应用PCR产物直接测序技术测定乙型肝炎病毒前C区基因序列

目的 :测定乙型重型肝炎和慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒前C区基因序列 ,探讨乙型肝炎病毒前C区基因变异的意义。方法 :采用PCR产物直接测序技术 ,测定 13例乙型重型肝炎和 10例慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒前C区基因序列 ,并与基因库中来自世界各地的不同基因型的毒株进行比较。结果 :患者血清中乙型肝炎病毒前C区基因序列 ,除发现乙型肝炎病毒前C区基因 1896位存在点变异外 ,还可见 184 6位点变异 ,且乙型重型肝炎患者发生病毒变异的频率明显高于慢性乙型肝炎 (P <0 .0 5 ) ,而 186 2位未检出变异。 1838位核苷酸全部为腺嘌呤核苷酸 (A) ,184 6位核苷酸大多为胸腺嘧啶核苷酸 (T) ,仅 4例发生了G→A点突变。经与不同基因型的毒株进行比较 ,提示沈阳地区流行的乙型肝炎病毒毒株接近美国株。结论 :乙型重型肝炎患者发生病毒变异的频率明显高于慢性乙型肝炎 ;沈阳地区流行的乙型肝炎病毒毒株接近美国株     

PCR检测HBV—DNA对HBsAg无症状携带者传染性的监测

用多聚酶链反应和斑点杂交技术检测了５０例ＨＢｓＡｇ无症状携带者血清中ＨＢＶＤＮＡ，检出率分别为５０％和５８％。抗－ＨＢｃ、抗－ＨＢｅ和ＨＢｅＡｇ阳性者ＨＢＶＤＮＡ的检出率高于阴性者．单项ＨＢｓＡｇ阳性无症携带者ＨＢＶＤＮＡ在血中呈不同程度地波动，其排毒情况无明显规律可循。     

乙肝病毒PCR产物的鉴定及单项抗HBc阳性血清的HBV基因扩增

本文报道ＨＢＶ基因扩增产物的限制性酶切分析和寡核苷酸探针杂交鉴定、应用血清ＨＢＶＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物制备基因探针和单项抗ＨＢｃ阳性血清的ＨＢＶ基因扩增。ＰＣＲ用ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｗ３种亚型ＨＢＶ的Ｃ基因区共有序列为内外两对引物分单次或套式扩增，产物为６６ａｂｐ或４２８ｂｐ，两者序列中段共含－ＢｇＩⅡ酶切点并与一寡核苷酸探针同源。４２８ｂｐ产物被用以缺口平移标记３２Ｐ探针作斑点和转印杂交检测。结合分子杂交的ＰＣＲ结果从单项抗ＨＢｃ阳性的８／４２例慢性肝炎和２／１２例无症状受测者血清中检出ＨＢＶＤＮＡ，证实病毒低度复制和传染性。     

HBV DNA PreC/C和BCP片段基因多态性及临床意义

目的 :分析乙肝患者 HBV DNA前 C/ C区和基本核心启动子区部分 DNA片断突变。方法 :PCR扩增HBV DNA nt1735～ 196 5片段 ,将产物进行 HBV DNA测序。结果 :在 6 8例乙肝患者中 ,突变阳性率 4 8.5 % ,点突变16 8个 ,频率前 10位的是 nt176 4、176 2、1799、176 6、1896、175 4、1899、176 8、1814及 1913,还检出鲜见报道的 192 3、192 2、190 7等点突变。慢性肝炎 5 4例和肝炎肝硬化 10例 HBV DNA nt1896、176 4、176 2点突变阳性数分别为 9、19、19和 3、19、19,两者差异有极显著性 (P<0 .0 1)。结论 :前 C/ C区与基本 C区启动子区基因突变可能与肝实质纤维化相关 ,HBV DNA突变发生率较高 ,且位点众多 ,基因测序对芯片探针设计有着十分重要的指导价值和临床意义     

肾炎肾组织中HBV DNA的检测及其存在意义

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分子杂交和免疫组化技术，检测１８例肾穿刺组织中ＨＢＶ ＤＮＡ和ＨＢＶ相关抗原的阳性情况。结果表明１５全ＢＶ ＤＮＡ阳性，其中８例成人和４例儿童为整合型，另３例儿童为游离型，有１３例ＨＢＶ抗原阳性。除肾小球外，肾小管亦表达ＨＢＶ抗原，提示ＨＢＶ ＤＮＡ在存在状态在成人主要为整合型，在儿童有整合型和游离型。     

HBV—DNA不同模板制备进行多聚酶链基因扩增

本文采用 4.2mol/L异硫氰酸胍、25mmol/L柠檬酸钠、0.1mol/L2一巯基乙醇,0.5%(W/V)十二烷基肌氨酸钠作为裂解液进行一步法程序式抽提血清标本HBV—DNA模板用于多聚酶链基因扩增.该法与常规DSD抽提法及微量直接法进行比较,具有方法简单、稳定、不易污染且敏感性高.抽提过程可在1个小时内完成,经酶切及a~(32)P标记探针放射自显影鉴定PCR产物具良好特异性,该法尤其适应于大量临床标本的检测,值得推广使用.     

