类杆菌耐药基因转移的分子生物学研究进展

类杆菌是人类肠道中数量最多的条件致病茵,其耐药菌株局部流行提示类杆菌存在耐药因子。70年代末发现大肠杆菌氨苄青霉素耐药基因可向类杆菌作属间转移,克林霉素、红霉素、四环素抗性基因也可在类杆菌中发生属内转移现象。研究耐药基因的属间转移机理对医院内感染的防治,具有重要的临床意义。类杆菌具有良好的耐药基因转移系统,近年来人们通过穿梭质粒(shuttle vector)构建等工作,从分子水平上对类杆菌与大肠杆菌耐药基因属间转移机理及其影响因素进行了研究。     

医院泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素的耐药机制

目的 探讨医院泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素的耐药机制.方法 应用PCR方法对2010年12月至2012年3月期间本院从临床痰标本中分离的36株泛耐药鲍曼不动杆菌进行碳青霉烯酶IMP、OXA23基因和整合子基因检测;提取细菌膜蛋白行SDS-PAGE电泳分析其组成.结果 36株泛耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶OXA23基因扩增均为阳性;14株碳青霉烯酶IMP基因扩增阳性,22株阴性.12株整合子PCR产物约1200 bp,10株约3000 bp,14株整合子PCR产物约3500 bp.与碳青霉烯抗生素敏感鲍曼不动杆菌膜蛋白比较,22株泛耐药鲍曼不动杆菌存在相对分子质量为25 000、36 000的膜蛋白缺失.结论 医院泛耐药鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯抗生素机制与产IMP、OXA23碳青霉烯酶及膜蛋白缺失有关.     

儿童社区获得性呼吸道感染的病原学研究

目的探讨儿童呼吸道感染的病原学特点,以期为临床治疗提供依据.方法采集1784名呼吸道感染患儿咽拭标本常规细菌培养和/或PCR法支原体,K-B法测定流感嗜血杆菌、肺炎链球菌耐药性,以套式-聚合酶链反应及PCR技术进行肺炎链球菌耐药基因TEM基因、ermB基因和mefA基因检测,加DAN测序分析.结果 129例细菌培养阳性,依次为流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌属;153例支原体阳性,以肺炎支原体、人型支原体为主,少数为肺炎衣原体.其中流感嗜血杆菌、肺炎链球菌对青霉素、克林霉素、红霉素、阿奇霉素、阿莫西林/克拉维酸、复方甲基异恶唑、头孢菌素及红霉素等10种常用抗生素均不同程度耐药,但对氯霉素和万古霉素均敏感;肺炎链球菌β内酰胺酶基因(TEM)、红霉素耐药基因(甲基化酶基因ermB)表达阳性,但未表达红霉素耐药基因(外排基因mefA).结论流血嗜血杆菌和肺炎链球菌本地区呼吸道感染儿童主要致病菌,对常用抗生素有不同程度耐药,肺炎支原体和人型支原体也是重要致病原;肺炎链球菌耐药可能是通过表达TEM基因和ermB基因实现的.     

同时携带多种耐药基因导致一株弗劳地枸橼酸盐杆菌产生泛耐药

南昌大学第二附属医院分离到一株泛耐药的弗劳地枸橼酸盐杆菌,该菌对临床常用抗生素全部耐药.发现多种耐药基因同时位于该菌中,包括一种新型AmpC酶基因,现报道如下.     

同时携带多种耐药基因导致一株弗劳地枸橼酸盐杆菌产生泛耐药

南昌大学第二附属医院分离到一株泛耐药的弗劳地枸橼酸盐杆菌,该菌对临床常用抗生素全部耐药.发现多种耐药基因同时位于该菌中,包括一种新型AmpC酶基因,现报道如下.     

同时携带多种耐药基因导致一株弗劳地枸橼酸盐杆菌产生泛耐药

南昌大学第二附属医院分离到一株泛耐药的弗劳地枸橼酸盐杆菌,该菌对临床常用抗生素全部耐药.发现多种耐药基因同时位于该菌中,包括一种新型AmpC酶基因,现报道如下.     

