NS-398对宫颈癌细胞系的增殖抑制作用及对survivin基因表达的影响

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对宫颈癌HeLa,SiHa细胞系的增殖、凋亡作用及其对凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法:体外培养宫颈癌HeLa,SiHa细胞系,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析不同浓度的NS-398分别作用于HeLa,SiHa细胞系24h、48h后对细胞增殖的作用;流式细胞仪(FCM)检测对细胞凋亡的作用;RT-PCR分析对凋亡抑制基因survivin表达的影响。结果:MTT检测显示,NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞系增殖,并有浓度时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测提示,NS-398可诱导HeLa,SiHa细胞系凋亡,有浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR分析表明,NS-398可抑制HeLa,SiHa细胞系凋亡抑制基因survivinmRNA表达,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞增殖,诱导凋亡,其机制与抑制凋亡抑制基因survivin mRNA表达有关,为宫颈癌治疗提供了新的靶点和理论依据。     

HeLa和SiHa细胞中Skp2、p27和C-myc的表达

目的:检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)、C-myc、p27在宫颈癌HeLa及SiHa细胞系中的表达,明确这些指标在宫颈癌细胞系表达的意义。方法:通过细胞免疫组化、Westernblot、RT-PCR技术分析Skp2、p27和C-myc在蛋白和mRNA水平表达的差异。结果:免疫组化显示:He-La细胞中Skp2和C-myc表达强度高于SiHa细胞(P=0.032和P=0.026),而HeLa细胞中p27蛋白表达弱于SiHa细胞(P=0.035)。Westernblot显示:在HeLa细胞中Skp2和C-myc蛋白表达分别是SiHa细胞表达量的2.8倍和1.5倍;而SiHa细胞中的p27蛋白的表达水平是HeLa细胞中表达的2.7倍。RT-PCR结果显示:HeLa细胞中内源Skp2和C-myc的mRNA表达水平高于SiHa细胞(P=0.034和P=0.028),而SiHa细胞中的p27的mRNA表达水平高于HeLa细胞的表达水平(P=0.002)。结论:Skp2及C-myc在HeLa细胞中的表达水平高于SiHa细胞中的表达水平,而p27在HeLa细胞中的表达水平低于SiHa细胞中的表达水平。     

GPR30在宫颈癌细胞生长中的作用及其机制研究

目的:体外研究雌激素膜受体GPR30对宫颈癌细胞生长的影响及其作用机制。方法:选择宫颈腺癌HeLa和宫颈鳞癌SiHa细胞株,分别用GPR30特异性激动剂G1和拮抗剂G15处理宫颈癌细胞株。RT-PCR、Western blot法检测处理前后宫颈癌HeLa与SiHa细胞中GPR30、TLR3 mRNA及其蛋白表达变化;MTT法检测G1、G15及Poly I:C处理对宫颈癌细胞生长的影响。结果:(1)HeLa细胞中GPR30表达量高于SiHa细胞。G1处理后HeLa、SiHa细胞中GPR30 mRNA及其蛋白表达水平增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05;P0.05);G15处理后,HeLa、SiHa细胞中GPR30 mRNA及其蛋白表达水平降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05;P0.05)。(2)HeLa、SiHa细胞中TLR3 mRNA表达量分别为(0.5327±0.05373)、(0.3526±0.05774),蛋白表达量分别为(0.3572±0.097039)、(0.5002±0.09718)。G1能降低He La、Si Ha细胞中TLR3mRNA及其蛋白表达水平,G1 10-6mol/L处理组与对照组比较差异有统计学意义(P均0.05)。G15能增高HeLa、SiHa细胞中TLR3 mRNA及其蛋白表达水平,G15 10-5mol/L处理组与对照组比较,差异有统计学意义(P均0.05),与Poly I:C处理组比较差异无统计学意义(P0.05)。(3)10-6mmol/L、10-5mmol/L G1分别处理后,宫颈癌HeLa、SiHa细胞生长增殖率分别为(16.68±5.86)%、(26.67±3.25)%及(14.99±6.43)%、(22.72±1.77)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均0.05)。10-6mmol/L、10-5mmol/L G15分别处理后,宫颈癌HeLa、SiHa细胞的生长抑制率分别为(21.09±2.32)%、(22.99±3.15)%及(15.86±6.49)%、(19.18±2.61)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均0.05)。结论:宫颈癌细胞中存在雌激素膜受体GPR30表达,宫颈腺癌细胞中GPR30表达量高于宫颈鳞癌细胞,体外调节GPR30表达可影响宫颈癌细胞生长。抑制GPR30表达可通过上调TLR3表达而抑制宫颈癌细胞生长,GPR30可能成为宫颈癌治疗的新靶点。     

