增殖。各浓度c-myc的正义寡核苷酸未发现其抑制血管平滑肌细胞增殖。结论 c-myc的反义寡核苷酸抑制培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。 相似文献
13.
陈琳 《福建医科大学学报》1999,33(4):465-465
原癌基因c-myc参与调控细胞的增殖、分化和凋亡过程,在白血病细胞株HL-60 中有很高的表达。c-myc通过扩增活化或基因重排而异常激活,在白血病的发生和发展中可能起着重要的作用。 目的 通过脂质体介导c-myc反义核酸转染HL-60 细胞,观察其抑制细胞生长增殖、促进分化、诱导凋亡,降低c-mycm RNA 和蛋白表达水平,探讨反义核酸的抗肿瘤作用机制。 方法 HL-60 细胞在37℃、5%CO2 条件下,培养于10% 小牛血清1640 培养液中,细胞接种密度为4×107/L,反义核酸终浓度为1μm ol/L,反义核酸与脂质体比例为1 μm ol(6.5 μg)∶10 μg,无血清转染6 h。实验同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体无义组等对照组。连续培养4 天。通过锥虫蓝拒染实验测定细胞的生长能力;NBT还原实验和瑞特-姬姆萨染色测定细胞的分化能力;免疫细胞化学染色检测c-myc蛋白表达;RT-PCR法检测c-myc m RNA 水平;吖啶橙/溴化乙锭染色观察凋亡细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;DNA抽提及电泳观察凋亡细胞DNA降解片段的形成。 结果 脂质体转染c-myc反义核酸的作用:(1)抑制HL-60 相似文献
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目的:探讨利用表皮生长因子偶联牛血清白蛋白纳米载体介导c-erbB2反义寡脱氧核苷酸以增加人乳腺癌SK-BR3细胞对其的摄取.方法:采用超声乳化-化学交联及羧和反应制备EGF偶联白蛋白靶向纳米载体.99mTc通过乙酰双半胱氨酸标记于c-erbB2反义寡脱氧核苷酸,研究其稳定性,结合靶基因的特异性,并探讨人乳腺癌SK-BR3细胞对其的摄取及滞留.结果:EGF靶向纳米载体包载99mTc-乙酰双半胱氨酸-c-erbB2反义寡脱氧核苷酸组的摄取率及滞留率均高于正义寡脱氧核苷酸组和无义寡脱氧核苷酸组.同时99mTc-乙酰双半胱氨酸-c-erbB2反义寡脱氧核苷酸使用纳米载体荷载组的摄取率及滞留率均高于未使用纳米载体组,差异有统计学意义(P〈0.05).结论:EGF靶向纳米载体能够提高乳腺癌SK-BR3细胞对99mTc-乙酰双半胱氨酸-c-erbB2反义寡脱氧核苷酸的摄取和滞留,能达到更好的靶向作用. 相似文献
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目的 探讨c-myc的反义寡核苷酸抑制培养大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法 帖壁法培养血管平滑肌细胞,将不同浓度的反义正义寡核苷酸加入培养液,观察对血管平滑肌细胞增殖的作用。结果 5μm/ml c-myc的反义寡核苷酸加入培养液后第5、7天抑制血管平滑肌细胞增殖,15μg/ml c-myc的反义寡核苷酸加入培养液后第3、5、7天抵制血管平滑肌细胞增殖。各浓度c-myc的正义寡核苷酸未发现其抑制血 相似文献
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目的 研究反义N-myc基因转染后人神经母细胞瘤细胞在神经生长因子处理后的诱导分化情况,探讨N-myc在神经生长因子诱导分化中的意义。方法 用基因重组技术构建表达反义N-myc的逆转录病毒载体。用Transfectam Reagent等多种基因转染方法,转染已经基因转染恢复了神经生长因子受体表达的人神经母细胞瘤系,建成表达反义N-myc的转化细胞系。用神经生长因子处理转化细胞系,观察NGF是否能诱 相似文献
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了解重组RA538、反义c-myc腺病毒载体对正常细胞的影响。方法:采用形态学观察、MTT、RT-PCR等方法,对腺病毒介导RA538及反义c-myc基因对正常人胚肺成纤维细胞的影响进行研究。结果以Ad-LacZ进行组腺病毒转导效率检测发现腺病毒2BS细胞具有很高的转导效率,AdRA538、Ad-ASc-myc对正常人胚肺2BS细胞无生长抑制及凋亡诱导作用,同时Ad-RS538对2BS内源性c-m 相似文献
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针对C-mycmRNA第二外显子起始妈AUG及下游4个密码子设计合成了反义、正义及锚配寡核苷酸(ODNs)、并对合成的ODNs进行 硫代磷酸化修饰。在人肝癌细胞SMMC-7721培养体系中,对反义寡核苷酸(ASODN)抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现(1)与正义和错配ODNs相比较,反义C-mycODN有明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长的作用;(2)该生长抑制作用随ASODN剂量增加而增 相似文献
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舒拉明联合bcl-2基因反义寡核苷酸对前列腺癌细胞增殖的影响 总被引:2,自引:1,他引:1
[目的]探讨舒拉明联合bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸对前列腺癌细胞(LNCaP细胞)增殖的影响.[方法]采用3H-TdR掺入法观察舒拉明和反义寡脱氧核苷酸对LNCaP细胞增殖的影响,流式细胞荧光免疫法检测bcl-2基因表达,放射免疫分析法检测PSA表达.[结果]舒拉明和反义寡脱氧核苷酸单独作用LNCaP细胞后,细胞3H-TdR掺入率、bcl-2蛋白表达以及PSA水平明显低于对照组,呈现剂量依赖效应,二者联合应用抑制作用明显增强.[结论]舒拉明和bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸联合应用,可明显增强对前列腺癌细胞增殖的抑制,减少舒拉明用药剂量. 相似文献