河豚毒素对钠通道的影响及其药理作用

河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)与石房蛤毒素(Saxitoxin)被称为海洋毒素的代表。TTX存在于河豚的睾丸、卵巢、卵、肝、脾、眼球和血液内。提取分离得到的TTX,在神经生理学、肌肉生理学、药理学等方面被广泛应用,是一种氨基全氢喹啉型化合物,其结构为一种笼形原醋酸类小分子非蛋白神经毒素,具有毒性强、活性和特异性高的生物学特性,是细胞膜上一种快速可逆的钠离子通道阻滞剂。20世纪初,日本学者田原良纯首先从河豚卵巢中提取了TTX,其相对分子量为319,分子式为C11H17N8O3,为无色、无味晶体。本文仅从细胞电生理学和药理学角度对TTX作一…     

河豚毒素小分子拮抗肽的设计与鉴定

目的用计算机辅助分子设计技术,设计河豚毒素(TTX)小分子拮抗肽,分别用免疫学方法和动物实验进行验证。方法利用计算机辅助分子设计技术,对TTX的空间结构进行了优化;用分子对接确定了TTX关键位点;用分子模建设计了3个能与TTX结合的小分子拮抗肽;分别用竞争ELISA进行免疫学筛选;用动物实验进行中和活性测定。结果成功设计了3个针对TTX的小分子拮抗肽并进行了多肽合成,用竞争ELISA筛选到针对TTX的小分子拮抗肽P2,拮抗肽P2浓度与TTX的结合能力成正比。动物实验中,针对TTX的小分子拮抗肽P2对注射2.5倍半数致死剂量TTX昆明小鼠的保护率为25%,起到了一定解毒效果。结论获得了能与TTX特异性结合的中和性小分子拮抗肽,TTX浓度达到4.05μg/mL(LD50的2.5倍),TTX拮抗肽P2对实验组小鼠的保护率为25%。     

河豚毒素的药用研究进展

河豚毒素（TTX）是在河豚鱼和其他海洋动物中发现的一种神经毒素。它是一种电压门控钠通道（VGSCs）阻滞剂,能够选择性地与VGSCs外前庭上的α-亚基结合,阻止钠离子进入通道,从而产生药理活性。作为典型的钠离子通道阻滞剂,TTX具有显著的镇痛作用。TTX能够选择性地阻断Na⁺通道而不影响其他离子通道,减少了常用抗心律失常药物引起不良反应的概率,降低了用药风险。此外,TTX在戒毒等方面亦有显著作用。因此,TTX具有很大的成药潜力。本文对河豚毒素的结构与性质、作用机制、药理活性和在研制剂进行综述,为其成药性评价研究和在药学领域的应用提供概要性支撑。     

河豚毒素在小鼠体内分布及代谢动力学

河豚毒素(TTX)是1个重要的海洋毒素,具有相当广泛的药理作用。药理学研究成果表明,TTX在阻滞可兴奋细胞膜上的钠离子通道、通透性方面有独特的功能,可强烈抑制神经兴奋传导。TTX中毒后麻痹症状出现在食后20min~3h,致死时间最短为1·5h,最长约8h[1~3]。由于TTX的LD50约为10μg·kg-1,且组织液的干扰作用,所以生物体内TTX含量测定、分布及药物动力学研究较困难。1985年颜松民等[4]用毒效法进行了小鼠TTX药物动力学研究,但详细的作用情况及分布特征尚不清楚。本文首次用同位素示踪法研究了小鼠静脉注射125I-TTX的代谢动力学,并对其在…     