多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性与AmpC耐药基因的研究

目的了解我院临床分离的60株多重耐药鲍曼不动杆菌（multi-drug resistant Acinetobater baumannii,MDRAB）的耐药性和AmpC耐药基因的存在状况。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测鲍曼不动杆菌对18种抗生素的药敏结果,对该细菌进行总DNA的提取,用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因,结合药物敏感试验分析菌株的耐药特征。结果检出结构基因ampC型49株,占81.7%;blaADC基因型50株,占83%;ACT基因型2株;41株菌同时携带blaADC和ampC结构基因,占68%;2株同时携带blaADC、ACT和ampC结构基因;未检测到其它AmpC耐药基因（MOX、CIT、FOX、DHA）。携带AmpC耐药基因的菌株耐药率高,特别是对头孢曲松、氨苄西林、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因的耐药率已接近或达到100%,而对于丁胺卡那霉素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为5%和20%。结论多重耐药鲍曼不动杆菌的blaADC耐药基因和ampC结构基因同时携带率高,并且是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

检测克林霉素诱导耐药的葡萄球菌

为了检测葡萄球菌中克林霉素诱导性耐药，正确报告药物敏感试验结果，临床实验室标准化委员会（CLSI，即NCCLS）2004年发布N100．S14，增加了克林霉素对葡萄球菌纸片诱导试验，国内陈民钧教授作了介绍旺]。我们根据文件规定，在128株金黄色葡萄球菌（金葡）和283株凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）中操作D试验，现将结果报告如下。     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌同源性分析及其耐药机制的研究

鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)是导致院内感染的重要条件性致病菌,其分离率仅次于铜绿假单胞菌.研究表明亚胺培南是治疗鲍曼不动杆菌感染的有效药物,而一旦出现亚胺培南耐药也就意味着对绝大多数常用抗菌药物耐药.近年来我院鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药性逐渐上升[1],本研究拟从菌株同源性分析着手,在了解菌株分子流行病学特征的同时联合检测几种β-内酰胺酶编码基因,以明确本地区菌株对亚胺培南的耐药特性.     

儿童医院多重耐药菌耐药情况分析

目的 了解本院多重耐药菌（MDROs）的分布情况及耐药情况,为本院医院感染控制和临床合理使用抗菌药物提供依据。方法 收集2015年1月~6月住院患儿细菌感染的临床分离菌株,依据2011年CLSL标准的常规鉴定和纸片扩散法,测定菌株对抗菌药物的敏感性,采用WHONET 5.5软件对收集到的细菌监测资料进行统计分析。结果 共检测出病原菌1330株,其中MDROs130株;检出前三位的MDROs为ESBLs阳性大肠埃希菌76株（58.50%）、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）32株（24.60%）、ESBLs阳性克雷伯氏菌22株（16.90%）;检出MDROs前三位的科室依次是新生儿科、PICU、综合内科;MDR-GP对克林霉素、红霉素及β-内酰胺类抗菌药物耐药率较高,MDR-GN对头孢三代、常用抗革兰氏阴性菌的青霉素类抗菌药物耐药率较高。结论 本院MDROs的医院感染的防控重点在收治感染性疾病的内科。本院MDROs革兰氏阴性菌对红霉素、克林霉素,耐药率高于成人医院,儿童感染的MRSA的检出率低于成人医院,耐药率相似。     

抗生素产生菌中抗生素耐药基因表达的研究进展

抗生素产生菌编码抗生素耐药基因以保护自身免受它们产生的生物活性分子的损伤.通常情况下,耐药基因的表达往往先于或伴随其它合成基因的表达,且与抗生素生物合成基因密切相关;此外,耐药基因也可通过抗生素本身或生物合成途径的中间产物进行激活.将抗生素耐药基因产生途径与抗生素的合成偶联起来的调节机制是多元复杂性的,它与临床上抗生素耐药性的产生有潜在的关联性.     

