利用无机载体固定化青霉素酰化酶的研究

以无机材料６２０１型担体作载体,进行青霉素酰化酶固定化的研究。考察了ＡＰＴＳ和戊二醛浓度、给酶量以ｐＨ等因素对固定化酶酶活的影响。结果表明,以６２０１型担体为载体制备得到的固定化酶具有较高的酶活回收,达４２．８％;操作稳定性良好;用其连续水解３０批青霉素Ｇ的钾盐溶液,酶活未见明显下降;该固定化酶与游离酶相比,可在较宽的ｐＨ范围保持高酶活。     

固定化青霉素G酰化酶的初步研究

本文研究固定化青霉素G酰化酶的不同制备方法,比较了各种固定化青霉素G酰化酶的载体。实验表明:聚丙烯腈纤维和无机载体制成的固定化酶具有较高的酶比活力,而且表面积大,易于装柱,抗污染能力大,又能裂解高浓度青霉素 G 溶液生成6-APA。     

青霉素酰化酶:固定化及其应用

青霉素酰化酶广泛应用于β-内酰胺类抗生素中间体和半合成β-内酰胺类抗生素的合成。虽然游离酶具有极高的催化活性,但其对温度、pH值、溶剂极性等的耐受范围极窄,极易失活,而且在有机溶剂中发生的失活是不可逆的。为了提高其各方面稳定性,不断有新的固定化方法提出。本文综述了青霉素酰化酶的固定化方法及其应用。     

青霉素酰化酶提取及其与固定化酶的动力学参数测定和比较

采用冻融-溶媒法从大肠杆菌中提取青霉素酰化酶(经硫酸铵沉淀、透析、冷冻干燥),制得酶粉,活力为1100.37u/g,经六批提取试验,平均提取收率47.93％。分别测定游离酶及其固定化酶米氏常数Km值。游离酶的Km值为2.39mM,固定化酶按其颗粒大小不同,Km值分别为5.62、8.46、8.42mM。 在对pH稳定性测定中,游离酶最适pH为7～8,而固定化后在pH5～9之间都较稳定。对温度的稳定性测定中,游离酶与固定化酶在40℃以下都较稳定,但在45℃保温一小时后,游离酶只存留活力39.51％,而固定化酶却存留活力86.92％,二者有显著差异、温度再高相差更大。因此酶经固定化后,对pH和温度的稳定性都有明显提高。金属离子对青霉素酰化酶的活力有所影响。特别是铁离子和铜离子影响较大,故酶反应容器不能采用铁和铜的材料。     

固定化青霉素酰化酶反应器的研制和应用(英文)

目的研制一个全新的 2 0 0L不锈钢固定化青霉素酰化酶反应器并在中试中应用。方法在罐内壁上安装三个盛酶柱 ,每根酶柱装入湿纤维状固定化酶 1 5kg,酶活力 76 2IU·g-1(以湿品为基础计算 )。以HBO3 作缓冲液 ,底物青霉素G钾的质量浓度为 80 g·L-1。每批投料 12kg,每批裂解反应 90min。结果 15批之后 ,剩余酶活力 6 85IU·g-1(以湿品为基础计算 ) ,6 APA收率平均达 89 8%。结论 6 APA生产中使用新的固定化青霉素酰化酶反应器将提高 6 APA的收率 ,减少固定化青霉素酰化酶的损耗。     

固定化酰化酶在青霉素裂解反应中的影响因素分析

在酶促脱酰法裂解青霉素工业钾盐生产药用中间体6-氨基青霉烷酸(即6-APA)的反应杌理中,在不同反应物浓度、pH及温度下将直接影响酰化酶的活性及其使用寿命。本文通过多组实验进行比较分析摸索出酰化酶的最适宜的工艺条件以达到延长酰化酶的使用寿命,降低6-APA的生产成本的目的。     

固定化青霉素酰化酶合成头孢拉定的工艺研究

用7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢霉烷酸和2,5-二氢苯甘氨酸甲酯盐酸盐在磷酸盐缓冲液体系中（20℃,pH 7.0）,利用固定化青霉素酰化酶催化合成抗生素头孢拉定,收率90%。     

青霉素G酰化酶在γ—氧化铝上的吸附交联固定化

以γ-氧化铝为载体,利用戊二醛对巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)Bp931胞外青霉素G酰化酶进行吸附交联固定化.酶活力回收为31%,在37 C、pH8.0的条件下,固定化酶对青霉素G的活力为304IU/g;作用于青霉素G的表观米氏常数Km值为3.23×10-2M.该固定化酶可耐高离子强度洗涤,连续合成头孢拉定(cephradine)10批次,酶活力剩余82%.     