PCR产物直接测序检测乙型肝炎病毒耐药变异位点

目的研究采用PCR产物直接测序技术在乙型肝炎病毒(HBV)耐药变异位点检测的特异性和实用性。方法 166例经过核苷类似物治疗至少2年以上的慢性乙肝患者,提取血清HBVDNA,采用巢式PCR扩增,将所得的PCR产物进行琼脂糖电泳检测,阳性PCR产物直接测序。对测序成功的样本进行耐药变异分析。结果 166例中有120例HBV DNA扩增电泳产物阳性,测序确定基因耐药变异位点有40例(24.1%,40/166);其具体分布为:L180M和M204V/I均变异17例(42.5%,17/40)、M204V/I变异lO例(25%,10/40)、N236T变异8例(20%,8/40)、L180M变异3例(7.5%,3/40)、A181V/T变异1例(2.5%,1/40)、A181V/T和N236T变异1例(2.5%,1/40)。120例患者测序确定基因耐药未测出变异位点有80例(66.66%,60/120)例。结论本院核苷类似物治疗2年以上患者,控制病毒疗效并不佳,有24%患者出现基因耐药。PCR产物直接测序法是目前检测HBV耐药变异的一种较好的方法,可用于专科医院临床检测。     

PCR产物直接测序检测乙型肝炎病毒耐药变异位点

摘要：目的研究采用PCR产物直接测序技术在乙型肝炎病毒（HBV）耐药变异位点检测的特异性和实用性。方法166例经过
核苷类似物治疗至少2年以上的慢性乙肝患者,提取血清HBV DNA,采用巢式PCR扩增,将所得的PCR产物进行琼脂糖电泳
检测,阳性PCR产物直接测序。对测序成功的样本进行耐药变异分析。结果166例中有120例HBV DNA扩增电泳产物阳性,
测序确定基因耐药变异位点有40例（24.1%,40/166）;其具体分布为：L180M和M204V/I均变异17例（42.5%,17/40）、M204V/I
变异10例（25%,10/40）、N236T变异8例（20%,8/40）、L180M变异3例（7.5%,3/40）、A181V/T变异1例（2.5%,1/40）、A181V/T和
N236T变异1例（2.5%,1/40）。120例患者测序确定基因耐药未测出变异位点有80例（66.66%,60/120）例。结论本院核苷类似
物治疗2年以上患者,控制病毒疗效并不佳,有24%患者出现基因耐药。PCR产物直接测序法是目前检测HBV耐药变异的一种
较好的方法,可用于专科医院临床检测。
     

聚合酶链反应检测重型肝炎患者血清HBVDNA

采用ＰＣＲ法检测４８例重型肝炎患者血清中ＢＨＶＤＮＡ存在情况，并与斑点杂交检测进行比较，结果表明：ＰＣＲ检测３９例阳性，检出率为８１．３％（３９／４８）．ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）组ＰＣＲ检测均阳性（８／８），ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（－）组阳性率为８８．０％（２２／２５），抗体阳性组检出率为７２．７％（８／１１），检测灵敏度为１．０ｆｇ；斑点杂交检测１５例阳性，阳性率３０．２％（１５／４８），各组斑点杂交阳性率均低于ＰＣＲ法．提示：（１）大多数重型肝炎患者血清中存在低滴度的病毒颗粒，对重肝发病有一定作用；（２）大部分ＨＢｅＡｇ阴性，抗体阳性的重型肝炎患者血清仍有传染性，应考虑抗病毒治疗．     

用试管PCR法和玻片PCR法检测SRSV感染细胞中的病毒顺序

多聚酶链反应(PCR)作为一种快速灵敏的分子生物学实验手段正日益引起科研及实践工作者的重视。传统的PCR常需先提得核酸,再对核酸样品进行扩增。我们采用的试管PCR法和玻片PCR法可省去提取核酸的步骤,而直接从细胞开始,对小鼠SRS腹水瘤病毒基因进行扩增,灵敏度达到1×10~5个细胞。     

PCR检测HBVDNA对HBsAg无症状携带者传染性的监测

用多聚酶链反应和斑点杂交技术检测了５０例ＨＢｓＡｇ无症状携带者血清中ＨＢＶＤＮＡ，检出率分别为５０％（２５／５０）和５８％（２９／５０）。抗－ＨＢｃ、抗－ＨＢｅ和ＨＢｅＡｇ阳性者ＨＢＶＤＮＡ的检出率高于阴性者。单，ＮＨＢｓＡｇ阳性无症状携带者ＨＢＶＤＮＡ在血中呈不同程度地波动，其排毒情况无明显规律可循。     

多聚酶链反应检测乙型肝炎后肝硬化患者血清HBV－DNA及其意义

为观察乙型肝炎后肝硬化患者体内ＨＢＶ的复制状况，为抗病毒治疗提供依据，以减少盲目用药。应用多聚酶链反应，对２６例乙型肝炎后肝硬化患者检测了血清ＨＢＶ－ＤＮＡ存在状态。结果显示，活动性乙型肝炎后肝硬化９例，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性８例，阳性率８８．８８％，静止性乙型肝炎后肝硬化１７例，ＨＢＶ－ＤＮＡ脑性６例，阳性率３５．２９％。两组比较。血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率差异显著（Ｐ＜０．０１）。结果表明，应重点对活动性乙型肝炎后肝硬化患者进行抗病毒治疗。     

