维生素E琥珀酸酯处理人胃癌细胞过程中自噬与内质网应激的交互作用

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(VES)处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬与内质网应激的交互作用。方法:用不同剂量(0、5、10、15、20 μg/mL)VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h后,激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3(LC3)荧光强度和分布情况,Western blot分别检测内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和LC3、Beclin-1的表达情况;在分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和氯喹(CQ)以及内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理2 h后,以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,Western blot分别检测内质网应激标志物GRP78、GRP94及自噬标志蛋白LC3、Beclin-1的变化。结果:与阴性对照组比较,随着VES剂量的增加,激光共聚焦显微镜观察到LC3在细胞内点状分布逐渐聚集和增强,GRP78和GRP94表达先降低后升高(P均<0.05),LC3和Beclin-1表达逐渐升高(P均<0.05);VES+3-MA组及VES+CQ组的GRP78和GRP94蛋白表达均高于单独VES组(P均<0.05);VES+4-PBA组的LC3和Beclin-1蛋白表达均低于单独VES组(P均<0.05)。结论:VES处理人胃癌细胞过程中自噬与内质网应激可以相互调节,具有交互作用。     

维生素E琥珀酸酯通过内质网应激诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的:探讨内质网应激在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的作用。方法:分别采用Western blotting和RT-PCR检测VES不同剂量(0、5、10和20μg/ml)处理SGC-7901细胞24 h和20μg/ml VES处理SGC-7901细胞不同时间对内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白(glucose regulative protein,GRP)GRP78、GRP94和内质网应激凋亡途径关键因子C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)的蛋白和mRNA表达的影响;进一步采用RNA瞬时干扰阻断CHOP的表达后用20μg/ml VES作用SGC-7901细胞24 h,采用DAPI染色法观察细胞凋亡的改变。结果:20μg/ml VES组在mRNA水平卜均诱导GRP78、GRP94和CHOP的表达增加;在蛋白水平上20μg/ml VES显著增加GRP78和CHOP的表达,GRP94表达先降低,而后又升高;阻断CHOP后VES诱导的细胞凋亡由46.3%降低为27.9%(P0.05)。结论:内质网应激可能参与了VES诱导的SGC-7901细胞凋亡。     

AMPK在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞自噬中的作用研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯（VES）是否影响人胃癌SGC-7901细胞中腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）活性,并探讨AMPK在VES诱导自噬中的作用。方法：用不同剂量（5、10、15、20 μg/mL）VES处理SGC-7901细胞24 h,以及20 μg/mL VES分别处理SGC-7901细胞3、6、12、24 h后,Western blot法检测SGC-7901细胞中自噬标志蛋白LC3、Beclin-1及AMPK、ACC及其磷酸化蛋白的表达。用RNAi技术沉默AMPK,20 μg/mLVES处理SGC-7901细胞24 h,Western blot法检测LC3、Beclin-1蛋白以及AMPK、mTOR、p70S6K与4EBP-1及其磷酸化蛋白表达,并采用荧光定量PCR法检测LC3 mRNA表达情况。结果：VES处理SGC-7901细胞后,与对照组比较,随着VES剂量的增加、作用时间的增长,AMPK磷酸化水平上升,LC3、Beclin-1蛋白表达增加（P<0.05）。RNAi沉默AMPK后,与单纯VES处理组比较,LC3、Beclin-1蛋白表达降低,LC3 mRNA表达下降（P<0.05）;mTOR、p70S6K及4EBP-1磷酸化活性升高（P<0.05）。结论：VES可诱导SGC-7901细胞中AMPK活化,AMPK活化后影响mTOR及其下游分子活性,继而诱导自噬的发生。     

维生素E琥珀酸酯诱导内质网应激激活JNK的表达对人胃癌SGC-7901细胞自噬的影响

目的:研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)激活内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞自噬过程中发挥的作用.方法:用不同剂量VES(5、10、15、20μg/ml)分别处理SGC-7901细胞24 h,采...     

