含CpG基序的寡核苷酸对乙型肝炎病毒基因疫苗的细胞免疫效应的影响

目的探讨人工合成的CpG ODN作为佐剂对乙肝病毒基因疫苗诱导小鼠产生细胞免疫应答的影响.方法构建编码乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原蛋白S的重组真核表达质粒pCR3.1-S作为HBV基因疫苗,人工合成含CpG基序(motif)的硫代磷酸寡核苷酸(CpG ODN)作为佐剂,观察其对HBV基因疫苗接种Balb/c小鼠诱导产生淋巴细胞增殖和淋巴细胞杀伤等细胞免疫应答的影响.结果与空载体对照组相比较,HBV基因疫苗诱发Balb/c小鼠产生较好的HBV特异的淋巴细胞增殖及杀伤效应(P＜0.05);应用CpGODN组与未应用组相比较,免疫小鼠产生更强的HBV特异性细胞免疫应答(P＜0.05).结论CpG ODN作为佐剂,对HBV基因疫苗诱导Balb/c小鼠产生细胞免疫应答具有促进作用.     

CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠和HBV转基因C57BL/6J小鼠

目的:探讨人工合成硫代修饰的含CpG基序的寡脱氧核苷酸(ODN)作为佐剂对HBsAg诱导BALB/c和HBV转基因小鼠产生免疫应答的影响. 方法: 用人工合成CpG ODN与血源HBsAg联合免疫BALB/c和HBV转基因C57BL/6J小鼠,采用ELISA方法观察小鼠血清HBsAg及抗-HBs水平,用ELISPOT方法判断CpG ODN对HBsAg免疫小鼠脾T淋巴细胞分泌细胞因子的影响. 结果: CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠较HBsAg单独注射组同期抗-HBs滴度明显提高,尤其在首次免疫后6、8、12 wk,2组比较差异显著(P<0.05),联合免疫较CpG ODN单独免疫自首次免疫后4 ～16 wk差异显著(P<0.05).与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或9倍;CpG ODN,HBsAg联合免疫可诱导转基因小鼠产生抗-HBs,随时间延长,抗体滴度逐渐升高,并能使更多小鼠产生抗体,而单用HBsAg组、CpG ODN组均不能诱导抗-HBs的产生,免疫后各组血清HBsAg浓度较免疫前明显下降(P <0.05),但组间无明显差别(P>0.05),与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或11倍. 结论: CpG ODN作为佐剂可增强HBsAg诱导BALB/c小鼠产生体液及细胞免疫应答,CpG ODN ,HBsAg联合免疫可打破HBV转基因小鼠对HBsAg免疫耐受,可望成为慢性乙型肝炎的有效预防和治疗性疫苗.     

CpG ODN的体外免疫活性及其作为乙肝疫苗佐剂的研究新进展

为了增强乙肝疫苗的免疫效力,开发研制新型疫苗佐剂是当前国内外学者研究的热点之一。近年来的研究表明:含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)在体外实验中,对人和鼠的多种免疫细胞有活化作用;在动物实验中,CpG ODN不仅可增强乙肝疫苗的体液免疫应答,还可增强其细胞免疫应答,这正是铝佐剂所达不到的,且CpG ODN与铝佐剂具有协同效应,今后可考虑双佐剂联合乙肝疫苗接种,能提高接种人群的应答率,刺激机体产生更有效的保护作用;动物实验还显示,CpG ODN能增强HBV转基因小鼠对乙肝疫苗的免疫应答和抗病毒效应,说明乙肝疫苗辅以CpG ODN可望作为临床上免疫治疗慢性HBV感染的可行性途径;Ⅰ期临床试验表明CpG ODN对人体较安全。     

