白纹伊蚊贵州地方株垂直传播登革1型病毒的研究

目的：研究白纹伊蚊贵州地方株对1型登革病毒(DEN-1)的垂直传播能力。方法：用DEN-1感染白纹伊蚊贵州3个地方株(贵阳、毕节、兴义)，收集亲代及子1～3代蚊虫标本，提取蚊体总RNA，通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒核酸。并以白纹伊蚊海南株作为对照。结果：感染DEN-1后的白纹伊蚊贵阳株亲代、子1代；白纹伊蚊毕节株亲代、子1代；白纹伊蚊兴义株及海南株亲代、子1～3代的蚊体内均可检测到病毒核酸。结论：DEN-1均能通过白纹伊蚊贵州3个地方株垂直传播。白纹伊蚊贵州不同地方株对DEN-1的垂直传播能力有差别。     

白纹伊蚊贵州麻尾株垂直传播登革病毒实验研究

目的：研究白纹伊蚊贵州麻尾株对2型登革病毒(DEN—2)的经卵传递能力。方法：用DEN-2 NGC株感染白纹伊蚊贵州麻尾株，收集亲代及子1、2、3代蚊虫标本，提取亲代及子代蚊体内病毒总RNA，通过RT—PCR扩增蚊体内DEN—2病毒核酸，并用限制性核酸内切酶Hinf Ⅰ酶切鉴定。结果：感染白纹伊蚊贵州麻尾株后，子1～3代蚊体内均可检测出病毒核酸。结论：DEN-2能通过白纹伊蚊贵州麻尾株垂直传播，至少可以传3代。     

贵州自然界白纹伊蚊体内登革病毒带毒情况

目的：利用细胞、分子生物学技术对贵州省自然界白纹伊蚊体内登革病毒(DEN)带毒情况进行调查。方法：采集贵州省9个地(州)市共计18个县(区)白纹伊蚊幼虫标本，饲养成蚊；制备蚊悬液，碘化钠法提取RNA，用DENNSl基因区通用引物经逆转录-聚合酶链反应(TR-PCR)检测DEN核酸，限制性内切酶酶切鉴定阳性PCR产物并分型；蚊悬液接种C6／36细胞进行病毒分离，制作细胞片，间接免疫荧光法检测DEN抗原。结果：从独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到1株DEN-2型病毒，从凯里、黄果树和镇远3处地方株白纹伊蚊体内检测出DEN核酸，用抗DEN1～4型单克隆抗体经间接免疫荧光(IFA)和RT-PCR产物酶切分型鉴定，分别为登革病毒2型、4型。结论：贵州省存在DEN感染的自然循环。     

贵州自然界白纹伊蚊体内登划病毒带毒情况

目的 :利用细胞、分子生物学技术对贵州省自然界白纹伊蚊体内带登革病毒 (DEN)情况进行调查。方法 :采集贵州省9个地 (州 )市共计 18个县 (区 )白纹伊蚊幼虫标本 ,饲养为成蚊 ;制备蚊悬液 ,碘化钠法提取RNA ,用登革病毒NS1基因区通用引物经逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测DEN核酸 ,限制性内切酶酶切鉴定阳性PCR产物并分型 ;蚊悬液接种C6 /36细胞进行病毒分离 ,制作细胞片 ,间接免疫荧光法检测DEN抗原。结果 :从独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到 1株DEN 2型病毒 ,从凯里、黄果树和镇远 3处地方株白纹伊蚊体内检测出DEN核酸 ,用抗DEN 4型单克隆抗体经间接免疫荧光(IFA)和RT PCR产物酶切分型鉴定分别为登革病毒 2型、4型。结论 :贵州省存在DEN感染的自然循环     

白蚊伊蚊经卵传递登革2型病毒的实验研究

目的证明白蚊伊蚊亲代能够经卵传递登革2型病毒给子代,并且在传递过程中病毒毒力呈逐渐增强趋势。方法采用套式PCR分批检测感染雌蚊的子一代至子四代卵内登革病毒结合C6／36细胞培养分离病毒及TCID50法滴定病毒滴度。结果白蚊伊蚊能经卯传递DEN-2,至少可传四代以上：且在传代中病毒毒力有增强的趋势。结论实验证明白蚊伊蚊对登革2型病毒有较大的媒介效能,且在维持登革病毒的自然循环中起重要作用。     

