多氯联苯对大鼠海马神经元细胞的影响

背景与目的: 探讨多氯联苯(polychlorinated biphenyl; PCB)对大鼠海马神经元细胞生长发育的影响。 材料与方法: 取新生Wistar 大鼠双侧海马,无菌条件下制备细胞悬液。实验分为对照组和PCB低(1×10-8 mol/L)、中(1×10-7 mol/L)、 高(1×10-6 mol/L)3个剂量实验组。运用光镜、免疫组化技术研究PCB对大鼠海马神经元细胞形态学及bcl-2和TGF-β1表达的影响。 结果: PCB对大鼠海马神经元细胞的损伤随着PCB剂量的增加呈升高趋势,高剂量PCB组海马神经元细胞结构改变明显,神经元细胞轴突和树突消失仅部分残存,胞体萎缩;PCB能诱导海马神经元细胞 bcl-2和TGF-β1的表达,PCB低剂量组bcl-2呈强阳性表达,中剂量组bcl-2表达显著下调,高剂量组bcl-2为阴性表达; 低剂量组TGF-β1表达显著下调,中剂量组TGF-β1表达上调;高剂量组呈阴性,而对照组神经元细胞的bcl-2和TGF-β1均为阳性表达。 结论: PCB对大鼠海马神经元细胞的生长产生影响。     

多氯联苯对大鼠肾脏c-fos、c-Myc和β-catenin表达影响的研究

目的：探讨多氯联苯（polychlorinated biphenyl,PCB）对大鼠肾脏组织c-fos、c-Myc和β-catenin表达的影响。方法：Wistar大鼠45只随机分为4组,对照组饲喂正常饲料,PCB低、中、高剂量组分别饲喂不同PCB含量（分别为0.1、1、10 mg/kg）的颗粒饲料,90d后建立慢性PCB毒性动物模型,利用免疫组化方法检测PCB染毒后大鼠肾脏组织中c-fos、c-Myc和β-catenin蛋白的表达。结果：对照组肾小管上皮细胞中c-fos和c-Myc为阴性,低、中、高PCB剂量组c-fos表达的阳性率分别为58.33%、100%和75.3%,中剂量组阳性率同其它各组相比差异具有统计学意义（P〈0.01）;低、中、高PCB剂量组c-Myc表达的阳性率分别为41.67%、75%和100%,高剂量组c-Myc的阳性表达率显著高于其它各组（P〈0.01）;低、中、高PCB剂量组β-catenin表达的阳性率分别为91.6%、100%和83.3%,明显高于对照组22%（P〈0.01）,PCB各组β-catenin阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：PCB能促进大鼠肾脏组织表达c-fos、c-Myc和β-catenin,并可能与PCB对肾脏功能的损伤有关。     

大豆异黄酮对去卵巢高脂模型大鼠PPARδ基因表达的影响

背景与目的:研究高含量大豆异黄酮(Soy isoflavones,SI)对去卵巢动脉粥样硬化大鼠PPARδ基因表达的影响。材料与方法:将60只SD大鼠去卵巢,10只喂基础饲料,另50只喂4周高脂饲料后,随机分为高脂模型组,SI低、中、高三个剂量组和雌激素已烯雌酚对照组,共5组,每组10只。继续喂高脂饲料22周,各SI剂量组加喂总异黄酮含量为90.04%,金雀异黄素(genistein,Gen)含量为39.37%的SI,按30mg/kg、90mg/kg、270mg/kg三个剂量饲喂,观察实验大鼠主动脉及肝脏的形态学变化,并检测大鼠肝脏、小肠、主动脉中PPARδ的表达情况。结果:高脂模型组主动脉和肝脏脂质堆积,细胞变形。而SI高剂量组主动脉和肝脏脂质堆积较少,细胞较正常。SI使大鼠肝脏、小肠、血管中PPARδ的表达增高。结论:SI可对抗高脂饲料对去卵巢大鼠造成的脂代谢紊乱,对主动脉壁及肝细胞具有保护作用,且呈剂量-效应关系。SI促进高脂饲料喂养的去卵巢大鼠血管的PPARδ表达。     

