细菌16S rRNA在诊断非中性粒细胞性腹水自发性细菌性腹膜炎中的应用

目的 评价荧光定量PCR检测腹水细菌16S rRNA基因在诊断非中性粒细胞性腹水自发性细菌性腹膜炎患者中的临床应用价值.方法 用细菌16S rRNA基因荧光定量PCR法检测64例非中性粒细胞性腹水疑似自发性细菌性腹膜炎患者及6例慢性肝病伴非感染性腹水患者腹水中的细菌DNA,同时与腹水细菌培养结果进行对比.结果 细菌16S rRNA荧光定量PCR最低可检测到10个拷贝的DNA复制,检测细菌的阳性率明显高于细菌培养的阳性率,分别为15.63%和3.13%,两组差异有统计学意义(x2=5.52,P＜0.05).6例非感染性腹水荧光定量PCR及细菌培养均阴性.结论 腹水细菌16S rRNA荧光定量PCR检测细菌的特异性强、敏感性高,在诊断非中性粒细胞性腹水自发性细菌性腹膜炎患者中具有重要的临床应用价值.     

16S rRNA基因检测及在自发性细菌性腹膜炎诊断中的应用

自发性细菌性腹膜炎(SBP)是失代偿期肝硬化常见的严重并发症,及时、正确的诊断并使用抗生素治疗是降低患者病死率的关键.腹膜炎时,传统的腹水细菌学检查所需时间长、费用高、操作繁琐,且敏感度低.当前,应用分子诊断技术,通过检测细菌DNA以诊断感染性疾病和鉴定致病菌正被广泛地运用于临床.此文就目前最常用的检测靶分子-细菌核糖体16S小亚基(16S rRNA)在SBP诊断中的应用进展进行概述.     

自发性细菌性腹膜炎的实验室诊断进展

自发性细菌性腹膜炎(SBP)是肝硬化患者失代偿期常见的严重并发症.早诊断、早治疗和及时准确地应用抗生素是降低发病率和病死率的关键.传统的SBP诊断方法所需时间长、操作繁琐、敏感性低.目前,多种实验室诊断方法不断发展,为SBP的诊断提供了更加敏感、快速的诊断手段.此文就SBP实验室诊断的研究进展进行概述.     

快速腹水筛检试验在诊断肝硬化腹水并自发性细菌性腹膜炎中的价值

目的 探讨快速腹水筛检试验在诊断肝硬化腹水并自发性细菌性腹膜炎中的价值.方法 选取92例肝硬化腹水患者,在入院24 h内行腹腔穿刺,抽取的腹水分别进行快速腹水筛检试验、腹水常规检查和腹水干化学分析.以腹水常规检查多形核白细胞≥0.25×106/L作为自发性细菌性腹膜炎的诊断标准.结果 快速腹水筛检试验诊断肝硬化腹水并自发性细菌性腹膜炎的敏感度为90.00%,特异度为100.00%,假阳性率为0,假阴性率为10.00%,约登指数为90.00%.阳性预测值为100.00%,阴性预测值为98.80%.结论 快速腹水筛检试验是一种快速筛检肝硬化并自发性细菌性腹膜炎的较好方法.     

自发性细菌性腹膜炎诊断方法的研究进展

自发性细菌性腹膜炎(SBP)是肝硬化和重型肝炎患者常见且严重的并发症,死亡率很高,它的主要诊断方法是腹腔穿刺后腹水多形核白细胞(PMN)计数和腹水培养,但是这些方法有一定局限性。文中就SBP诊断方法的研究进展进行了综述。     

肝硬化自发性细菌性腹膜炎感染菌种分析

目的 了解辽宁地区肝硬化患者的腹水感染菌种分类.方法 对1925例肝硬化患者抽取腹水,采用床头接种人血培养基,分析细菌菌种.结果 腹水细菌培养阳性166例(8.62%),生长11种细菌,革兰阴性菌生长占64.46%,其中大肠埃希菌占总构成比的53.01%.在腹水培养阳性的患者中,肝功能Child-Pugh C级患者的病死率为63.25%.结论 本地区肝硬化患者自发性细菌性腹膜炎的感染菌种以革兰阴性菌为主,临床上应有针对使用抗生素.     

肝硬化腹水合并自发性细菌性腹膜炎治疗分析

自发性细菌性腹膜炎,是肝硬化合并腹水的患者常见与严重的并发症之一,这与肝硬化患者免疫功能明显降低,特别是肝内网状内皮系统严重受损,巨噬细胞吞噬功能以及白细胞黏附趋化与吞噬功能降低等原因有关,也是导致死亡的重要因素之一.本研究对本医院近2年来收治的50例肝硬化腹水合并自发性细菌性腹膜炎的临床资料进行分析,现将结果报道如下.     

