庚型肝炎病毒5‘非编码区基因分析及基因型的初步划分

为了分析我国庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的基因结构特点，对２名个体供血者、２例慢性肝炎患者及２例肝硬化患者的血清标本进行了庚型肝炎病毒基因组５’非编码区２７７个核苷酸的基因扩增、分子克隆和序列分析，并利用基因分析软件处理结果。结果表明，分离出的６株ＨＧＶ５’非编码区基因序列（Ｇ００１～Ｇ００６）之间同源性在９６．２％以上。而与国外报道的３株ＨＧＶ序列比较同源性在８６．９％～９１．６％。通过对６株ＨＧＶ（Ｇ００１～Ｇ００６）及国外报道的３株ＨＧＶ基因序列变异性的比较，将ＨＧＶ基因型初步划分为不同的３个组。结果提示我国ＨＧＶ株５’非编码区序列有较高的同源性，而与国外报道的有较大差异，但不同毒株在此区域均可能形成稳定而相似的二级结构模式。     

心脏移植并发疱疹病毒6型感染

从１３例心脏移植病人的外周血淋巴细胞中分离出２株疱疹病毒６型（ＨＨＶ６），并检测了手术前后病人血清特异性抗－ＨＨＶ６ＩｇＧ抗体。这２株ＨＨＶ６可引起典型的细胞病变。分离的毒株在电镜下可见疱疹类病毒样颗粒。经特异性抗体和ＤＮＡ杂交试验证明，这两株病毒均属于ＨＨＶ６Ｂ组。病人血清中特异性抗－ＨＨＶ６ＩｇＧ抗体出现４倍或４倍以上增长的有５例（３９％），其中包括２例病毒分离阳性的病人血清。由于病人在术前血清已是阳性和术后出现有意义效价的增长，因此试验结果提示心脏移植前后免疫抑制剂的应用可能是造成ＨＨＶ６复发感染的重要原因。     

鼻咽癌组织中人疱疹病毒6型感染及其临床意义

目的　探讨人疱疹病毒６ 型（ＨＨＶ６） 与鼻咽癌（ＮＰＣ） 发病的关系。方法　采用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 和原位杂交同时检测正常鼻咽组织和ＮＰＣ 癌前鼻咽组织以及ＮＰＣ 组织中ＨＨＶ６ 和ＥＢＶＤＮＡ 的存在情况。采用免疫组化检测３６ 例ＮＰＣ 组织的ＥＢＶＬＭＰ１ 蛋白表达。结果　在４２ 例ＮＰＣ组织、２１ 例鼻咽癌前病变组织中,经ＰＣＲ检出ＨＨＶ６ ＤＮＡ,阳性率分别为３０－９％ （１３ 例） 和４－７ ％（１ 例） 。ＥＢＶＤＮＡ为９５－２％ （４０ 例） 和６６－６ ％ （１４ 例）。２７ 例正常鼻咽组织未检出ＨＨＶ６ ＤＮＡ,ＥＢＶＤＮＡ为２５－９％ （７ 例）。经ＩＳＨ,仅在１３ 例ＰＣＲＨＨＶ６ ＤＮＡ阳性的ＮＰＣ组织中检出１１ 例阳性,３６ 例ＮＰＣ组织、１０ 例鼻咽癌前病变组织ＩＳＨＥＢＶＤＮＡ 阳性。ＮＰＣ组织的ＥＢＶＬＭＰ１ 蛋白阳性率为４７－２ ％（１７３６）。结论　鼻咽癌组织中存在ＨＨＶ６ 感染,提示ＨＨＶ６ 感染与ＮＰＣ有关。ＨＨＶ６ 感染与ＥＢ病毒ＬＭＰ１ 蛋白表达上调呈正相关,提示在ＮＰＣ 的发生中ＨＨＶ６ 可能直接参与和（ 或） 通过上调ＥＢＶＬＭＰ１ 的表达而起一定作用     