塞来昔布对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-C及bcl-2 mRNA表达的影响

 目的探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-CmRNA及bcl-2mRNA表达的影响,研究COX-2抑制剂抗肿瘤的作用机制。方法将培养的PC-3细胞分为四组:试验组(分别以10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L不同浓度塞来昔布处理)和对照组,采用RT-PCR的方法检测四组中VEGF-C及bcl-2mRNA的表达。结果10μmol/L塞来昔布组VEGF-C/GAPDH值及bcl-2/GAPDH值与对照组相比差别均无统计学意义(P>0.05);20μmol/L及40μmol/L塞来昔布组VEGF-C/GAPDH值分别为0.370±0.063、0.263±0.062,bcl-2/GAPDH值分别为0.339±0.047、0.272±0.042,两组中上述两项指标均较对照组明显下降(P均<0.01)。结论塞来昔布可能通过对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-C及bcl-2mRNA表达的抑制发挥其抗肿瘤作用。     

铁过量对大鼠淋巴细胞DNA损伤的影响

目的： 探讨不同剂量铁补充对大鼠淋巴细胞DNA损伤的影响。方法：SPF级6~7周龄雄性Wistar大鼠40只,按体质量随机分为4组,每组10只大鼠,即对照组、缺铁组、10倍铁剂量补充组、20倍铁剂量补充组,4组均采用隔日腹腔注射右旋糖酐铁,每次注射0.72 mL,每次注射含Fe2+分别为0.9、0.3、9和18 mg,连续注射6周。4组大鼠自由饮用去离子水,喂饲无铁饲料,于第6周末眼眶取血,使用血清铁试剂盒测定血清铁浓度,采用碱性单细胞凝胶电泳法测定大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤状况。结果：缺铁组大鼠血清铁含量为53.54 μmol/L,明显低于正常对照组的77.62 μmol/L(P<0.01),10倍和20倍铁剂量补充组大鼠血清平均铁含量分别达到104.77 μmol/L和205.30 μmol/L,显著高于对照组(P<0.01)。外周血淋巴细胞DNA本底损伤分析显示,缺铁组和正常对照组淋巴细胞DNA损伤总体水平分别为25.30 AU和21.13 AU,两组间差异无统计学意义(P>0.05),10倍和20倍铁剂量补充组DNA自发损伤水平分别为对照组的3.9倍和8.0倍(82.80 AU和169.50 AU),显著高于对照组(P<0.01);然而H2O2与铁过量联合损伤分析显示,大鼠外周血淋巴细胞在10 μmol/L H2O2处理后,缺铁组大鼠DNA氧化损伤水平达到260.40 AU,与对照组(259.00 AU)相比差异无统计学意义(P>0.05),而10倍和20倍铁剂量补充组分别为对照组的1.1倍和1.2倍(293.80 AU和308.88 AU),均明显高于正常对照组(P<0.01)。结论：10倍、20倍铁剂量补充均可提高机体铁的营养状况或增加铁负荷水平;与正常铁摄入水平相比,铁缺乏未见DNA本底及H2O2联合损伤增加,而铁补充过量可引发机体外周血淋巴细胞DNA本底损伤增加及H2O2联合损伤加剧。     