抗生素应用对16S rRNA基因芯片检测腹水细菌的影响

目的 评价抗生素的应用是否影响基因芯片(寡核苷酸序列分析)检测腹水细菌16S rRNA 基因在自发性细菌性腹膜炎(SBP)诊断中的应用.方法 采用16S rRNA PCR-基因芯片检测76例临床疑似SBP肝病患者的腹水细菌16S rRNA基因,与同期患者的腹水细菌培养相比,分析两种不同检测方法对应用抗生素(31例)和未应用抗生素(45例)患者的细菌阳性率的差异.结果 76份疑似SBP患者的腹水样本中,基因芯片检测阳性率22.37％(17份),明显高于腹水细菌培养阳性率的7.89％(6份),两种方法差异有统计学意义( x2=18.05,P＜0.01).应用抗生素组腹水细菌基因芯片检测阳性率为19.35％(6份),略低于未应用抗生素组的24.44％(11份),但两组差异无统计学意义( x2=0.274,P＞ 0.05).应用抗生素组腹水细菌培养阳性率为0(0/31),而未应用抗生素组阳性率为13.33％(6/45),两组差异有统计学意义(x2=4.488,P＜0.05).结论 16S rRNA PCR-基因芯片检测腹水细菌与腹水培养相比可能更少受抗生素应用的影响.     

肝硬化肝性腹水并发自发性细菌性腹膜炎临床分析

笔者对3所医院近6年住院的肝硬化肝性腹水患者并发自发性细菌性腹膜炎（SBP）进行了回顾性分析，以期达到早期诊断、及时治疗及提高肝硬化生存率的目的。     

腹水钙卫蛋白含量对肝硬化自发性细菌性腹膜炎的诊断评价

目的探讨肝硬化腹水中钙卫蛋白水平对自发性细菌性腹膜炎(SBP)的诊断价值。方法从108例肝硬化腹水患者获得136份腹水标本,分成试验组(SBP)41份和对照组(非SBP)95份,检测腹水中钙卫蛋白含量,同时两组均收集临床资料及腹水相关检测结果,比较使用抗菌药物前试验组和对照组腹水钙卫蛋白含量水平,以及试验组使用抗菌药物前后腹水钙卫蛋白含量变化,绘制ROC曲线,确定腹水钙卫蛋白诊断SBP的临界值。结果治疗前试验组钙卫蛋白含量270~15 273ng/ml,显著高于对照组0~75ng/ml(P<0.001),试验组治疗后钙卫蛋白含量9~13 043ng/ml,显著低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.01),钙卫蛋白与中性粒细胞(PMN)呈相关性(r=0.76039,P<0.0001);以687ng/ml作为诊断的临界值,此时钙卫蛋白诊断SBP的敏感性90.7%、特异性为86.3%。结论腹水中钙卫蛋白水平可以作为诊断SBP的特异性和敏感性较好的指标,值得临床推广。     

乳酸杆菌及嗜热链球菌的种水平鉴定——16SrRNA基因PCR扩增及序列分析

目的建立鉴定乳酸杆菌及嗜热链球菌的16SrRNA基因PCR方法。方法优化细菌DNA提取方法及PCR反应条件,将细菌16SrRNA基因的PCR产物克隆到质粒载体上并进行序列分析,以对乳酸杆菌酸奶分离株进行鉴定。结果 16SrRNAPCR鉴定方法将50株益生菌酸奶分离株分为7个种,分别为:保加利亚乳酸杆菌24株、嗜热链球菌12株、嗜酸乳酸杆菌7株、干酪乳酸杆菌3株、德氏乳酸杆菌2株、发酵乳酸杆菌1株及巴黎链球菌1株。结论建立的16SrRNA基因PCR方法灵敏、可靠,适用于乳酸杆菌及嗜热链球菌的鉴定。     

16S rRNA、16S-23S rRNA基因测序分析检测主要血流感染病原菌比较

目的比较细菌16S rRNA、16S-23S rRNA 基因测序分析在血流感染病原菌检测中的作用。方法提取临床上血流感染常见的金黄色葡萄菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、洛菲不动杆菌、肺炎克雷伯杆菌、化脓性链球菌、奇异变形杆菌、潘尼变形杆菌、屎肠球菌、粘质沙雷菌、宋内志贺菌、产气肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、腐生葡萄球菌基因组 DNA,运用 16S rRNA、16S-23S rRNA 基因进行 PCR 扩增。扩增产物经测序后在美国国家生物技术中心(NCBI)上进行比对分析,确定菌种。结果在所分析的 19 种临床血流感染常见细菌中,16S rRNA 基因测序分析可将除粘质沙雷菌外的细菌鉴定到种的水平,但无法完全区分近缘种属;16S-23SrRNA 成功鉴定 17 种细菌,除大肠埃希菌、宋内志贺菌外所有细菌均成功鉴定到单一种的水平。结论 16S-23S rRNA 基因可作为血流感染细菌检测较好的分子靶标。     

16S rRNA PCR on clinical specimens: Impact on diagnosis and therapeutic management