CpG ODN增强孕鼠及其新生小鼠对乙肝疫苗的免疫应答反应

目的 探讨CpG ODN对孕鼠及其新生小鼠的免疫应答增强作用。方法将乙肝疫苗和20μg CpG ODN联合或单独肌肉注射到怀孕第1天的C57BL／6孕鼠体内，怀孕第14天以同样剂量加强免疫1次。待分娩后立即收集母鼠厦其新生小鼠的血清，用ELISA方法检测抗HBs IgC抗体，无菌取母鼠的脾脏作既染色，观察脾脏淋巴细胞变化。测量新生小鼠体长并称量体重、脑重。结果孕鼠空白对照组产生的抗HBs IgG抗体与孕鼠HBsAg组相比P〈0．05，具有显著性差异。孕鼠HBsAg＋CpG ODN组与孕鼠HBsAg组相比，差异具有显著性（P〈0．05）。HBsAg＋CpG ODN组新生小鼠的抗HBs IgG抗体与HBsAg组相比，差异具有显著性（P〈0．05）。表明乙肝疫苗联合20μg CpG ODN免疫孕鼠，使孕鼠及其新生小鼠抗HBs IgG抗体产生显著增加。显微镜下观察表明CpG ODN使孕鼠的脾脏淋巴细胞浸润明显增多。各实验组的新生小鼠体长、体重、脑重、体重系数等生长发育指标与对照组相比无显著性差异。结论 20μg CpG ODN能够增强孕鼠对乙肝疫苗的免疫应答并被动增强其新生小鼠的免疫力，对新生小鼠的宫内发育无不良影响。     

CpG ODN增强人外周血单个核细胞对淋巴瘤细胞系Jurket杀伤活性的实验研究

目的 探讨合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG ODN)体外刺激人外周血单个核细胞(PBMC)的活性,以及活化后的PBMC对肿瘤细胞的杀伤作用.方法 采用MTT法,ELISA法检测CpG ODN对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖活性以及活化后的PBMC对Jurkat细胞的杀伤活性.结果 CpG ODN组,植物血球凝集素(PHA)组及CpG ODN+PHA组较空白对照组能明显促进PBMC的增殖和干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)的分泌,杀伤活性明显增高(P<0.05);CpG ODN组比PHA组明显促进PBMC的增殖和IFN - γ、IL-12的分泌,且杀伤活性明显增高(P<0.05) ;CpG ODN+PHA组在促进PBMC的增殖和IFN - γ、IL-12的分泌和对Jurkat细胞杀伤活性上明显高于其他组(P<0.05).结论 CpG ODN 具有免疫增强作用,能提高PBMC对肿瘤细胞Jurkat的杀伤作用.     

CpG ODN增强免疫力低下小鼠对乙肝疫苗的体液免疫应答

目的 探讨CpG ODN对免疫力低下小鼠的体液免疫增强作用。方法 选用老年C57BL／6小鼠和免疫抑制模型小鼠，将重组HBsAg疫苗和CpG ODN同时或单独肌注到小鼠体内，2周后以同样剂量加强免疫1次，再过3周后摘除眼球取血，用ELISA方法检测抗HBsAg IgG抗体。结果 免疫抑制模型中同时注射CpG ODN和疫苗组产生的IgG抗体绝对量是单独注射疫苗组的2倍；老年鼠组中10μg和20μg CpG ODN与疫苗同时注射组产生的IgG抗体绝对量分别是单独注射疫苗组的3倍和4倍。结论 CpG ODN能增强免疫力低下小鼠对乙肝疫苗的体液免疫应答。     

CpG ODN活化外周血单个核细胞对淋巴瘤HUT-78细胞杀伤作用的研究

目的 探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)在肿瘤免疫治疗中的作用.方法 将CpG ODN刺激体外培养的人外周血单个核细胞(PBMC),ELISA法检测其分泌细胞因子白细胞介素-12(IL-12)、干扰素-γ(INF-γ)的表达, MTT法检测CpG ODN作用后的PBMC对淋巴瘤细胞株HUT-78细胞杀伤活性.结果 与对照组相比,经CpG ODN作用后的PBMC对HUT-78细胞杀伤活性显著提高(P＜0.05),同时CpG ODN能明显促进PBMC分泌细胞因子IL-12、INF-γ(P＜0.05).结论 CpG ODN可增强PBMC介导的抗淋巴瘤细胞的作用,其杀伤活性与分泌细胞因子有关. Abstract： Objective To study the immunotherapy role of CpG ODN(CpGoligodeoxynucleotide) on tumor.Methods After treated with synthetic CpG ODN for 48 hours, the inhibiting effect of PBMC on HUT-78 cells were detected by MTT method.The secretions of TNF-γ and IL-12 from PBMC determined using ELISA method.Results The PBMC treated with CpG ODN enhanced their antitumor effect on HUT-78 cells and increased the secretion levels of TNF-γ and IL-12.Conclusions CpG ODN increases the cytotoxicity of PBMC on HUT-78 cells in vitro, as well as facilitates the IL-12 and TNF-γ secretion.     