EXOSC4对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:探讨EXOSC4在调节宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭方面的作用及机制。方法:通过GEPIA在线数据库分析EXOSC4在宫颈癌中的表达及预后情况,Western blot法检测人宫颈癌细胞株中EXOSC4的表达,设计合成靶向EXOSC4的特异性shRNA,构建稳定低表达EXOSC4的宫颈癌细胞株。Western blot和荧光定量PCR验证干扰效率;CCK-8和细胞克隆形成实验检测各组HeLa细胞的增殖能力;采用流式细胞仪检测细细胞周期;采用细胞划痕和Transwell实验检测HeLa细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法检测EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)和Wnt/β-catenin通路相关蛋白(β-catenin、c-Myc、cyclin D1)的表达水平。结果:宫颈癌组织中EXOSC4表达明显高于正常组织,EXOSC4高表达提示预后不良。与HCC94和SiHa细胞系相比,EXOSC4在HeLa细胞中表达量最高。抑制EXOSC4表达可显著降低宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,细胞周期阻滞在G_0/G_1期,上调E-cadherin表达,下调N-cadherin、Vimentin、β-catenin、c-myc和Cyclin-D1表达(均P0.05)。结论:沉默EXOSC4可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭。     

激发型CD40单抗对宫颈癌细胞株SiHa化疗敏感性的影响

目的:研究激发型CD40单抗(5C11)对宫颈癌细胞株SiHa化疗敏感性的影响及其机制。方法:采用流式细胞术检测宫颈癌细胞株SiHa上CD40分子的表达,用MTT法检测5C11联合化疗药物对SiHa细胞的作用,PI染色检测SiHa细胞周期的变化,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,RT-PCR方法分析单抗5C11作用SiHa细胞后凋亡基因表达水平变化。结果:宫颈癌细胞株SiHa高表达CD40,5C11和盐酸吉西他滨单独抑制细胞生长作用不明显,但两者联合能显著抑制SiHa生长和促进凋亡,SiHa细胞经5C11作用后出现S期阻滞,抗凋亡基因bcl-XL表达明显下调,促凋亡基因Bax的上调作用不明显。结论:CD40分子通过介导S期阻滞和调节凋亡基因表达水平增加SiHa细胞对盐酸吉西他滨化疗的敏感性。     

MicroRNA-150通过下调MUC4抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭

目的探讨microRNA-150(miR-150)与宫颈癌细胞生物学功能的相关性。方法收集宫颈癌/癌旁配对样本23例,培养宫颈癌细胞系SiHa细胞、HeLa细胞、miR-150 mimics干预细胞。生物信息学分析,确定miR-150靶标,双荧光素酶报告基因检测进行验证;RT-qPCR及Western blot检测miR-150、MUC4表达;CCK-8检测细胞增殖;AO-PI染色后荧光倒置显微镜下,观察细胞自噬;Transwell检测细胞迁移。结果在宫颈癌组织及SiHa、HeLa细胞中,miR-150表达显著下调,MUC4表达显著上调;荧光素酶报告基因检测证实MUC4是miR-150的直接靶标;miR-150过表达后MUC4表达显著降低,SiHa细胞增殖、迁移侵袭能力显著降低,且细胞凋亡增加;miR-150过表达与细胞自噬相关。结论miR-150可能通过下调MUC4表达抑制宫颈癌细胞的恶性生长和侵袭行为,这可能为宫颈癌的诊断和治疗策略提供新方法。     

