5—氮—2‘—脱氧胞苷对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的p16基因去 …

目的 研究５－氮－２＇－脱氧胞苷（５－ａｚａ－ＣｄＲ）对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的作用，探讨其抗肿瘤效应及可能机理。方法 用人子宫内膜癌裸鼠植瘤模型（ＳＬ－１），观察５ａｚａ－ＣｄＲ对其抗肿瘤用。根据用药不同分为５ａｚａ－ＣｄＲ组、５－ａｚａＣｄＲ＋顺铂（ＤＤＰ）组、ＤＤＰ组和对照组（注入生理盐水），测定用药前后各种肿瘤体积的变化；采用限制性内切酶酶切、聚合酶链反应（ＰＣＲ）及逆转录－酶合酶链反应（     

骨化三醇对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤作用的研究

目的:研究骨化三醇对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的作用。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A,将对数生长期的HEC-1-A细胞株接种于裸鼠右侧背部皮下。将成瘤的裸鼠随机分为两组,分别为对照组、骨化三醇组。观察两组裸鼠生长状况,测量移植瘤的体积和重量,RT-PCR检测肿瘤组织凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达,流式细胞仪Annexin-V/PI双标法观察肿瘤细胞的凋亡情况。结果:对比两组裸鼠用药前后净体重(净体重=裸鼠体重-移植瘤的质量)变化:骨化三醇组与对照组差异无显著性(P>0.05);对比两组裸鼠用药前后移植瘤体积变化:骨化三醇组与对照组比较差异均有显著性(P<0.05);流式检测两组移植瘤凋亡率分别为:对照组(1.45 0.23)%,骨化三醇组(22.52 1.25)%,两组间比较差异均有显著性(P 0.05)。对照组、骨化三醇组Bcl-2 mRNA表达依次下降,而Bax mRNA表达依次上升。骨化三醇组Bcl-2 mRNA和Bax mRNA转录强度与对照组相比差异均有显著性(p<0.05)。结论:本研究结果表明,骨化三醇对HEC-1-A移植瘤具有较强的抗肿瘤作用,该作用是通过Bax/Bcl-2途径诱导HEC-1-A肿瘤细胞凋亡起作用。     

骨化三醇对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤作用的研究

目的:研究骨化三醇对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的作用。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A,将对数生长期的HEC-1-A细胞株接种于裸鼠右侧背部皮下。将成瘤的裸鼠随机分为两组,分别为对照组、骨化三醇组。观察两组裸鼠生长状况,测量移植瘤的体积和重量,RT-PCR检测肿瘤组织凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达,流式细胞仪Annexin-V/PI双标法观察肿瘤细胞的凋亡情况。结果:对比两组裸鼠用药前后净体重(净体重=裸鼠体重-移植瘤的质量)变化:骨化三醇组与对照组差异无显著性(P>0.05);对比两组裸鼠用药前后移植瘤体积变化:骨化三醇组与对照组比较差异均有显著性(P<0.05);流式检测两组移植瘤凋亡率分别为:对照组(1.45 0.23)%,骨化三醇组(22.52 1.25)%,两组间比较差异均有显著性(P 0.05)。对照组、骨化三醇组Bcl-2 mRNA表达依次下降,而Bax mRNA表达依次上升。骨化三醇组Bcl-2 mRNA和Bax mRNA转录强度与对照组相比差异均有显著性(p<0.05)。结论:本研究结果表明,骨化三醇对HEC-1-A移植瘤具有较强的抗肿瘤作用,该作用是通过Bax/Bcl-2途...     

