HPV16E7蛋白在宫颈癌中的表达和意义

目的：探讨人乳头瘤病毒１６Ｅ７蛋白（ＨＰＶ１６Ｅ７）与宫颈癌间的关系。方法：采用免疫组化ＳＰ法对１５例正常宫颈组织、８０例宫颈鳞癌、１７例腺癌组织进行了研究。结果：①ＨＰＶ１６Ｅ７蛋白在宫颈癌中的表达明显高于正常宫颈组织,且在鳞癌中的表达明显高于腺癌;②ＨＰＶ１６Ｅ７蛋白表达与宫颈癌的临床分期成负相关,与组织学分级、淋巴结转移无关。结论：预防ＨＰＶ感染是防止宫颈癌发生的重要措施之一。     

宫颈癌及癌前病变中HPV16E6／E7的检测及其意义

To leam whether HPV16 E6/E7 genes correlate with cervical carcinoma and precancerous lesions. Methods Amplification and cloning of HPV16 E6/E7 genes were performed by PCR and molecular biological techniques for their sequences. Cervical cancer, CIN Ⅱ - Ⅲ and cervicitis were confirmed by pathologic detections. Results Detection rates of HPV16 E6/E7 in biopsies of cervical carcinoma, CIN Ⅱ - Ⅲ and cervicitis were individually 70%, 75% and 65%. Statistic results show that there is no difference among them in HPV16 E7 detection. Also ther is no difference between cervical cancer and CIN Ⅱ - Ⅲ in HPV16 E6 detection, however, both were higher detections than in cervicitis statistically. Conclusion HPV16 E6/E7 genes correlate with cervical carcinoma and precancerous lesions. E6 gene might especially function on occurrence of cervical carcinoma from precancerous lesions.     

两株宫颈癌细胞株中HPV16E6/E7蛋白的表达

目的 :探索及检测宫颈癌细胞株 Caski、 Si Ha细胞内 HPV1 6 (16型人乳头瘤病毒 ) E6 /E7蛋白含量 ,筛选宫颈癌基因治疗研究的合适细胞株。方法 :用间接免疫荧光染色及流式细胞术检测 Caski、 Si Ha宫颈癌细胞株中 HPV1 6 E6 、 HPV1 6E7蛋白含量 (荧光强度值 )。结果 :Caski细胞中 HPV1 6 E6 、 HPV1 6 E7蛋白含量分别为 :2 0 .72± 6 .35、 5 6 .80± 4 .30 ;Si Ha细胞中 HPV1 6 E6 、E7蛋白含量分别为 :1.77± 0 .75、 4 9.2 7± 8.0 6。 2细胞株间 HPV1 6 E7蛋白表达量无明显差异 (P>0 .0 5 )。结论 :Caski、Si Ha宫颈癌细胞株中 HPV1 6 E6 、E7蛋白的表达是不平行的。Caski细胞适用于以 HPV1 6 E6 ,HPV1 6 E7蛋白为观察对象的研究 ,Si Ha细胞可用于 HPV1 6 E7蛋白的研究 ,但不适宜用于以 HPV1 6 E6 蛋白为观察对象的研究。     

HPV16E6真核表达载体的构建及其在CaSki细胞中的表达及定位

目的:构建pEGFP-C2-HPV16E6真核表达载体,转染CaSki细胞,检测其在CaSki细胞中的表达。方法:用RT-PCR法从CaSki细胞中扩增出带有HindⅢ、XbaⅠ酶切位点的HPV16E6基因片段,将HPV16E6基因全长片段克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达载体pEGFP-C2上,通过脂质体将pEGFP-C2-HPV16E6转染入CaSki细胞。结果:pEGFP-C2-HPV16E6真核表达载体构建成功,转染CaSki细胞48h后经RT-PCR及Western-blot检测可见HPV16E6蛋白的高表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白主要在CaSki细胞核内表达。结论:成功构建了pEGFP-C2-HPV16E6真核表达载体,为进一步对HPV16E6的研究奠定了基础。     