371株鲍曼不动杆菌的临床耐药状况

本文对临床分离出的鲍曼不动杆菌的耐药性进行回顾性分析,为临床经验性治疗首选抗生素提供依据。对我院2006年10月至2009年10月分离出的371株鲍曼不动杆菌,用VITEK32细菌鉴定及药敏分析系统进行细菌鉴定和药敏试验,结合K-B法作补充对照。在分离出的371株鲍曼不动杆菌中,以老年煤工尘肺患者及重症监护病人集中的科室比率较高,在呼吸道标本中的构成比高于其他种类的标本。该菌对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦,氨苄西林/舒巴坦的耐药率相对较低,各为5.0%、19.5%、19.5%。对复方新诺明、妥布霉素、左氧氟沙星、庆大霉素、环丙沙星、头孢吡肟、头孢他啶的耐药率分别为32.7%、43.2%、44.6%、44.9%、47.3%、53.8%、56.5%。对头孢曲松、氨曲南、氨苄西林、呋喃妥因、头孢唑啉有较高的耐药性,耐药率均在90%以上。鲍曼不动杆菌对多种抗生素耐药现象严重,根据药敏试验合理应用抗生素十分重要。     

泛耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类耐药相关基因研究

目的 探讨泛耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类抗菌药物耐药机制。方法 收集2014年湖北省黄石市中心医院住院患者中分离的20株泛耐药鲍氏不动杆菌,用mdfA测序确认菌种,再采用聚合酶链反应法分析16种氨基糖苷类药物获得性耐药相关基因。 结果 20株泛耐药鲍氏不动杆菌共检出4种氨基糖苷类获得性耐药基因,氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅰ阳性率15.00％;ant(3")-Ⅰ阳性率20.00％;aph3'-Ⅰ阳性率100.00％;16SrRNA甲基化酶未检出;外排泵adeB基因阳性率95.00％。 结论　泛耐药鲍氏不动杆菌中携带的耐药基因和耐药表型相对应,对氨基糖苷类药物耐药与产aac(3)-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、aph3'-Ⅰ修饰酶基因和获得外排泵adeB 2种耐药机制有关。     

肺炎链球菌耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn的检测

目的 研究耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn在携带肺炎链球菌的北京儿童中分布特点。方法对185株呼吸道感染患儿鼻咽部分离的肺炎链球菌进行以下检测：E-test、琼脂稀释或纸片扩散法测定对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类等15种抗生素的药物敏感性。PCR检测大环内酯类耐药基因ermB和mef/A，四环素耐药基因tetM以及转座子Tn1545的整合酶基因intTn。结果185株肺炎链球菌的药敏结果显示，对红霉素、克林霉素、四环素和复方磺胺甲基异嗯唑的耐药率较高，分别为78．9％、76．2％、86．0％和78．7％，对阿莫西林，克拉维酸、头孢克洛、头孢曲松和头孢呋辛耐药率较低，分别为2．2％、15．5％、2．8％和14．1％。所有红霉素耐药株均检出ermB和／或mefA，其中79．5％为ermB阳性，17．8％为ermB和mefA同时阳性，2．7％为mefA阳性。tetM基因在分离株中的阳性率是87％，四环素耐药组的tetM基因携带率是96．9％，高于敏感组（26．9％）。四环素耐药株的红霉素耐药率（90．0％）亦高于敏感株组（11．5％）。87．6％的肺炎链球菌存在intTn基因，intTn基因阳性组的红霉素、四环素、氯霉素、复方磺胺甲基异嗯唑和环丙沙星的耐药率较intTn基因阴性组高。分离株最常见的基因组合是intTn＋terM＋ermB，占58．4％。结论北京地区呼吸道感染儿童鼻咽部肺炎链球菌耐大环内酯类抗生素的主要原因是ermB编码的23S rRNA甲基化酶致靶位改变。tetM基因编码蛋白质的核糖体保护作用，是肺炎链球菌四环素耐药的重要机制。接合性转座子Tn1545的存在与菌株的红霉素和四环素耐药关系密切，可能是肺炎链球菌多重耐药的重要机制之一。     

