日本血吸虫SIEA66-68kDa抗原的分离、纯化及免疫保护性研究

目的研究日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原66-68kDa（SIEA66-68kDa）的动物免疫保护力,并对其作为天然分子疫苗的可行性进行评估。方法采用电泳切胶、电洗脱、超滤离心等技术,分离纯化SIEA66-68kDa天然分子抗原,免疫小鼠,待其产生抗体后进行尾蚴攻击感染（40尾/只）,计算减虫率和减卵率。结果 SIEA66-68kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用,其减虫率为41.70%,每克肝脏减卵率为51.23%,雌虫子宫减卵率为29.30%,每克大肠减卵率为59.26%,每克粪便减卵率为45.17%,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 SIEA66-68kDa天然分子抗原具有刺激小鼠产生较好的抗日本血吸虫感染的免疫保护作用,可作为抗日本血吸虫感染候选分子疫苗的靶标。     

重组日本血吸虫中国大陆株rTPI分子对小鼠免疫保护性作用的研究

目的研究重组日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶（SjC－TPI）分子抗血吸虫感染的保护性作用。方法用IPTG诱导表达,制备纯化的重组TPI蛋白,将重组TPI抗原免疫C57BL／6及昆明鼠,8周后用血吸虫尾蚴攻击感染,45d后剖杀,计数减虫率及减卵率。结果C57BL／6获得27．78％的减虫率;昆明鼠获得21．39％的减虫率,54．00％的减卵率。结论重组SjC－TPI对血吸虫感染具有一定的保护作用,可能为日本血吸虫病疫苗候选分子之一。     

日本血吸虫（中国大陆株）线粒体相关蛋白对小鼠免疫保护性的初步研究

目的 研究日本血吸虫（中国大陆株）线粒体相关蛋白（rSj338/26GST)对小鼠的免疫保护性，预测其作为血吸虫疫苗候选分子的潜能。方法 将编码日本血吸虫线粒体相关蛋白的cDNA经PCR扩增后亚克隆人载体质粒pGEX-6p-1进行表达，并用表达的重组抗原的融合蛋白免疫BABL／c小鼠。结果 与对照组相比，rSj338/26GST重组蛋白免疫小鼠获得了32．3％的减虫率及46．5％肝总减卵率；与Sj26GST免疫组相比，rSj338抗原可能使小鼠获得22．5％的减虫率及30．0％的肝总 减卵率。结论 证明重组的日本血吸虫线粒体相关蛋白(rSj338/26GST及rSj338)可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力，可望成为新的疫苗候选分子。     

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原对小鼠免疫保护性的初步研究

目的：为研究日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa抗原的免疫保护性。方法：将其编码cDNA经PCR扩增后亚克隆入载体质粒PGEX—1λt进行表达，并用重组抗原免疫了一批昆明鼠。结果：与对照组相比，重组抗原免疫小鼠获得了38．93％的减虫率。结论：证明重组的日本血吸虫22．6kDa抗原可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白诱导水牛保护性免疫的研究

为观察重组日本血吸虫副肌球蛋白（ｒＳｊ９７）对水牛的保护效果。２０头水牛随机分为佐剂（Ｑｕｉｌ Ａ）对照组和抗原（ｒＳｊ９７）免疫组。对照组仅注射Ｑｕｉｌ Ａ，而免疫组注射Ｑｕｉｌ Ａ加ｒＳｊ９７，在第０、２１５周肌肉注射。第３次免疫后两周经腹部贴片攻击感染１０００条日本血吸虫尾蚴，感染后第４９ｄ剖杀冲虫，计数虫数和肝卵数。结果显示，与对照组相比，ｒＳｊ９７免疫组的减虫率为４９．９％（Ｐ〈０．０５），肝脏减卵率５７．３％（Ｐ〈０．０１）。提示ｒＳｊ９７可诱导水牛产生一定程度的血吸虫攻击感染的保护性免疫力，并具有一定程度的抗病作用，进一步证实了副肌球蛋白可作为抗血吸虫病的侯选疫苗分子。     

