体外培养人眼小梁细胞表达转化生长因子—β2

目的：了解体外培养人眼小梁细胞是否会表达转化生长因子－β2(Transforming growth factor-β2,TGF-β2)，以确定TGF-β2的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关。方法：一步法提取体外培养人眼的小梁细胞RNA，利用RT－PCR检测TGF－β2的m RNA, 用双链测序鉴定PCR产物，并用免疫组化SUPERVISION法检测TGF－β2蛋白的表达。结果：RT－PCR扩增得到的单一产物，其序列与已知序列完全一致。TGF－β2免疫组化染色呈阳性。结论：小梁细胞自身产生的TGF－β2，是小梁网局部微环境和房水中TGF－β2的来源之一，TGF－β2不仅通过旁分泌式，也可通过自分泌方式作用于小梁细胞。小梁细胞产生TGF－β2的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关，值得进一步研究。     

转化生长因子—β与眼表瘢痕形成

转化生长因子－β（TGF－β）是一种多功能的细胞因子，在结膜和角膜中均有分布，参与眼表损伤后的瘢痕形成。本综述TGF－β的分子结构、受体和信号传导通路及其生物学功能，着重介绍TGF－β在结膜和角膜损伤愈合、瘢痕形成中的作用，以及羊膜移植对TGF－β的瘢痕形成的抑制作用。     

转化生长因子—β与原发性开角型青光眼

转化生长因子－β（TGF－β）在人类几乎所有的细胞中均可发现，通过与受体结合，在细胞增殖、免疫、细胞外基质合成中，发挥着重要的生物学效应。本就TGF－β在原发性开角型青光眼的发病机制，滤过性手术术后瘢痕形成中所起作用的进展进行综述。     

TGF-β1对胎儿晶状体上皮细胞增殖的作用

目的 探讨转化生长因子－β1（transforming growth factor-β1,TGF－β1)对胎儿晶状体上皮细胞增殖的作用。方法 用SP免疫对48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行细胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA),TGF－β1免疫组织化学染色。结果 PCNA，TGF－β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均表达；免疫阳笥细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色；TGF－β1阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状；经相关分析：TGF－β1与PCNA呈正相关。结论 PCNA，TGF－β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达；TGF－β1与PCNA呈正相关，具有促进晶状体上皮细胞增殖的作用。     

转化生长因子β与白内障

在众多的生长因子和细胞因子中，以转化生长因子β（TGF－β）与白内障的关系最为密切。眼内介质中存在着无活性的潜活TGF－β和有活性的成熟TGF－β，在一定条件下潜活TGF－β可活化为成熟TGF－β。晶体上皮细胞有TGF－β受体，体外在TGF－β作用下可发生白内障样改变，而TGF－β的抑制物如α-巨球蛋白可以防止这种改变，可见TGF－β在白内障的发生和发展过程中起着重要的作用。本文对TGF－β与白内障关系作一简要综述，供有关研究者参考。     

人胎儿晶状体上皮细胞增殖及相关因子的动态研究

目的：观察增殖细胞核抗原（PCNA）及转化生长因子－β1（TGF－β1），表皮生长因子（EGF）在人胎和晶状体上皮细胞的表达，并探讨其在晶状体发育中的作用。方法：用SP免疫细胞化学法对48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行PCNA，TGF－β1，EGF免疫细胞化学染色。结果：PCNA，TGF－β1，EGF在人胎儿不同胎龄状体上皮细胞内均有表达；免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色；TNF－β1，EGF阳性细胞浆为桔共色或棕黄色的颗粒状或斑块状；经相关分析，TGF－β1与EGF以及TGF－β1，EGF与PCNA均呈正相关。结论：PNCA，TGF－β1，EGF在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞内均有表达，TGF－β1，EGF具有协同作用，共同促进晶状体上皮细胞的增殖。     