新疆地区HPV16型变异体及E6、E7、LCR基因变异分析

目的 探讨新疆地区感染HPV16变异体谱系分布及E6、E7、LCR基因突变研究. 方法 对HPV16阳性的宫颈癌及癌前病变患者,提取基因组DNA,利用PCR扩增HPV16 DNA E6、E7基因及LCR区核苷酸片段,正反向测序.与HPV16基因序列分析比对,确定HPV16谱系分布,分析核苷酸突变位点. 结果 E6基因突变率为80.00％,主要突变位点为T350G(59.78％)和T178G(18.48％);E7突变率为54.78％,主要突变位点为A647G(33.33％)和T846C(26.98％);LCR突变率为23.48％,主要突变位点为C24T(74.07％)和C13T(18.52％).新疆维吾尔族妇女与汉族妇女之间比较,维吾尔族妇女T350G突变率(72.00％)显著高于汉族(45.24％),汉族妇女A647G(33.33％)、T846C(31.25％)、C24T(78.95％)三个突变率均显著高于维吾尔族(依次为20.00％、13.33％、62.50％),差异具有统计学意义.新疆汉族妇女中感染的HPV16主要为亚洲型,新疆维吾尔族妇女感染的HPV16主要为欧洲型. 结论 T350G突变可能是新疆维吾尔族妇女宫颈癌高发的原因之一,新疆汉族妇女中感染的HPV16型主要为亚洲型,新疆维吾尔族妇女感染的HPV16型主要为欧洲型.     

热休克蛋白70和Fas在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨热休克蛋白70（HSP70）和Fas在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及与临床病理特征的关系，以及HSP70和Fas在NSCLC组织中表达的相互关系。方法采用免疫组织化学SP法对46例NSCLC组织、10例正常肺组织进行免疫组织化学研究。结果NSCLC组织中HSP70的阳性表达率为80．43％（37／46）、正常肺组织巾无阳性表达；Fas在NSCLC组织中的阳性表达率为65．22％（30／46），正常肺组织中阳性表达率为100．00％。HSP70阳性表达在NSCLC的病理类型、TNM分期、细胞分化程度之间的差异均无统计学意义（P均〉0．05），在淋巴结有无转移之间的差异有统计学意义（P〈0．05）。Fas阳性表达在NSCLC的病理类型之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。在TNM分期、细胞分化程度、淋巴结转移之间的差异有统计学意义（P〈0．05或〈0．01）。HSP70与Fas在NSCLC组织中表达呈负相关（γ=-0．327，P〈0．05）。结论 在NSCLC组织中HSP70的高表达和Fas的低表达与肿瘤发生转移有关，HSP70和Fas可能是调控肿瘤细胞增殖及捅亡的重要基因，可以作为NSCLC的辅助诊断及判断预后的参考指标。联合检测这二项指标对肺癌的生物学行为、预后的判断有重要意义。     

叶酸与HPV16 E6/E7 mRNA表达在宫颈癌变中的交互作用

目的 探讨叶酸与人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6/E7 mRNA表达在宫颈癌变中的交互作用。方法 选取经病理学确诊的宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者64例、低度宫颈上皮内瘤样变(CIN1)患者55例、高度宫颈上皮内瘤样变(CIN2+)患者55例和正常宫颈(NC)者80例作为研究对象。采用微生物法测定血清叶酸和红细胞叶酸水平,应用real-time PCR法检测HPV16 E6/E7 mRNA表达水平。利用SPSS 16.0软件进行相关资料的χ²检验、方差分析、Welch检验、Kruskal-Wallis H检验、有序logistic回归和Spearman秩相关分析,应用相加模型进行交互作用分析。结果 随着宫颈癌变的进展,血清叶酸和红细胞叶酸水平均呈逐渐降低趋势(χ²=32.71,P<0.001; χ²=16.32,P<0.001),且血清叶酸和红细胞叶酸含量呈正相关(r=0.41,P<0.001);HPV16 E6/E7 mRNA表达水平随着宫颈癌变的进展呈逐渐升高趋势(χ²=30.11,P<0.001; χ²=38.99,P<0.001);红细胞叶酸含量与HPV16 E6/E7 mRNA表达量呈负相关(E6:r=-0.14,P=0.009;E7:r=-0.21,P=0.001),红细胞叶酸缺乏与HPV16 E6/E7mRNA高表达在CIN1、CIN2+和SCC组均存在正相加交互作用。结论 叶酸缺乏和HPV16 E6/E7 mRNA高表达均可增加宫颈癌及癌前病变发生的风险,两者在宫颈癌变进展中存在协同作用。     