Objective16S rRNA PCR (16S PCR) performed on clinical samples contributes to bacterial identification in cases of negative culture due to an antibiotic therapy. Sensitivity of the 16S PCR is low (19–42%). Little data is available on its impact on the management of patients. We aimed to evaluate the contribution of 16S PCR to diagnosis and therapeutic management at the university hospital of Dijon, France.Patients and methods16S PCR was performed on the clinical specimens of 132 patients. Clinical settings, laboratory results, and data on antibiotic therapy were collected, as well as conclusions drawn from the 16S PCR result by physicians. Each case was analyzed to determine if the 16S PCR was helpful. The relevance of the 16S PCR was also assessed.ResultsThe 16S PCR yield was 27.3%, ranging from 14.3% to 64.3% depending on the type of specimen. 16S PCR had a positive impact on diagnosis in 28.8% of cases. Five negative 16S PCR results were considered helpful as they contributed to ruling out bacterial infection. 16S PCR led to treatment changes in six patients (4.5%): three narrower spectrums, two treatment adaptations, and one discontinuation. The 16S PCR was considered “non-relevant” in 35 cases (26.5%). None of these 35 PCRs contributed to the patient's management.ConclusionPhysicians should be aware of performances of 16S PCR. Dialogue between physicians and bacteriologists is essential for appropriate selection of indications and correct interpretation of results.     

Copy number of the 16S rRNA gene in Coxiella burnetii

Coxiella burnetii is an obligate intracellular bacterium with a doubling time of 5–7 hours. Chromosomal DNA from C. burnetii was digested with various restriction enzymes previously determined to not cut within the genomic 16S rRNA gene, or with a combination of these noncutting enzymes in conjunction with AflIII, a restriction enzyme that cuts twice within the 16S rRNA gene. Restriction fragments were resolved electrophoretically and probed with a radiolabeled DNA fragment containing the 3 AflIII portion of the C. burnetii 16S rRNA gene. Only a single DNA fragment in these digests hybridized to the probe, indicating that there is a single genomic copy of the 16S rRNA gene in C. burnetii and thus only a single copy of the rRNA operon.     

利用荧光素原位分子杂交检验水样中嗜肺军团菌的研究

目的：利用针对嗜肺军团菌种特异性16SrRNA和军团菌致病基因-巨噬细胞感染增强因子（mip）序列探针原位分子杂交建立嗜肺军团菌的快速、特异性检验方法。方法：设计特异性针对嗜肺军团菌种特异性16SrRNA和mip探针，采用荧光素标记探针对采自西安市8家宾馆中央空调冷凝水、贮水池水各8份进行原位分子杂交，并且结合细菌分离、生化鉴定技术检验水样中嗜肺军团菌。结果：细菌分离鉴定表明2份冷凝水、5份贮水池水分离到可疑菌落，抗体凝集实验证实嗜肺军团菌血清Ⅰ型3份、Ⅴ、Ⅵ型各1份，2份阴性。实验周期约10～12d；原位分子杂交显示16SrRNA、mip的探针杂交信号成堆分布于原虫细胞内，形如杆菌状，16SrRNA与mip的杂交信号存在完全双标记，但有少数mip的杂交信号不与16SrRNA共存，5株鉴定为嗜肺军团菌Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ型的水样原虫中，经16SrRNA、mip探针杂交均为阳性，对2株非嗜肺军团菌水样原虫进行16SrRNA、mip的杂交结果均为阴性。实验周期约20h。结论：结果表明该方法适用于对存在于原虫内致病性嗜肺军团菌进行检验，是种快速、特异性的致病性嗜肺军团菌检验方法。     

16S rRNA methylase-producing, gram-negative pathogens, Japan

To investigate the exact isolation frequency of 16S rRNA methylase-producing, gram-negative pathogenic bacteria, we tested 87,626 clinical isolates from 169 hospitals. Twenty-six strains from 16 hospitals harbored 16S rRNA methylase genes, which suggests sparse but diffuse spread of pan-aminoglycoside-resistant microbes in Japan.     

霍乱弧菌毒力基因检测与16S rRNA基因分型研究

目的：了解浙江省霍乱弧菌毒力基因携带情况和16SrRNA基因型状况，为霍乱防治提供科学依据。方法：利用16SrRNA基因探针分析了浙江省不同时期分离的88株霍乱弧菌经BglI消化的16SrRNA基因限制性酶谱，以多重PCR法对140株霍乱弧菌进行6种毒力相关基因（ctxA、rtxA、Ace、TcpA、Cri、Zot）检测分析。结果：发现各菌株的杂交片断范围为2～12Kb，每个菌株有6～9条杂交带不等。88株霍乱菌株可分为9个16SrRNA基因型（ribotype，RT），其中埃尔托型霍乱弧菌（el tor vibrio cholerae，EVC）可分为6个RT，0139群霍乱弧菌（vibrio cholerae 0139，VC 0139）分为3个RT；所有VC0139菌株均携带3种以上毒力基因，86．3％的菌株携带全部6种毒力基因，所有EVC流行株均携带2种以上毒力基因，79．1％的菌株携带全部6种毒力基因。结论：认为霍乱流行菌株基因型的变迁可能是引起新一次流行的原因。结合毒素基因检测结果，我们认为VC0139与EVC在遗传特征上有相近的特点，但又有所区别。