JAK抑制剂AG490联合DDP对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:观察JAK/STAT通路阻断剂AG490联合顺铂(Cis-diaminedichloro-platinum,DDP)对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响,探讨AG490通过阻断STAT3通路对人宫颈癌裸鼠移植瘤生长抑制作用及与caspase-3蛋白表达的关系。方法:建立人子宫颈癌(HeLa)细胞裸鼠异种移植瘤模型并分组。AG490单用或联合DDP处理各组裸鼠。用药期间测量裸鼠体重和肿瘤体积,检测瘤重计算抑瘤率。流式细胞术检测肿瘤组织中细胞凋亡情况,免疫组化检测移植瘤组织中P-STAT3和caspase-3蛋白表达。数据均用SPSS10.0统计软件处理。结果:治疗第7天与DDP组(265.51±23.74)和AG490组(382.89±16.54)比,联合用药组(250.66±18.55)肿瘤体积明显缩小(P<0.05和P<0.001)。DDP组裸鼠体重与联合用药组差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、DDP组、AG490组和联合用药组抑瘤率分别为0,51.2%,33.6%,59.2%,联合用药组的抑瘤作用比单用组更加明显(P<0.05,P<0.001)。FCM分析表明,实验组的肿瘤标本中均可见凋亡峰,凋亡率分别是(52.1±1.3)%,(39.5±0.4)%和(66.7±1.8)%,与对照组(10.2±2.4)%的差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤坏死范围与用药明显相关,联合用药组肿瘤的坏死范围最大,与单独用药组的差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示,联合用药组P-STAT3表达下调,caspase-3表达上调,但二者无负相关(r=-0.074,P>0.05)。结论:AG490对宫颈癌生长有一定的抑制作用,增加P-STAT3表达,但对caspase-3表达无直接作用。AG490与DDP联合应用可进一步提高治疗效果。     

转导人肿瘤坏死因子α基因对耐药性绒毛膜癌裸鼠移植瘤耐药性的逆转作用

目的　探讨转导人肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor α,TNF α)基因 ,对耐药性绒毛膜癌 (绒癌 )裸鼠移植瘤耐药性的逆转作用。方法　将绒癌细胞系JEG 3(A细胞系 )、耐药性绒癌细胞系JEG 3/VP2 (B细胞系 )和转导TNF α基因的耐药性绒癌细胞系JEG 3/VP2 /TNF α(C细胞系 )接种于裸鼠颈背部皮下 ,建立绒癌裸鼠移植瘤模型。每种细胞系移植瘤模型均分为对照组 (腹腔注入生理盐水 )和化学药物治疗 (化疗 )组 [腹腔注入鬼臼乙叉甙 (VP 1 6) ] ,观察移植瘤的生长特点、组织学结构以及对化疗药物的敏感性 ;用逆转录聚合酶链反应方法和免疫组织化学方法 ,检测转导TNF α基因的耐药性绒癌裸鼠移植瘤中多药耐药 (multidrugresistance ,MDR1 )基因在mRNA和蛋白水平表达的改变。结果　移植成瘤率均为 1 0 0 % ,潜伏期 1 0～ 1 4d ;移植瘤组织学特征符合绒癌特点 ;C细胞系移植瘤的生长速度最慢 ,明显低于A、B两个细胞系的生长速度 (P均 <0 0 5) ;C细胞系对照组裸鼠的移植瘤[体积 (4 2± 0 5)cm3,重量 (0 95± 0 1 2 )g]比B细胞系对照组 [体积 (7 9± 0 3)cm3,重量 (1 60± 0 0 6)g]明显减少 (P <0 0 5) ,应用同样剂量的化学药物作用后 ,C细胞系化疗组肿瘤的抑制率 (41 0 %～42 5 % )接近A细胞系化疗组 (46     