轮状病毒1,2血清型VP7蛋白基因的扩增及其克隆

用聚合酶链反应扩增了轮状病毒Ｗａ株（第１血清型）和ＤＳ－１株（第２血清型）的全长ＶＰ７蛋白基因，利用两引物５＇末端的多接头位点，以ｐＵＣ１８质粒为载体构建了含两株ＲＶＶＰ７基因ｃＤＮＡ拷贝的重组体。经ＰＣＲ扩增制备得１～４血清型ＲＶＶＰ７基因高变区（５１－３９２核苷酸）￣（３２）Ｐ标记核酸探针，对重组质粒型别进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和斑点杂交鉴定，结果Ｗａ株ＶＰ７基因重组体只与１型探针呈强杂交信号，ＤＳ－１株重组体只与２型探针呈强杂交信号。     

人类bcl—2cDNA在NIH／3T3细胞中的表达

将０．９１ｋｂ的含有完整开放阅读框的人类ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ以正向克隆于逆不病毒载体ｐＬ－ＸＳＮ的ＥｃｏＲ１位点，经ＰＡ３１７细胞包装后感染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞，筛选出Ｇ４１８抗性克隆，经免疫印迹证实人类ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ在ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中获得了表达，这一表达人类Ｂｃｌ－２蛋白的哺乳类细胞模型的建立探讨ｂｃｌ－２的作用机制及其与其它基因间关系的研究奠定了基础。     

人6型疱疹病毒糖蛋白H基因测序与表达

用随机双脱氧核苷酸链末端终止法对人６型疱疹病毒（ＨＨＶ－６）糖蛋白Ｈ（ｇＨ）基因进行ＤＮＡ序列测定，找出开读框架，将其大部分插入到质粒ｐＥＴ３ＣＰ并分别转染大肠杆菌株ＢＬ２１、ＰＬＹＳＳ和ＰＬＹＳＥ。３５Ｓ甲硫氨基酸掺入试验表明，带有部分ＨＨＶ－６ｇＨ基因片段的ｐＥＴ３ＣＰ质粒，可在上述大肠杆菌株表达，分子量约为３７×１０~３。     

传染性法氏囊病病毒HZ96 VP2 cDNA的结构分析及在大肠杆 …

以随机引物反转录传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）杭州分离株ＨＺ９６基因组合成第１链ｃＤＮＡ。以第１链ｃＤＮＡ为模板,ＰＣＲ扩增ＨＺ９６ ＶＰ２ ｃＤＮＡ;Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测序ＨＺ９６ＶＰ２ｃＤＮＡ,并对其基因结构氨基酸序列进行计算分析;构建非融合表达质粒,在大肠杆菌中表达ＶＰ２蛋白。结果表明,克隆的ＨＺ９６ＶＰ２ｃＤＮＡ全长为１４３１个核苷酸对（ｂｐ）,含起始密码子ＡＴＧ和终止密码子ＴＡＡ,编码     

丙型肝炎病毒非结构基因5b的变异及与干扰素治疗的关系

以聚合酶链反应直接序列分析方法测定了４例无症状慢性丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者，与９例接受干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者血清中ＨＣＶ非结构基因５ｂ（ＮＳ５ｂ）ｃＤＮＡ的序列。发现，与已发表的Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ序列相比，无症状慢性ＨＣＶ感染者的ＨＣＶ在核苷酸水平的同源性高于干扰素治疗有效的慢性丙型肝炎患者（９５．６５％±２．６１％比９４．３５％±２．２９％），后者又高于干扰素治疗无效的慢性丙型肝炎患者（９２．７０％±１．９０％）。还发现在干扰素治疗后，治疗无效者血清中ＨＣＶＮＳ５ｂｃＤＮＡ序列发生明显变化，在所测定的３８０个核苷酸中有９～４８个发生碱基替换，从而导致所编码的氨基酸中有６～２０个发生突变。结果提示，ＨＣＶＮＳ５ｂ基因变异与病情及干扰素治疗有一定关系。变异较大者常出现明显的临床表现，且干扰素治疗可能趋势于失败。     

新型酵母表达系统—Pichia.pastoris高效分泌型表达病毒生长因 …

目的：实现痘苗病毒生长因子的高效分泌型表达。方法：构建ｐＰＩＣ９Ｄ／ＶＧＦ表达载体,扩增引物分别为Ｐ１：ＴＡＴＡＣＧＴＡＧＡＴＡＧＴＧＧＴＡＡＣＧ,Ｐ２：ＴＡＧＡＡＴＴＣＴＴＡＡＧＴＧＴＴＴＧＧＴＴＴＴ;采用Ｐｉｃｈｉａ．ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母表达系统。结果：经酶切鉴定,证明克隆的基因是正确的;经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,证明转化基因组中确实整合有ＶＧＦ基因,其分子量为９．６ｋＤ;得到了高效分泌型ＶＧＦ     