2008-2010年广州市自然界白纹伊蚊携带登革病毒监测

目的通过对广州地区登革热媒介蚊虫白纹伊蚊携带登革病毒情况的监测,探讨传播媒介对该地区登革热流行特征的影响。方法采集广州市各区新旧疫点附近的白纹伊蚊幼虫及成蚊,提取蚊虫总RNA,用登革病毒特异引物经实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行病毒核酸检测。结果 2008年以来共检测白纹伊蚊标本658批,合计12348只,平均每批检测18.8只蚊虫,未检测出登革病毒核酸。结论广州地区白纹伊蚊自然种群携带登革病毒水平较低。     

登革2型病毒NGC株感染白纹伊蚊C6/36细胞中浓核病毒DNA的扩增和序列测定

目的:探索白纹伊蚊C6/36细胞对登革2型病毒(Dengue Type 2 virus,DEN2)不敏感的原因.方法:根据Genbank提供的DEN2新几内亚株(NGC株)NS1基因序列设计引物,设立病毒对照组、病毒DNA酶(DNase)处理组和细胞对照组,通过提取核酸、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、限制性内切酶(Hind Ⅲ)酶切、1.5%琼脂糖凝胶电泳检测RT-PCR及其酶切产物,并对其扩增产物进行序列测定,用软件比对与白纹伊蚊C6/36细胞浓核病毒(Densonucleosis virus,DNV)基因的同源性.结果:经RT-PCR,细胞和病毒组均出现约1 300 bp的条带,不能被Hind Ⅲ酶切,而病毒DNase处理组未能扩增出此条带;经GenBank比对,该片段序列与白纹伊蚊C6/36细胞DNV部分序列的同源性达95%以上.结论:C6/36细胞对DEN2不敏感的原因是由于伊蚊C6/36 DNV的污染.     

登革2型病毒E基因克隆及B细胞抗原表位分析

目的扩增登革病毒2型新几内亚株(NGC)E基因,并进行B细胞抗原表位分析。方法根据登革2型病毒NGC株E基因序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增NGC株E基因并克隆至pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α后测序。按Kyte-Doolit-tle方案、Jameson-Wolf方案和Emini方案预测B细胞抗原表位。结果通过RT-PCR方法,获得了登革2型病毒NGC株E基因,并对登革2型病毒NGC株E基因进行B细胞抗原表位预测。结论通过RT-PCR方法,获得了登革2型病毒NGC株E基因,为制备登革2型病毒E基因单克隆抗体和疫苗打下基础。     

白纹伊蚊经口感染、刺叮传播和经卵传递登革病毒的实验研究

为评价白纹伊蚊在我国传播登革病毒(DEN)的媒介效能和了解自然界媒蚊体内病毒的保存机制,应用C_6/36细胞培养结合间接荧光抗体试验(IFA),研究经口感染DEN的白纹伊蚊,证明不仅对DEN有较高的感染率(32.1～32.8％),而且通过直接叮咬敏感乳鼠,也能传播DEN。对感染蚊的子_1和子_2代成蚊分别进行全蚊匀浆病毒分离和直接叮咬乳鼠法检测,也证明白纹伊蚊能经卵传递DEN,至少可传2代以上。说明白纹伊蚊对DEN能起较大的媒介效能。且在维持DEN的自然循环中,也起重要作用。     

从贵州白纹伊蚊体内分离到一株2型登革病毒

从贵州省独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到一株病毒 ,用抗DEN1 4型单克隆抗体经间接免疫荧光法和RT PCR产物酶切分型鉴定为DEN 2 ,并对其NS1和E基因RT PCR产物进行部分基因序列测定 ,与DEN 2NGC株比较 ,麻尾株的NS1基因区有 7个碱基发生点突变 ,E基因区有 1个碱基的插入 ,两个序列被GenBank收录 ,编号分别为AY2 774 0 2、AY2 782 2 6 ;麻尾分离株与其他 9株DEN 2型病毒进行系统发育关系的分析 ,结果显示与D2 - 4 3株系统进化关系最近 ;证明贵州省存在DEN感染的自然循环。     