AD-p53及联合顺铂治疗卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤及腹水的实验研究

目的:探讨腺病毒载体介导的p53基因(AD-p53)对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞系(SKOV-3)的影响,探讨AD-p53及联合顺铂(DDP)以及不同剂量的AD-p53对卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤及腹水的抑制作用.方法:培养SKOV-3细胞,分组后行免疫荧光染色,绘制细胞生长曲线;建立裸鼠腹腔移植瘤模型.共6组:空白对照组、DDP组、低AD-p53组、高AD-p53组、低AD-p53+DDP组、高AD-p53+DDP组.计算抑瘤率及裸鼠腹水形成量.结果:①成功转染基因并表达p53蛋白的细胞在染色后呈红光,当MOI=100及以上时,转染率可达90%以上.②体外实验结果:经AD-p53作用的各组,细胞生长曲线受到不同程度抑制.③体内试验结果:a:各治疗组与空白对照组、联合用药组与单用药组之间瘤重差异均有统计学意义(P＜0.05),DDP组与单用AD-p53组、不同剂量AD-p53组之间瘤重差异无统计学意义(P＞0.05).b:空白对照组裸鼠均出现血性腹水,量0.4～2.0 ml,各治疗组无明显腹水形成.高AD-p53组荷瘤裸鼠的一般状态较其他组差.结论:AD-p53可成功转染SKOV-3细胞,并对细胞生长有抑制作用;AD-p53能抑制卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤,并对腹水的形成有抑制作用,其与顺铂有协同抗癌性;无限制地增大AD-p53剂量不会增加疗效,反而会对用药个体不利.     

人子宫内膜癌裸鼠模型的建立及其生物学特性的研究

目的 为子宫内膜癌的体内实验及临床研究提供动物实验模型。方法 将人子宫内膜癌手术切除标本移植于BALB／C（nu/nu)裸鼠皮下,传代移植成功后进行鼠间传代。结果 共进行了14例手术标本移植,原代移植成功率为42．9％,自第5代以后,移植瘤的传代成功率均达到100．0％。至2001年5月,共有5株移植瘤传至48－63代,连续传代的移植瘤仍保持原癌组织病理形态特点及人类肿瘤染色体的特点。在传代过程中,裸鼠模型SL－1、SL－2、SL－3的DNA倍体和DNA指数均无明显变化,而SL-4、SL－5随着传代次数的增加,DNA倍体和DNA指数均发生明显变化。5个移植瘤模型雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）表达均为阴性;p53蛋白表达：SL－3、SL－5阴性,SL－1弱阳性,SL－2、SL－4强阳性;P16表达：SL－1、SL－4、SL－5阴性,SL-3阳性,SL－2强阳性;c-erbB－2表达：SL-3、SL-5阴性,SL－2弱阳性,SL－1、SL－4强阳性。结论 人子宫内膜癌手术标本经48－63代传代,成功建立了5株人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型,为开展人类子宫内膜癌的体内实验及临床研究,提供了理想的动物模型。     

Smac基因转染对卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤顺铂敏感性及微血管生成的影响

目的:探讨转染Smac基因对卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤顺铂敏感性及微血管生成的影响。方法:建立卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤模型,随机分为5组,分别给予不同药物干预:(1)对照组:移植瘤内注射生理盐水;(2)DDP组:腹腔内注射顺铂;(3)空质粒+DDP组:移植瘤内注射空质粒,24h后腹腔内注射顺铂;(4)Smac组:移植瘤内注射Smac重组质粒;(5)Smac+DDP组:移植瘤内注射Smac重组质粒,24h后腹腔内注射顺铂。顺铂浓度为0.5mg/m1,给药剂量按3mg/kg计算。观察各组裸鼠移植瘤体积变化,计算抑瘤率。TUNEL法检测移植瘤组织标本的凋亡指数,免疫组化法检测CD34并计算微血管密度(MVD)。结果:Smac+DDP组的移植瘤体积最小,平均抑瘤率72.94%,与其他组比较差异有统计学意义(P0.05)。对照组、DDP组、空质粒+DDP组、Smac组、Smac+DDP组的凋亡指数分别为(19.90±3.18)%,(21.82±4.40)%,(22.64±3.81)%,(30.23±4.06)%,(48.59±4.47)%,MVD计数分别为(24.8±5.36),(21.2±3.11),(19.8±3.70),(14.4±3.85),(11.6±2.70)。其中,Smac+DDP组的凋亡指数最高,MVD最低,与其他组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:Smac基因转染可增强卵巢癌耐药移植瘤对顺铂的敏感性,同时减少微血管生成。     