河豚毒素对4种急性疼痛模型的镇痛效应比较研究

目的评估河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)对4种急性疼痛模型的镇痛效果,为其合理应用提供实验支持。方法动物肌内注射1 mg/kg盐酸吗啡或不同剂量TTX,TTX剂量为0、0.5、1、2、4、8μg/kg,给药后40 min,分别进行醋酸扭体实验、福尔马林刺激实验、热板实验和甩尾实验,记录动物疼痛反应或痛阈,计算疼痛抑制率;取动物血清,Elisa法测定花生四烯酸含量。结果盐酸吗啡对4种急性疼痛模型均有显著镇痛效应;TTX可减少醋酸诱导的小鼠扭体次数,降低福尔马林诱导的大鼠Ⅰ相和Ⅱ相疼痛反应,对两种疼痛模型的最高疼痛抑制率均达到80.00%以上;TTX在甩尾实验和热板实验中有一定的镇痛作用,最高疼痛抑制率分别为25.00%、19.79%。醋酸和福尔马林均能导致动物血清花生四烯酸升高,但是TTX对花生四烯酸无显著抑制作用。结论 TTX对醋酸和福尔马林诱导的化学性刺激疼痛模型具有良好的镇痛效果,而对热诱导(热板和热水)的物理性刺激疼痛模型的镇痛效果较弱,TTX可能通过阻断炎性介质介导的疼痛反应产生镇痛效果。     

极化心脏停搏液对离体成熟心肌细胞保护作用的研究

目的 观察Na+通道阻滞剂河豚毒素(TTX)极化心脏停搏液对离体成熟大鼠心肌细胞内[Ca2+]I的影响,探讨其对成熟心肌细胞的保护作用.方法 成年Wistar大鼠心脏,用酶解法分离成具有搏动性的单个成熟心室肌细胞悬液,随机分成基础组、STH2组和TTX组,STH2组和TTX组分别应用St.Thomas Ⅱ号停搏液和TTX停搏液处理,建立模拟缺血/再灌注损伤的停搏/复搏细胞模型,采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定各组细胞不同时期的[Ca2+]I.结果 TTX组和STH2组成熟心肌细胞复搏后[Ca2+]I均明显高于基础组,TTX组明显低于STH2组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 极化心脏停搏液较去极化心脏停搏液能减轻成熟心肌细胞Ca2+超载,对离体成熟心肌细胞有较好的保护作用.     

11-脱氧河豚毒素的结构表征与毒力测定研究

目的对制备获得的11-脱氧河豚毒素(11-deoxyTTX)纯品进行结构确证与毒性测定。方法采用HRMS、1 H NMR和13 C NMR对样品进行结构表征;同时进行11-deoxyTTX对小鼠的急性毒性试验。结果样品的HRMS图谱信息与11-deoxyTTX相对分子质量吻合;1 H NMR和13 C NMR谱揭示了两组数据,该数据与文献报道基本一致;测得11-deoxyTTX对小鼠的半数致死量(LD50)为(128.82±2.09)μg.kg-1。结论 11-deoxyTTX是以半缩醛型-内酯型的互变异构体存在,与河豚毒素(TTX)的结构差别在于TTX中C-11上的羟基被氢取代。11-deoxyTTX的毒性很强,但明显低于TTX的毒性,表明TTX中C-11上的羟基对阻滞钠离子进入钠通道也发挥了重要作用。     

极化心脏停搏液对离体成熟心肌细胞保护作用的研究

目的观察Na+通道阻滞剂河豚毒素(TTX)极化心脏停搏液对离体成熟大鼠心肌细胞内[Ca2+]i的影响,探讨其对成熟心肌细胞的保护作用。方法成年Wistar大鼠心脏,用酶解法分离成具有搏动性的单个成熟心室肌细胞悬液,随机分成基础组、STH2组和TTX组,STH2组和TTX组分别应用St.ThomasⅡ号停搏液和TTX停搏液处理,建立模拟缺血/再灌注损伤的停搏/复搏细胞模型,采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定各组细胞不同时期的[Ca2+]i。结果 TTX组和STH2组成熟心肌细胞复搏后[Ca2+]i均明显高于基础组,TTX组明显低于STH2组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论极化心脏停搏液较去极化心脏停搏液能减轻成熟心肌细胞Ca2+超载,对离体成熟心肌细胞有较好的保护作用。     

