ELISA检测抗HCV影响因素分析

ELISA方法的检测原理是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,     

用新的非侵入性抗原检测诊断幽门螺杆菌感染

为寻找新的非侵入性技术诊断幽门螺杆菌 (Hp)感染 ,本文评价了检测粪便 Hp抗原(Hp SA)酶免疫测定 (EIA)在 Hp感染的诊断和疗效观察中的准确性。用作 Hp SA EIA检测的粪便标本来自欧洲 1 1个胃镜室的 5 0 1例进行胃镜检查的患者。作者先将抗 Hp多克隆抗体吸附到微孔上作为捕获抗体 ,然后将稀释液稀释的粪便标本和结合过氧化物酶的多克隆抗体加入到微孔中 ,室温培育 1小时后 ,洗去未结合的物质 ,加入底物室温培育 1 0分钟。如有结合的 Hp抗原存在 ,即出现显色反应 ,加入终止液 ,用分光光度计 (45 0 nm)读取结果 ,<0 .1 40为阴性 ,0 .1 …     

ELISA检测乙肝标志物的影响因素浅析

酶联免疫吸附试验（ELISA法）是目前检验科常用的免疫学检测方法之一,其基本原理是将已知抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面,测定时将受检标本（抗原或抗体）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开,     

应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的:制备和纯化O157:H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157:H7免疫血清并进行纯化及酶标记.建立对O157:H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延. 方法ELISA双抗体夹心法检测O157:H7抗原.步骤:包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157:H7酶结合物,最后加入底物显色.结果本课题所研制的抗O157:H7酶结合物只对O157:H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应.结论应用酶联免疫吸附试验(即双抗体夹心法)对肠出血大肠杆菌O157:H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感.临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌O157:H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段.     

应用ELISA检测注意的事项

酶结合免疫吸附测定 (ELISA)法在临床检验中应用广泛 ,它以免疫学反应为基础 ,将抗原抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合 ,由于抗原抗体反应在一种固相载体———聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行 ,每加入一种试剂温育后 ,可通过洗涤除去多余的游离反应物 ,从而保证试验结果的特异性和稳定性。ELISA操作简便 ,灵敏度高 ,但是其步骤较多 ,尤其是做乙型肝炎标志物的检测 ,各个环节稍不注意就会影响结果 ,现将我们在工作中的体会作一总结。1准备1 1将新鲜标本放入37℃水温箱1～2小时 ,再用2500r/min离心10分钟 ,使血清析出 ,注意…     

应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的制备和纯化O157∶H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157∶H7免疫血清并进行纯化及酶标记。建立对O157∶H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延。 方法ELISA双抗体夹心法检测O157∶H7抗原。步骤包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157∶H7酶结合物,最后加入底物显色。结果本课题所研制的抗O157∶H7酶结合物只对O157∶H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应。结论应用酶联免疫吸附试验（即双抗体夹心法）对肠出血大肠杆菌O157∶H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感。临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌O157∶H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段。     

用ABC-ELISA直接测定细胞在悬液中产生的抗体

本文报道利用高度敏感的亲和素-生物素过氧化物酶(ABC)试剂,建立一种测定体外合成抗体的ELISA.将抗原致敏动物的脾脏细胞悬液直接加在包盖过抗原的微量滴定板孔内,置37℃的CO_2培养箱内温育6小时后,洗去细胞,各孔加生物素化第二抗体,温育2小时后洗板,继加ABC,反应30分钟后洗板,加底物显色.若在细胞悬液中加入蛋白合成抑制剂嘌呤霉素,可使光密度读数下降,从而证明参加反应的抗体确系体外合成.此法测定重复样品的     

间接ELISA:标准化和质量控制的实用方面

引言测定血清抗体的最好技术是固相免疫测定。该系统取决于抗原与惰性载体表面结合的能力,它能形成供以后吸附抗体用的免疫吸附剂,然后通过载体表面的抗体与标记抗球蛋白结合物的反应测定特异性抗体量。     

应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠村菌Ｏ１５７：Ｈ７

目的：制备和纯化Ｏ１５７：Ｈ７抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗Ｏ１５７：Ｈ７免疫血清并进行纯化及酶标记。建立对Ｏ１５７：Ｈ７感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延。方法：ＥＬＩＳＡ双抗休夹心法检测Ｏ１５７：Ｈ７抗原,步骤：包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗Ｏ１５７：Ｈ７酶结合物,最后加入底物显色。结果：本课题所研制的抗Ｏ１５７：Ｈ７呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应。结论：应用酶联免疫吸附试验（即双抗体夹心法）对肠出血大鼠肝菌Ｏ１５７：Ｈ７抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感。临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段。     