胞嘧啶脱氨酶基因联合5-氟胞嘧啶对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的　了解胞嘧啶脱氨酶 (CD)基因联合 5 氟胞嘧啶 (5 FC)对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法　应用胚肾 2 93细胞扩增整合有CD基因的复制缺陷的腺病毒 ,并将其分离、提纯。以卵巢癌裸鼠模型作为研究对象。实验组 (5只 ) :将整合有CD基因的复制缺陷的腺病毒 0 1ml[1×10 10 菌斑形成单位 (pfu) /ml]注入瘤体内 ,隔日 1次 ,共 3次 ;同时将 5 FC按每次 4 0 0mg/kg注入裸鼠腹腔内 ,每日 2次 ,共 7d。对照组 (5只 ) :以同样方法将同体积生理盐水注入裸鼠体内。观察两组裸鼠的肿瘤生长速度及倍增时间。结果　 (1)整合有CD基因的腺病毒滴度为 1 0 7× 10 10 pfu/ml。 (2 )实验组裸鼠肿瘤生长明显受抑制 ,肿瘤体积由 9mm3 增加到 85 5mm3 ,而对照组肿瘤体积由 7mm3 增加到 2 0 14mm3 ,两组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,这种显著性差异在用药结束后约 2 0d才表现出来 ,并维持约 30d。(3)实验组与对照组肿瘤倍增时间分别为 (8 1± 0 7)d和 (6 4± 0 7)d ,两组比较 ,差异有显著性 (P<0 0 5 )。结论　应用CD基因联合 5 FC对卵巢癌裸鼠移植瘤具有良好的抑制作用     

高氧致慢性肺疾病早产大鼠P16基因启动子区甲基化

目的 探讨高氧致慢性肺疾病早产大鼠肺组织p16基因的启动子甲基化状态.方法 将早产Wistar大鼠80只随机分为高氧组(吸入氧浓度0.90)和对照组(吸入氧浓度0.21),每组均为40只.分别采用半巢式甲基化特异性聚合酶链反应技术和甲基化特异性聚合酶链反应技术检测肺组织p16基因的启动子甲基化状态.同时,应用逆转录-聚合酶链反应技术、Western印迹及免疫组织化学方法检测肺组织p16基因mRNA和蛋白的表达水平.结果 应用半巢式甲基化特异性聚合酶链反应技术和甲基化特异性聚合酶链反应技术,对照组中不同日龄早产大鼠均未发现有甲基化发生.半巢式甲基化特异性聚合酶链反应技术检测高氧组甲基化发生率为52.5%(21/40),高于甲基化特异性聚合酶链反应技术检测甲基化的发生率(42.5%,17/40),但差异无统计学意义.高氧组肺组织p16 mRNA表达水平在7、14、21 d时分别为1.73±0.40,1.29±0.19和0.95±0.25,均低于对照组(分别为2.11±0.37、1.60±0.27和1.72±0.34),t分别为2.19、2.95和10.43,P均＜0.05.高氧组肺组织p16蛋白表达水平在7、14、21 d时分别为88.1±8.7、65.7±4.5和50.4±4.9,也低于对照组(分别为95.0±4.1、83.5±13.6和86.7±11.9),t分别为2.27、3.95和13.40,P均＜0.05.甲基化大鼠肺组织p16 mRNA表达水平为1.06±0.61,蛋白表达水平为62.32±25.65,均低于非甲基化大鼠,分别为1.63±0.62和94.93±22.21,差异均有统计学意义(t=2.95,OR=0.86,P＜0.01;t-4.28,OR=0.85,P＜0.01).结论高氧可导致早产大鼠的肺组织p16基因启动子甲基化异常,且其甲基化的发生率随高氧暴露时间的延长而逐渐增加,高氧诱导的p16基因启动子高甲基化状态可能是p16 mRNA及蛋白的低水平表达的机制之一,但并非基因沉默.     