β-D-葡聚糖通过下调HPV16 E6和重新激活p53调节HPV16阳性宫颈癌细胞的生物学行为

目的:研究β-D-葡聚糖在宫颈癌细胞中的作用及可能机制。方法:CCK-8法检测β-D-葡聚糖对宫颈癌细胞CaSki、HeLa和SiHa细胞增殖的影响，伤口愈合试验检测细胞迁移情况，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中HPV16 E6/E7、HPV18 E6/E7、p53和p21 mRNA表达水平，Western blot检测N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、p53、波形蛋白、p21蛋白表达水平。以宫颈癌CaSki细胞为研究对象，在雌性BALB/c小鼠皮下注射成瘤，验证β-D-葡聚糖在体内对肿瘤生长的抑制作用。结果:β-D-葡聚糖对不同宫颈癌细胞增殖的影响不同，对CaSki细胞增殖有显著的时间依赖性抑制作用，对HeLa细胞增殖无显著影响，对SiHa细胞作用72h后表现为促进增殖作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、HeLa和SiHa细胞的迁移都有抑制作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、SiHa的细胞周期有调节作用并能促进其凋亡(P<0.05),但对HeLa细胞无显著影响。与对照组相比，β-D...     

HOTAIR对宫颈癌HeLa细胞增殖及自噬的影响北大核心CSCD

目的探讨HOTAIR对宫颈癌HeLa细胞增殖及自噬的影响。方法应用qRT-PCR法检测宫颈癌和正常宫颈组织中HOTAIR表达水平,并分析其与临床病理参数的关系。构建宫颈癌He La细胞HOTAIR过表达细胞株(pcDNA3.1(+)-HOTAIR组)和HOTAIR干扰细胞株(si-HOTAIR组),CCK-8法检测HOTAIR对HeLa细胞增殖的影响。Western blot和免疫荧光分别检测各组细胞自噬关键基因LC3的蛋白和荧光表达。结果宫颈癌组织HOTAIR表达水平显著高于对照组(P <0.001),而与临床病理参数的关系无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,pcDNA3.1(+)-HOTAIR组HeLa细胞增殖水平显著升高(P <0.001),细胞质内LC3点状荧光明显增加。结论 HOTAIR在宫颈癌组织中表达增高,同时可上调宫颈癌HeLa细胞的自噬水平并促进HeLa细胞增殖,其有望成为判断宫颈癌恶性程度和患者预后的生物学标志物。     

HOTAIR对宫颈癌HeLa细胞增殖及自噬的影响

目的探讨HOTAIR对宫颈癌HeLa细胞增殖及自噬的影响。方法应用qRT-PCR法检测宫颈癌和正常宫颈组织中HOTAIR表达水平,并分析其与临床病理参数的关系。构建宫颈癌He La细胞HOTAIR过表达细胞株(pcDNA3.1(+)-HOTAIR组)和HOTAIR干扰细胞株(si-HOTAIR组),CCK-8法检测HOTAIR对HeLa细胞增殖的影响。Western blot和免疫荧光分别检测各组细胞自噬关键基因LC3的蛋白和荧光表达。结果宫颈癌组织HOTAIR表达水平显著高于对照组(P 0.001),而与临床病理参数的关系无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,pcDNA3.1(+)-HOTAIR组HeLa细胞增殖水平显著升高(P 0.001),细胞质内LC3点状荧光明显增加。结论 HOTAIR在宫颈癌组织中表达增高,同时可上调宫颈癌HeLa细胞的自噬水平并促进HeLa细胞增殖,其有望成为判断宫颈癌恶性程度和患者预后的生物学标志物。     