我国2型登革病毒NS1基因的克隆及部分碱基序列的测定

将我国登革２型病毒株ＮＳ１基因的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增片段直接克隆到Ｔ－载体ＤＮＡ中。用限制性内切酶分析经蓝／白斑筛选和ＰＣＲ鉴定的阳性克隆的ＤＮＡ，证明插入片段与扩增的ＮＳ１片段的大小一致。用双脱氧链末端终止法测序结果表明，ＮＳ１基因扩增片段５’端的部分碱基序列并未发生改变。     

细胞因子对乙肝病毒基因疫苗诱导产生抗体的影响

将构建的三套乙肝病毒基因疫苗（分别编码Ｓ蛋白、ｐｒｅＳ１＋ｐｒｅＳ２＋Ｓ蛋白及ｐｒｅＳ２＋Ｓ蛋白）注射于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠胫前肌内。基因疫苗接种３天后，以同样部位注射ｒｈＩＬ－２、ｒｈＩＬ－４、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＩＦＮ－γ。运用ＥＬＩＳＡ检测不同时间小鼠血清中乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及抗－ＨＢｓ。结果显示：注射基因疫苗３天内，小鼠体内即可表达ＨＢｓＡｇ；两周后，血清中可测到抗－ＨＢｓ，两月后抗体水平达到高峰，并保持高水平至少两月以上；肌内注射的几种细胞因子均可提高血清中抗－ＨＢｓ水平，与对照组相比差异有极显著性（Ｐ＜０．０１），其中，ｒｈＩＬ－４、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＩＦＮ－γ较ｒｈＩＬ－２作用强。提示，细胞因子可作为基因疫苗的佐剂。该研究为增强基因疫苗免疫效果提供了新途径。     

慢性丙肝患者外周CTL对HCV抗原位点的特异性识别及受HLA的限制

目的研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染后外周血中细胞毒Ｔ细胞（ＣＴＬ）对ＨＣＶ的识别杀伤。方法用ＨＣＶＮＰ合成肽Ａ链和Ｂ链从ＰＢＭＣ中经反复刺激产生ＨＬＡＢ４４限制的ＨＣＶ抗原特异ＣＴＬ，对５位人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ｂ４４分子阳性的丙肝患者，６位ＨＬＡＢ４４阴性的丙肝患者及５位ＨＬＡＢ４４阳性，但ＨＣＶ阴性的对照者外周ＣＴＬ对ＨＣＶ核壳蛋白（ＮＰ）的反应进行研究。结果发现ＣＴＬ能识别一个ＨＣＶＮＰ位点，该位点位于ＨＣＶ核壳蛋白的第８１～１００个氨基酸残基之间。而此位点的识别受ＨＬＡⅠ类分子Ｂ４４的限制。在５位ＨＬＡＢ４４阳性的患者，其ＣＴＬ对此位点有明显的细胞毒作用，而其余６位ＨＬＡＢ４４阴性的患者及５位正常对照者，均无此种细胞毒作用。结论在慢性丙肝患者外周血存在ＣＤ８＋的ＣＴＬ，这种ＨＣＶ特异的ＣＴＬ能够识别一个ＨＣＶ的核壳蛋白（ＮＰ）位点，此位点位于ＨＣＶＮＰ残基第８１到１００之间。并且识别此位点的ＣＴＬ受ＨＬＡⅠ类分子Ｂ４４的限制。本文结果为ＨＣＶ感染后，体内细胞免疫在病毒清除中的作用及发病机理的研究提供了方法和线索。     