孔源性视网膜脱离视网膜下液中TGF—β1含量与PVR存在关系的初步探讨

目的：定量测定孔源性视网膜脱离患视网膜下液中转化生长因子β1的含量,探讨转化生长因子β1与增殖性玻璃体视网膜病变程度的相对应关系。方法：采集30例行孔源性视网膜脱离复位术患的视网膜下液,用TGF－β1试剂盒进行检测。结果：30例视网膜脱离患视网膜下液中均含有TGF－β1,SRF中TGF－β1含量随着病程的延长而增加,随着PVR严重程度的增加而增加。结论：在PVR形成的中,随着PVR程度的增加,视网膜下液中TGF－β1的含量随之增加,这可能为细胞迁移,增,膜收缩形成的原因,将来也许可以用拮抗TGF－β1的方法去预防和治疗PVR的形成。     

转移生长因子-β2介导的小梁细胞纤维联结蛋白的mRNA及蛋白质的表达

目的探讨转移生长因子-β2（TGF—β2）对猪眼小梁细胞中纤维联结蛋白的mRNA及蛋白质表达的影响。方法经器官培养法（organ culture）2～3天后，分组的猪眼前段分别注入浓度为0．45ng／ml（原发性开角型青光眼前房水中TGF—β2的浓度）和0．18ng／ml（正常人眼前房水中TGF—β2的浓度）的活性TGF—β2，对照眼灌注不含TGF—β2的培养基，将猪眼前节经固定、石蜡包埋和切片，通过原位杂交和免疫组化的方法检测小梁网细胞中纤维联结蛋白的mRNA和蛋白质的表达，对照组采用同样的方法检测。结果在灌注含有0．45ng／ml活性TGF—β2的标本中，小梁细胞中纤维联结蛋白的杂交信号和免疫反应强度均呈强阳性，而在灌注含有0．18ng／ml TGF—β2的标本中，小梁细胞其杂交信号和免疫反应强度均较弱，在对照组中，杂交信号和免疫组化染色呈阴性。结论TGF—β2对灌注猪眼中小梁网的纤维联结蛋白的mRNA和蛋白质表达起正调节作用，表明猪眼小梁细胞合成的这种ECM（细胞外基质成分，即纤维联结蛋白）被房水中的TGF—β2调节，这个结论和我们以及其他研究者先前的假设是一致的，即浓度升高的活化TGF—β2可能在猪眼的小梁组织发生病理组织学改变中起着重要的作用。     

青光眼结膜成纤维细胞增生与TGF-β的表达

目的探讨接受药物治疗的原发性开角型青光眼患者结膜成纤维细胞（human Tenon’s fibroblast，HTF）的增殖能力以及与转化生长因子β（transforming growth factor—β，TGF—β）表达的关系。方法药物治疗的原发性开角型青光眼患者，在抗青光眼手术中取结膜Tenon囊组织并在体外培养到含有不同浓度胎牛血清（FBS）培养基中，检测HTF的增殖情况，用RT-PCR方法检测TGF—β3种异形体的mRNA表达水平，并与对照组进行对照。结果实验组的HTF细胞增生明显高于对照组（P=0．0013）。3种TGF—β异形体在mRNA水平均被HTF表达，且实验组的TGF—β2和TGF-β3在mRNA水平的表达显著高于对照组。结论实验组HTF中增高的TGF—β可能促进细胞增殖，而二者也可能与本研究中至少1a的抗青光眼滴眼液的持续使用有关。且细胞增生与TGF—β表达提高都促进了抗青光眼滤过术后的切口愈合，从而对手术效果起到负面影响。     

羊膜对准分子激光屈光性角膜切削术后角膜组织表达TGF—β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原和

目的：观察羊膜移植对准分子激光屈光性角膜切削术（photorefractive keratectomy,PRK)后角膜组织表达转移生长因子－β1）、Ⅰ、Ⅲ型膛原和纤维连接蛋白（fibronectin,FN)的影响，探讨羊膜移植减轻瘢痕形成的部分机制。方法：对10只新西兰白兔双眼行PRK，术后1眼立即行角膜表面羊膜移植术，另眼作为对照。于术后4周进行免疫组织化学染色检查。结果：羊膜移植组角膜上皮与基质中角膜基质细胞及胶原纤维TGF－β1表达较对照组明显减弱，前角膜基质表达Ⅲ型胶原和FN亦明显较对照组减弱。角膜基质Ⅰ型胶原表达两组间无明显差异。结论：羊膜能抑制PRK后角膜组织TGF－β1、Ⅲ型胶原和FN的表达，羊膜移植后瘢痕形成轻可能部分与羊膜调节组织TGF－β1、Ⅲ型胶原和FN的表达有关。     