miR-186通过下调EGFR表达对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

目的:探讨miR-186与EGFR在宫颈癌组织和细胞中的表达及作用机制。方法:RT-PCR与Western blot法分别检测30例宫颈癌组织与30例正常宫颈组织中miR-186与EGFR表达,分析其与宫颈癌临床病理之间的关系。增殖侵袭实验检测SiHa和HeLa细胞增殖与侵袭;双荧光素酶实验明确EGFR的3'-非翻译区(3'-UTR)是否为miR-186的直接靶点。结果:与正常宫颈组织比较,宫颈癌组织中miR-186呈低表达,EGFR呈高表达,两者均与宫颈癌分化程度、淋巴转移密切相关。宫颈癌组织中miR-186表达与EGFR表达均呈负相关(EGFR mRNA:R~2=0.865,P0.001;EGFR蛋白:R~2=0.832,P0.001)。上调miR-186表达能抑制SiHa和HeLa细胞的增殖与侵袭。双荧光素酶实验明确miR-186靶定了EGFR的3'UTR并影响了EGFR的蛋白表达。EGFR过表达逆转了miR-186抑制的细胞增殖和侵袭。结论:miR-186通过靶定EGFR的3'-UTR抑制EGFR表达进而抑制宫颈癌SiHa和HeLa细胞的增殖与侵袭。     

子宫颈癌细胞中RAR-β基因表达缺陷与其DNA甲基化的关系

目的观察宫颈癌细胞中RAR-β基因表达的情况,并探讨RAR-β基因DNA甲基化与RAR-β基因表达缺陷的关系。方法采用RT-PCR技术检测宫颈癌细胞系SiHa、HeLa、C33A和Caski细胞中RAR-β mRNA的表达,免疫荧光化学染色法及蛋白印迹法检测其RAR-β蛋白的表达,同时应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）技术检测宫颈癌细胞中RAR-β基因DNA甲基化状态及采用5-脱氧-2’-杂氮胞苷（5-Aza-edR）处理后RAR-β基因DNA甲基化状态的变化,以及5-Aza-edR处理对RAR-β基因表达缺陷的影响。四甲基偶氮唑蓝（MTF）比色法测定5-Aza-edR对细胞增殖的影响。结果SiHa、HeLa、Caski和C33A细胞中RAR-β mRNA的表达水平分别为0．25±0．08、0、0．60±0．19、3．12±0．92,RAR-β蛋白表达水平分别为0．23±0.07、0、0．14±0．05、0．68±0．21。SiHa、HeLa、Caski细胞中存在RAR-β基因的表达缺失或低下,而C33A细胞中存在RAR-β基因的表达。MSP技术检测发现,SiHa、HeLa、Caski细胞中存在RAR-β基因DNA甲基化,而C33A细胞为非甲基化状态。5-Aza-edR处理后,SiHa、HeLa、Caski和C33A细胞中RAR-β mRNA的表达水平分别为1、82±0．59、2．13±0.62、1.67±0．43、2．95±0．89,RAR-β蛋白表达水平分别为0．69±0．21、0．83±0．29、0．56±0．16、0.64±0.20。5-Aza-cdR处理前后SiHa、HeLa、Caski细胞中RAR-β mRNA和蛋白的表达水平比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;C33A细胞中RAR-β mRNA和蛋白的表达比较,差异则无统计学意义（P〉0、05）。5-Aza-edR处理后能抑制宫颈癌细胞的增殖。结论RAR-β基因的表达缺陷在宫颈癌的发生中起重要作用,RAR-β基因DNA异常甲基化是导致该基因表达缺陷的重要原因。     