插入CpG序列和IL—2基因的HBV重组真核表达载体的构建

目的：构建插入CpG序列和IL-2基因的HBV重组真核表达载体。方法：采用PCR产物直接克隆方法,构建了编码HBsAg基因的真核细胞表达载体pcDNA3.1^ -HBsAg;并以此为基础通过重组DNA技术分别构建了在不同位置含不同数目的CpG序列的重组质粒pcDNA3.1^ -S/CpG1、pcDNA3.1^ -S/CpG2、pcDNA3.1^ -S/CpG1 CpG2及IL-2和HBsAg融合基因的表达载体pcDNA3.1^ -S/IL-2。通过脂质体基因转移技术导入Cos-7细胞中检测其瞬间表达。结果：通过酶切、PCR及测序证实已分别正确完整地插入IL-2基因和CpG序列,体外转染Cos-7细胞后可见基因的表达和分泌,结论：本实验成功构建了我们所设计的5种重组质粒,拟为今后探索优化基因疫苗的设计及HBV治疗性疫苗的研究奠定基础。     

CpG-ODN增强乙型肝炎病毒转基小鼠对重组乙肝疫苗的细胞免疫应答

[目的 ]探讨CpG -ODN作为佐剂对重组乙肝疫苗诱导乙肝病毒转基因小鼠产生细胞免疫应答的影响。[方法 ]用重组干扰素 (rIFNα - 2b)、重组乙肝疫苗 (rHBsvaccine)和重组乙肝疫苗 CpG -ODN分别免疫HBV转基因小鼠后 ,流式细胞仪检测免疫小鼠的外周血T淋巴细胞亚群 ,ELISA法检测免疫小鼠的外周血IL - 2、IL - 12 (p70 )和IFN -γ的含量 ,MTT法和乳酸脱氢酶法分别检测免疫小鼠的淋巴细胞增殖和杀伤功能。[结果 ]重组乙肝疫苗组CD3 、CD4 、CD8 细胞在T细胞中所占百分比分别为 (2 5 .0 0 8± 2 .85 2 ) %、(13.6 40± 1.6 16 ) %、(9.989± 1.12 3) %均明显高于对照组 ,(P <0 .0 5 ) ;IL - 2、IL - 12 (p70 )和IFN -γ的含量分别为 (130 4 .2 88± 5 72 .2 12 ) pg/mL、(2 0 3.810± 91.80 7) pg/mL、(86 0 .736± 336 .888)pg/mL均明显高于对照组 ,(P <0 .0 5 ) ;淋巴细胞特异性增殖和杀伤效应与对照组相比均有明显差异 ,(P <0 .0 5 )。疫苗 CpG -ODN组与疫苗组比较 ,免疫小鼠产生更强的HBV特异性细胞应答 (P <0 .0 5 ) ,且以Th1型细胞免疫应答为主。而干扰素组由于给药次数和剂量等原因 ,与对照组无显著差异。 [结论 ]CpG -ODN作为佐剂可以较好的增强重组乙肝疫苗诱导HBV转基因小鼠产生细胞免疫应答。     

CpG ODN 对活动性肺结核患者外周血Th1/Th2型免疫应答的调节作用

目的 观察CpG寡脱氧核苷酸（CpG ODN）对活动性肺结核患者外周血单个核细胞（PBMC）γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-12以及IL-10表达的影响.方法 20例活动性肺结核患者和20名健康人PBMC根据刺激物不同分为空白对照组、结核菌素纯化蛋白衍化物（PPD）组（10 ng/mL）、CpG ODN组（2 nmoL/mL）和CpG ODN＋PPD组.用real time-PCR法检测PBMC IFN-γmRNA、IL-12 mRNA和IL-10 mRNA的表达.结果 ①活动性肺结核患者PBMC空白对照组IFN-γ mRNA和IL-12 mRNA的表达低于健康人（P＜0.01,P＜0.05）,IL-10 mRNA的表达与健康人相似（P＞0.05）;②经PPD刺激,IFN-γ mRNA、IL-12 mRNA和IL-10mRNA的表达较空白对照组增高（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）,但IFN-γ mRNA的表达低于健康人（P＜0.01）,IL-12 mRNA的表达与健康人相似（P＞0.05）,IL-10 mRNA的表达高于健康人（P＜0.01）;③经CpGODN刺激,IFN-γmRNA和IL-12 mRNA的表达高于空白对照组（P＜0.01,P＜0.01）,但低于健康人（P＜0.01,P＜0.05）,IL-10 mRNA的表达与空白对照组相似（P＞0.05）,与健康人也无差别（P＞0.05）;④经CpGODN＋PPD刺激,IFN-γ mRNA和IL-12 mRNA的表达较空白对照组增高（P＜0.01,P＜0.01）,但IFN-γ mR-NA的表达低于健康人（P＜0.01）,IL-12 mRNA的表达与健康人相似（P＞0.05）,IL-10 mRNA的表达与空白对照组相似（P＞0.05）,与健康人也无差别（P＞0.05）;⑤经CpGODN＋PPD刺激,肺结核患者IL-12 mRNA的表达高于PPD组（P＜0.05）,IL-10mRNA的表达低于PPD组（P＜0.01）.结论 CpGODN可促进活动性肺结核患者PBMC产生IFN-γ和IL-12,增强Th1型免疫反应.CpGODN与PPD联合应用可进一步促进PPD对IL-12表达的诱导,并抑制PPD对IL-10表达的增强作用.     

