双重标记连接蛋白43激光共聚焦显微镜检测方法的研究

目的：探讨激光扫描共聚焦显微镜和荧光双重标记技术对心肌连接蛋白43进行定量和定位研究的方法。方法：应用罗丹明-麦芽凝集素标记心肌细胞膜,FTTC标记连接蛋白43;应用激光扫描共聚焦显微镜的检测器1和检测器2同时分别检测连接蛋白43和细胞膜,应用Image-Analysis程序进行图像分析。结果：在激光扫描共聚焦显微镜下,可以清晰地观察连接蛋白43和细胞膜,应用Image-Analysis程序能对连接蛋白43进行定量研究,连接蛋白43的分布也能同时得到研究。结论：结合应用激光扫描共聚焦显微镜和双重标记技术能对连接蛋白43进行精确的定量和定位研究,是一种先进的方法。     

激光共聚焦显微镜观察免疫荧光双重标记的前列腺癌内基质金属蛋白酶及其作用底物的表达

目的：探讨应用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光双重标记的前列腺癌标本的可行性及优点。方法：应用激光扫描共聚焦显微镜同时检测前列腺癌中基质金属蛋白酶(MMPs)和其作用底物的表达情况。结果:在激光扫描共聚焦显微镜下,可以清晰地观察MMP-7和层粘连蛋白（LN）可共同表达于前列腺癌细胞及基质中的基底膜、血管平滑肌和神经纤维;MMP-9和Ⅳ型胶原的主要表达于细胞外基质中的基底膜。结论:结合应用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光双重标记技术能对蛋白进行精确的定位研究。     

德国Leica Sp2激光扫描共聚焦显微镜

激光扫描共聚焦显微镜是以激光作为激发光源,在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦的原理和装置,对荧光标记样本进行断层扫描,获得高分辨率的光学切片,并利用计算机对所观察的对象进行数字图像处理的一套观察、分析和输出系统。激光扫描共聚焦显微镜具有非常广阔的应用领域和应用前景。     

流体剪切力和细胞骨架阻断对肌动蛋白丝的影响

目的：探讨流体剪切力对成骨细胞细胞骨架的影响.方法：实验分为3组,Ⅰ组（流体剪切力）,Ⅱ组（流体剪切力＋细胞松弛素D,Cytochalasin D）,Ⅲ组（流体剪切力＋噻氨酯哒唑,Nocodazole）.分别对Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组施加12dyne/cm2流体剪应力,应力作用时间分别为：0,10,30,60min.采用激光共聚焦显微镜、免疫荧光显微镜技术和免疫荧光染色方法对小鼠成骨细胞骨架进行形态学观察、F-肌动蛋白表达的荧光定量分析.结果：细胞在不同时间点受到同一剪切应力后,细胞的排列方向发生改变,细胞内的F-肌动蛋白排列同应力方向一致,随着应力时间延长到1h,F-肌动蛋白变得厚而丰富,F-肌动蛋白的荧光强度同0时段剪切力组相比明显增强（P〈0.01）.当加入细胞松驰素D后,细胞内F-肌动蛋白结构发生改变,在力的作用下,细胞内微丝断裂明显,随着拉伸时间的延长,微丝断裂更为明显,F-肌动蛋白的荧光强度同0时段剪切力组相比显著减弱（P〈0.01）.加入噻氨酯哒唑后,在剪切力作用下细胞内微管断裂,F-肌动蛋白丝完整且边缘呈锯齿状改变,它的荧光强度同0时段剪切力组相比也有明显减弱（P〈0.05）.结论：不同时间点受到同一剪切应力对细胞骨架微丝、微管结构产生一定的影响,微丝解聚和重排以及微管断裂与否在细胞力传导中起重要作用.     

应用LSCM对脑脊液淋巴瘤细胞内质网的研究

目的：通过激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）技术对脑脊液淋巴瘤细胞内质网进行立体、动态、定量研究。方法：将所观察脑脊液细胞分为正常淋巴细胞组、淋巴瘤细胞组，内质网以荧光探针DiOC6(3)标记后，得到内质网的断层扫描图像、荧光强度地形立体分布图并且定量测量内质网的荧光强度值。结果：与正常淋巴细胞相比，淋巴瘤细胞内质网空间立体分布有明显差别，平均荧光值明显增强，有非常显著性差异（P＜0．01）。结论：本研究对中枢神经系统淋巴瘤的诊断、鉴别诊断、瘤细胞分化程度和功能状态判断有一定意义。     