日本血吸虫及其中间宿主原肌球蛋白免疫小鼠的保护作用

目的：探讨从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分离的天然原肌球蛋白（分别称为SjcTM和OhTM）免疫小鼠后对日本血吸虫尾蚴攻击感染的保护作用。方法：参照Cote和Smilie文献改进的方法从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分别提取天然原肌球蛋白（TM）抗原，用SDS－PAGE分析其纯度和分子量，并以所提纯之TM抗原加福氏佐剂皮下多点注射免疫C57BL／6雌性小鼠，共免疫3次，攻击感染后6wk解剖小鼠，门脉灌注收集成虫，并分类计数小鼠肝脏和肠组织内的未成熟和成熟虫卵。同时设立佐剂对照组。结果：日本血吸虫大陆株成虫和湖北钉螺TM分子量相似约40kDa。与佐剂对照组相比，日本血吸虫和湖北钉螺TM 免疫组: 减虫率分别为21.1% 和28.2%; 平均每对成虫肝脏减卵率分别为20.1%和52.2% , 肠组织减卵率分别为32.8% 和28.1%; 肝脏成熟虫卵减少率分别为25.9% 和46.8% ,在肠组织的减少率分别为39.7% 和66.8%。结论: 日本血吸虫和湖北钉螺TM 抗原具明显的免疫原性, 免疫小鼠后具有抗感染和抗血吸虫病免疫的作用。可作为血吸虫病候选疫苗分子作进一步研究。     

日本血吸虫及其中间宿主原肌球蛋白免疫小鼠的保护作用

目的：探讨从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分离的天然原肌球蛋白（分别称为ＳｊｃＴＭ和ＯｈＴＭ）免疫小鼠后对日本血吸虫尾蚴攻击感染的保护作用。方法：参照Ｃｏｔｅ和Ｓｍｉｌｉｅ文献改进的方法从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分别提取天然原肌球蛋白（ＴＭ）抗原，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其纯度和分子量，并以所提纯之ＴＭ抗原加福氏佐剂皮下多点注射免疫Ｃ５７ＢＬ／６雌性小鼠，共免疫３次，攻击感染后６ｗｋ解剖小鼠，门脉灌注收集成虫，并分类计数小鼠肝脏和肠组织内的未成熟和成熟虫卵。同时设立佐剂对照组。结果：日本血吸虫大陆株成虫和湖北钉螺ＴＭ分子量相似约４０ｋＤａ。与佐剂对照组相比，日本血吸虫和湖北钉螺ＴＭ免疫组：减虫率分别为２１．１％和２８．２％；平均每对成虫肝脏减卵率分别为２０．１％和５２．２％，肠组织减卵率分别为３２．８％和２８．１％；肝脏成熟虫卵减少率分别为２５．９％和４６．８％，在肠组织的减少率分别为３９．７％和６６．８％。结论：日本血吸虫和湖北钉螺ＴＭ抗原具明显的免疫原性，免疫小鼠后具有抗感染和抗血吸虫病免疫的作用。可作为血吸虫病候选疫苗分子作进一步研究。     

日本血吸虫混合DNA疫苗免疫效果观察

目的 为提高日本血吸虫DNA疫苗免疫效力,观察日本血吸虫抗原分子的混合DNA疫苗诱导小鼠的抗攻击感染的保护性免疫。方法 大量制备真核质粒pBK-CMV-Sj26和pBK-CMV-Sj23,然后将单价DNA疫苗pBK-CMV-Sj26和pBK-CMV-Sj23混合后免疫小鼠。实验分为4组：混合疫苗组、单价疫苗pBK-CMV-Sj23组、空质粒对照组及生理盐水对照组。各组于0周、3周、5周在小鼠股四头肌注射相应质粒DNA或生理盐水,第9周小鼠用血吸虫尾蚴攻击感染,第15周剖杀小鼠计算减虫率及减卵率。结果 与对照组比较,实验组小鼠减虫率及减卵率有极显著性意义（P＜0．01）;与单价pBK-CMV-Sj23组比较,混合DNA疫苗组的减虫率及减卵率有显著性意义（P＜0．05）。结论 血吸虫混合DNA疫苗诱导小鼠对血吸虫的保护力优于单价DNA疫苗。     

日本血吸虫SIEA26-28kDa的抗雌虫生殖免疫作用--HGPRT是否是主要的靶抗原

目的观察日本血吸虫SIEA26—28kDa抗原的抗雌虫生殖作用。方法用AcA柱层析纯化日本血吸虫早期胚卵中的SIEA和SIEA26—28kDa成分。并以此纯化产物免疫BALB／c小鼠。将小鼠分为三组，分别用SIEA、SIEA26—28kDa和免疫佐剂免疫动物，然后进行尾蚴攻击感染。46天后剖杀动物，冲虫，然后作虫荷测定及虫卵分类计数。结果SIEA26—28kDa免疫组雌虫子宫内减卵率为54．8％。与对照组比较有极显著性差异；该实验组动物肝脏和小肠组织内的虫卵数比对照组分别降低了48.07％和77.41％，且以成熟虫卵数的下降较为显著，分别降低了83．6％和93．3％；粪卵数的下降幅度最为显著，达87．26％。结论SIEA26—28kDa可作为一种抗卵胚发育及抗雌虫生殖的候选抗原分子。     