TGF-β1诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡过程中Survivin基因的表达及意义

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡过程中Survivin基因的表达及意义。方法用免疫组织化学染色法检测人RPE细胞Survivin蛋白的表达;用AnnexinVFITC标记法测定TGFβ1作用下的人RPE细胞凋亡发生率;用RTPCR方法检测不同质量浓度TGFβ1作用下人RPE细胞Survivin基因的表达。结果免疫化学染色法显示:人RPE细胞表达Survivin基因;AnnexinVFITC标记法检测结果显示:人RPE细胞的凋亡率随着TGFβ1质量浓度的升高而增高;RTPCR结果显示:随着TGFβ1质量浓度的升高,Survivin基因的表达逐渐降低。结论Survivin基因在人RPE细胞的凋亡过程中起着非常重要的作用。     

INF-γ和TGF-β1对视网膜色素上皮细胞端粒酶活性的影响

目的 探讨不同浓度的干扰素-γ(interferon-γ，INF-γ)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-βl，TGF—β1)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞端粒酶活性的影响。方法 使用不同浓度的INF-γ和TGF—βl处理RPE细胞24h后，采用端粒重复序列扩增法定性、定量检测上述细胞因子作用下的RPE细胞端粒酶活性。结果 随着上述细胞因子浓度的增加，RPE细胞端粒酶活性逐渐降低，且呈剂量依赖性，2种细胞因子具有协同作用。结论 INF-γ和TGF—βl对RPE细胞端粒酶活性具有抑制作用，细胞因子有可能成为治疗增生性玻璃体视网膜病变的新靶点。     

正常角膜缘组织中与血管生成相关的生长因子及其受体的表达

目的：探查正常人角膜缘组织里与血管生成相关的生长因子及其受体的分布。方法：用冰冻切片和链亲合素过氧化物酶染色系统，选择一组兔抗人多克隆抗体，即：血管内皮生长因子（VEGF），碱性成纤维细胞生长因子（bFGF），血小板源性生长因子（PDGF－A）和转化生长因子－β1（TGF－β1）及其受体对11例角膜移植供体材料的角膜缘组织进行了检查。结果：VEGF，bFGF,PDGF-A和TGF－β14种生长因子仅在1或2例标本中不表达外，在大部分标本中表达阳性。4种生长因子的受体在角膜缘上皮，基底膜，上皮下组织和角膜组织内阳性表达分别是：VEGF9例，7例，10例和8例；bFGF8例，9例，9例和8例，PDGF5例，4例，10例和7例；TGF－β13例，0例，11例和6例。结论：在正常角膜缘组织中，存在VEGF，bFGF ,PDGF-A和TGF－β1及其受体，可能在维持正常的角膜功能和调节角膜缘组织的生长和增殖中起着重要作用。     

miR-101-3p靶向TGFβR1/Smad抑制视网膜母细胞瘤细胞侵袭和迁移

目的　探索miR-101-3p对视网膜母细胞瘤细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法　RT-PCR检测miR-101-3p及转化生长因子β受体1（transforming growth factor beta receptor 1，TGFβR1）表达水平；生物信息学预测miR-101-3p与TGFβR1的靶向关系并通过荧光素酶报告实验进行验证。将Y79细胞分为Control组、miR-101-3p mimic组（转染miR-101-3p mimic）、pcDNA-TGFβR1组（转染pc-TGFβR1）及miR-101-3p mimic+pc-TGFβR1组（共转染miR-101-3p mimic和pc-TGFβR1），MTT检测细胞增殖速率，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞侵袭，划痕实验检测细胞迁移，Western blot检测TGFβR1、Ki67、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-9、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2、MMP-9、血管内皮生长因子、p-Smad2及p-Smad3的表达水平。结果　在视网膜母细胞瘤组织中,miR-101-3p的表达为0.35±0.05，明显低于正常视网膜组织（P<0.01）；视网膜母细胞瘤细胞株Y79中miR-101-3p的表达为0.24±0.04，明显低于视网膜上皮细胞株ARPE-19（P<0.01）；与Control组相比，miR-101-3p mimic组miR-101-3p mRNA水平显著升高、TGFβR1 mRNA水平显著降低（均为P<0.01）；miR-101-3p与TGFβR1之间存在连续结合片段。与Control组相比，miR-101-3p mimic组TGFβR1的表达水平显著降低，增殖速率及细胞中Ki67表达均显著降低，细胞凋亡率显著增加，Bax及cleaved Caspase-9表达显著升高、Bcl-2表达显著降低，侵袭细胞数目和划痕闭合率显著降低，MMP-2、MMP-9、血管内皮生长因子、TGFβR1、p-Smad2和p-Smad3的表达水平显著降低（均为P<0.01）。结论　miR-101-3p通过靶向下调TGFβR1抑制视网膜母细胞瘤细胞的侵袭和迁移。     

