益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响

目的 :探讨益母草水苏碱(stachydrine,Sta)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响。 方法 :采用不同浓度的益母草水苏碱(10^-4,10^-5,10^-6mol/L)对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。 结果: 益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein／DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取和SERCA活性。 结论: 益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率和SERCA活性也明显提高。     

益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取能力的影响

目的：探讨益母草水苏碱（stachydrine,Sta）对去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取能力的影响。方法：采用不同浓度的益母草水苏碱（10-4、10-5、10-6mol/L）对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。结果：益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein/DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能。结论：益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率也明显提高。     

活性氧参与益母草水苏碱抗AngⅡ诱导心肌细胞肥大的影响

目的利用新生大鼠心肌细胞,观察益母草水苏碱对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大和活性氧（ROS）含量的影响。方法培养新生大鼠心肌细胞,利用AngⅡ诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度的益母草水苏碱对细胞肥大的影响（细胞数目、蛋白以及DNA含量）,同时用H2DCFDA荧光探针标记、流式细胞仪检测ROS含量。结果①AngⅡ（10^-6mol／L）使心肌细胞蛋白含量明显增高（P〈0．05）,对细胞数目和DNA含量无影响（P〉0．05）;②10^-7mol／L～10^-4mol／L浓度的益母草水苏碱呈剂量依赖性关系对抗AngⅡ导致的蛋白含量的增高（P〈0．05）;③AngⅡ可诱导心肌细胞内ROS含量增加,加入益母草水苏碱抑制了AngⅡ的这一作用。结论益母草水苏碱可抑制AngⅡ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大,抑制ROS含量增加可能是其作用机制之一。     

益母草水苏碱干预NE诱导乳鼠心肌细胞肥大的作用

目的:探讨益母草水苏碱干预NE诱导乳鼠心肌细胞肥大的作用。方法:采用改良Simpson法培养乳鼠心肌细胞,选用NE诱导制作心肌细胞肥大模型,随机分为对照组,NE(10-6M)组,Sta高中低剂量(10-4M、10-5M、10-6M)组及Car(10-6M)组。在药物作用的1d、3d、5d和7d后收集细胞,采用图像分析系统测量心肌细胞表面积,BCA法检测细胞蛋白含量,荧光微量测定细胞DNA含量,ELISA法检测细胞ANP和BNP含量,以细胞表面积、Protein/DNA比值以及ANP和BNP含量作为检测指标,观察益母草水苏碱对肥大心肌细胞的药效学作用。结果:益母草水苏碱作用于细胞1d后,Sta大中小剂量组与NE组比较各项指标没有统计学差异。益母草水苏碱作用于细胞3d后,Sta大中剂量组与NE组比较可以明显降低细胞的表面积、Protein/DNA的比值及ANP含量(P0.05),Sta小剂量组较NE组降低了细胞表面积(P0.05),其它各项指标没有差异。益母草水苏碱作用于细胞5d后,Sta大中小剂量组较NE组显著降低细胞的表面积、Protein/DNA的比值及ANP含量(P0.05),各组BNP含量与NE组比较,有降低的趋势,但是没有统计学差异。益母草水苏碱作用于细胞7d后,Sta大中小剂量组与NE组比较,明显降低细胞的表面积、Protein/DNA的比值、ANP和BNP含量(P0.05)。结论:益母草水苏碱具有抗NE诱导乳鼠心肌细胞肥大作用。     

益母草生物碱对去甲肾上腺素诱导心肌细胞肥大效应的抑制作用

目的 探讨益母草生物碱(Alkaloid of Leonurus,AFL)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的作用.方法 改良Simpson法培养新生大鼠心肌细胞,随机分为生理盐水对照组、NE组及AFL高中低剂量(0.05,0.1,0.5g/L)组.用NE诱导制作心肌肥大模型并给予相应的药物干预.采用伊红染色法测定心肌细胞表面积,BCA法测细胞蛋白含量,HOE 33258荧光法测定细胞DNA含量,观察不同浓度AFL对肥大心肌细胞的影响.结果 模型组细胞表面积、蛋白质含量及Protein/DNA比值与对照组相比明显增加(P＜0.05);AFL中、高剂量组与模型组比较,细胞表面积、蛋白质含量及Protein/DNA比值均显著减少(P＜0.05);低剂量AFL对细胞表面积、蛋白质含量及Protein/DNA比值无明显影响(P＞0.05).结论:AFL可浓度依赖性地拮抗NE诱导的大鼠心肌细胞的肥大反应.     