佐剂CpG ODN对HBV基因疫苗诱导抗体产生的影响

目的 探讨人工合成的ＣｐＧ ＯＤＮ作为佐剂对乙肝病毒基因疫苗诱导小鼠产生抗ＨＢｓ的影响。方法 构建编码乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）表面抗原蛋白Ｓ的重组真核表达质粒ｐＣＲ３．１－Ｓ作为ＨＢＶ基因疫苗,人工合成含ＣｐＧ ｍｏｔｉｆ的硫代磷酸寡核苷酸作为佐剂,以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠作为实验动物进行免疫接种,采用ＥＬＩＳＡ法检测免疫小鼠的抗ＨＢｓ应答。结果 与生理盐水作为佐剂组相比较,应用ＣｐＧ ＤＯＮ组小鼠产生更     

CpG-ODN调节小鼠免疫细胞对HBsAg体液免疫应答性的初步研究

目的：初步探寻能够刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳CpG-ODN序列。方法：应用正交设计法设计含有不同序列的10例CpG-ODN免疫小鼠，以研究影响CpG-ODN免疫活性的6个因素；免疫时间，CpG基序侧翼核苷酸、5‘‘‘‘‘‘‘‘-poly(A)、硫代修饰，回文结构和CpG-基序数量，筛选出量优组合的CpG-ODN。结果：10例CpG-ODN与HBsAg一起免疫小鼠均可不同程度地诱导小鼠抗HBsAg抗体水平的变化，显示出CpG-ODN较强的佐剂效应。结论：CpG-ODN与HBsAg一起免疫小鼠可诱导小鼠产生强烈的抗体应答，以六个因素均存在时CpG-ODN的免疫刺激活性较强，即10号序列5‘‘‘‘‘‘‘‘-AAAAAACGTTAACGTT-3’为本实验中刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳序列。     

白细胞介素-2对乙型肝炎病毒基因疫苗免疫效应的影响

目的　构建表达乙型肝炎病毒 (HBV)S蛋白的重组质粒pCR3 .1 -S作为基因疫苗 ,观察重组人白细胞介素 - 2 (rhIL - 2 )作为佐剂对其诱导BALB/c小鼠产生免疫应答的影响。方法　以不同剂量IL - 2作为佐剂 ,生理盐水作为对照 ,测定不同免疫组的血清抗HBs、淋巴细胞增殖活性、淋巴细胞杀伤活性 ,比较不同免疫组间体液和细胞免疫应答的差异。结果　抗HBsELISA滴度 ,IL - 2组与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5) ;淋巴细胞增殖指数、淋巴细胞杀伤率 ,IL - 2　 1 0 0 0U/ (只·次 )组、IL - 2　 2 0 0 0U/ (只·次 )组与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5) ,而IL - 2　 50 0U/ (只·次 )组与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论　一定剂量的IL - 2作为佐剂可增强HBV基因疫苗的免疫效应。     

Regulating Effects of Novel CpG Chitosan-nanoparticles on Immune Responses of Mice to Porcine Paratyphoid Vaccines

INTRODUCTION CpG oligodeoxynucleotide is a newly emerging powerful adjuvant inducing a broad array of immune responses to a wide variety of antigens. Previous studies showed that CpG motifs activate B cells and dendritic cells (DC), trigger immune cascade…     