庚型肝炎病毒NS5区优势抗原表位的表达及其抗原性的初步评价

目的 表达庚型肝炎病毒（HGV）基因且NS5区部分基因重组抗原，分析其抗原性。方法 分别亚克隆了HGV NS5a、NS5b以及NS5b与C区嵌和的基因至pThoiC表达载体上，构建成3个重组表达质粒，分别大肠埃希菌JM109（DE3），用IPTG诱导表达重组蛋白。表达产物经纯化后采用Western blot和间接ELISA方法分析3个重组蛋白的抗原性。结果 经酶切和序列分析鉴定正确，3种表达蛋白均高效表达且相对分子质量与预期大小相符。Western blot分析和间接ELISA试验表明，3种表达蛋白均能与抗－HGV阳性血清发生特异性反应。将应用重组蛋白检测的抗－HGV抗体与混合重组抗原（包括C区合成肽、NS5a合成肽、NS3区基因重组抗原）的检测结果进行了比较，在混合重组抗原阳性的22份血清中，P5a检出率为68％（15／22），P5b检出率为91％（20／22），Pc-5b检出率为73％（16／22）。在70份阴性标本中，3种抗原的检出率分别为P5a:7%(5/70);P5b:1%(1/70);Pc-5b:6%(4/70)。3个重组抗原单独检出阳性的标本，其中有一部分经RT－PCR检测亦为阳性。结论 原核表达的NS5区蛋白所检测的抗－HGV抗体不能完全被其他区段的抗原所覆盖，是免疫诊断HGV感染所必需的抗原表位之一。     

人工肝支持系统治疗重型病毒性肝炎的研究

目的 研究人工肝支持系统治疗重型病毒性肝炎的方法及疗效。方法 利用Baxter-550人工肾和Biologic-DT system进行人工肝支持系统（ALSS）治疗肝炎患者83例，其中重型肝炎患者66例。结果 治疗后平均胆红素、ALT、AST、BUN、Cr及内毒素较治疗前均有明显下降。66例重型肝炎患者中治愈好转31例（47．0％），死亡或自动出院35例（53．0％），对照组181例重型肝炎患者中治愈好转50例（27．6％），死亡或自动出院131例（72．4％）。结论 应用ALSS治疗重型肝炎患者具有一定疗效。     

人乳头瘤病毒58型L1壳蛋白在原核细胞中的高效表达及抗体制备

目的 人乳头瘤病毒58型（HPV58）是重要的高度致瘤性病毒之一。用原核细胞表达HPV58L1主要壳蛋白（McP）,并制备相应抗体血清,为基因工程疫苗研制打下基础。方法 用聚合酶链反应(PCR）扩增HPV58L1完整编码区基因,并克隆、测序。构建原核表达载体pRSETB58L1,表达的L1蛋白经SDS－PAGE纯化,免疫BALB／c小鼠。结果 在原核细胞中表达了HPV58L1壳蛋白,该壳蛋白的相对分子质量为60000,此蛋白与HPV16L1抗有交叉反应。获得抗HPV58L1壳蛋白特异性抗体,抗体滴度为1：80,并用该抗体屯昆虫细胞中表达的HPV58L1壳蛋白。结论 HPV58壳蛋白在原核细胞中获得的有效表达,纯化免疫小鼠后能产生抗HPV58L1特异性抗体,此抗体可用于鉴定真核细胞表达的HPV58L1壳蛋白。     

心康口服液预防小鼠病毒性心肌炎的实验研究

目的 探讨心康口服液预防小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的作用。方法 心康口服液预防性用药2d后的小鼠经腹腔感染CVB3,以诱发急性病毒性心肌炎模型,持续用药至20d,观察小鼠于感染不同阶段的心肌组织形态学改变并进行形态定量分析,所得数据用SPSS／PC软件包作统计学处理。结果 心康口服液各剂量组的心脏表面重度病变检出率显著低于病毒对照组（P＜0.01）;心肌组织重度损伤（心肌细胞大片坏死崩解）的检出率均低于病毒组及干扰素组,其中中剂量组与病毒组差异显著（P＜0.01）;心肌平均病变面积、病变面积／全心面积比值第20d时心康组与干扰素组均与病毒组差异显著（P＜0.01）,第5d时心康各剂量组与病毒组差异显著（P＜0.01）。结论 心康口服液预防性给药可保护心肌,减轻心肌损伤及促进损伤心肌恢复,其预防柯萨奇B3病毒性心肌炎的作用类似干扰素。     