PCB153对原代培养大鼠睾丸支持细胞SOD活性、DNA损伤及凋亡的影响

目的：探讨2,2′,4,4′,5-五氯联苯（2,2′,4,4′,5-hexachlorobiphenyl,PCB153）暴露对原代培养大鼠睾丸支持细胞（Sertoli cells,SC）超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、DNA损伤、细胞凋亡的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）的干预作用。方法：原代培养出生18～20d雄性SD大鼠的睾丸支持细胞,设PCB153不同浓度的染毒组（加入10、20、30μmol/L PCB153）,NAC组（以300μmol/L NAC预处理1h后加入30μmol/L PCB153）,和对照组（加入与PCB153最大染毒量等体积的DMSO）,各组细胞经上述处理后继续培养24h,用SOD试剂盒测定各组细胞SOD活性,彗星实验测定DNA损伤程度,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞荧光标记观察凋亡形态。结果：染毒24h后,大鼠睾丸支持细胞SOD活性随着PCB153染毒剂量的升高而降低,20、30μmol/L染毒组显著低于对照组（P〈0.05）,NAC预处理可提升SOD活性（P〈0.05）。各PCB153处理组及NAC预处理组与对照组相比,DNA损伤间的差异均无统计学意义（P〉0.05）,细胞凋亡率则均显著增加（P〈0.05）,NAC预处理可降低PCB153所致的凋亡率（P〈0.05）。结论：10～30μmol/L PCB153染毒24h可诱导的原代培养大鼠SCSOD活性降低,细胞凋亡增加,但并未引起DNA损伤,NAC预处理具有保护作用。     

一氧化氮对缺血再灌注硬化肝脏P-选择素表达的影响及保护作用

目的 :探讨一氧化氮 (nitric oxide NO)对肝硬化肝脏缺血再灌注 (ischemia- reperfu-sion I/ R)损伤后肝细胞 P-选择素表达的影响及保护作用。方法 :建立肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注模型 ,观察 L -精氨酸 (L - Arginine)、Nω-硝基 - L -精氨酸甲酯 (L - NAME)预处理组和 I/ R组肝细胞 P-选择素表达情况以及肝功能损伤情况。结果 :I/ R对肝细胞 P-选择素表达增强 (P<0 .0 1) ,肝损伤加重。NO供体 - L - Arginine预处理后 P-选择素表达下降 (P<0 .0 1) ,并在一定程度上减轻肝 I/ R损伤程度 ,而一氧化氮合酶抑制剂 - L - NAME预处理后 P-选择素表达增强明显 (P<0 .0 1) ,对肝脏无保护作用。结论 :肝硬化肝脏 I/ R损伤与肝细胞 P-选择素的表达有关 ,NO能抑制肝细胞 P-选择素的表达 ,减轻肝脏 I/ R损伤程度     

单次大剂量照射对大鼠肝星形细胞、细胞TGF-β及PI3K/Akt信号通路分子p-Akt (S473)的影响

目的 探讨单次大剂量照射对大鼠肝星形细胞、TGF-β、PI3K/Akt信号通路影响。方法 雄性SD大鼠40只,随机分为模型组(30只)和对照组(10只)。模型组大鼠均给予右侧半肝6 MV的X线单次30 Gy照射,对照组予以相同方式假照射,于照射后3、5、10 d随机抽取模型组大鼠10只,对照组3、4只,检测血清AST、ALT、ALP、TB、DB变化情况;肝脏组织经HE和Masson染色观察病理形态学变化;免疫组织化学检测肝组织内TGF-β₁、α-SMA、p-Akt (S473)表达。结果 在照射后第3、5、10天,模型组大鼠血清AST、ALT、ALP、TB、DB均逐渐升高,明显高于对照组。HE、Masson染色显示辐射诱导肝脏急性损伤大鼠肝血窦周围胶原纤维较对照组生成明显。免疫组化显示随照射后观察时间的延长TGF-β₁、α-SMA、p-Akt (S473)表达逐渐增强,经IPP分析差异有统计学意义(P=0.000)。结论 单次大剂量辐射导致急性放射性肝脏损伤过程中伴随肝星状细胞活化、TGF-β₁分泌增加及PI3K/Akt信号通路活化。     