云南白纹伊蚊经卵传递基孔肯雅病毒的研究

用基孔肯雅病毒经口感染雌性白纹伊蚊，对其子１代，分６５批（３３５８只）用组织培养和小白鼠方法分离基孔肯雅病毒，幼虫、雌性和雄性成虫的批阳性率依次为２７．５％（８／２９）、２５．００％（６／２４）和１６．１９％（２／１２）。同时从子２、３代幼虫和成虫中亦查出病毒。此结果表明该蚊具有将基孔肯雅病毒经卵传递给后代的能力，云南白纹伊蚊在基扎肯雅病毒保存和传播中起重要作用。     

STUDIES ON THE RAPID DETECTION OF DENGUE VIRUS ANTIGEN BY IMMUNOFLUORESCENCE AND RADIOIM- MUNOASSAY

Addition of fluorescein isothiocyanate-la- beled or 12sl-labeled immune ascitic fluid IgG antibody against Type 4 dengue virus onto brain imprint.s of newborn mice and coverglass cul- tures of Aedes albopictus mosquito cell line in- fected with the prototype strain of Type 4 dengue virus showed specific fluorescence in the cytoplasm which could be inhibited by unlabeled specific antibody or gave a positive result by radioimmunoassay in all of them. Results in all the corresponding uninfected imprints and co- verglass cultures were negative. When labeled antibodies were added onto those infected with Type 2 dengue virus or Japanese B encephalitis virus, no positive results were obtained by im- munofluorescence or radioimmunoassay. Res.ults by these two methods in a proportion of the head squashes of laboratory-bred female Aedes albopictus mosquitoes which had sucked the blood of mice infected with Type 4 dengue virus were positive, whereas in those mosquitoes which had not sucked the blood of infected mice the results were all negative. Type 4 dengue virus ant.igen was positive by both methods in a proportion of head squashes and of salivary gland, stomach and ovary squashes of female Aedes albopictus mosquitoes captured from the epidemic region of dengue fever. On the other hand, in those feruale Aedes at.bopictus mosqui- toes bred in the laboratory in nonepidemic re- gion, the results were all negative.     

白纹伊蚊及致倦库蚊对蝙蝠乙型脑炎病毒分离株的易感性分析

目的了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。方法通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。结果两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠乙脑病毒分离株。     

二氧化碳与BG-lure引诱剂诱蚊效果比较研究

目的 比较BG-trap捕蚊器在现场使用CO₂和BG-lure引诱剂（BG）的诱蚊效果。方法 2020年8—9月,设置2处现场,间隔100 m,每个现场设置2个点位,分别布放1个BG-trap捕蚊器,彼此间隔 5 m。每个点位设置不同流量CO₂及不同数量BG,次日同一现场2个捕蚊装置交换位置。收集各捕蚊器所捕捉的蚊虫,分类和记录捕获的蚊虫种类、性别和捕获数,并进行统计。结果 BG +/ CO₂ -和BG -/ CO₂ +捕获白纹伊蚊密度分别为14只和31只,淡色库蚊分别 2只和16只,差异均有统计学意义（t=-2.675,-4.873,P<0.05）。在BG +条件下,CO₂ +组白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊密度分别是CO₂ -组的2.6（25/9.5）、12.0（12/1）和3.0（12/4）倍,差异均有统计学意义（t=-4.119,-4.592, -3.284,P<0.01）,提示吸引白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊CO₂更有效;在BG -条件下,CO₂ +组白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊密度分别是CO₂-组的1.8（18/10）、15.5（15.5/1.0）和2.0（9.0/4.5）倍,差异均有统计学意义（t=-2.868,-5.259,-2.508,P<0.05）;在CO₂ +条件下,BG +组白纹伊蚊和淡色库蚊密度分别是BG -组的1.4 （43.5/31）和0.78（12.5/16.0）倍,差异无统计学意义（t=-0.943,0.709,P>0.05）;在CO₂ -条件下,BG +组白纹伊蚊和淡色库蚊是BG-组的1.0（14/14）和2.0（2.0/1.0）倍,差异无统计学意义（t=-0.500,-1.000,P>0.05）;在BG -条件下,添加0、 1和2份干冰捕获白纹伊蚊雌蚊密度分别为10只、17.5只和18只,三组差异有统计学意义（F=3.942,P<0.05）,捕获淡色库蚊雌蚊分别为1只、13只和18只,三组差异有统计学意义（F=13.881,P<0.05）,但添加1份和2份干冰捕获白纹伊蚊雌蚊和淡色库蚊雌蚊,差异无统计学意义（t=0.112,-0.540,P>0.05）;在CO₂ -条件下,添加0、1和2份BG捕获白纹伊蚊和淡色库蚊雌蚊分别为10只、10只、9.5只和1只、1只、1.5只,三组差异无统计学意义（F=0.120,0.477,P>0.05）。 结论 使用BG-trap捕蚊器监测中,CO₂诱蚊效果优于BG引诱剂,且用100 mL/min流量CO₂能更节省使用成本。     