宫颈癌细胞系HeLa、SiHa中侧群细胞的分离鉴定及特性初步研究

目的:探索宫颈癌细胞系HeLa、SiHa中侧群细胞(SP)的分选方法,并初步探讨其生物学特性.方法:流式细胞术(FACS)检测Hoechst 33342染色后的人宫颈癌HeLa、SiHa细胞系,明确SP细胞所占比例.免疫细胞化学法检测SP与non-SP细胞中乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达.比较SP和non-SP细胞体内免疫缺陷鼠的致瘤性.比较SP、non-SP及HeLa细胞的自我更新和化疗耐受性.结果:HeLa、SiHa细胞系中SP细胞分选比例分别为(1.07±0.32)％和(0.83±0.76)％.SP细胞中BCRP表达显著高于non-SP细胞.HeLa细胞中分离出的SP与non-SP细胞的致瘤率、致瘤潜伏期及瘤体体积无显著差异;而SiHa细胞中分离出的SP与non-SP细胞比较,致瘤潜伏期较短、肿瘤体积较大.体外培养7天后,SP细胞的生长速度显著高于non-SP与HeLa细胞.曲古霉素(TSA)浓度在0.05 μmol/L时对细胞的抑制作用最明显,其作用于SP细胞72h后的存活分数(SF)[(86.68±8.78)％]显著高于non-SP细胞[(49.06±6.26)％]及未分选的HeLa细胞[(43.69±4.84)％](P＜0.05).结论:SP细胞中可能含有大量干细胞样肿瘤细胞,具有很强的增殖、再生能力及化疗耐受性,可为宫颈癌临床治疗研究提供新的靶点.     

酸性成纤维细胞生长因子在宫颈癌中的表达及其信号传导途径

目的探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)在宫颈癌发生发展中的作用及其信号传导机制.方法应用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)对36例宫颈癌组织aFGF 及其受体FGFR1的表达进行了分析;并以不同浓度的aFGF 和酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein诱导宫颈癌细胞株HeLa细胞,[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定蛋白激酶C(PKC)及细胞外信号调节激酶(ERK)的活性.结果 aFGF mRNA 和FGFR1 mRNA在宫颈癌组织中的半定量检测结果分别为(1.233±0.064)和(1.168±0.103),与正常宫颈组织相比,差异有显著性(P<0.05),且在Ⅲ～Ⅳ期宫颈癌中的表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05);随着aFGF浓度的增加,HeLa细胞PKC及ERK 活性随之升高,与aFGF浓度呈剂量依赖效应;genistein抑制细胞内PKC及ERK 活性,与genistein 浓度亦呈剂量依赖效应.结论提示aFGF 与宫颈癌的发生、发展、浸润呈正相关,其受体具有TPK活性,TPK激活后可进一步激活PKC和ERK,进一步证明PKC及ERK确是TPK的下游信号分子.     

miR-154-5p调控CUL2对子宫颈癌裸鼠模型的抑制作用研究

目的探讨微小RNA 154-5p(miR-154-5p)调控枯灵素2(CUL2)对子宫颈癌裸鼠模型的抑制作用。方法 (1)采用慢病毒转染技术, 建立并筛选稳定过度表达miR-154-5p的子宫颈癌SiHa细胞株(miR-154-5p-OE组), 以转染慢病毒空载体的SiHa细胞作为对照组(miR-154-5p-CO组), 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测两组细胞中miR-154-5p和CUL2 mRNA的表达。将两组SiHa细胞悬液接种于裸鼠皮下, 建立裸鼠皮下移植瘤模型, 测量移植瘤体积。49 d后处死miR-154-5p-OE组和miR-154-5p-CO组裸鼠, 剥离移植瘤, 采用qRT-PCR技术、蛋白印迹(western blot)法和免疫组化法检测两组裸鼠移植瘤组织中miR-154-5p及CUL2 mRNA和蛋白的表达。(2)建立并筛选miR-154-5p与CUL2同时稳定过度表达的SiHa细胞株(CUL2-OE组), 以转染过度表达miR-154-5p载体和空基因序列载体的SiHa细胞作为对照组(CUL2-CO组), 进行功能回复实验, qRT-PCR技术检测...     

自噬基因Beclin1抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的研究

目的:研究自噬基因Beclin1对裸鼠宫颈癌细胞株HeLa移植瘤的抑制作用。方法:将自噬基因Beclin1真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Beclin1经脂质体包裹后转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Westernblot检测其mRNA及蛋白水平的表达,MTT法检测细胞生长抑制率;将HeLa细胞接种于裸鼠右前肢腋下建立裸鼠人宫颈癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分别以重组质粒pcDNA3.1(+)-Bec-lin1、pcDNA3.1(+)和生理盐水200μl每两天1次直接瘤内注射,连用3周后,测量3组肿瘤大小并观察肿瘤组织形态学改变。结果:pcDNA3.1(+)-Beclin1能使HeLa中Bec-lin1mRNA及蛋白表达增加(P<0.05),并显著抑制HeLa细胞的生长,呈现时间依赖性,与其余两组相比,有显著统计学差异(P<0.05);经重组质粒治疗21天后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相对于对照组瘤体明显缩小、瘤重明显减轻(P<0.05),病理检查可见,pcD-NA3.1(+)-Beclin1处理组瘤块内细胞坏死减少,结缔组织增生,而对照组中癌细胞分布呈弥漫性。结论:自噬基因Beclin1可以抑制HeLa移植瘤的生长。     