己烯雌酚对OVCAR3细胞株HOXA10基因表达与甲基化影响及其机制的探讨

目的:研究己烯雌酚(DES)对卵巢上皮性癌细胞株OVCAR3中HOXA10基因表达及启动子区甲基化状态的影响.方法:体外培养卵巢上皮性癌细胞株OVCAR3,分别加入5×10-6、5×10-7和5×10-8 mol/L的DES培养5d(120 h)后收集细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印记技术检测HOXA10基因mRNA和蛋白的表达水平;运用甲基化特异性聚合酶链反应检测HOXA10基因启动子区的甲基化状态.结果:随着DES浓度的升高,OVCAR3细胞中HOXA10基因的表达存在升高的趋势,且各组间的表达差异有统计学意义,HOXA10基因mRNA表达(5×10-8 mol/L DES组与对照组比较,P=0.002;5×10-7 mol/L DES组与5×10-8 mol/L DES组比较,P=0.028;5×10-6 mol/L DES组与5×10-7 mol/L DES组比较,P=0.000 2)、HOXA10基因蛋白表达(5×10-8 mol/L DES组与对照组比较,P=0.032;5×10-7 mol/L DES组与5×10-8 mol/L DES组比较,P=0.049;5×10-6 mol/L DES组与5×10-7mol/LDES组比较,P=0.009);且DES可诱导HOXA10基因启动子区的甲基化状态发生去甲基化改变.结论:DES可以上调卵巢上皮性癌细胞株OVCAR3细胞中HOXA10基因的表达,这与DES对HOXA10基因启动子区甲基化状态的影响有关.     

肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的疗效观察

目的观察肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的疗效, 探讨原代肝细胞提取方法, 观察体外培养的大鼠肝细胞生存情况。方法 利用胶原酶消化法分离大鼠肝细胞, 用D-氨基半乳糖(D-GalactosamineN, D-GalN)制作大鼠急性肝功能衰竭模型, 并以此模型为基础行大鼠同种异体肝细胞移植实验。结果 分离的肝脏实质细胞(Hepatocyte)的存活率在87%-95%。平均每只大鼠肝脏可分离出7.8×10⁷个肝脏实质细胞。肝细胞移植组大鼠7天的存活率为54.2%(13/24), 对照组8.3%(2/24), 移植组大鼠存活率与非移植组大鼠存活率之间具有显著性差异(P＜0.005)。结论 经腹腔移植同种异体肝细胞可明显改善D-GalN诱导的急性肝衰竭大鼠的存活率, 腹腔肝细胞移植是治疗急性肝衰竭安全有效的方法。     

姜黄素对化学诱导大鼠肝癌缺氧模型血管生成的影响

目的:探讨姜黄素对二乙基亚硝胺( diethylnitrosamine, DEN)诱发大鼠肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）缺氧后血管形成的影响。方法: 采用DEN诱发大鼠HCC,结扎肝动脉并构建大鼠HCC缺氧模型。将HCC模型大鼠按照数字表法随机分为单纯碘化油栓塞组（A组）、碘化油联合姜黄素栓塞组（B组）、碘化油联合肝周包膜组（C组）、碘化油联合姜黄素及肝周包膜组（D组）,每组10 只。比较各组大鼠相应治疗后HCC细胞及组织VEGF、微血管密度（microvessel density,MVD）及大鼠中位生存时间（median survival time,MST）。结果：B组与D组的VEGF蛋白表达及MVD均比A组显著降低（P<0.01）,而C组上述指标则与A组无显著变化（P>0.05）。B、C、D组比A组大鼠MST均显著延长（P<0.05）,D组大鼠的MST高于B、C组（P<0.05）。结论：姜黄素可抑制HCC缺氧大鼠肿瘤血管的生成,可降低VEGF表达及MVD,起到延长大鼠生存期的作用。     

