青藤碱对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤P-选择素和细胞间黏附分子-1表达的影响

目的 探讨青藤碱(sinomenine,Sin)对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤P-选择素和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法 采用高脂高糖饮食加腹腔注射小剂量链脲霉素建立糖尿病大鼠模型,造模成功后将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Sin低剂量治疗组和Sin高剂量治疗组.线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.Sin低(30 mg/kg),高剂量(60 mg/kg)治疗组于术前30 min分别给予大鼠腹腔注射.用免疫组化法观察缺血90 min再灌注24 h大鼠额顶部皮质P-选择素和ICAM-1表达,进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色和HE染色观察脑梗死体积及病理形态学变化.结果 ①糖尿病大鼠脑缺血再灌注24 h,P-选择素和ICAM-1表达均明显增加,与假手术组比较,差异具有显著性(均P<0.05);与缺血再灌注组比较,Sin高、低剂量治疗组均显著减少P-选择素和ICAM-1表达(均P<0.05),高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0.05).②Sin治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0.05).③Sin高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组,Sin高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组.结论 Sin对糖尿病大鼠缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与减轻脑缺血再灌注损伤阶段P-选择素和ICAM-1所介导的炎症反应有关.     

青藤碱对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用

目的:研究青藤碱对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法:以不同浓度青藤碱处理体外培养的A549细胞,采用MTT法检测24h、48h、72h后HepG2细胞的增殖状态;流式细胞仪测定青藤碱处理过的细胞凋亡、细胞周期分布及凋亡率,相对定量RT-PCR测定Cox-2mRNA的表达、Western blot检测细胞凋亡相关基因Cox-2的表达。结果:青藤碱能显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖,并具有时间和剂量依赖性。青藤碱处理组细胞早期凋亡率较对照组升高,呈时间剂量依赖性。相对RT-PCR结果显示其能下调HepG2细胞Cox-2mRNA的表达。Western blot检测Cox-2蛋白表达明显抑制。结论:青藤碱在体外能有效抑制肝癌细胞增殖。     

青藤碱免疫抑制作用机制的研究进展

青藤碱是青藤Sinomenium acutum藤茎中的主要活性生物碱,具有显著的镇痛、抗炎、免疫抑制等药效作用,是一种应用前景良好的天然免疫抑制剂.大量研究表明青藤碱对众多免疫细胞(T细胞、单核/巨噬细胞、树突状细胞、肥大细胞)和免疫应答相关因子(细胞因子、活性氧、核因子-κB、细胞黏附分子)均具有免疫调节作用.通过综...     

中药安胎养血合剂对大鼠肾移植急性排斥反应免疫抑制作用的研究

目的:研究中药安胎养血合剂(AnTai YangXue Mixture,ATYXM)对大鼠肾移植急性排斥的免疫抑制作用,探讨其与环孢素A(cyclosporine,CsA)是否具有协同作用。方法:建立大鼠异基因肾移植模型,随机分为4组——Ⅰ组,生理盐水对照组(NS),给予NS灌胃,NS 10mL.kg-1.d-1;Ⅱ组,中药ATYXM组,给予ATYXM灌胃,10mL.kg-1.d-1;Ⅲ组,CsA(cyclosprorine,CsA)组,给予CsA灌胃,10mL.kg-1.d-1;Ⅳ组,中西医结合组,给予ATYXM和CsA灌胃,AT-YXM 10mL.kg-1.d-1、CsA2.5mL.kg-1.d-1,两者间隔30min。于术后第5天每组随机取6只处死,取肾脏组织,通过TUNEL法检测凋亡指数,另6只大鼠观察移植肾存活时间。结果:对照组大鼠均在术后5天死亡,平均生存时间为(5.33±0.52)天,ATYXM组(8.67±1.51)天、CsA组(11.17±0.75)天和中西医结合组(13.67±1.63)天的存活时间明显长于对照组(P<0.05)。对照组凋亡指数为(15.90±4.91),ATYXM组为(6.60±2.01),CsA组为(4.00±1.41),中西医结合组为(3.60±1.51),对照组和各个实验组之间比较(P<0.05)。结论:安胎养血合剂通过抑制移植肾细胞凋亡的机制对大鼠肾移植急性排斥反应起到免疫抑制作用,并与环孢菌素有协同效应。     