益母草水苏碱对肥大心肌细胞活性氧信号的影响

目的:观察益母草水苏碱对心肌细胞肥大的作用,探讨其对活性氧(ROS)及其下游NF-κB信号的影响。方法:原代培养乳鼠的心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ建立细胞肥大模型,观察10-7～10-4mol/L浓度的益母草水苏碱对细胞肥大的影响(测定细胞体表面积及Protein/DNA比值),同时利用流式细胞仪检测ROS阳性细胞比例,West-ern Blot法测定细胞浆内p-IκBα(ser32)及核内NF-κB(p65)蛋白表达。结果:一定浓度的益母草水苏碱可以降低肥大心肌细胞的体表面积、Protein/DNA比值以及ROS阳性细胞比例(P0.05);益母草水苏碱干预降低了肥大心肌细胞浆内p-IκBα(ser32)及核内NF-κB(p65)蛋白的表达水平(P0.05)。结论:对ROS及其下游NF-κB信号的抑制可能涉及益母草水苏碱对抗心肌细胞肥大的作用机制。     

益母草水苏碱抑制去甲肾上腺素诱导心肌细胞胚胎基因再表达的作用

目的观察益母草水苏碱（stachydrine,Sta）对去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）诱导的新生大鼠心肌细胞胚胎基因再表达的抑制作用。方法采用II型胶原酶分离新生大鼠心肌细胞,随机分为空白对照组、NE组、卡维地洛组（Car组）及益母草水苏碱组（sta组）各组分别予相应的干预措施。采用荧光标记F-actin染色法测定心肌细胞表面积,Protein／DNA比值代表细胞蛋白合成,并以荧光定量PCR检测胚胎基因α—MHC、β-MHCmRNA表达情况。结果与空白对照组比较,NE组心肌细胞表面积、Protein／DNA比值以及3-MHCmRNA表达差异有统计学意义（P〈0．05）。与NE组比较,sta组及卡维地洛组心肌细胞表面积、Protein／DNA及β—MHCmRNA表达差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Sta能够显著抑制NE诱导的心肌细胞肥大。     

粉防已碱对血管紧张素II诱导心肌肥大及p-ERK1/2表达的影响

目的:观察粉防已碱(tetrandrine, Tet)对血管紧张素II(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的心肌肥大及p-ERK1/2表达及活性的影响.方法:培养新生大鼠心肌细胞,用相差显微镜计数心肌细胞搏动频率、细胞图像分析系统测量细胞体积、考马斯亮蓝法测定心肌细胞总蛋白含量、[3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;以ERK免疫沉淀活性试剂盒测定ERK活性,Western-blot测定p-ERK1/2表达.结果:Tet能显著抑制Ang II诱导的心肌细胞搏动频率、体积、总蛋白含量、蛋白合成速率的上升;对p-ERK1/2表达及活性具有剂量依赖性的抑制作用.结论:Tet可以明显抑制Ang II诱导的心肌肥大,机制与降低p-ERK1/2表达及活性有关.     