自制组织芯片研究FHIT蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因蛋白在非小细胞肺癌(non-small-cell carCi-noma,NSCLC)中的表达及意义。方法应用组织芯片和免疫组织化学SP法检测60例非小细胞肺癌组织、20例正常肺组织基因蛋白的表达情况。结果 FHIT基因蛋白在NSCLC中的阳性表达率为55.00%(33/60),正常肺组织中阳性表达率为85.00%(17/20),FHIT基因蛋白表达与非小细胞肺癌的性别、组织类型、肺癌淋巴结转移、吸烟等有关(P<0.05)。结论 FHIT基因在非小细胞肺癌的发生发展过程中发挥了重大作用。FHIT基因可能是烟草致癌的分子靶。     

E6AP与HPV16、18蛋白表达的关系及其在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:探讨E6AP基因与HPV16、18蛋白表达的关系及其在宫颈癌发生、发展过程中的作用和意义。方法:在40例宫颈癌、10例CIN及10例正常宫颈组织中采用免疫组化检测宫颈癌组织中HPV-16、18型E6蛋白表达,RT-PCR技术检测E6AP基因的表达。结果:宫颈癌组织中HPV-16、18型E6蛋白的阳性表达明显高于CIN组织和正常宫颈组织,CIN组织中的阳性表达高于正常宫颈组织,差异均有统计学意义。E6蛋白阳性组织E6APmRNA的表达(0.0946±0.0715)明显高于阴性组织中的E6APmRNA表达(0.0062±0.0103),差异有统计学意义。E6AP基因在癌组织中表达高于CIN组织及正常宫颈组织(P<0.05),E6AP的表达水平随临床分期的进展而升高(P<0.05)。结论:E6AP基因的表达与高危型人乳头瘤病毒HPV16、18E6蛋白的表达具有密切的关系,参与了宫颈上皮癌变的发生、发展过程,与宫颈癌的发生、发展密切相关。     

女性肺癌组织中细胞周期蛋白E的表达

目的　研究细胞周期蛋白E在女性肺癌组织中的表达及意义。方法　采用链菌素亲生物素 -过氧化酶免疫组化方法。结果　女性肺癌组织中细胞周期素E的表达占 62 % ,癌旁正常组织中阳性率占 2 6 % ,二者相比有显著性差异 (P <0 0 5) ,同时鳞癌中细胞周期素E的阳性略要高于腺癌。但细胞周期素E的表达与临床分期及分化无关。结论　女性肺癌组织中存在细胞周期素E的过表达 ,提示细胞周期素E有可能是肺癌的潜在预报因子     

RNA干涉宫颈癌HPV16 E6基因的体内实验研究

目的：采用RNA干涉技术干扰宫颈癌HPV16E6基因转录，通过体内动物实验了解其抑制HPV16E6基因的效率。方法：设计合成针对HPV16E6的siRNA，借脂质体转染宫颈癌CaSki细胞，通过体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型，将E6siRNA直接注入动物腹腔或瘤体，通过移植瘤体积、重量的变化，肿瘤切片HPV16E6免疫组化，肿瘤细胞凋亡来了解RNA干涉的效果。结果：体内实验中无论腹腔还是瘤内注射HPV16E6siRNA，均明显抑制肿瘤的生长，HPV16E6蛋白表达明显受抑，肿瘤细胞凋亡增加，重复给药较单次给药效果更好。结论：宫颈癌裸鼠移植瘤实验表明RNA干涉HPV16E6基因的效果具有特异性和高效性。     

人乳头瘤病毒E5的研究进展

人乳头瘤病毒E5是一种转化作用的癌蛋白,是细胞膜或内膜整合蛋白.人乳头瘤病毒E5在感染的细胞中表达,主要在感染细胞克隆早期的繁殖、扩张中起重要作用.它干预生长因子受体,干扰周期蛋白和周期蛋白激酶,促进病毒癌基因转化,抑制抑癌基因表达,激活启动子促进病毒繁殖,并通过多种机制促使损伤细胞,通过细胞周期,使宿主细胞增殖、分化延缓、恶性化.近年的研究揭示了不同类型人乳头瘤病毒癌蛋白的功能差异,为人乳头瘤病毒诱导细胞永生化和致癌分子机制的研究提供了依据.该文将从E5对信号转导途径的影响,对细胞周期的影响,与癌基因和抑癌基因的相互作用,反式激活作用和变异几方面综述E5的研究进展.     

HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA和TCT检测在宫颈上皮内瘤变筛查中的应用

目的分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E 6/E 7 mRNA、第二代杂交捕获技术(hybrid Capture,HCⅡ)和薄层液基细胞学技术(thinprep cytology test,TCT)在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)筛查中的效能,选择适宜的分流筛查方案。方法采用病例-对照研究设计,80例CINⅠ~+的病例样本为HCⅡ或TCT筛查阳性并经组织学诊断;132例正常或炎症标本包括:组织学诊断正常或炎症的标本;HCⅡ阴性,TCT阴性且HPV E 6/E 7 mRNA均为阴性的标本。检测方法分别为:TCT进行细胞学检测、用b-DNA技术检测其HPV E 6/E 7 mRNA和用HCⅡ检测HPV DNA。结果在212例正常或宫颈炎和CIN标本中,HCⅡ的阳性率(37.74%)显著高于HPV E 6/E 7 mRNA的阳性率(25.94%)(P0.05);与TCT的阳性率(31.60%)比较差异无统计学意义(P0.05)。TCT的检出率高于HPV E 6/E 7mRNA的检出率,但差异无统计学意义(P0.05)。HPV E 6/E 7 mRNA与HCⅡ的符合率最高,Kappa为0.733,P=0.000;其次为HC II和TCT的符合率,Kappa为0.564,P=0.000;HPV E 6/E 7 mRNA与TCT的符合率,Kappa仅为0.519,P=0.000。并且,在HCⅡ检测结果阳性的67例CINⅠ~+样本中,HPV E 6/E 7 mRNA检测或TCT检测结果皆为阳性。而在HCⅡ阳性的13例正常或炎症样本中,HPVE 6/E 7 mRNA+或TCT结果阳性仅有7例(53.85%)。结论在CINⅠ~+分流筛查方案中,HPV E 6/E 7 mRNA和TCT共同作为HCⅡ阳性分流筛查的方法,可有效降低HCⅡ的假阳性。     

COX-2、HPV16-E6蛋白在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和人乳头瘤病毒16型E6蛋白(human papillomavirus-16 E6 protein,HPV16-E6)在宫颈癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法:采用免疫组化S-P法检测COX-2和HPV16-E6蛋白在宫颈癌上皮中的阳性表达情况。结果:COX-2与淋巴结转移、宫旁或脉管浸润及肌层浸润深度呈显著性相关(P<0.05)。HPV16-E6与年龄、病理类型、宫旁或脉管浸润呈显著性相关(P<0.05)。COX-2和HPV16-E6蛋白在宫颈癌中的阳性率呈正相关(P<0.01)。结论:COX-2和HPV16-E6在宫颈癌的侵袭转移中可能发挥协同作用。联合应用选择性COX-2抑制剂和HPV疫苗是宫颈癌防治中的一个新的有效策略。     

HPV E6/E7 mRNA P53及P16在宫颈脱落细胞中的表达与在ASCUS分层管理中的应用

目的检测人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA、P53及P16在宫颈脱落细胞中的表达,分析其在未能明确意义的不典型鳞状细胞(ASCUS)分层管理中的应用。方法选取2016年4月—2018年10月郑州大学附属肿瘤医院220例宫颈液基薄层细胞学(TCT)检查结果为ASCUS的患者,采用支链DNA技术和细胞涂片免疫组化法检测宫颈脱落细胞中HPV E6/E7 mRNA、P53及P16表达情况。结果宫颈炎、低度鳞状上皮内病变(LSIL)及高度鳞状上皮内病变(HSIL)患者中HPV E6/E7 mRNA、P53及P16阳性率比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。HPV E6/E7 mRNA与P53蛋白不相关(r=1.107,P=0.112),HPV E6/E7 mRNA与P16蛋白呈正相关(r=0.363,P=0.000),P53与P16蛋白呈正相关(r=0.477,P=0.000)。结论 HPV E6/E7 mRNA、P53及P16蛋白在ASCUS患者宫颈脱落细胞中的阳性率随宫颈病变程度增加而增加,检测三者可作为ASCUS分流管理的方法。