河豚毒素拮抗剂的实验研究

河豚中毒是鱼类中毒中最为严重的一类。已知毒性是由于所含河豚毒素(Tetrodotoxih, TTX)所致。TTX属于非蛋白质毒素,其结构稳定,经日晒、盐腌、炒、煮等处理均不能使之破坏。在整个东南亚及太平洋范围,尤其在日本因食河豚中毒的病死率可高达60％。TTX中毒的主要临床表现为知觉麻痹,运动障碍,头晕头痛,恶心     

河豚毒素处方前初步研究

目的 考察河豚毒素（TTX）在不同溶剂中的溶解性及稳定性，以及温度和pH值对稳定性的影响。方法 配制TTX不同介质的溶液，采用高效液相色谱法（HPLC）测定其在不同温度、不同pH缓冲液中的浓度，分析计算其溶解度及稳定性。结果 TTX在pH值为3.5时溶解度最大，随着pH值增加其溶解度逐渐降低。TTX在强碱条件下降解最为迅速，在70 ℃条件下、0.1 mol/L的氢氧化钠溶液中，20 min即完全降解。稳定性试验结果同样证明TTX在碱性条件下的稳定性最差，在37 ℃、pH值=7.4的磷酸缓冲盐溶液（PBS）中，TTX浓度在1~10 h时开始持续降低，28天降解率为88.07±0.27%。结论 TTX易溶于pH值=3.5的酸性水溶液，几乎不溶于碱性水溶液。其稳定性与温度、介质pH值密切相关，在酸性水溶液中较为稳定，在碱性条件下易降解，温度升高会加速其降解过程。     

河豚毒素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的研究河豚毒素（TTX）心脏停搏液对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法取Wistar大鼠24只,建立Langendorff-Neely离体心脏灌注模型,随机分为3组（n=8）：基础组、STH-2组、TTX组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,免疫组化测定凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53的表达,Westernblot检测Bcl-2蛋白表达。结果STH-2组凋亡指数（AI）（11.20±0.79）%高于TTX组（6.92±1.10）%和基础组（1.34±0.23）%（P〈0.01）。TTX组Bcl-2的PEI为（22.63±1.10）%高于STH-2组（13.51±0.67）%和基础组（2.52±0.58）%（P〈0.01）;STH-2组Bax的PEI为（8.04±0.57）%高于TTX组（6.05±0.46）%和基础组（2.14±0.57）%（P〈0.01）。TTX组Bcl-2/Bax为3.78±0.41高于STH-2组1.75±0.15（P〈0.01）。TTX组Bcl-2的相对蛋白含量为（86.1±0.98）%高于STH-2组（53.2±1.76）%和基础组（23.7±2.61）%（P〈0.01）。p53蛋白在各组均未见明显阳性表达。结论与STH-2比较,TTX能减少缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡数,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2表达,下调Bax表达,提高Bcl-2/Bax比值有关。     