贞芪扶正胶囊对大鼠实验性肝癌发生发展的影响

目的 :观察贞芪扶正胶囊在化学致癌剂二乙基亚硝胺 (diethylnitrosamine ,DENA)诱发大鼠肝癌过程中 ,对肝癌发生、发展的影响。方法 :实验分为 4组 ,除单纯致癌组 (D组 )外 ,其余各组大鼠均在给予致癌剂前 (A组 )、同时 (B组 )或后 (C组 )加给贞芪扶正胶囊。在给予致癌剂 2 0周后取肝脏作肉眼、光镜和电镜检查。结果 :单纯致癌组大鼠均形成肝癌。服用贞芪扶正胶囊的各组情况则有较大差异 ,A组大鼠显示致癌剂对肝脏毒性损伤明显低于其他各组 ,并且当其他各组动物均已形成肝癌甚至已有转移时 ,此组中仅有少数大鼠形成肿瘤 ,多数大鼠则仅出现DENA毒性刺激而形成的细胞增生结节。结论 :贞芪扶正胶囊有预防或延缓肝癌发生的作用     

布洛芬通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控肝癌QGY-7703细胞迁移和侵袭的机制

目的 探讨布洛芬通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对肝癌QGY-7703细胞迁移和侵袭的调控机制。方法 取对数生长期人肝癌细胞QGY-7703,采用随机法分为两组,对照组（C组）：加入等容量的RPMI l640培养液;实验组（B组）：按照不同布洛芬浓度分为三个亚组：B1组250 μmol/L,B2组500 μmol/L、B3组1 000 μmol/L。各组分别作用24、48和72 h后,利用Transwell小室检测各组细胞的侵袭和迁移能力。各组分别作用48 h后,采用Real-time PCR检测各组细胞中PI3K、PTEN和MMP-9基因表达的变化;用Western blot检测各组细胞中PTEN、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）和MMP-9蛋白表达情况。结果 与C组比较,B1、B2、B3三组细胞迁移和侵袭能力均降低,具有浓度和时间的依赖性,差异有统计学意义（P<0.01）;与C组比较,B1、B2、B3三组细胞PTEN mRNA和PTEN蛋白表达明显升高,且随着布洛芬作用浓度的增加而升高,具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）;与C组比较,B1、B2、B3三组细胞PI3K mRNA、Akt和mTOR蛋白的表达量差异均无统计学意义（P>0.05）;与C组比较,B1、B2、B3三组细胞MMP-9 mRNA和蛋白的表达以及p-Akt、p-mTOR蛋白的表达均显著下降,且随着布洛芬作用浓度的增加而降低,具有良好的浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 布洛芬可以抑制QGY-7703细胞的迁移和侵袭能力,与布洛芬对细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路的调控有关。     

罗勒多糖对卵巢癌肿瘤转移相关基因SEMA4C表达影响实验研究

目的：观察分析罗勒多糖对卵巢癌SKOV3细胞肿瘤转移相关基因SEMA4C表达的影响,揭示罗勒多糖抗卵巢癌转移的作用机制。方法：体外培养卵巢癌SKOV3细胞,实验分为5组,A组为不加罗勒多糖处理的空白对照组,B组（罗勒多糖100mg／L）、C组（罗勒多糖500mg／L）、D组（罗勒多糖1000mg／L）、E组（紫杉醇0．05μmol／L）为紫杉醇组;荧光实时定量PCR检测不同处理组细胞中SEMA4CmRNA的表达变化;免疫细胞化学分析不同处理组细胞中se—ma4C蛋白的表达差异。结果：SKOV3细胞中SEMA4CmRNA相对表达量,B组为（3．60±0．01）×10-4,C组为（3．04±0．34）×10-4,D组为（1I81±0．42）×10-4,E组为（5．56±0．14）×10-4,与A组（9．02±0．41）×10-4比较,差异均有统计学意义,P〈0．01;B、C和D组与E组比较,差异有统计学意义,P〈0．01;SKOV3细胞中Sema4C蛋白表达平均光密度B组为9．64±0．21,C组为8．58±0．16,D组为6．15±0．38,E组为12．16±0．20,与A组的15．19±0．22比较,差异有统计学意义,P〈0．01;B、C和D组与E组比较,差异均有统计学意义,P〈O．01;罗勒多糖可以抑制卵巢癌细胞中SEMA4CmRNA及编码蛋白的表达,且随着药物浓度的增大,抑制作用越明显。结论：罗勒多糖可下调肿瘤转移相关基因SEMA4C的表达,可能是罗勒多糖抗卵巢癌淋巴道转移的新机制。     