非水相青霉素酰化酶催化反应研究进展

青霉素酰化酶（penicillin acylase，PA）又称为青霉素酰胺酶或青霉素氨基水解酶，主要从大肠埃希菌胞内酶和巨大芽孢杆菌胞外酶获得，该酶已大规模应用于工业生产β-内酰胺类抗生素的关键中间体，并试图开发应用于半合成β-内酰胺类抗生素的工业生产。本文概述近年来PA在非水相催化中的研究进展，重点介绍提高非水相酶的稳定性的方法，如固定化方法、生物学方法和介质工程等。     

青霉素G酰化酶在γ-氧化铝上的吸附交联固定化

以 γ-氧化铝为载体 ,利用戊二醛对巨大芽孢杆菌 (Bacillus megaterium) Bp931胞外青霉素 G酰化酶进行吸附交联固定化。酶活力回收为 31% ,在 37℃、p H8.0的条件下 ,固定化酶对青霉素 G的活力为30 4IU/ g;作用于青霉素 G的表观米氏常数 Km值为 3.2 3× 10 - 2 M。该固定化酶可耐高离子强度洗涤 ,连续合成头孢拉定 (cephradine) 10批次 ,酶活力剩余 82 %     

以聚丙烯腈纤维为载体制备工业用固定化PGA的基本条件

以聚丙烯腈纤维为载体 ,共价结合制备工业生产应用的固定化青霉素酰化酶。经过测定 ,获得了制备固定化酶的基本条件 :对部分酸水解聚丙烯腈纤维进行霍夫曼重排反应溶液中的次氯酸钠浓度为 4%～ 16 % (v/v) ;用含戊二醛的溶液对经过霍夫曼重排反应的水解纤维进行活化反应溶液的pH为 6 5～ 8 5 ,最适 pH7 0 ;活化反应时间为 10min ;活化纤维中醛基含量为 12 5 0 μmol/g以上 ;酶与活化纤维连接反应溶液的最适pH值为 6 5～ 7 0 ;反应时间为 10min。在酶与活化纤维的连接反应溶液中加入竞争性抑制剂 苯乙酸 ,对酶活力具有保护作用 ,能提高酶活力的固定化效率。在酶与活化纤维的连接反应溶液中剩余的游离酶经吸附、洗涤和浓缩后 ,可以再用于制备固定化酶。变性固定化酶经再生活化后作为载体固定化新的酶液 ,也能制备出较好的固定化酶。     

青霉素酰化酶制备6-APA的研究进展

6-氨基青霉烷酸（6-APA）是重要的抗生索药物中间体之一．目前均采用青霉素酰化酶酶促裂解青霉素获得。本文介绍近年来青霉索酰化酶催化青霉素水解的研究进展，青霉素酰化酶的性质及其催化机理，青霉素酰化酶的固定化方法．青霉素酰化酶反应器的设计，反应介质工程的研究进展。     

固定化青霉素酰化酶反应器研究进展

介绍固定化青霉素酰化酶反应器的研究现状，将这类反应器分为搅拌釜反应器、柱式填充床反应器、中空纤维膜反应器以及电渗析耦合反应器，从工程角度分析了各类反应器的优缺点，并展望其今后的发展趋势。     

青霉素G酰化酶的亚基重组

青霉素G酰化酶在半合成β-内酰胺类抗生素工业中催化关键反应。将来源于Esherichia coli的α亚基分别与Kluyvera citrophila,Providencia rettgeri,Alcaligenes faecalis的β亚基重组得到三种杂合酶,杂合酶表达量随野生型PGA同源性的减小而降低,E.coli和A.faecalis氨基酸序列的相同性低至41%,其杂合酶仍然具有水解3-苯乙酰胺-6-硝基苯甲酸的活力。     

Immobilization of penicillin G acylase onto ion exchange and hydrophobic resins

Penicillin G acylase was immobilized on numerous cation exchange resins and hydrophobic adsorbents. Amberlite XAD-7 was the matrix of choice among the matrices studied for the immobilization of enzyme. Binding of 96.8% and expression of 82.6% of the penicillin G acylase was achieved on XAD-7. Penicillin G acylase immobilised on XAD-7 was used for 80 cycles for the production of 6-PA in a stirred tank reactor.     

Substrate specificity of penicillin acylase of E. coli.

The hydrolysis of several phenylacetylamino compounds was studied using a purified preparation of E. coli penicillin acylase. The L-isomers of phenylacetyl amino acids were cleaved much faster than the D-isomers. The same observations was made for some phenylacetylamino beta-lactams. When the beta-lactam ring is incorporated in a penam or cephem ring system, the D-isomers were hydrolysed somewhat faster than the L-isomers. We also confirmed that benzylpenicillins with an hydroxy- or an amino-group in alpha-position of the side chain were hydrolysed, both in the normal and the 6-epi-series.