青藤碱对体外人胆管癌细胞的抑制作用

目的研究青藤碱对体外人胆管癌细胞的抑制作用。方法 CCK-8和平板克隆实验检测青藤碱对胆管癌细胞存活率及增殖率的影响,流式细胞术检测青藤碱对胆管癌细胞凋亡作用的影响,Transwell检测青藤碱对胆管癌细胞侵袭能力的影响,细胞划痕检测青藤碱对胆癌细胞迁移能力的影响,Western blot检测青藤碱对胆管癌细胞中凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9和侵袭相关蛋白E-Cadherin、Vimentin表达的影响。结果随着青藤碱浓度的提高以及时间的延长,胆管癌细胞的存活率逐渐下降(P0.05,P0.01),细胞集落形成数量逐渐减少(P0.05,P0.01)。青藤碱可呈剂量依赖性地促进胆管癌细胞凋亡(P0.01),抑制胆管癌细胞的侵袭迁移(P0.01),并且可以使cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白以及E-cadherin蛋白表达逐渐升高,vimentin蛋白表达逐渐下降(P0.05,P0.01)。结论青藤碱可以有效地抑制体外胆管癌细胞的增殖,侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,这可能与其上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和E-cadherin蛋白表达,以及下调vimentin蛋白表达有关。     

盐酸青藤碱对佐剂性关节炎大鼠关节滑膜肥大细胞表达的影响

目的：观察盐酸青藤碱对佐剂性关节炎大鼠关节滑膜肥大细胞表达的影响,探讨盐酸青藤碱治疗关节炎的作用机制。方法：选用Wistar大鼠45只,造模成功30只,治疗组灌服盐酸青藤碱,对照组灌服雷公藤多甙并设单纯造模组。42 d后观察大鼠关节滑膜肥大细胞表达和关节肿胀指数。结果：盐酸青藤碱、雷公藤多甙均能改善关节肿胀指数,盐酸青藤碱能减少佐剂性关节炎大鼠关节滑膜肥大细胞总数及脱颗粒率。结论：盐酸青藤碱改善关节肿胀指数的机制可能与减少佐剂性关节炎大鼠关节滑膜肥大细胞总数有关,其作用机制与雷公藤多甙不同。     

中药安胎养血合剂对大鼠肾移植急性排斥反应影响的初步研究

目的研究安胎养血合剂对大鼠肾移植急性排斥反应的影响,为其在器官移植免疫治疗上的应用提供实验依据。方法建立大鼠异体肾移植急性排斥反应模型(SD→Wistar),随机分为4组,每组12只。I组,生理盐水对照组(NS),NS10 ml/(kg.d)。II组,中药安胎养血合剂组,中药10 ml/(kg.d)。III组,CsA(cyclosprorine,CsA)组,CsA 10 ml/(kg.d)。IV组,中西医结合组,中药10 ml/(kg.d),CsA2.5 ml/(kg.d),两者间隔30 min。观察各组肾移植大鼠的存活时间,术后第6天取血测定血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)的水平,并行移植肾病理学检查。结果中药安胎养血合剂可以延长受体鼠的存活时间,与CsA联合应用具有协同作用,可以明显延长受体鼠的存活时间,其方剂对移植肾的功能具有保护作用并能改善移植肾的形态和病理变化。结论中药安胎养血合剂对大鼠肾移植急性排斥反应有一定的抑制作用;与CsA具有协同作用。     

青藤碱缓释胶囊对巨细胞病毒性肝炎模型大鼠肝移植术后急性排斥反应的影响

目的观察青藤碱缓释胶囊对巨细胞病毒性肝炎大鼠肝移植术后急性排斥反应的影响。方法雄性Lewis大鼠40只(受体),用HCMV-AD169病毒株尾静脉注射建立大鼠巨细胞病毒性肝炎模型,然后另取40只DA大鼠(供体)肝脏移植于受体,术后分为对照组、干预组。干预组给予青藤碱缓释胶囊混悬液5.0 mg/(kg·d)分2次灌胃,对照组给予等量生理盐水灌胃,均灌胃2周。分别在灌胃1周和2周后取静脉血检测CD4^+T淋巴细胞及其亚群Th1、Th17占淋巴细胞的百分率,并采用ELISA法检测肝脏组织中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-17表达量。结果干预1周后,干预组静脉血中CD4^+T及Th1、Th17百分率和肝组织中TGF-β_1、TNF-α、IL-2、IL-17含量均明显低于对照组(P均<0.05);干预2周后,对照组静脉血中CD4^+T及Th1、Th17百分率和肝组织中TGF-β_1、TNF-α、IL-2、IL-17含量均明显高于干预1周后(P均<0.05),干预组静脉血中CD4^+T及Th1、Th17百分率和肝组织中TGF-β_1、TNF-α、IL-2、IL-17含量均明显低于干预1周后及对照组(P均<0.05)。结论青藤碱缓释胶囊可抑制巨细胞病毒性肝炎大鼠肝移植术后急性排斥反应。     