从白纹伊蚊与致倦库蚊分离和鉴定可结合登革Ⅱ病毒的蛋白分子

目的筛选登革Ⅱ病毒（DENV-2）识别白纹伊蚊、致倦库蚊的连接分子。方法提取不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊的总
蛋白,用SDS-12% PAGE进行分析,用病毒覆盖蛋白结合试验（VOPBA）筛选不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊表达连接
DENV-2分子。结果VOPBA检测不同发育时期白纹伊蚊显示：幼虫样品的泳道可见到25 000、35 000、50 000的DEN-2结合分
子,蛹样品的泳道可见到35 000、50 000分子,雄蚊样品可见到50 000分子,雌蚊样品中可见到35 000、50 000分子。DEN-2结
合蚊35 000分子在白纹伊蚊幼虫、蛹及成蚊的雌蚊的三个阶段均存在,而雄蚊的成蚊则缺少这一分子。VOPBA检测不同发育
时期致倦库蚊：幼虫样品可见100 000分子,蛹样品可见40、100 000分子,另外在50 000位置上下亦可见48 000、60 000左右的
多个条带,雄蚊与雌蚊样品均见40 000、100 000分子。结论35 000大小的蛋白分子分布与白纹伊蚊感染组织向性相关。
     

广州大学城2020年白纹伊蚊幼虫及成蚊抗药性调查

目的 了解广州大学城登革热媒介白纹伊蚊幼虫及成蚊对常用杀虫剂的抗药性现状,为制定针对性防控策略提供参考.方法 分别在广州大学城一期和二期校区采集白纹伊蚊幼虫,在实验室条件下繁殖一代,分别采用幼虫浸渍法和成蚊接触筒药膜滤纸接触法对4类4种幼虫药物和4类9种成蚊药物进行敏感性测定,并运用SPSS25.0进行统计学分析.结果...     

蚊防御素基因的克隆及序列分析

目的：克隆是我国重要蚊媒的防御素基因并对其序列进行分析。方法：分别提取埃及伊蚊、白纹伊蚊、致乏库蚊、中华按蚊的基因组DNA和总RNA。根据国外已发表的防御素基因序列设计、合成引物，进行PCR 和RT－PCR。结果：分别从埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊基因组DNA中扩增出预期片段，将片段切胶纯化后进行序列分析并与已发表的防御素基因比较，显示埃及伊蚊和白纹伊纹的扩增片段与已发表的防御素基因序列有很高的同源性，而中华按蚊的拉增片段则与已发表的防御素基因序列的同源性较低，且不具备特征性的6个半胱氨酸序列。结论：克隆出运行及伊蚊和白纹伊蚊的防御素基因，蚊虫防御素基因的同源性高低与其遗传分类距离有一定的平行关系。     

白纹伊蚊北方分布边界调查及密度监测分析

目的调查白纹伊蚊(Aedes albopictus)北方边界及密度,了解登革热传播危险程度及白纹伊蚊孳生习性,为制定防制措施提供科学依据;方法7-9月依据《全国埃及伊蚊、白纹伊蚊分布边界专项调查方案》,对县内城市居民区、农村居民区、旅游景区、养殖耕种区、特殊场所等五种生态环境分别以诱蚊诱卵器、诱蚊灯、容器法及吸蚊器、人工捕捉方法进行调查监测;结果涉县境内的北纬36°17′至36°55′,东经113°26′至114°之间存在白纹伊蚊,这是涉县首次发现白纹伊蚊,且布雷图指数、容器指数均超过20%;结论涉县及周边区域未来对登革热等蚊媒传染病防控形势严峻,同时对白蚊伊蚊河北省分布情况确定提供重要依据,也对河北省相关蚊媒传染病防控有着警示的作用。