1995至2000年北京地区散发性急性肝炎患者肝炎病毒抗体的检测与分析

目的 了解北京市地区散发性肝炎患者甲型、乙型、丙型和戊型肝炎病毒感染型别分布及重叠感染。方法 用EIA法检测1995斫2月至2000年12月北京地区散发性急性肝炎患者抗－HAVIgM、HBsAg／抗－HBcIgM、抗－HCVIgM/IgG和抗－HEVIgM/IgG。结果 214例散发性急性肝炎患者血清,抗甲、乙、内和戊型肝炎病毒IgM总阳性数155例,戊型肝炎76例。有9名患者检出2种肝炎病毒抗原或抗体阳性,其中在3名肝硬化患者和2名静脉吸毒者同时检测到HBV和HCV抗原或抗体,1例HBsAg阳性者检测到抗－HAVIgM,3例－HCVIgG阳性者中分别检测到2例抗－HBVIgM和1例抗－HEVIgM。肝炎病毒重叠感染的9名患者年龄在31岁至49岁之间。结论 北京地区散发性急性肝炎78％是由消化道传染的甲戊型肝炎病毒引起,戊型肝炎在四种肝炎中位居首位,其次为甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎。肝炎病毒重叠感染多见乙、丙型肝炎病毒合并感染或慢性乙、丙型肝炎患者合并甲型或戊型肝炎病毒感染。在我国对散发性病毒性肝炎的预防应引起高度重视。     

1990～2000年间我国乙型流感病毒HA1基因演变的特征

目的 了解1990—2000年间我国乙型流感病毒HA1基因的演变特征。方法 提取病毒RNA，经逆转录和聚合酶链式反应扩增后测序，测定的序列和Gen bank中已有的相关序列进行比较。结果 ①我国乙型流感病毒在此期间一直存在两个差别较大的谱系，除1994年和1997年Victoria谱系为主外，其余各年均以Yamagata谱系为主；②1992年以后Yamagata谱系又分化出两个组，彼此间氨基酸序列差异达6％；③1990—2000年间非回复突变的、大的变异株引导乙型流感的流行；④除了个别毒株之外，同一年份我国不同地区流行的属于同一谱系的乙型毒株HA1基因序列差别不大。结论 我国乙型流感病毒1990—2000年间一直存在两个差别较大的谱系，其中Yamagata谱系在此期间又分化出两个组，谱系的更换和同一谱系内出现大的变异株具有重要的流行病学意义。     

汽车驾驶员腰椎保护带的振动防护效应测试及其生物力学作用分析

通过对汽车驾驶员腰部振动的测试 ,了解腰椎保护带对振动的防护效应并对其生物力学作用进行分析。以日本产五十铃八吨载重卡车 (TDG72 )为测试车型。在装载六吨货物以三种不同车速 (10、30、6 0 km/ h)行进在柏油公路时 ,分别在佩带和不佩带腰椎保护带的情况下 ,对驾驶员腰椎部位垂直振动和水平纵向振动进行实时测量 (传感器安置于裤腰带和保护带的背外侧 )。结果显示 :1驾驶员腰部振动频率多为 10 Hz以下 ,属低频振动 ;2垂直振动大于水平纵向振动 ;3系腰椎保护带时的振动测量值大于不系腰椎保护带的测量值。由于腰椎保护带改变了脊柱的生物力学和振动特性 ,从而起到了保护腰椎的作用。我们认为它是防治汽车驾驶员腰痛的良好方法之一。     

心音图运动试验的精密度和准确度的分析

“心音图运动试验”(PCGET)是新近提出的一项心肌收缩能力以及心血管病人和健康人的心力储备评估方法。为了验明 PCGET方法的可信度 ,我们进行了该方法的精密度和准确度的研究。对 30个志愿者进行了PCGET,不同检查者对同一受试者同一心动周期中 S1幅值测量时 ,检查者 A的一组数据的 x± s=5 .0 5 0 .0 45 1,检查者 B的一组数据的 x± s=4.95± 0 .0 34 6 ,F=1.6 99,P>0 .0 5。不同检查者对同一受试者同一心动周期测量时 ,检查者 A的一组数据的 x± s=0 .789± 0 .0 0 18,检查者 B的一组数据的 x± s=0 .787± 0 .0 0 17,F=1.16 7,P>0 .0 5。对 PCGET运动前后心脏变力性状态评估的准确度为 10 0 %。结果表明 ,PCGET的精密度和准确度高 ,可作为心力储备的无伤性、简便、经济的量化测评方法。