多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药分子机制及质粒谱分析

目的了解我院临床分离的66株多重耐药鲍曼不动杆菌（MDRAB）的耐药性和整合子（qacE△1-sull）、转座子（tnpU）存在状况,并对菌株质粒谱进行分析。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测鲍曼不动杆菌对18种抗生素的药敏结果,并对该细菌进行总DNA的提取。用聚合酶链反应（PCR）检测qacE△1-sull及tnpU,提取质粒进行同源性分析。结果 66株鲍曼不动杆菌中整合子qacE△1-sull基因阳性率为31.8%,转座子tnpU基因阳性率为30.3%。携带遗传标记的菌株耐药率高,特别是对头孢曲松、氨苄西林、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因的耐药率已接近或达到100%,而对丁胺卡那霉素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为5%和20%;有19株对亚胺培南耐药,其中整合子阳性率63.2%,转座子阳性率36.8%。检出质粒的46株（70%）临床分离菌出现1～3条大质粒带,大小在1～20kb间,其中出现1条带的有33株、2条带8株、3条带5株,有12株菌提取到大小相同的质粒。结论多重耐药鲍曼不动杆菌耐亚胺培南的耐药现象严重;整合子、转座子遗传标记的携带率高,可能是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

婴幼儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染状况和耐药基因的研究

目的了解感染婴幼儿的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药性和耐药基因,明确检测青霉素结合蛋白2a（PBP2a）和甲氧西林耐药基因（mecA）的临床价值。方法用金黄色葡萄球菌乳胶凝集试验和梅里埃鉴定金黄色葡萄球菌,同时用纸片扩散法完成12种常用抗生素的药敏试验。对头孢西丁的结果,按当年CLSI标准执行,用于判断菌株甲氧西林的耐药性。采用PBP2检测试剂盒检测PBP2a蛋白,PCR检测mecA基因。结果 2007-2009年婴幼儿共检出245株金黄色葡萄球菌,其中MRSA检出率为17.6%（43/245）。MRSA对庆大霉素、复方新诺明、克林霉素、红霉素、氯霉素的耐药性均显著高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（P〈0.05）,其余抗生素的差异无统计学意义（P〉0.05）,43株MRSA的PBP2a蛋白和mecA基因的检测结果全为阳性,阳性率为100%。结论用头孢西丁（30μg）能有效地筛查MRSA,检测PBP2a蛋白和mecA基因均能正确地确认MRSA。且检测PBP2a蛋白方便快捷,特异性好,值得临床推广。     