聚合酶链反应检测132例乙肝感染者HBVDNA

本文运用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙肝病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）．可检出极微量的ＨＢＶ感染者，它对乙肝发病机理的研究、判断患者病变活动和传染性以及判定抗病毒药物疗效均具有重要意义。     

血浆及其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒检测比较

目的：了解慢性丙型肝炎患者的血浆及其外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｓ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）的存在及存在形式。方法：反转录多聚酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴＰＣＲ）技术检测１２４例慢性丙型肝炎患者的血浆及ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ。结果：在７０例抗ＨＣＶ及血浆ＨＣＶＲＮＡ阳性的患者中有２１例（３０％）的患者其ＰＢＭＣ内存在ＨＣＶＲＮＡ正链，仅１例存在ＨＣＶＲＮＡ负链。在５４例抗ＨＣＶ阳性、血浆ＨＣＶＲＮＡ阴性的患者中，仅有２例（３．７％）检出ＨＣＶＲＮＡ正链，未检出ＨＣＶＲＮＡ负链，这２例患者均为干扰素治疗３～６个月的病人。结论：ＰＢＭＣ可作为肝外病毒复制场所。对慢性ＨＣＶ感染者来说，３～６个月的干扰素治疗时间可能是不够的，ＨＣＶ在ＰＢＭＣ内的存在可能是干扰素治疗后复发的原因之一。     

聚合酶链反应技术在淋病诊断及治愈判定中的价值

目的：探讨聚合酶链反应技术（PCR）在淋病诊断及治愈判定中的价值。方法：应用PCR和淋球菌培养法平行检测74例STD门诊疑诊为淋病患者的标本,并对34例确诊患者进行治疗后的随访检测。结果：74例疑诊患者中,两种方法均检出淋球菌的有54例,均阴性的6例,PCR阳性而培养法阴性的14例,PCR阴性而培养法阳性的0例。以PCR和培养法检测结果为“扩大金标准”,则PCR的敏感性为100％（68／68）,显著高于培养法的（79．41％）;两者的特异性均为100％（6／6）。对34例确诊患者进行治疗后随访检测结果显示：PCR检测的阴转时间平均33．4±8．7天,明显延迟于培养法（平均6．3±1．8天）。结论：PCR诊断淋病具有高敏、特异、快速的优点,但在治愈判定中的价值不如培养法。PCR阴转则表明病情已愈,有临床意义。     

聚合酶链反应在检测乙肝病毒感染中的应用

应用PCR技术对医院临床实验室检测的265例乙肝患者血清的ELISA五项结果所用血清作了复检、结果发现：ELISA五项指标全阴40例，单纯HBsAb阳性40例，单纯HBcAg阳性40例，HBsAg两项阳性40例，HBsAg、HBeAb和HBcAb三项阳性40例，HBsAg、HBeAg和HBcAb三面阳性40例，HBsAg和HBeAg均阳性15例及单纯HBsAg阳性10例，而PCR检测HBV－DNA的阳性例数分别为2，3，7，16，11，38，15和3例，ELISA法和PCR法检测的目的物本不同同，其临床意义，学者对ELISA法已有不少报道，PCR法检出HBV－DNA证明血清中有乙肝病毒存在，对PCR检测结果，结合ELISA检测结果作了讨论。     

新鲜与石蜡包埋CA组织中的病毒检测

目的：对尖锐湿疣（ＣＡ）中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）及人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）进行检测。方法：采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）。结果：新鲜湿疣中ＨＰＶ阳性率为８０．８％,其中ＨＰＶ１１／６ｂ（＋）者１９例,ＨＰＶ１６（＋）者２例。石蜡包埋组织中ＨＰＶ阳性率为５８．３％。５例ＨＰＶ强阳性的湿疣组织ＨＣＭＶ检测全部阴性。结论：新鲜组织的ＨＰＶ检出率高于石蜡包埋组织;部分湿疣由ＨＰＶ１６感染所致,应注意其恶变倾向;本文结果不支持ＣＡ中ＨＰＶ与ＨＣＭＶ复合感染的可能。     

应用聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液中的乙肝病毒

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了４５例肺科病人的支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中乙肝病毒（ＨＢＶ），同时对其中２４例作血清ＨＢＶ检测，发现ＢＡＬＦ中ＨＢＶ阳性率为２６．６７％（１２／４５）、血清ＨＢＶ阳性率为４１．６７％（１０／２４）；血清ＨＢＶ阳性者其ＢＡＬＦ方有可能检出ＨＢＶ、血清ＨＢＶ阴性者其ＢＡＬＦ不能检出ＨＢＶ，ＢＡＬＦ中ＨＢＶ脱氧核糖核酸（ＨＢＶ－ＤＮＡ）可以复制、有传染性。