维生素E琥珀酸酯处理人胃癌细胞过程中自噬与活性氧蓄积的交互作用

目的：探讨维生素E琥珀酸酯（VES）处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬与活性氧（ROS）蓄积是否存在交互作用。方法：不同剂量（0、5、10、15、20 μg/mL）VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,采用免疫荧光染色观察细胞内自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3（LC3）的荧光强度和分布情况,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达情况,流式细胞术检测细胞内ROS水平;用ROS淬灭剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理2 h后以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,免疫荧光染色观察细胞内LC3荧光强度和分布情况,Western blot检测LC3和Beclin-1的表达情况;RNA瞬时干扰阻断BECN-1基因的表达后,以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,流式细胞术检测细胞内ROS水平。结果：与对照组相比,随着VES作用剂量的增加,LC3的荧光强度逐渐增强;LC3和Beclin-1蛋白表达均逐渐升高;流式细胞术检测结果显示胞内ROS水平逐渐增强;淬灭ROS之后LC3荧光强度以及LC3和Beclin-1蛋白表达水平均明显低于VES单独处理组（P<0.05）;阻断自噬关键基因BECN-1后细胞内ROS水平高于VES单独处理组（P<0.05）。结论：VES可诱导人胃癌细胞发生自噬及ROS蓄积,并且VES处理人胃癌细胞过程中自噬与ROS水平可以相互调节,具有交互作用。     

酸性神经磷脂酶在维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响

目的： 探讨酸性神经磷脂酶 (acid sphingomyelinase,ASMase)在维生素E琥珀酸酯 (vitamin E succinate,VES)诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响。方法：常规体外培养人低分化胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为ASMase抑制剂地昔帕明 (desipramine,DES)处理组 (12.5 μmol/L DES作用2 h),对照组 (含2％胎牛血清的RPMI-1640培养液),VES+DES组 (用12.5 μmol/L DES抑制ASMase活性2 h后加20 μg/mL VES)以及VES处理组 (20 μg/mL)。以ASMase活性试剂盒检测0、1.5、3、6 h时VES+DES组及VES处理组细胞中ASMase活性。MTT法分别检测12、24和48 h时各组细胞的增殖情况。再在处理细胞24 h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、Perk、p-Perk、Chop和Caspase-4的表达。结果：VES (20 μg/mL)处理能够诱导细胞中ASMase活性增加,在3 h时细胞中ASMase活性达到最高,随后逐渐降低;VES+DES组细胞中ASMase活性始终维持在较低的水平。与对照组相比,DES组在各项检测中均无明显变化,而VES组与VES+DES组在处理细胞12、24与48 h后,细胞的增殖受到明显抑制 (P均<0.05),并呈时间-效应趋势,且VES+DES组细胞不同时间点的相对增殖率均明显高于VES组 (P均<0.05);细胞形态学显示20 μg/mL VES处理细胞后,镜下死细胞明显增多,而VES+DES组死亡细胞数量较VES组减少;流式细胞术检测凋亡率显示VES处理组为 39.21%±1.90%,明显高于空白对照组(3.91%±1.68%)与DES组(4.07%±1.39%) (P均<0.05),VES+DES组 (19.47%±4.46%)较VES组明显降低 (P<0.05);Western blot结果显示VES+DES组细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、p-Perk、Chop以及c-Caspase-4表达水平较单纯VES处理组降低 (P均<0.05)。结论：ASMase参与VES通过内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的过程,起促进凋亡的作用。     

未折叠蛋白反应在癌症进展中的作用

摘 要：内质网是真核细胞中控制蛋白质合成、折叠和加工的主要细胞器。在内质网应激条件下,错误折叠的蛋白质在该细胞器中积累,当错误折叠的蛋白质积累超过临界阈值时,启动称为未折叠蛋白反应（the unfolded protein response,UPR）的信号转导途径,以恢复体内平衡。肿瘤细胞经常暴露于改变蛋白质稳态的因素,从而产生内质网应激。大多数现有的证据支持内质网应激条件下启动UPR信号参与肿瘤细胞的生存和适应应激环境,然而最近的研究结果表明,UPR也可能独立于蛋白质错误折叠而参与癌症的进展。全文主要综述UPR在癌症进展中的作用,为癌症治疗潜在靶点提供思路。     

BaX在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

背景与目的:探讨Bax蛋白在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用.材料与方法:用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡的形态学改变;Westem Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞中Bax蛋白表达量的影响和VES对Bax蛋白与细胞色素c(cytochrome c,Cyt c)蛋白在细胞内分布的影响;用Mito Tracker RedCMXRos荧光染色观察线粒体膜电位(△Ψm)的变化.结果:VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡,提高Bax蛋白表达水平,并使Bax蛋白从胞浆转移到线粒体;VES作用后发生线粒体膜电位下降,Cyt c从线粒体释放到胞浆.结论:VES可能通过Bax蛋白来启动线粒体凋亡途径,诱导SGC-7901细胞发生凋亡.     