坎离颗粒对压力负荷超载所致舒张性心力衰竭大鼠心肌肌质网钙转运的影响

目的探讨坎离颗粒改善舒张性心力衰竭大鼠左室舒张功能的可能作用机制。方法 56只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组和缬沙坦组,每组14只。除假手术组外其余各组采用腹主动脉缩窄法制成心脏压力负荷超载心力衰竭模型。术后1周中药组给予坎离颗粒溶液6.75 g/(kg·d)灌胃,缬沙坦组给予缬沙坦混悬液7.2μg/(kg·d)灌胃,假手术组、模型组给予等量双蒸水灌胃,每日1次,共干预32周。观察各组大鼠心肌肌质网形态学变化、钙摄取功能、钙ATP酶2a(SERCA2a)活性及其蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌肌质网钙摄取速率显著降低,心肌组织SERCA2a活性降低,SERCA2a蛋白表达增加(P0.05或P0.01);心肌肌质网明显减少,线粒体空化严重。与模型组比较,中药组心肌肌质网钙摄取速率提高,SERCA2a活性、蛋白表达明显增高(P0.05或P0.01);心肌肌质网、线粒体结构完好。结论坎离颗粒可能通过增加心肌组织SERCA2a蛋白和活性、促进心肌肌质网钙摄取速率,从而改善舒张性心力衰竭大鼠左心室舒张功能。     

三七总皂苷抗心肌肥大的作用与其影响神经体液因素的关系

目的:通过研究三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对大鼠整体和离体模型心肌肥大的影响,探讨PNS对心肌肥大的作用机制。方法:用腹主动脉缩窄法建立大鼠整体心肌肥大模型,PNS腹腔注射给药,持续3周后,测大鼠收缩压(SBP)、全心重量/体重(HW/BW)、左室重量指数(LVI)、左室心肌纤维直径(MD);用去甲肾上腺素(NE)诱导培养的新生大鼠心肌细胞制作离体心肌肥大模型,给PNS72h后,测定细胞表面积和蛋白质含量。结果:PNS浓度依赖性地抑制腹主动脉缩窄大鼠HW/BW,LVI,MD的增加,但不能显著降低大鼠SBP;0.1-0.5g·L^-1PNS可显著抑制NE诱导的心肌细胞表面积和蛋白质含量的增加,P<0.01。结论:PNS能抑制大鼠整体和离体2种模型心肌肥大,其作用机制不是通过降低压力负荷.而是与拮抗神经体液因素NE的作用有关。     

Astragalosides rescue both cardiac function and sarcoplasmic reticulum Ca²⁺ transport in rats with chronic heart failure

The study investigated the beneficial effects of astragalosides (AS) on cardiac performance in rats with chronic heart failure. Chronic heart failure was produced by left anterior descending coronary artery ligation, and the therapeutic efficacy of astragalosides at 10, 20 and 40 mg/kg was evaluated. Five weeks after the operation, cardiac function was deficient and sarcoplasmic reticulum Ca²⁺‐ATPase (SERCA) activity was significantly reduced. Moreover, SERCA mRNA decreased, while expression of the SERCA down‐regulator phospholamban (PLB) was significantly increased. Phosphorylated phospholamban (P‐PLB), the form that does not inhibit SERCA, was also reduced by chronic heart failure. Treatment with AS improved left ventricle function and cardiac structure, reversed the depression of SERCA activity, and increased P‐PLB. These results suggest that the cardioprotective effect of AS may be due to the increase in P‐PLB protein, which disinhibits SERCA activity. Rescue of sarcoplasmic reticulum Ca²⁺ cycling by astragalosides could normalize excitation–contraction coupling and improve overall cardiac function. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

黄芪注射液对左室肥厚大鼠心肌钙超载及肌浆网钙泵表达的影响

目的：探讨黄芪对压力过载致左室肥厚大鼠心肌钙含量及肌浆网钙泵(SERCA2a)表达的影响。方法：采用缩窄腹主动脉法制备压力过载性心肌肥厚模型。大鼠随机分为假手术组，模型组，低、中、高剂量黄芪组(5，10，20 g·kg^-1·d^-1)和卡托普利组(0.05 g·kg^-1·d^-1)。造模后第13周开始灌胃给药，连续12周。测定大鼠左室质量指数(left ventricular mass index, LVMI)和心肌钙含量的变化(原子吸收光谱法)，并检测(RT-PCR，Western blot)大鼠左室组织肌浆网钙泵的表达。结果：黄芪呈剂量依赖性抑制模型大鼠左室质量指数的增加(P<0.01，P<0.001)，其中高剂量黄芪作用与卡托普利相似；黄芪能抑制肥厚心肌组织钙超载(P<0.01)；与假手术组相比，心肌肥厚大鼠左心室SERCA2a 基因表达下调(P<0.05)，高剂量黄芪使之表达上调(P<0.05)，而卡托普利对其表达无明显影响。结论：黄芪对大鼠压力过载性心肌肥厚的抑制作用可能与其减轻心肌钙超载及上调心肌SERCA2a基因表达有关。     