大鼠皮肤中青藤碱的HPLC测定

目的建立一种皮肤中青藤碱测定的HPLC方法。方法采用ODS柱,以甲醇-水-乙二胺(55∶45∶0.225)混合液为流动相,柱温30℃,体积流量1 mL/min,检测波长为265 nm。样品处理过程包括皮肤匀浆、液-液萃取、氮气吹干有机层以及以少量流动相复溶残留物后进样分析。盐酸昂丹司琼作内标。结果皮肤中的内源性物质对测定无干扰;取样皮肤(1 cm2)中药物含有量在1.02～20.4μg范围内与药物和内标物峰面积之比呈良好的线性关系(R=0.998 3,n=6);日内、日间精密度良好(RSD≤7.2%);准确度(相对回收率)为92.6%～104.6%,提取回收率为73.9%～87.9%,复溶的供试品溶液在24 h内稳定(相对回收率为97.9%～111.5%),皮肤样品冷冻-解冻循环3次测定结果稳定(相对回收率为96.0%～107.4%)。结论该方法的精密度、准确度、稳定性均符合生物样本测定要求,可用于皮肤中青藤碱测定。     

青藤碱凝胶对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用

 目的：研究青藤碱凝胶（sinomenine gels, SING）对大鼠佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）的治疗作用。方法：用Freund's完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎，经皮给药，观察青藤碱凝胶对大鼠双侧后足跖肿胀度、免疫器官重量及血液流变学的影响。结果：SING高剂量（80 mg·kg^-1）明显抑制AA大鼠双侧后足跖肿胀，改善血液流变学，但对免疫器官重量无明显影响。SING低剂量（40 mg·kg^-1）亦可明显抑制AA大鼠双侧后足跖肿胀度，但对血液流变学及免疫器官重量无明显影响。结论：SING外用对大鼠AA有显著的治疗作用。     

高效液相色谱法测定青藤碱血药浓度及药物动力学研究

用反相高效液相色谱外标法,测定单剂量(20mg/kg)静脉注射青藤碱后不同时间兔体内血药浓度,并用Marguardt法迭代拟合,结果符合二室模型。     

青藤碱贴片释放度测定研究

目的：对所制备的青藤碱贴片进行体外释放度测定。方法：通过青藤碱贴片内青藤碱的高效液相测定方法,依照透眼吸收研究方法进行青藤碱贴片的体外释放度研究。结果：贴片体外释放度研究表明青藤碱体外释药随时间为一递增过程,符合Ｈｉｇｕｃｈｉ方程。     

青藤碱传递体经皮给药的药动学和药效学研究

 目的 研究传递体对青藤碱经皮给药的影响。方法 通过薄膜分散法制备青藤碱传递体,并测定经皮给药和静脉注射给药2种给药方式下动物血药浓度和脑组织中药物的含量,以及不同给药方式下小鼠镇静镇痛和抗炎镇痛作用效果的变化,考察传递体对青藤碱在体内吸收、分布以及它对青藤碱止痛效果的影响。结果 经皮给药传递体能提高青藤碱的透过量,显著升高血液和脑组织中药物的浓度,提高镇痛疗效。静脉注射青藤碱传递体能提高脑组织中的药物含量,增强中枢镇痛作用,但在一定程度上降低血药浓度,影响外周抗炎镇痛效果。结论 传递体能改善青藤碱吸收、分布,影响药物的镇痛效果。     

青藤碱PVA膜中经皮吸收促进剂的选择

以改进型Ｆｒａｎｚ扩散池为经皮吸收研究装置,ｐＨ６．８磷酸缓冲液为接收液,裸鼠皮肤为实验皮肤,ＨＰＬＣ法测定青藤碱含量,采用均匀设计法从氮酮、丙二醇、油酸中选择适宜的经皮吸收促进剂及最佳配比。结果：氮酮、丙二醇的含量分别为６％、１０％时,青藤碱有最大的经皮速率常数。氮酮与丙二醇以一定比例组成复合体使用时,对青藤碱的经皮吸收有较好的促进作用。     

青藤碱对类风湿关节炎病人树突状细胞免疫活性的影响

 目的观察中药单体青藤碱对体外培养类风湿关节炎树突状细胞免疫活性的影响。方法分离12例类风湿关节炎病人外周血单核细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组。采用GM-CSF,IL-4进行刺激分化,于分化第4天开始给予干预,于培养第8天收获细胞。混合淋巴细胞反应检测树突状细胞对同种异体T细胞的刺激作用,酶联免疫吸附法检测树突状细胞培养上清中IL-12的含量,流式细胞技术检测树突状细胞表型的改变。结果与对照组相比,在不同混合比例下青藤碱可抑制树突状细胞对同种异体T细胞的刺激能力,青藤碱可抑制树突状细胞IL-12的分泌及其表面分子CD40,CD80,CD83,CD86和HLA-DR的表达。结论青藤碱可能通过抑制树突状细胞激活T细胞的能力,而达到治疗类风湿关节炎的作用。     