原因不明性原发不孕患者子宫内膜白血病抑制因子基因的表达

目的探讨白血病抑制因子（LIF）基因在子宫内膜的表达与原因不明性原发不孕的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对35例原因不明性原发不孕患者（病例组）和20例继发不孕患者（对组照）的黄体中期子宫内膜行LIFmRNA检测。结果对照组患者黄体中期LIFmRNA表达水平为1.093±0.761（±s,下同）,病例组患者为0.448±0.239,两组相比,差异有极显著性（P<0.01）。结论LIF可能参与了胚泡着床过程。LIF的基因表达缺陷或减弱,可能是导致原因不明性原发不孕的原因之一。     

孕激素对人卵巢癌细胞株H08910细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨孕激素（Ｐ）对人卵巢癌细胞株ＨＯ８９１０细胞体外增殖及凋亡的调控作用。方法 选用人卵巢癌细胞株ＨＯ８９１０进行体外培养,实验组中加入含有同浓度Ｐ的培养液,对照组加入等量空白培养液,采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,光学显微镜和透射电子显微镜进行形态学观察,终末脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）计数凋亡细胞,流式细胞仪间     

子宫内膜异位症患者腹腔液肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的？…

子解子宫内膜内异症患者腹腔液肿瘤坏死因子α和白细胞介素６（ＩＬ－６）水平的变化及对人精子活动力和鼠胚胎发育的影响。方法将行诊断性腹腔镜检查的不孕患者２５例,根据术后诊断分为内异症组（１４例）和对照组（１１例,盆腔正常）,利用双抗体夹心法检测其腹腔液和腹腔巨噬细胞培养上清液中ＴＮＦ－α和ＩＬ－６和水平。并将两组的腹腔液分别与人精子和鼠２细胞期胚进行体外培养,观察萁 上人精子活动力鼠２细胞期胚胎发育的     

雌激素对去势兔血脂、内皮素及动脉粥样硬化形成的影响

目的 探讨雌激素对卵巢切除（ＯＶＸ）的去势兔的血脂、内皮素、动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法 将４５只３月龄雌兔随机分为５组,每组９只,Ａ组为正常对照,Ｂ组为假手术＋胆固醇饮食,Ｃ组为ＯＶＸ＋胆固醇饮食,Ｄ组为ＯＶＸ＋胆固醇饮食＋苯甲酸雌二醇,Ｅ组为ＯＶＸ＋胆固醇饮食＋戊酸雌二醇。喂养１２周后取血,分别测定血脂、内皮素,处死动物并留取主动脉标本测量动脉粥样硬化斑块的面积。结果 ⑴Ｄ组和Ｅ组总胆固醇     

白细胞介素2基因转导对卵巢癌细胞系SKOV3免疫原性的影响

目的 探讨白细胞介素２（ＩＬ－２）基因转导对卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３免疫原性的影响。方法 应用流式细胞术,测定ＳＫＯＶ３细胞组织相容性白细胞抗原（ＨＬＡ）ＨＬＡ－ＡＢＣ、ＨＬＡ－ＤＱ及ＨＬＡ－ＤＲ分子的表达,＾５１Ｃｒ－４ｈ释放实验显示ＳＫＯＶ３、ＳＫＯＶ３／Ｎｅｏ、ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对自然杀伤（ＮＫ）细胞和淋巴因子激活杀伤（ＬＡＫ）细胞杀伤的敏感性。结果 ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞中ＨＬＡ－Ａ     