siRNA对宫颈癌细胞系 HPV16 E6基因的作用

目的 构建并筛选出最有效的HIV16 E6基因特异的小干扰RNA(amall interfering RNA，siRNA)表达载体，观察其对宫颈癌细胞中HIV16 E6基因表达的长期影响，探讨E6基因在宫颈癌发生过程中的分子作用机制，为临床HIV感染及宫颈癌治疗探索新方法。方法 构建Hairpin siRNA质粒，稳定转染宫颈癌SiHa细胞，鉴定转染细胞中的质粒DNA，通过Real-Time RT-PCR检测细胞中HPV16 E6mRNA表达，采用Westem-blot检测p53、p21等蛋白的变化。MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)检测SiHa细胞转染siRNA后细胞增殖曲线。结果 HIV16 E6A hairpin siRNA表达载体转染人宫颈癌SiHa细胞，可以在细胞内长期表达siRNA，有效抑制细胞内HIV16 E6基因的表达。E6A siRNA能抑制细胞生长，作用持续达4个月以上。结论 利用siRNA表达载体抑制整合在细胞中的外源HIV E6病毒癌基因可能是治疗HIV感染和宫颈癌的一种新的理想方法。     

干扰素α-2b对宫颈癌细胞HPV16 E6E7基因抑制作用的研究

目的研究干扰素α-2b对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用，从细胞生物学及分子生物学水平探讨干扰素α-2b对宫颈癌细胞SiHa的作用机制。应用RT-PCR半定量检测细胞内HPV16 E6E7 mRNA表达，观察干扰素α-2b对宫颈癌SiHa细胞中HPV16 E6E7 mRNA表达的影响。方法以不同浓度的人重组干扰素α-2b含药培养液作用于感染HPV16的人宫颈癌细胞系——SiHa细胞，并设立无药对照，通过MTT及流式细胞分析技术检测该药对细胞生长及增殖的影响；进行细胞凋亡检测并用RT—PCR法半定量检测对HPV16 E6E7基因表达的影响。结果经含有干扰素α-2b的培养液作用后，细胞数量减少，1000IU／ml的干扰素α-2b对细胞抑制作用最强；细胞周期各时相中，S期细胞所占比例明显减少；均可诱导细胞凋亡；均使细胞中HPV16 E6E7mRNA表达明显减少。结论干扰素α-2b不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长，并可能通过抑制HPV16 E6E7基因表达的分子机制，达到抑制肿瘤目的。     

格尔德霉素对宫颈癌HeLa细胞中bcl-2表达的影响

目的:观察格尔德霉素(geldanamycin,GA)在体外对宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2和mRNA转录、蛋白表达水平的影响。方法:分别给予宫颈癌HeLa细胞0,0.02,0.2,2,10μmol/L浓度GA处理24h,用annexin V方法检测细胞凋亡,半定量PCR检测bcl-2、Hsp90 mRNA转录水平,用10μmol/L的GA处理HeLa细胞3、12、24、48h后,Western blot检测bcl-2、Hsp90蛋白表达水平的变化。结果:宫颈癌HeLa细胞经不同浓度的GA作用24h,细胞凋亡指数呈剂量依赖性增加,bcl-2 mRNA表达呈剂量依赖性降低,bcl-2蛋白表达水平呈时间依赖性降低,处理组与对照组之间的差异有统计学意义;但GA对Hsp90 mRNA和蛋白表达水平无明显影响。结论:GA可抑制宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2的转录和表达,促进凋亡。     