日本血吸虫rSj338及膜蛋白rSj22.6抗原表位联合免疫对小鼠的保护性研究

目的 观察日本血吸虫（中国大陆株）的线粒体相关蛋白rSj338及膜蛋白rSj22.6有效抗原表位混合后对小鼠的免疫保护性，为将来复合疫苗的研制提供理论依据。方法 分别用特异性抗rSj338抗体和抗rSj22.6的抗体筛选噬菌体随机12肽库，将获得的rSj338的有效抗原表位与rSj22.6有效抗表位混合后免疫BALB／c小鼠，并与rSj338的有效抗原表位混合免疫组进行比较。结果 rSj338的4种表位和rSj22.6抗原的4种表位混合免疫组小鼠获得了45．4％（P＜0．01）的减虫率及59．1％（P＜0．01）肝总减卵率，rSj338的4种表位混合免疫组小鼠获得了34．2％（P＜0．01）的减虫率及46．8％（P＜0．01）肝总减卵率；rSj338 4种表位和rSj22.6的4种表位混合免疫组获得的减虫率和肝总减卵率均高于rSj338的4种表位混合免疫组，差异有显著性（P＜0．05）。结论 两种抗原分子的有效抗原表位联合免疫的效果优于单个抗原分子的有效抗原表位。     

辐照旋毛虫肌肉幼虫免疫对日本血吸虫感染的保护作用

目的　观察辐照旋毛虫肌肉幼虫 (TsML)免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的保护效果。　方法　用60 Co照射的TsML经腹腔免疫小鼠 15只 ,另设TsML匀浆和生理盐水免疫组作为对照。在两次加强免疫后 (1次 /周 ) ,分别用日本血吸虫尾蚴攻击感染。感染后第 40d解剖小鼠 ,计算虫荷 ,并对肝组织中的虫卵和雌虫子宫内的虫卵进行计数。同时采用数字图像处理技术对成虫形态结构进行测量分析。　结果　 1)辐照TsML免疫组与生理盐水对照组比较 ,小鼠虫荷数、肝组织和雌虫子宫内的虫卵数显著减少 ;免疫小鼠体内血吸虫虫体及睾丸、卵巢发育受到明显影响 ;2 )TsML匀浆免疫组的减虫效果较差 ,减卵效果及虫体、睾丸、卵巢发育与辐照TsML免疫组相似。　结论　辐照TsML和匀浆TsML免疫均能诱导小鼠产生对日本血吸虫攻击感染的保护作用 ,且辐照TsML较匀浆TsML具有更好的保护效果。     

Paramyosin: a candidate vaccine antigen against Schistosoma japonicum

Paramyosin, a 97 kDa myofibrillar protein, is a candidate vaccine antigen for prevention of infection with the human parasite Schistosoma mansoni . To determine if paramyosin would also induce protection against Schistosoma japonicum , paramyosin was biochemically purified from S. japonicum adult worms. SDS-PAGE demonstrated a single protein with a molecular weight of 97 kDa. In four separate experiments, vaccination of mice with S. japonicum paramyosin without adjuvant induced significant resistance (62%–86%, P < 0.001) against cercarial challenge as compared to controls. These data suggest that S. japonicum paramyosin may represent a candidate vaccine for immunization against schistosomiasis japonica.     

日本血吸虫DNA多价疫苗pVIVO_2SjFABP-23的构建及其保护性免疫

目的构建日本血吸虫多价DNA疫苗pVIVO2SjFABP-23,并观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法根据Sj FABP和Sj23的基因序列合成两对特异性引物,利用重组PCR技术将日本血吸虫Sj FABP和Sj23的基因片段进行拼接,得到融合基因SjFABP-23,再将该片段重组于p GEM-T载体中,进行PCR扩增及DNA序列测定。然后经双酶切将目的片段SjFABP-23克隆到pVIVO2的一个多克隆位点上转化E.coliGT 110获得重组质粒pVIVO2SjFABP-23,免疫小鼠进行免疫保护性实验。结果PCR扩增出一条大小约为1.1Kb的目的片段。免疫小鼠获得52.14%减虫率(P<0.01)和60.93%的减卵率(P<0.01),且均高于单价疫苗pVIVO2Sj23(P<0.05)。结论PCR成功扩增SjFABP-23的基因片段,血吸虫DNA多价疫苗pVI-VO2SjFABP-23构建成功,该疫苗在小鼠抗血吸虫感染中具有比单价疫苗pVIVO2Sj23更好的免疫保护作用。     

日本血吸虫24—26kDa抗原和重组Sj26抗原的...