河豚毒素实验疫苗对小鼠口服河豚毒素中毒的免疫保护效应

目的　开发河豚毒素 (TTX)的抗毒疫苗。方法　TTX与载体蛋白中国鲎血蓝蛋白 (TTH)、破伤风类毒素 (TT)和牛血清白蛋白 (BSA)化学偶联 ,分别制成免疫抗原TTX TTH和TTX TT ,检测抗原TTX BSA。经腹腔或皮下注射免疫原 (用Freund佐剂 ) ,免疫BALB/c小鼠 ;每组 12只 ;5个月内接受免疫原累计量 375 μg/鼠。定期采集动物血清 ,ELISA法监测血清中抗体质量 (滴度及亲和力 )。经igTTX的生理盐水攻击免疫鼠 ,以检验抗毒效价 ;首次剂量6 30 μg·kg- 1,间隔 2～ 3周后提高剂量再次攻击活存动物 ,观察攻毒实验后症状 ,记录 2 4h存活率及死亡鼠的存活时间。结果　所试两种人工抗原的抗毒效应无明显差异。免疫鼠经ig 6 30 ,80 0 ,12 0 0 ,15 0 0 ,2 0 0 0 μg·kg- 1TTX攻毒时 ,存活率分别为10 0 % ,95 % ,90 % ,70 %和 4 5 % ;测得半数死亡剂量约为 2 0 0 0 μg·kg- 1。免疫鼠经 2～ 5次igTTX重复攻毒 ,86 %动物累积耐受剂量高于 3.5mg·kg- 1;4 3%动物累积耐受剂量高于 5 .5mg·kg- 1。中毒对照动物ig 6 0 0 μg·kg- 1TTX全部死亡。结论　研制的TTX的化学实验疫苗可高效预防TTX口服攻毒 ,免疫预防是对抗TTX中毒很有希望的途径     

河豚毒素中毒机理与临床救治探讨

探讨河豚毒素(TTX)的中毒机理及临床TTX中毒的有效救治措施。     

河豚毒素与局麻药联合应用对家兔齿髓刺激所致疼痛的对抗作用

河豚毒素(tetrodotoxin，TTX)是一种毒性极高的非蛋白神经毒素。具有很强的局麻作用。其效力比目前常用局麻药强万倍以上。持续时间长。将TTX与常用局麻药联合应用于齿髓镇痛。国内外文献尚未报道。我们设想将极微量TTX与常用局麻药利多卡因、丁卡因联合给药，通过齿髓刺激试验，测定其局部镇痛作用，观察是否具有协同或增强局麻效果，以探讨TTX作为协同局麻药应用于临床的可能。     

替曲朵辛治疗急性海洛因依赖戒断综合征的随机双盲临床试验

目的:初步评价替曲朵辛(TTX)治疗急性海洛因依赖戒断综合征的疗效和安全性。方法:采用随机双盲、安慰剂对照设计。126例海洛因依赖者随机分为3组,接受疗程为7 d的相应治疗:安慰剂组、5μg TTX和10μg TTX组,bid,肌肉注射;在治疗前及治疗期间每天上午注射给药后1 h采用戒断症状评定量表(OWS)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)和临床总体印象量表(CGI)进行疗效评价,并于治疗前和治疗结束时进行阿片类药物尿检。安全性评价包括在基线和治疗末期进行的实验室检查及每天给药后的生命体征和心电图监测、不良反应报告。结果:3组海洛因依赖者的人口学资料(年龄、性别构成)、海洛因用药特征、基线戒断症状总分和基线焦虑评分没有统计学差异。TTX组的戒断症状评分变化与安慰剂组有显著差异(P<0.05)。3组受试者的焦虑评分在治疗期间逐渐下降,10μg TTX组d4的焦虑评分显著低于安慰剂组(P<0.05)。安慰剂组、5μg TTX组和10μg TTX组分别发生了6例、3例和9例不良事件,严重程度为轻度和中度,各组之间没有显著差异。10μg TTX组的一例受试者因不良事件而停止研究。结论:替曲朵辛注射液每日使用剂量5μg-10μg,疗程7日,对急性海洛因戒断症状的疗效显著优于安慰剂组,且安全性良好。     

河豚毒素与吗啡联合用药对吗啡依赖性与镇痛耐受作用的影响

目的:研究河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)与吗啡联合使用对吗啡依赖性及镇痛耐受作用的影响。方法:采用吗啡依赖性小鼠模型及热板实验,评价单独使用吗啡(2.5 ml.kg-1)以及联合给药(吗啡2.5 mg.kg-1+TTX 0.5μg.kg-1、吗啡2.5 mg.kg-1+TTX 1.0μg.kg-1)对纳洛酮催促戒断症状及镇痛耐受性的影响。结果:联合用药可以抑制吗啡依赖性小鼠戒断后体重的丢失,明显抑制吗啡依赖小鼠纳洛酮催促后的跳跃反应,抑制小鼠热板实验的潜伏期时间的增加。结论:TTX与吗啡联合用药可以抑制吗啡的依赖性与镇痛耐受作用的产生。     