抗体酶及其在医药中的应用前景

酶催化具有高效、高专一性、反应条件温和等显著特点。然而，对于大多数与生命活动无直接联系的化学反应来说，大自然并没有赋与它们象酶那样的高效催化剂。“抗体-抗原”有与“酶-底物”相类似的结合特性，而且抗体具有丰富的多样性，机体的免疫系统能产生10B种不间的抗体分子。1969年，Jencks W提出通过免疫，诱导产生抗底物激态的抗体，该抗体将具有类似酶的催化特性，     

血小板表面相关抗体测定及临床意义

我科开展了血小板表面相关抗体的测定已多年,最近对40例健康成人和48例原发性血小板产减少性紫癜(ITP)患者测定了血小板表面相抗体,作了统计学处理,ITP患者血小板表面相关抗体值明显高于健康人P<0.01,对ITP的诊断有着极为重要的意义,值得推广和使用。1　原理先将抗体血清包被在微量反应板上,再加入病人的血小板溶解液,如果被检样品血小板表面有IgG、IgA、IgM和C3则会和包被上的抗体形成抗原抗体复合物,再加入酶联抗血清进行固相放大,最后在底物还原下显色,其颜色的深浅与血小板表面的相关抗体量成正比,测定其显色的值,以测定所得之值…     

基因重组克隆技术制备的幽门螺杆菌抗原检测血清抗体的对比研究

过去的几年中建立了一些非侵入性检测幽门螺杆菌(Hp)感染的方法,其中临床应用较多的是培养的Hp菌体抽提物作为抗原检测血清总抗体或尿素酶抗体。近年国外应用基因工程表达的多克隆或单克隆基因蛋白作为抗原,并结合到固相载体上,同时应用酶标记抗人IgG(或IgA)可以检测相应的血清—     

以敏感的逆转录酶及抗原捕获ELISA检测人类免疫缺陷症病毒的敏感性比较

试验用病毒系从传代培养的T细胞系(CEM)中生长的人类免疫缺陷症病毒(HIV)分离物获得,在电镜下计数经染色的病毒样颗粒。逆转录酶(RT)试验是将50μl病毒样品与50μl 2倍浓缩的RT试验缓冲液结合,37℃温育22小时。用Abbott和Du Pont两种试剂盒作抗原捕获(AC)ELISA。Abbott试剂盒用人抗HIV抗体包被聚苯乙烯珠捕获病毒抗原,然后加兔抗HIV抗体及羊抗兔IgG-辣根过氧物酶结合物,再加底物邻苯二胺。DuPont试剂盒系将兔抗HIV p24抗体包被96孔微量板,检测系统为生物素化兔抗HIV p24抗体和链霉亲和素-辣根过氧物酶结合物,邻苯二胺为底物。结果证明,病毒多聚酶活性与病毒颗粒     

抗核抗体谱检测在自身免疫性疾病诊断中的应用价值

目的 探讨自身免疫性疾病患者血清抗核抗体谱检测及其临床意义.方法 将核抗原和相关胞浆抗原印迹于硝化纤维膜上.患者血清中的抗体与膜条上的相应抗原特异性结合.加入辣根过氧化物酶标记二抗,形成抗原-抗体-酶标二抗复合物.再加入底物后,即可显示其自身抗体是否存在.用该免疫印迹法(IBT)检测42例自身免疫性疾病患者血清抗核抗体谱.结果 在20例系统性红斑狼疮(SLE)患者中,抗dsDNA抗体、抗-Sm抗体、抗组蛋白抗体、抗核小体抗体阳性率分别为65％、50％、45％、45％.9例干燥综合征(SS)患者中,抗SSA60、抗SSA52、抗SSB阳性率分别为88.8％、77.7％、66.6％.6例混合性结缔组织疾病(MCTD)抗nRNP均为阳性.5例进行性系统性硬皮病(PSS)患者抗Scl-70均为阳性.2例皮肌炎(PM)患者均显示抗Jo-1抗体阳性.结论 抗核抗体谱检测对自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断具有重要意义.     