维生素E琥珀酸酯经由活性氧诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡

背景与目的:研究维生素E琥珀酸酯(VES)对人胃腺癌SGG7901细胞生长的抑制作用,探索VES诱导SGC-7901细胞凋亡情况及其可能机制.材料与方法:胃癌SGC-7901细胞分为VES不同浓度处理组和1 mmol/L甘露醇+20 μg/ml VES处理组(细胞先用1 mmol/L的甘露醇处理2 h后,加入20 μg/ml的VES处理),SGC-7901细胞经受试物处理24 h后,采用MTT、单细胞凝胶电泳方法和流式细胞技术,检测VES诱导SGC-7901细胞的氧化损伤及凋亡的情况,用相应的生化检测试剂盒检测细胞内活性氧及谷胱甘肽的含量变化. 结果:0、1.25、2.5、5、10、20 μg/ml的VES对胃癌细胞SGC-7901细胞的生长均有不同程度的抑制作用,其中20 μg/mlVES组抑制作用最大,其生长抑制率达76.91%.研究结果还显示随VES浓度的增加,细胞凋亡率呈现增加的趋势.彗星实验结果显示,各实验组随着VES浓度的增加,彗星尾长与彗星细胞率呈现增加的趋势.VES 10、20 μg/ml组与阴性对照组相比,SGC-7901细胞内谷胱甘肽含量显著下降(P<0.05),同时活性氧含量显著增加(P<0.05).1 mmol/L甘露醇+20μg/ml VES处理组与VE$20 μg/ml处理组比较:SGC-7901细胞DNA损伤程度较轻,细胞凋亡率明显低于YES 20 μg/ml处理组,其细胞内活性氧的生成减少,细胞内谷胱甘肽的消耗减少(P<0.05).绪论:VES可显著抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,且随VES剂量的增加,其抑制作用越强.细胞内活性氧含量增加、谷胱甘肽耗竭所导致的氧化损伤作用可能是VES诱导细胞凋亡的机制之一.     

Bid在维生素E琥珀酸酯诱导SGC-7901细胞凋亡中的作用

背景与目的:研究Bid在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用.材料与方法:在VES诱导SGC-7901细胞凋亡过程中,检测Bid蛋白的活化;用RNA瞬时干扰阻断Bid的表达,再用VES作用SGC-790细胞后,比较Bid阴性表达和Bid阳性表达细胞的凋亡率、线粒体膜电位(△Ψm)、胞浆中细胞色素C含量和PARP活化程度. 结果:VES作用细胞后Bid发生活化;Bid阴性表达细胞的凋亡率较Bid阳性表达细胞降低,线粒体膜电位升高,胞浆中细胞色素C含量减少,PARP活化减弱.结论:在VES诱导SGC-7901细胞凋亡过程中,Bid可能发挥重要作用.     

淬灭胃癌SGC-7901细胞内活性氧对维生素E琥珀酸脂诱导内质网应激的影响

目的：探讨淬灭胃癌SGC-7901细胞内活性氧（ROS）对维生素E琥珀酸脂（VES）诱导内质网应激的影响。方法：将不同浓度（1、5、10和20 mmol/L）N-乙酰半胱氨酸（NAC）作用胃癌SGC-7901细胞2 h,再加入20 μg/mL VES处理12 h,经2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠（DCFH-DA）染色后,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内ROS水平。另将20 mmol/L NAC作用SGC-7901细胞2 h,再加入20 μg/mL VES处理细胞12 h,经DCFH-DA染色后,流式细胞术进一步检测细胞内ROS水平。将20 mmol/L NAC作用SGC-7901细胞2 h,再加入20 μg/mL VES分别处理15和24 h后,分别采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blotting法检测内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白GRP78和CHOP mRNA及蛋白的表达。结果：与单纯VES处理组相比,20 mmol/L NAC预处理组胃癌细胞内ROS下降最为明显（P < 0.05）。与对照组相比,20 μg/mL VES能够诱导胃癌细胞内GRP78和CHOP mRNA及蛋白的表达明显增加（P < 0.05）;而与单纯20 μg/mL VES处理组相比,20 mmol/L NAC对VES诱导GRP78和CHOP mRNA及蛋白表达具有显著的抑制作用（P < 0.05）。结论：在体外,淬灭胃癌细胞内ROS能够抑制VES诱导的内质网应激反应。     