青藤碱对家兔 C-BSA 肾炎模型影响的实验研究

目的：研究青藤碱对慢性肾炎的药理作用。方法：采用C－BSA复制家兔膜性肾小球炎模型,用青藤碱进行实验性治疗。结果：青藤碱能使模型动物尿蛋白、血Cr与BUN、徨环免疫复合物（CIC）、及血与尿中的β2微球蛋白（β2－MG）均明显降低。用青藤碱治疗的动物,肾小球平均直径和肾小球内细胞数低于模型组。结论：青藤碱在减轻肾小球免疫性炎症、改善肾功能方面有较好的作用。     

盐酸青藤碱脂质体缓释片人体药动学与生物等效性研究

 目的研究盐酸青藤碱脂质体缓释片人体药动学和生物等效性。方法采用随机交叉实验设计,20名健康受试者单剂量、多剂量口服受试制剂、参比制剂,采用HPLC测定血浆中盐酸青藤碱的浓度,采用3P97软件计算药动学参数。结果单剂量口服缓释片、普通片各60mg后,普通片的ρ_max(101.23±21.52)μg·L^-1明显高于缓释片的ρ_max(80.16±20.62)μg·L^-1。缓释片口服给药后的t_max为(4.35±0.81)h,较普通片t_max(2.29±0.70)h延迟,有显著差别(P<0.05),其相对生物利用度为(112.61±8.22)%。受试者多剂量口服普通片与缓释片后药动学参数稳态时曲线下面积(AUC_ss)分别为(1496.56±145.25)、(1582.61±155.82)μg·h·L^-1;ρ_max分别为(115.23±25.26)、(167.21±35.12)μg·L^-1;t_max分别为(2.35±0.72)、(4.51±0.85)h;平均稳态血药浓度(ρ_av)分别为(62.35±11.82)、(65.94±12.16)μg·L^-1;血药浓度波动度(DF)分别为(1.76±0.21)和(2.41±0.25),其相对生物利用度为(105.75±7.35)%。结论经统计学检验表明,这两种制剂的AUC_0-24h、AUC_0-∞具有生物等效性,普通片与缓释片口服时吸收程度等效,吸收速度不等效。缓释片的达峰时间明显滞后普通制剂,该缓释片显示出缓释特征。     

青藤碱联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响

目的 观察青藤碱（sinomenine,SIN）联合甲氨蝶呤（methotrexate, MTX）对体外培养类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者成纤维样滑膜细胞（fibroblast like synoviocytes,FLS）增殖、凋亡及其破骨细胞分化因子表达的影响。方法 从RA患者滑膜组织分离培养FLS,分为SIN1、2、3、4组,MTX1、2、3、4组,联合1、2、3、4组,分别加入0.001、0.010、0.100、1.000 mg/mL SIN,0.001、0.010、0.100、1.000 mg/mL MTX,0.001 mg/mL SIN+0.001 mg/mL MTX,0.010 mg/mL SIN+0.010 mg/mL MTX,0.100 mg/mL SIN+0.100 mg/mL MTX,1.000 mg/mL SIN+1.000 mg/mL MTX的含药培养基,并以未加药物的培养基作为对照组,共13组,每组设3个复孔。采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;半定量RT PCR检测FLS NF-κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）mRNA表达水平。结果 与对照组比较,各药物组RA FLS增殖OD值均降低, 联合3组RA FLS凋亡OD值、OPG mRNA表达升高,RANKL mRNA表达降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;与联合3组比较,SIN 3组及MTX 3组RA FLS增殖OD值升高（P<0.05）。结论 SIN与MTX联合对RA FLS具有协同抑制效应,这可能是二者联用抑制RA骨破坏的机制之一。     

当归对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中黏附分子ICAM-1表达的影响

目的:观察当归对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管间质纤维化过程中黏附分子P-选择素(P-selectin)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)等细胞因子的表达和CD68单核/巨噬细胞浸润的影响。方法:采用大鼠模型,52只SD大鼠分为:假手术组、UUO组、当归组。术后第7d和第14d留取标本处死大鼠,用免疫组化方法检测肾组织内P-selectin、ICAM-1、CD68、TGF-β1的表达。结果:与假手术组相比,UUO组大鼠第7d和第14d肾组织内ICAM-1、P-selectin、CD68、TGF-β1的表达均显著上调(P<0.05)。与UUO组相比,当归组两个时间段肾小管间质病变减轻,且肾组织内ICAM-1、CD68、TGF-β1的表达受到显著抑制(P<0.05)。结论:当归可能是通过抑制ICAM-1的表达和炎细胞的组织浸润,从而降低了肾小管间质TGF-β1的水平和纤维化的进展。