酶免疫测定与放射免疫测定用于乙型肝炎表面抗原检测的比较

作者比较了固相酶免疫测定(EIA)与固相RIA检测人血清HBsAg的结果。RIA用AusriaⅡ试剂盒。血清与豚鼠扰-HBs包被的珠于45℃培养2小时,然后用I~(125)标记的人抗-HBs血清于45℃培育1小时,测定I(125)结合物。以每分钟计数(cpm)是阴性对照的2.1倍为阳性。EIA用Auszyme I试剂盒,血清与豚鼠抗-HBs包被的珠于40℃培育2小时,然后用辣根过氧物酶标记的羊抗-HBs血清于40℃培育1小时,加入苯二胺底物,在暗处放0.5     

酶联免疫吸附试验一步法检测HBsAg有关问题探讨

酶联免疫吸附试验（ELISA）是检测HBsAg常用方法，根据反应模式可分为一步法和二分法。一步法是将待测样品和酶标记抗体同时加入到反应孔中进行反应。从而达到简便、快速的目的；两步法是先将样品加入到反应孔中，待反应结束后再加入酶标记抗体，从而使待测样品的“捕获反应”和酶标记抗体的“酶联反应”分开进行，因而反应更加稳定、重复性也更好，但反应时间比一步法长。目前国内用于检测HBsAg的试剂盒多为ELISA一步法，在实际工作中，某些因素使一步法检测结果受到影响，若不注意，将出现假阳性或假阴性。现对操作中出现的问题进行探讨，旨在提高HBsAg检测结果的准确性。     

ELISA法检测人血丙种球蛋白制剂抗-HCV含量——稀释液的选择

<正> ELISA法是用HCV特异性抗原包被酶联板,待检样品中的抗—HCV抗体与包被抗原反应后,再与酶标抗体结合形成抗原—抗体—酶标抗体复合物,加入TMB显色后读取OD值以判定制品中抗—HCV含量。     

加酶时间对竞争ELISA法检测HBcAb的影响

目的观察加酶时间对竞争ELISA法检测乙肝核心抗体(HBcAb)结果的影响。方法将梯度稀释后含不同浓度的HBeAg加到包被着HBcAb的酶标反应孔内,在不同时间后,分别加入酶结合物(酶标HBcAb),并按说明书操作,检测结果并判读。结果酶结合物加的越迟,吸光度越低,即阳性“程度”越高。结论在竞争ELISA法检测HBcAb中,酶结合物的加样时间对HBcAb的检测有很明显的影响。加样越迟,越易导致假阳性。     

血清幽门螺杆菌抗原检测方法比较

目的 :对血清幽门螺杆菌抗原检测的两种方法进行对比分析。方法 :取 42例患者胃粘膜组织块 ,应用尿素酶(HPUT)试剂盒进行检测 ,操作步骤按产品说明书进行。另外 ,采用夹心ELISA法做对比检测 ,简要过程是以抗HP特异性抗体包被固相支持物 ,依次加入封闭蛋白 (覆盖非结合点 ) ,试样及酶标记的HP抗体 ,TMB显色 ,以肉眼观察定性结果。每批试剂均设阳性及阴性对照。包被及酶标记抗HP抗体的效价为 1∶5 12 0 0。结果 :42例中 ,HPUT的阳性检出率为 2 8.5 7% ,夹心ELISA法检出血清HP抗原的阳性率为 30 .95 %。两法的符合率达 90 % ,两者无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :夹心ELISA方法简单 ,无痛苦 ,适合于大规模的筛查。夹心ELISA法检测血清HP抗原与用HPUT检测胃内尿素酶的符合率高 ,且配对进行 χ2 检验表明 ,两法间无显著性差异 ,提示应用夹心ELISA检测血清HP抗原 ,有可能替代HPUT诊断HP现症感染 ,但仍需扩大观察的例数 ,进一步考验这一方法的特异性、敏感性及稳定性     

外源凝集素免疫试验:用外源凝集素-抗体结合物定量和滴定抗原及抗体

[Guesdon J-L et al:J Immunol Methods 39(1～2)1,1980(英文)] 作者研究了用外源凝集素-抗体结合物(LAbC)作为一般试剂,用于需要标记抗原或抗体的免疫学技术中的可能性。使用这些结合物,在后来再加入作为标记的糖结合物时,就连接到外源凝集素(L)的糖结合部位上,从而使其带上标记。