维生素E琥珀酸酯诱导MDA-MB-435乳腺癌细胞的凋亡

目的:检测维生素E琥珀酸酯(vitaminEsuccinate,VES)对MDAMB435乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用并分析凋亡诱导分子Fas表达的变化。方法:以VES刺激人乳腺癌细胞MDAMB435(雌激素受体阴性)12、24和48h,VES浓度为5、10和20μg/mL,以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数变化,Westernblot法检测VES作用后Fas蛋白水平变化。结果:VES对MDAMB435乳腺癌细胞增殖具有显著的抑制作用并表现为时间和剂量依赖关系。流式细胞仪分析细胞凋亡,MDAMB435细胞的自然凋亡率为1.5%,5、10和20μg/mLVES分别作用48h后凋亡率升高至13.1%、20.2%和46.5%。TUNEL法检测VES作用后乳腺癌细胞凋亡指数由1.1±0.4升高至10.8±1.0、30.4±2.7和51.4±4.7,细胞Fas蛋白水平分别升高1.3、1.9和4.3倍,细胞表面Fas平均荧光强度由46.29升高至59.66、84.54和103.41。结论:VES对MDAMB435乳腺癌细胞具有显著的增殖抑制作用,并诱导细胞的凋亡,其机制与细胞表面Fas表达上调有关。     

内质网应激在芹菜素诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激在芹菜素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用。方法:采用Western blot方法检测不同剂最(0、20、40、60、80μmol/L)芹菜素作用48 h和60μmol/L芹菜素作用不同时间(0、12、24、48 h)后对胃癌SGC-7901细胞中内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白(glucose regulative protein,GRP)GRP78、GRP94和内质网应激凋亡途径关键因子C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologousprotein,CHOP)表达的影响;并用DAPI荧光染色和流式细胞仪检测10 mmol/L内质网应激抑制剂4-苯丁酸(4-phenylbutyrie acid,PBA)加入前后细胞凋亡情况的变化。结果:芹菜素可以诱导GRP78、GRP94蛋白的表达,并随着剂量和时间的增加蛋白表达量也呈增加趋势,但芹菜素不能诱导CHOP蛋白的表达;荧光染色和流式细胞术结果显示4-PBA与20μmol/L芹菜素联合作用组的细胞凋亡率明显增加,与20μmol/L芹菜素组及溶剂对照组间的差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:内质网应激在芹菜素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中可能对细胞起到保护作用。     

二十二碳六烯酸增加人胃癌细胞SGC-7901对多柔比星的敏感性

目的:本研究旨在探讨二十二碳六烯酸[docosahexaenoic acid (DHA),22:6 ω-3]逆转由多柔比星( adriamycin,ADR)引起的胃癌SGC-7901细胞的耐药性.方法:体外常规培养人低分化胃腺癌细胞SGC-7901,分别以DHA、ADR单药和DHA+ADR联合作用于细胞24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;倒置光学显微镜下观察细胞的形态;FCM法检测细胞的凋亡率;激光共聚焦显微镜以及高效液相色谱法检测细胞中ADR的蓄积情况;RT-PCR及蛋白质印迹法检测细胞中多药耐药蛋白(multidrug resistanceprotein,MDR) P-糖蛋白p-170的表达情况.结果:DHA与ADR联合作用于胃癌SGC-7901细胞后,DHA能够增加ADR对细胞的生长抑制作用;细胞形态观察发现死细胞明显增多;细胞凋亡率显著增加;细胞中的ADR蓄积量约增加2.1倍;细胞中p-170 mRNA以及蛋白表达降低(P均＜0.05).结论:DHA能够增加胃癌细胞SGC-7901对ADR的敏感性,放大ADR的肿瘤杀伤作用.