基于心血管芯片模型的4种深海毒素致伤评价与雷公藤甲素的保护作用研究

目的 构建一种心血管芯片模型,评估四种海洋毒素即大田软海绵酸(OA)、芋螺毒素(CTX)、河豚毒素(TTX)和环亚胺毒素(GYM)对血管糖萼组织的损伤,初步探索雷公藤甲素对毒素致伤的保护作用。方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)接种于三通道结构的微流控芯片,并对所构建的心血管芯片模型进行表征。采用CCK-8法和免疫荧光染色法分析低、中、高三个浓度的海洋毒素对细胞活力和糖萼组织损伤情况,以及雷公藤甲素对毒素致伤的保护作用。结果 所构建心血管器官芯片中的细胞生长状态良好,具有结构完整的糖萼组织,与对照组相比,OA中、高浓度以及GYM高浓度均对细胞活力具有一定抑制（P<0.05),CTX和TTX在所测浓度下对细胞没有明显活力抑制,但是四种毒素均引起细胞表面糖萼组织的严重损伤（P<0.01),且随着浓度增加,糖萼损伤率升高。经雷公藤甲素预保护后,四种毒素对HUVEC的毒性显著降低,糖萼组织损伤率下降。结论 四种毒素对HUVEC细胞活力以及表面的糖萼组织具有损伤,且呈一定的剂量关系,而雷公藤甲素对毒素损伤后的HUVEC细胞具有保护作用。     

河豚毒素与吗啡联合用药对吗啡依赖性与镇痛耐受作用的影响

目的:研究河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)与吗啡联合使用对吗啡依赖性及镇痛耐受作用的影响。方法:采用吗啡依赖性小鼠模型及热板实验,评价单独使用吗啡(2.5 ml.kg-1)以及联合给药(吗啡2.5 mg·kg-1+TTX 0.5μg·kg-1、吗啡2.5 mg·kg-1+TTX 1.0μg·kg-1)对纳洛酮催促戒断症状及镇痛耐受性的影响。结果:联合用药可以抑制吗啡依赖性小鼠戒断后体重的丢失,明显抑制吗啡依赖小鼠纳洛酮催促后的跳跃反应,抑制小鼠热板实验的潜伏期时间的增加。结论:TTX与吗啡联合用药可以抑制吗啡的依赖性与镇痛耐受作用的产生。     

极化型与去极化型心脏停搏液对离体大鼠心肌细胞胞质游离钙离子含量的影响

目的观察极化型心脏停搏液(TTX组)与传统的去极化型停搏液(St.Thomas-2号液,STH-2)对急性分离的大鼠心肌细胞胞质静息游离钙离子含量的影响。方法45只健康Wistar大鼠,随机分为正常对照组、STH-2组和TTX组。采用急性酶学分离的方法获取成熟大鼠心室肌细胞,持续灌流给药,利用离子成像技术,观察不同配方的心脏停搏液对于急性分离的大鼠心肌细胞胞质游离钙离子浓度的影响。结果①STH-2组和TTX组细胞质内游离钙离子含量均较灌流前后升高(P<0.05);②STH-2组恢复正常台式液灌流后15min与灌流前比较差异有统计学意义,而TTX组灌流前后的细胞内钙离子含量差异无统计学意义。结论与传统的STH-2号液相比,采用加有钠离子通道选择性的拮抗剂TTX的极化型心脏停搏液可以减少心肌细胞在停搏液灌流过程中的胞内钙离子含量,减轻钙超载,因而具有较好的心肌细胞保护作用。     

河豚毒素的药理作用及临床应用

本文介绍了河豚毒素（TTX）的化学特性、药理作用及临床应用。