Effect of astragalosides on intracellular calcium overload in cultured cardiac myocytes of neonatal rats

Astragalosides were the main active components from a native Chinese herb Astragalus membranaceus. Recent studies have shown that Astragalosides have a protective effect on myocardial injury in rats. The present study was designed to investigate the effect of Astragalosides on intracellular calcium overload and sarcoplasmic reticulum calcium load (SR Ca2+ load) in cultured cardiac myocytes from neonatal rats. Astragalosides (100 microg/ml) were incubated in the presence of isoproterenol (ISO) (10(-5) M) for 72 hours in cardiomyocytes. Metoprorol (10(-6) M), a beta1-selective antagonist, was cultured in the same condition as Astragalosides. The result showed that intracellular calcium concentration ([Ca2+]i) and SR Ca2+ load increased in ISO-treated cardiac myocytes as compared to control (P < 0.01). Astragalosides prevented ISO-induced increase in [Ca2+]i and SR Ca2+ load. Metoprolol also inhibited those increase. The mRNA expression and activity of sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase (SERCA) were enhanced following ISO treatment in cardiac myocytes, and these increases were inhibited by Astragalosides or metoprolol (P < 0.05). The decrease of superoxide dismutase (SOD) activity and the elevation of intracellular maleic dialdehyde (MDA) were observed after ISO treatment in cardiac myocytes. Both Astragalosides and metoprolol restored the SOD activity and reduced the level of MDA. We conclude that Astragalosides have the effects on reducing [Ca2+]i and SR Ca2+ load, enhancing free radical removal and decreasing lipid peroxidation in ISO-treated cardiomyocytes, which might account for their protective effect on myocardial injury.     

高效液相色谱串联电喷雾质谱法测定大鼠血浆中水苏碱

 目的应用LC/ESI-ITMS检测大鼠血浆中水苏碱的含量。方法取血浆样品0.2mL,经3 mL乙腈-甲醇(90∶10)混合液沉淀蛋白并萃取后,以甲醇-水-甲酸(70∶30∶1,pH 3.5)为流动相,用Agilent zorba Extend-C₁₈色谱柱分离,通过电喷雾离子阱质谱,以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z144→m/z84(水苏碱)和m/z166→m/z148(内标,麻黄碱)。结果水苏碱线性范围为0.02～5.00 mg·L^-1,定量限20μg·L^-1,最低检测限为1μg·L^-1,日内、日间测定值RSD小于5.4%。在大鼠体内药动学研究中,应用此法测定了6只大鼠给予盐酸水苏碱后血浆中水苏碱的浓度。结论该法快速灵敏,准确度高,适用于大鼠体内水苏碱的药动学研究。     

Pycnogenol Cytotoxicity in Pancreatic INS‐1E β cells Induced by Calcium Dysregulation

Natural standardized flavonoid extract from the bark of Pinus pinaster, Pycnogenol (Pyc), was recently found to decrease intensively the activity of sarcoplasmic reticulum Ca²⁺‐ATPase of rabbit skeletal muscle (SERCA1). On the basis of this inhibitory effect in a cell‐free system and similarities of SERCA1 to its other isoforms, proapoptotic properties of Pyc may be expected in cellular systems. Pycnogenol (40–100 μg/mL) induced a concentration‐dependent decrease of the viability of pancreatic INS‐1E β cells associated with induction of apoptosis. In addition, intracellular Ca²⁺ level increase was found along with reduction of protein expression level of SERCA2b and impairment of insulin secretion by β cells. These facts indicate that Pyc may induce apoptosis by impairment of calcium homeostasis. Copyright © 2017 John Wiley & Sons, Ltd.