TGF—β2干预的缺氧状态下补肾活血剂对Muller细胞及谷氨酰胺合成酶活性的影响

目的观察在缺氧和（或）转化生长因子-β2（TGF—β2）干预条件对体外培养的Muller细胞活力以及谷氨酰胺合成酶（GS）的影响。方法用出生7d的SD大鼠体外培养视网膜Muller细胞，将第2代细胞在含20％胎牛血清的DMEM中培养24h后，换用无血清的DMEM孵育24h。分组为：空白血清对照组（20％正常SD大鼠血清的DMEM）；TGF—β2组（20％正常SD大鼠血清的DMEM及终质量浓度为150ng／L的TGF—β2）；模拟缺氧组（20％正常SD大鼠血清的DMEM及终浓度1．0mmol／L的连二亚硫酸钠）；TGF—β2＋缺氧组（20％正常SD大鼠血清的DMEM液、终浓度1．0mmol／L的连二亚硫酸钠和终质量浓度为150ng／L的TGF—β2）；中药血清组（20％中药SD大鼠血清的DMEM）；中药血清＋TGF—β2＋缺氧组（20％中药SD大鼠血清的DMEM、终浓度1．0mmol／L的连二亚硫酸钠和终质量浓度为150ng／L的TGF—β2）。以透射电镜观察视网膜Muller细胞超微结构、以490型酶标仪测定细胞外液乳酸脱氢酶（LDH）释放量及GS活性。结果在缺氧条件下Muller细胞的超微结构发生明显的改变，如：细胞核变形，固缩；细胞器破坏；微绒毛内糖原明显增多。与正常对照组比较，TGF-β2干预组、缺氧组、TGF-β2＋缺氧组的LDH释放量均明显增加（P〈0．05），缺氧组、TGF—β2＋缺氧组的GS活性均明显下降（P〈0．01）；与缺氧组比较，TGF-β2＋缺氧组的LDH释放量明显增加、GS活性明显下降（P〈0．05、P〈0．01）。补肾活血中药血清能降低24h及48h时正常以及TGF—β2与缺氧同时存在条件下LDH的释放量（P〈0．05），增强12h时正常条件下以及12h和24h时TGF-β2与缺氧同时存在条件下GS的活性（P〈0．05、P〈0．01）。结论TGF—β2可加重缺氧条件下Muller细胞活力与GS活性的降低；补肾活血中药含药血清能增强视网膜Muller细胞活力及GS活性。     

体外培养的兔睫状体色素上皮细胞表达转化生长因子-β1

目的研究体外培养条件下兔睫状体色素上皮(ciliarypigmentepithelium,CPE)细胞是否表达转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1),探讨TGFβ1在增殖性玻璃体视网膜病变中的作用。方法体外培养兔眼CPE细胞,取第3代细胞应用免疫组织化学Supervision染色方法检测TGFβ1的表达,用PBS代替第1抗体作为阴性对照。结果与正常活体组织不同,体外培养的兔CPE细胞经免疫组织化学染色,其细胞膜和细胞浆呈棕黄色阳性着色,阴性对照组未见明显棕黄色阳性着色。结论CPE细胞具有合成和表达TGFβ1潜能,为进一步研究增殖性玻璃体视网膜病变、房水形成和睫状体炎症奠定了基础。     