鲍曼不动杆菌临床分离株表型、基因型和耐药基因的对比研究

目的 对比研究鲍曼不动杆菌临床分离株基因型和编码耐药基因的差异,并分析其与临床多重耐药性的关系.方法 随机收集中南大学湘雅二医院2008年9月至2009年9月分离的77株鲍曼不动杆菌,采用WHO推荐的K-B法对鲍曼不动杆菌进行临床常见15种抗生素药物敏感试验,并对药敏谱进行分析.用随机扩增多态性DNA法(RAPD)技术进行基因分型.并利用PCR对β-内酰胺酶基因TEM-1、IMP、OXA-23、OXA-24、AmpC和氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅰ、aac(6')-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ和16S rRNA甲基化基因armA、rmtA、rmtB进行扩增及序列分析.对比分析鲍曼不动杆菌耐药基因的携带情况,以及与基因型和耐药性的关系.结果 77株鲍曼不动杆菌中敏感菌株有31株,对5种或5种以上抗生素耐药的多重耐药菌株46株,内含全耐药菌株10株.RAPD技术将其分为17型,为A-G型,多重耐药株中E型为优势克隆株(17株),在重症监护病房(ICU)中流行最广,占47.1%(8/17).敏感株中各型散在分布.PCR扩增结果显示,多重耐药株和敏感株携带TEM-1、IMP、OXA-23、OXA-24、AmpC、aac(3)-Ⅰ、aac(6')-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ和armA耐药基因的比率分别为95.7%、39.1%、84.8%、54.3%、87.0%、89.1%、84.8%、45.7%、63.0%和58.1%、9.7%、32.3%、48.4%、48.4%、29.0%、45.2%、12.9%、9.7%,未发现rmtA和rmtB基因阳性菌株.经x2检验,除OXA-24外,其余各耐药基因携带率比较差异有统计学意义(P＜0.05).药敏分析提示携带以上耐药基因的鲍曼不动杆菌菌株的耐药率明显高于未携带该基因的菌株,其中对阿米卡星和庆大霉素耐药的菌株,其氨基糖苷类酶基因均阳性(34.8%),含所测的所有β-内酰胺酶基因的菌株均为全耐药株.结论 与临床分离的敏感鲍曼不动杆菌相比,多重耐药株耐药谱广,耐药率高,其携带β-内酰胺酶基因和氨基糖苷类酶基因种类多,分离率高,且同一克隆的多重耐药株可在病室内和病室间传播.     

两例产NDM肺炎克雷伯菌耐药基因分析及治疗方案

目的 对某三甲医院临床分离的肺炎克雷伯菌进行耐药基因及表型分析，为临床治疗和预防耐药菌感染提供参考。方法 对某三甲医院临床分离的两株产NDM型金属β-内酰胺酶(new delhi metallo-beta-lactamase, NDM)进行全基因组检测。结果 两分离菌株含有多种质粒，在质粒上有NDM的耐药基因位点。结论 产NDM耐药菌的基因主要在质粒上，应加强抗生素的合理使用和感染控制措施，以减缓耐药基因的播散，预防耐药菌的产生。     

科学家发现抗生素新耐药基因

经近 5年的探索 ,于日前发现了一种抗生素耐药基因 ,世界基因库已正式将其命名为ＳＨＶ2 8.临床上常见的细菌感染主要有败血症、尿路感染、肺部感染等 .对较重的细菌感染 ,第三代头孢 (头孢噻肟即凯福隆、头孢曲松即菌必治、头孢他啶即复达欣 )治疗效果好、副作用小 ,是目前临床上最常用的抗生素 .经常使用头孢类抗生素的病人 ,细菌会产生头孢菌素的耐药基因 .细菌一旦具有这种耐药基因 ,头孢类抗生素对这种细菌感染的病人失去任何治疗作用 .浙大医学院附属第一医院从各类较重的细菌感染患者身上取血、尿或痰等标本 ,进行细菌培养及特殊的药…     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药分析及基因型研究

目的分析20株鲍曼不动杆菌对耐碳青霉烯类抗生素的耐药性及对碳青霉烯酶基因的研究。方法用API鉴定条进行细菌鉴定及K-B法进行药敏试验,用碳青霉烯酶4种基因的特异性引物进行聚合酶链反应（PCR）扩增和基因型的测序分析,并通过网上Genbank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果 20株鲍曼不动杆菌对左旋氧氟沙星、丁胺卡那霉素、多粘菌素B的耐药率分别为50%、25%、4%。其它抗生素的耐药率均在90%以上。携带D类碳青霉烯酶OXA-23基因有17株（85%）,携带OXA-51基因有15株（75%）,OXA-24、OXA-58基因引物PCR扩增为阴性,随机各抽取3株OXA-23基因阳性株进行测序后通过在网上Genbank比对发现与OXA-23标准株99%同源,OXA-51基因阳性株与OXA-51标准株98%同源。结论本院耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌对多粘菌素B的耐药率最低,其次是丁胺卡那霉素,以携带OXA-23型碳青霉烯酶基因为主,应引起临床高度重视,防止在院内广泛传播。