This paper reports on the comparison of the recombinant Sj26 (rSj26) antigen originated from the Philippine strain and 24-26 kDa antigen isolated and purified from Chinese mainland strain of S. japonicum for their antigenicity and immunogenicity. The results showed that there were obvious cross reactions between rSj26 and 24-26 kDa antigen when rSj26 antigen was tested against specific antibodies in sera from mice infected with the mainland strain of S. japonicum or 24-26 kDa antigen was tested against specific anti-rSj26 antibodies by ELISA, IFA and Western blotting etc. Both of 24-26 kDa and rSj26 antigen had weak cross reaction with SEA antigen. The worm reduction rate after challenging with mainland strain cercariae in mice immunized with rSj26 was 26-32%, similar to that in mice immunized with 24-26 kDa antigen. It is suggested that rSj26 antigen can induce certain level of specific protective immunity to protect the host against infection by Chinese strain of S. japonicum cercaciae.     

花生四烯酸对小鼠日本血吸虫病治疗效果观察

目的 观察花生四烯酸对小鼠体内日本血吸虫的杀虫效果.方法 小鼠感染日本血吸虫尾蚴后,被随机分为给药组、溶剂组和未处理组.给药组小鼠在不同给药时间点,以300 mg/kg的剂量连续2d或连续7d灌服花生四烯酸溶液,溶剂组小鼠在相应时间点灌服玉米油,各组小鼠于感染后42 d解剖,收集小鼠体内成虫、肝内虫卵并计数,计算减虫率...     

日本血吸虫24-26kDa抗原和重组Sj26抗原的抗原性和免疫原性比较研究

本文报告从日本血吸虫大陆株成虫抽提的24—26kDa抗原与源于日本血吸虫菲律宾株的重组Sj26抗原之间在抗原性和免疫原性上所进行的一系列比较研究。ELISA、IFA和Westernblotting等方法观察结果均表明,24—26kDa和rSj26抗原免疫后所诱导的特异性抗体与其对应的抗原之间具有明显的抗原交叉反应,而与其它血吸虫抗原如可溶性虫卵抗原也有交叉反应。若以两种抗原加福氏佐剂分别免疫小鼠,以日本血吸虫大陆株尾蚴攻击感染,减虫率相似(26～32％),表明两种抗原存在一定程度的交叉免疫保护性。这些研究结果为开发rSj26抗原,或是根据已知Sj26 cDNA核苷酸序列制备DNA探针,从已构建的日本血吸虫(大陆株)cDNA库筛选相关目的基因,加速血吸虫疫苗的研制起着重要作用。     

日本血吸虫中国株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白真核重组体的构建及其免疫小鼠的保护性研究

目的研究日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)全长编码基因DNA疫苗诱导小鼠的免疫保护性效果。方法将全长SjSDISP基因克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建真核表达质粒pcDNA3-SjSDISP,用重组裸DNA免疫昆明小鼠3次,间隙2W,末次免疫后第二周进行日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后42 d处死小鼠,剖杀冲虫,计算减虫率和减卵率。结果经双酶切、PCR和测序验证,表明真核表达质粒pcDNA3-SjSDISP构建成功。动物免疫保护性实验结果显示:pcDNA3-SjSDISP疫苗组减虫率较低,与对照组相比减虫效果不明显(P>0.05);但在每克肝卵、每克粪卵和每雌子宫内卵方面,与对照组相比差异均具有显著性(P<0.01)。结论日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白DNA疫苗可能主要在抗血吸虫卵胚发育或抗生殖起作用,具有潜在的疫苗研究与开发价值。     

pVAX1/IL-18对日本血吸虫DNA疫苗效果影响的初步研究

目的 探讨pVAX1/IL-18对日本血吸虫pVAX1/SjRPS4·CB疫苗免疫保护效果的影响。方法 将BALB/c小鼠随机分为NS组、pVAX1空质粒组、pVAX1/IL-18组、pVAX1/ SjRPS4·CB组、pVAX1/ SjRPS4·CB+pVAX1/IL-18组,每组12只。每组小鼠在左后腿股四头肌注射相对应质粒100 μg或者等剂量生理盐水,隔2W加强1次,共注射3次。末次免疫后3周腹部贴片感染小鼠。感染后8周剖杀小鼠,用ELISA法检测小鼠特异性抗体IgG,计算减虫率、肝组织减卵率、肠减卵率、每雌减卵率。结果 pVAX1/SjRPS4·CB、 pVAX1/IL-18联合免疫小鼠后,IgG滴度为1∶12 800,高于单独免疫组;减虫率、肝组织减卵率、肠减卵率、每雌减卵率与其他组相比差异均有统计学意义。结论 pVAX1/IL-18对日本血吸虫DNA疫苗具有明显增效作用。