细胞外基质蛋白和转化生长因子β2共同作用诱导人视网膜色素上皮细胞向肌纤维母细胞转化

目的 了解转化生长因子β2（TGFβ2）和细胞外基质（ECM）调节人胚胎视网膜色素上皮（hfRPE）细胞向肌纤维母细胞分化的作用，确定这种调节的信号传导机制。 方法 hfRPE细胞培养于由ECM包被或未包被的培养皿上，培养液中加入或不加入TGFβ2，用免疫组织化学、流式细胞仪、蛋白印迹技术检测α平滑肌机动蛋白（α-SMA）的表达。在培养液中分别加入calphostin C, 染料木黄铜（genistein）, PD98059和渥曼青霉素（Wortmannin），测定α-SMA的表达。 结果 hfRPE细胞培养于ECM包被的培养板上，培养液中加入TGFβ2后，出现明显的形态学改变，包括细胞伸展变长，可见肌动蛋白微丝的形态。流式细胞仪及免疫细胞化学检测结果显示，培养液中加入TGFβ2可明显增加α-SMA的表达，并与剂量成正相关。当TGFβ2 的刺激浓度为50 ng/ml时，与培养于未包被的培养板上的hfRPE细胞相比，用纤维连接蛋白（FN）包被培养板后，〖JP1〗总的平均荧光强度（TMFI）增加（38.01±1.14）%（P<0.05）。蛋白印迹技术检测显示同样的结果。而上述效应可以大部分被蛋白激酶C（PKC）通路抑制剂calphostin C（10 nmol/L）抑制（P<0.01）。 结论 TGFβ2可诱导hfRPE细胞向肌纤维母细胞转化，并与其剂量成正相关，这种作用可被FN加强。TGFβ2和ECM的这种调节作用可能是通过PKC细胞内信号传导通路而发挥作用 。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 328-332)     

乙酸纤维膜在印迹细胞法免疫检测干眼病的应用

目的;研究乙酸纤维膜（cellulose acetate membrane,CAM)在眼球结膜印迹细胞检查（Conjunctival impression cytology)联合免疫组织化学染色的应用价值。方法：对门诊诊断为干眼病的24例病人,采用乙酸纤维膜、印迹细胞法获取干眼病人球结膜上皮细胞,用抗体TGF－β1进行免疫组织化学染色,光镜观察。结果：显微镜观察见乙酸纤维膜透明,TGF－β1染色阳性的球结膜上皮细胞胞膜清晰,胞浆呈棕色,胞核呈兰色。结论：采用乙酸纤维膜印迹细胞检查,操作简单,不损伤结膜,联合免疫组化染色,显微镜下观察细胞清楚,可成为检查眼表疾病的一种简便有效的辅助手段。     

转化生长因子-β在增生性玻璃体视网膜病变中的作用

增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是孔源性视网膜脱离手术失败的主要原因,其发病机制尚未完全明了。综述了转化生长因子13．(TGF—β1)的生物学特性以及它在PVR发展中的作用。探讨TGF—β1与PVR形成的关系。TGF—β在PVR的形成过程中参与了细胞的增殖、膜的收缩。TGF—β是加速PVR形成的重要生长因子之一。将来也许可以用TGF—β的拮抗剂来预防和治疗PVR。     

慢病毒介导的TGFβ-R2shRNA抑制人LECs细胞TGFβ—R2的表达

目的：观察转化生长因子β-R2特异性短发夹 RNA （ shRNA ）对人晶状体上皮细胞TGFβ-R2表达的影响。 方法：根据小干扰RNA （ siRNA ）的设计原则,针对转化生长因子β-受体2基因序列特征构建特异性 shRNA （ RNAi ）载体,与TGFβ-R2过表达载体共转染293 T细胞,经Western blot筛选出有效RNAi载体后,进行扩增、纯化、滴度测定,并转染培养的人LECs , qPCR 检测TGFβ-R2 siRNA慢病毒载体对TGFβ-R2 mRNA表达的影响。 结果：经Western blot 筛选,TGFβ-R2/GV115RNAi＃1对目的基因的表达敲减效果最明显,慢病毒包装,滴度为8E＋8 TU/mL,感染人LECs细胞后,对TGFβ-R2基因有显著的敲减效果,达到78．1％（P＜0．05）。 结论：TGFβ-R2 RNAi载体构建成功,并且能抑制人晶状体上皮细胞TGFβ-R2 mRNA的表达。