RNA干扰技术阻抑survivin基因表达对子宫颈癌细胞放射和化疗敏感性的影响

目的探讨利用RNA干扰(RNAi)技术阻抑survivin基因的表达,对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性和化疗敏感性的影响。方法通过脂质体介导,将含survivin基因小分子干扰RNA的重组真核表达质粒pSilencer2．1-s2、阴性对照质粒pSilencer2．1-NC和空载质粒pSilencer2．1-U6 neo转染宫颈癌细胞系HeLa,获得HeLa-s2、HeLa-NC和HeLa-U6 neo细胞,同时设未转染的HeLa细胞为阴性对照。RT-PCR技术、蛋白印迹法分别检测survivin mRNA和蛋白的表达水平,并计算survivin mRNA和蛋白表达抑制率;激酶活性检测法测定波长在405 nm处的吸光度(A405)值,表示半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;平板克隆形成实验观察细胞的放射敏感性变化,以克隆形成率表示;四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活率并计算顺铂的50％抑制浓度(IC50)。结果与HeLa-NC、HeLa-U6 neo及未转染的HeLa细胞比较,HeLa-s2细胞survivin mRNA和蛋白表达水平明显下降,survivin mRNA和蛋白表达抑制率分别为(62．8±0．3)％和(60．1±0．5)％。HeLa-s2细胞的A405值为1．261±0．043,未转染的HeLa细胞的A405值为0．314±0．012,两者比较,差异有统计学意义(P<0．05)。HeLa-s2与未转染的HeLa细胞相比,细胞凋亡率明显升高(P<0．05),分别为(29．23±1．41)％和(2．74±0．32)％。不同照射剂量下,HeLa-s2与未转染的HeLa细胞分别比较,克隆形成率均明显降低(P<0．05)。在同一顺铂浓度下,HeLa-s2与未转染的HeLa细胞比较,细胞存活率显著降低(P<0．05),HeLa-s2细胞对顺铂的IC50值较未转染的HeLa细胞下降显著(P< 0．05),分别为(0．873±0．021)和(9．212±0．033)μg／ml。结论利用RNAi技术可阻抑HeLa细胞中survivin基因的表达,增强caspase-3活性,诱导细胞凋亡,显著提高细胞的放射敏感性和对顺铂的化疗敏感性。     

RNAi抑制宫颈癌HeLa细胞survivin基因及其对顺铂敏感性影响的研究

目的:利用RNA i技术抑制宫颈癌HeLa细胞株Survivin基因,观察HeLa细胞株的细胞凋亡率、survivin蛋白表达及对顺铂(DDP)药物敏感性的变化。方法:以培养的宫颈癌HeLa细胞株为体外研究模型,设脂质体组、对照组、RNA i组进行实验。(1)半定量RT-PCR,W estern blot法检测Survivin mRNA、蛋白在各组细胞中的表达;(2)用流式细胞术分析各组细胞周期及细胞凋亡率的影响;(3)用MTT法分析DDP对各组细胞存活率作用的浓度。结果:(1)RT-PCR检测结果显示,Survivin扩增条带(206bp)的亮度差异显著,RNA i组明显弱于脂质体组及对照组。RNA i组Survivin mRNA相对含量较质脂体组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);W estern blot检测各实验组Survivin蛋白的表达,脂质体组与对照组Survivin蛋白条带明显存在,且基本一致,而RNA i组同样位置的条带基本消失;(2)RNA i组细胞阻滞在G0/G1期,G/M期减少,与脂质体组和对照组分别比较,差异有统计学意义(P<0.01);(3)MTT比色法检测结果显示,不同浓度顺铂处理后脂质体组、对照组、RNA i组的IC50分别为(0.298±0.035)、(0.147±0.031)、(0.012±0.001),RNA i组HeLa细胞对顺铂的药物敏感性增高。两者相比差异有统计学意义(P=0.000)。结论:RNA i明显抑制了Survivin在转录及翻译水平的表达;RNA i抑制Survivin基因表达,能明显提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的药物敏感性。