RhoA—ROCK信号通路介导缺氧所致乳腺癌细胞肌动蛋白细胞骨架重构

目的：探讨缺氧对乳腺癌细胞（MDA-MB-435细胞）肌动蛋白细胞骨架重构和细胞形态改变与RhoA-ROCK信号通路的关系。方法：对体外培养的MDA-MB-435细胞进行缺氧16h处理，或在缺氧前用ROCK的特异性抑制剂Y-27632（10umol／L）预处理细胞1h，再进行缺氧处理。用共聚焦激光扫描显微镜研究缺氧或使用Y-27632对MDA—MB-435细胞肌动蛋白细胞骨架重构的影响和细胞形态的改变。结果：乳腺癌细胞经16h缺氧处理，肌动蛋白细胞骨架发生解聚，应力纤维的排列和分布以及细胞形态明显改变；事先使用Y-27632再进行缺氧处理，可防止缺氧所致乳腺癌细胞内肌动蛋白细胞骨架解聚。同时应力纤维在细胞内排列和分布恢复正常。结论：RhoA-ROCK信号通路可能参与缺氧所致乳腺癌细胞内肌动蛋白细胞骨架的重构和细胞形态的改变。     

一种检测巨噬细胞内NADPH氧化酶活性的新方法

目的建立一种检测活细胞内ＮＡＤＰＨ氧化酶活性的新方法。方法用超氧离子物荧光探针ＨＥ标记巨噬细胞后,在激光扫描共聚焦显微镜下,用最适发射波长为５３０ｍｍ的检测器１检测巨噬细胞内ＨＥ的荧光强度变化。结果检测器１可检测单个和多个巨噬细胞内ＨＥ的荧光强度变化,ＰＭＡ刺激后巨噬细胞内ＨＦ荧光强度增强,ＮＡＤＰＨ氧化酶活性升高;地塞米松使巨噬细胞内ＨＥ荧光强度减弱,ＮＡＤＰＨ氧化酶活性降低：经地塞米松处理０．５ ｈ, ＰＭＡ刺激引起的巨噬细胞内 ＨＥ荧光强度增强幅度减小, ＮＡＤＰＨ氧化酶活性变化减小。结论激光扫描共聚焦显微术结合荧光标记技术可原位实时观察活细胞内ＮＡＤＰＨ氧化酶活性的变化。     

周期性张应变对椎间盘纤维环细胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨周期性张应变对培养的大鼠椎间盘纤维环细胞内Ca2 浓度([Ca2 ])的影响及其可能机制.方法采用激光扫描共聚焦显微镜和Fluo-3/AM荧光探针标记技术,测定周期性张应变对纤维环细胞内[Ca2 ]的影响,并分析了EGTA、维拉帕米和氯化钆预处理对此作用的影响.结果应变为10%、频率为1 Hz的周期性张应变1 min使细胞内[Ca2 ]增加1.13倍;EGTA可以阻断此作用;而维拉帕米和氯化钆仅可部分阻断.结论周期性张应变使纤维环细胞内[Ca2 ]升高,细胞外钙内流起主要作用,且有不同的钙离子通道参与.     

应用激光扫描共聚焦显微镜对脑脊液转移B细胞型淋巴瘤细胞线粒体的研究

近期激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal mioroscope,LSCM)具有对细胞进行光学切片,荧光定量、定位分析等其它方法不具备的功能[1,2],本研究将应用于脑脊液淋巴瘤细胞线粒体研究.     

量子点荧光技术标记口腔鳞癌细胞中bcl-2的研究

【目的】 利用量子点(QD)优良的光学性质对人舌癌Tca8113细胞内bcl-2进行特异性荧光标记,并与异硫氰酸荧光素(FITC)进行光稳定性比较。 【方法】 分别利用QD605nm和FITC,通过间接免疫荧光法,在激光共聚焦显微镜下观测人舌癌Tca8113细胞内bcl-2的表达,并激光连续照射1 h,用激光共聚焦显微镜自带软件Leica Confocal Software测量量子点QD605nm和FITC的荧光信号强度。 【结果】 激光共聚焦显微镜下可见人舌癌Tca8113细胞内bcl-2明显表达,量子点QD605标记的荧光信号比FITC更具特异性,且激光连续照射1 h, QD605nm标记的荧光未见明显衰减,而FITC标记的荧光1 h内已基本淬灭。【结论】 量子点荧光标记技术能对细胞内bcl-2进行标记,比传统的有机荧光具有更显著的优点。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。