瘦素对人卵巢黄素化颗粒细胞雌、孕激素分泌的体外实验研究

目的探讨瘦素在体外对人卵巢颗粒细胞雌激素和孕激素生成的影响。方法将来自体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的卵巢黄素化颗粒细胞纯化后，在不同浓度瘦素(0、10、30、100、300ng/ml)和人绝经期促性腺激素（hMG，0、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10IU/ml）单独或联合作用下进行体外培养，收集培养液，采用放射免疫方法测定颗粒细胞产生雌二醇及孕酮的量。结果不同浓度的瘦素对雌二醇、孕酮的生成无影响；hMG为5IU/ml时，雌二醇水平平均为2.36×10-11mol/L，加入不同浓度瘦素（10、30、100、300ng/ml），雌二醇的生成均受到明显的抑制，随瘦素浓度增加，雌二醇水平逐渐降低（P<0.05），孕酮水平无明显变化；hMG浓度小于0.5IU/ml时，瘦素对雌二醇生成无影响；hMG浓度大于0.5IU/ml、瘦素为100ng/ml时，雌二醇水平低于不加瘦素的对照（P<0.05）。结论瘦素参与卵巢颗粒细胞激素生成的调节，在卵泡发育和黄体形成中有一定的作用。     

卵巢颗粒膜细胞一氧化氮的分泌及激素调节作用

目的探讨排卵前人卵巢颗粒膜细胞一氧化氮（NO）的分泌与白细胞介素1β（IL-1β）的关系，及其调节雌、孕激素的作用。方法收集体外受精-胚胎移植时穿刺卵巢抽吸的卵泡液，取出卵细胞后，分离出颗粒膜细胞进行培养，分别进行向其内添加IL-1β及NO供体的实验，测定各自培养液中的NO、雌二醇(E2)、孕酮(P)量及芳香化酶的活性。结果添加IL-1β组颗粒膜细胞的NO分泌量为（537±23）μmol/L，不添加IL-1β组为（411±15）μmol/L（P<0.01）；添加NO供体S-硝基乙酰基青霉胺（SNAP）组颗粒膜细胞的E2分泌量为（1234±136）μg/L，不添加NO供体SNAP组为（1792±103）μg/L（P<0.01）；添加NO供体SNAP组颗粒膜细胞的P分泌量为（988±103）μg/L，不添加NO供体SNAP组为（2486±123）μg/L（P<0.001）；添加NO供体SNAP组颗粒膜细胞的芳香化酶活性为（0.422±0.052）Ci/ml，不添加NO供体SNAP组为（0.833±0.012）Ci/ml（P<0.01）。结论在排卵前，卵巢颗粒膜细胞可分泌NO并可能受IL-1β的调节，NO与IL-1β共同参与类固醇激素合成的调节。     

阴道超声照射对子宫内绒毛的影响

目的 了解经阴道超声照射对早期妊娠（早孕）妇胚胎的安全性。方法 将８０例欲终止妊娠的早孕妇女分为４组（各２０例）：Ⅰ组对照,不予超声照身;Ⅱ组经腹超声照射妊娠囊１０ｍｉｎ;Ⅲ组经阴道超声照射妊娠囊３ｍｉｎ;Ⅳ组经阴道超声照射妊娠囊１０ｍｉｎ。１ｈ后行人工流产术,取绒毛组织行电子显微镜超微结构观察,丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）测定及姐妹染色单体交换率（ＳＣＥ）分析。结果 Ⅳ组绒毛断裂、     

雷公藤多甙治疗子宫肌瘤的临床研究

目的 观察雷公藤多甙治疗子宫肌瘤的疗效及副作用。方法 随机将虱分为两组,实验组服用雷公藤多甙４０ｍｇ／ｄ治疗３～６个月,对照组服用米非司酮２５ｍｇ／ｄ治疗３个月。治疗前后均用Ｂ超测量子宫及其肌瘤大小,用放射免疫法（ＲＩＡ）测血清促卵泡素（ＦＳＨ）、促黄体生成素（ＬＨ）、垂体催乳素（ＰＲＬ）、雌二醇（Ｅ２）、孕酮（Ｐ）和睾酮（Ｔ）水平。结果 实验组患者子宫肌瘤于服药３～４个月后６０．０％患者治疗有效