伤寒Ty21a-CpG佐剂减毒活疫苗诱导抗体应答的研究

目的探讨人工合成的CpG-ODN 作为佐剂对伤寒Ty21a减毒活疫苗诱导小鼠产生抗体的影响.方法将不同剂量的人工合成的含CpG ODN的硫代磷酸寡核苷酸作为佐剂与伤寒Ty21a减毒活疫苗混合,以小鼠作为免疫动物进行免疫接种,采用试管凝集法检测免疫小鼠的血清特异性抗体滴度.结果 CpG-ODN 30μg佐剂组与不用佐剂的Ty21a减毒活疫苗相比较,应用CpG-ODN 组小鼠产生更强的抗体应答,抗体几何均数滴度相比有明显的差异.结论 CpG-ODN作为佐剂可促进伤寒Ty21a减毒活疫苗诱导昆明小鼠产生特异性免疫应答.     

IL—12提高DNA疫苗诱导小鼠抗HBV皮下移植瘤的免疫研究

目的 观察ＩＬ－２真核表达载体（ｐＷＲＧ３１６９）对ＨＢＶ－ＳＤＮＡ疫苗（ｐＣＲ３．１－Ｓ）诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２＾ｄ）的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达ＨＢｓＡｇ的小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５细胞（Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ）成瘤性的影响。方法肌肉注射ＤＮＡ疫苗,背部皮下接种Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ细胞,观察成瘤情况,４ｈ＾５１Ｃｒ释放法检测小鼠脾细胞ＣＴＬ活性。结果 对照组、ｐＣＲ３．１－Ｓ及共同免疫     

CpG ODN增强乙肝疫苗免疫反应的研究

目的研究人工合成的CpG ODN对乙肝表面抗原的免疫增强效应,评价CpG ODN的佐剂效应。方法将不同剂量特定的CpG ODN与乙肝表面抗原联合免疫小鼠,用ELISA检测小鼠乙肝表面抗体的滴度。结果CpG ODN联合乙肝表面抗原免疫小鼠,在短期检测中,高剂量组能较快的达到检测阈,各剂量组间抗体滴度检测值差异有显著性（P〈0．05）,在长期检测中,各剂量组间抗体滴度检测值差异有显著性（P〈0．05）,检测值随CpG剂量的增高而增大。结论CpG ODN增强乙肝表面抗原的免疫反应短期和长期都具有剂量效应。     

非甲基化CG的寡脱氧核苷酸链对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的影响

目的:探讨非甲基化CG的寡脱核苷酸链(CPG ODN)对慢性乙型肝炎(CHB)患者树突状细胞(DCs)功能的影响.方法:对10例慢性乙型肝炎患者,10例HBV携带者及10例健康对照者外周血来源DCs进行体外培养.应用流式细胞技术检测DCs的表面分子HLA-DR,CD80和CD86的表达,ELISA检测DCs培养上清中IL-12水平,并在电镜下观察DCs的改变.结果:体外培养第6天的DCs,加入CpG ODN继续培养24 h后,透射电镜下观察,与完全培养基对照组DCs相比,其表面的空起丰富、增粗,粗面内质网增多,空泡减少甚至消失.流式细胞仪分析显示, CpG ODN刺激组CD80,CD86及HLA-DR在CHB患者、HBV携带者及正常人DCs上的表达阳性率均较完全培养基对照组明显升高(P＜0.05).CHB患者、HBV携带者及正常人DCs均用完全培养基培养时,CHB患者及HBV携带者DCs上的HLA-DR,CD86和CD80的表达阳性率较正常人明显下降(P＜0.05),但CHB患者和HBV携带者之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).CHB患者、HBV携带者及正常人DCs均用CpG ODN刺激时,CHB患者DCs上的HLA-DR和CD86表达阳性率较HBV携带者及正常人明显下降(P＜0.05),但HBV携带者和正常人之间比较却无统计学差异(P＞0.05);CHB患者和HBV携带者DCs的CD80表达阳性率较正常人明显下降(P＜0.05),但CHB患者和HBV携带者之间比较却无统计学差异(P＞0.05).ELISA检测发现CpG ODN刺激组DCs分泌IL-12的水平无论在CHB患者、HBV携带者及正常人均较完全培养基对照组明显升高(P＜0.05).无论是完全培养基培养还是CpG ODN刺激,CHB患者及HBV携带者DCs分泌IL-12较正常人明显下降(P＜0.05),但CHB患者和HBV携带者之间比较却无统计学差异(P＞0.05).结论:CpG ODN能够明显促进CHB患者外周血DCs成熟,为CpG ODN治疗CHB提供了实验基础.