饮水微囊藻毒素在大鼠肝癌发生期间对细胞增殖与凋亡的影响

目的: 研究经饮水摄入微囊藻毒素(MC)在大鼠肝癌发生期间对细胞增殖与凋亡的影响,进而探讨微囊藻毒素促肝癌机制.方法:50只Wistar大鼠随机分为4组,A组(空白对照):B组(DEN启动对照);C组(DEN处理,饮含MC藻水):D组(DEN处理,腹腔注射MCLR纯毒素)、应用LSAB免疫组化技术检测大鼠肝癌前病变病灶中PCNA、Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:各处理组PCNA平均积分光密度值(AIOD)均较A组0.0013明显升高,分别为B组0.0033,C组0.0036和D组0.0088,其中D组与B组比较有明显升高(P<0.05).饮水摄入或腹腔注射微囊藻毒素均可使Bcl-2表达上调,Bax表达下调.结论:促进调控细胞增殖与凋亡的基因平衡失调.使细胞失控性生长,可能是微囊藻毒素促肝癌作用的分子机制之一.     

巴西蜂胶抗大鼠急性放射性肝损伤的实验研究

目的：探讨巴西蜂胶对30Gy高能X线上腹部照射后大鼠急性放射性肝损伤的防护作用。方法：40只SD大鼠随机分为4组：A组（生理盐水＋假放疗组）;B组（蜂胶＋假放疗组）;C组（蜂胶＋放疗组）;D组（生理盐水＋放疗组）。实验大鼠接受高能X线上腹部照射30Gy,并于照射后4天采血、处死,观察大鼠肝细胞凋亡情况、肝脏病理改变,检测血清ALT、AST水平变化,观察肝脏组织的SOD、GSH活性变化。结果：C组与D组比较,大鼠肝细胞凋亡指数、血清ALT、AST水平显著降低,病理损伤减轻,肝脏组织中SOD、GSH均显著增高（P〈0.05）。结论：巴西蜂胶可清除自由基,减少辐射所致肝细胞凋亡,进而对急性放射性肝损伤起一定的防护作用。     

急性淋巴细胞白血病小鼠甲氨蝶呤化疗后血及脑组织药物浓度的对比研究

 目的　探索急性淋巴细胞白血病小鼠不同剂量甲氨蝶呤（MTX）化疗后血和脑组织药物浓度的关系。方法　4周龄清洁级普通昆明小鼠80只：建立急性淋巴细胞白血病小鼠模型,随机抽取20只小鼠经股骨取骨髓行骨髓细胞学检查作模型验证;依据MTX化疗剂量与标本采取时间点的不同将余60只急性淋巴细胞白血病小鼠分为六组,每组10只,分别为A、B、C、D、E、F组;各组均取0.5 ml血液及0.4 g脑组织,血液离心,脑组织匀浆后离心,取上清用荧光偏振免疫方法检测药物浓度。结果　A、B、C、D、E、F六组平均MTX血药浓度分别为（39.08±5.18）μmol／L、（15.86±1.02）μmol／L、（8.67±5.43）μmol／L、（68.29±5.19）μmol／L、（29.55±6.22）μmol／L、（13.98±1.12）μmol／L,组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）;各组脑组织平均MTX浓度依次为：（1.05±0.26）μmol／L、（0.61±0.25）μmol／L、（0.48±0.25）μmol／L、（2.07±0.35）μmol／L、（1.27±0.21）μmol／L、（0.59±0.69）μmol／L,组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）;六组血与脑组织药物浓度相关系数依次为：0.82、0.75、0.19、0.81、0.55、0.43。结论　急性淋巴细胞白血病小鼠经大剂量MTX（HD-MTX）方案化疗后,于0.5 h出现血及脑组织药物浓度峰值,5 g／m2较3 g／m2能更好地透过血脑屏障使脑组织药物浓度达到有效治疗浓度。