wt—P53基因对人膀胱移行细胞癌细胞系转染及其生物学特性影响的研究

目的：探讨膀胱肿瘤的治疗途径。方法：利用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将外源性野生型ｐ５３（ｗｔ－ｐ５３）基因导入人膀销移行细胞癌细胞系ＴＢＣ－１细胞中,并得到表达,结果;细胞在体外标准条件下,生长增殖率降低,流式细胞计检测显示细胞周期Ｇ０＋Ｇ１细胞比例明显增高,凋亡指数升高,细胞生长速度减低,代表细胞增殖能力的ＡｇＮＯＲｓ计数下降,结论：增加ｗｔ－ｐ５３的基因表达具有抑制恶性肿瘤生长的作用。     

急性白血病多药耐药性检测的临床应用

目的 探讨急性白血病（急白）患者多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达的临床意义放应用。方法 对３５例初治急白患者采用Ｓ－Ｐ免疫组化染以法检测ＭＤＲ１表达产物,地部分患者进行动态观察并配合药敏测定,了解急白患者化疗前后耐药情况的变化。结果 本组３５例ＭＤＲ,表达阳性者１４例（４０％）,其中急性淋巴细胞白血病（急淋）９便,急性晨淋巴细胞白血病（急非淋）５例,两者无显著差异,１４例ＭＤＲ１表达阳性者,达完全缓解     

膀胱移行细胞癌P53表达的临床意义

目的：探讨Ｐ５３表达与胱移行细胞癌（ＴＣＣ）预后的关系。方法：ＬＳＡＢ方法测定８例正常膀胱粘膜组织及４９例ＴＣＣ标本中Ｐ５３表达;推断Ｐ５３表达与ＴＣＣ的关系。结果：Ｐ５３在正常膀胱组织中无表达,而在ＴＣＣ中表达阳性率为４０．８％,两组比较有显著性差异,在Ｔ１及Ｔ２－４期ＴＣＣ中表达阳性纺分别为３１．４％、６４．３％;在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级ＴＣＣ中分别为１３．３％￣５０％、６０％,显示Ｐ５３表达阳笥率随分     

P21^WAF1／CIP1蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的 观察Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因的蛋白产物在膀胱移行细胞癌中的表达及意义。方法采用免疫组化技术检测５６例膀胱移行细胞癌标本Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１蛋白的表达。结果 Ｐ２１蛋白在膀胱移行细胞癌中的阳性表达率为３５．７％（２０／５６）。它在低分化,浸润性肿瘤的表达明显低于高分化,浅表性肿瘤（Ｐ〈０．０５）,在复发肿瘤中的阳性表达率高于原发性肿瘤（Ｐ〈０．０５）。结论Ｐ２１的表达水平可作为评估膀胱     

膀胱癌ras,MDR1基因表达及其相互关系的实验研究

应用免疫组化技术对３２例膀胱癌ｒａｓ基因，ＭＤＲ１基因的表达及其相互关系进行了研究。结果表明：３２例膀胱癌ｒａｓ基因，ＭＤＲ１基因的阳性表达率分别为３７．５％，６２．５％，初发膀胱癌ｒａｓ基因，ＭＤＲ１基因的阳性表达率分别为３５％，５０％，而化疗后复发的膀胱癌ｒａｓ基因、ＭＤＲ１基因的阳性表达率为４１．６％、８３．３％。随着肿瘤病理分级的升高，ｒａｓ基因及ＭＤＲ１基因的阳性表达率也随之增高，结果证     

膀胱移行细胞癌中P53蛋白的表达及意义

目的 探讨Ｐ５３蛋白在膀胱移行细胞癌中的分布与临床分期,病理分级,淋巴结转移和预后的关系。方法 应用ＡＢＣ免疫组化法对６６例人体膀胱移行细胞癌进行研究。结果 正常膀胱粘膜Ｐ５３均阴性。发现Ｐ５３在浸润性膀胱癌中的表达高于浅表性膀胱癌（Ｐ〈０．０５）;     

膀胱移行细胞癌VEGF表达与微血管计数的关系

目的 检测膀胱移行细胞癌中血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）表达和肿瘤微血管计 探讨其相互关系及临床意义。方法 采用免疫组织化学检测５３例原发性膀胱移行细胞癌和８例非癌旁胱手术标本ＶＥＧＦ表达,并对肿瘤微血管进行计数,结果 ５３例膀胱移行细胞癌标本中ＶＥＧＦ的阳性表达率为５４．７％,对照组８例膀胱粘膜均为阴性;低分化和浸润性癌组ＶＥＧＦ阳性表达率为ＭＶＣ显著高于高分化和表浅性癌组：ＶＥＧＦ表达阳性者ＭＶ     

1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙氨基)丙烷盐酸盐对内皮素促血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用内皮素－１（ＥＴ－１０．１μｍｏｌ·Ｌ－１）建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用［３Ｈ］胸腺嘧啶核苷（［３Ｈ］ＴｄＲ）参入法，流式细胞术，免疫细胞化学及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，观察了１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙氨基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ０．１μｍｏｌ·Ｌ－１）对血管平滑肌细胞增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响．结果发现：ＤＤＰＨ能逆转ＥＴ－１所致［３Ｈ］ＴｄＲ参入量增多，阻止血管平滑肌细胞由静止期（Ｇ０／Ｇ１期）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）和有丝分裂期（Ｇ２／Ｍ期），并能逆转ＥＴ－１引起的ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｓｉｓ原癌基因相关抗原及ｍＲＮＡ表达增强，Ｐ５３抑癌基因相关抗原及ｍＲＮＡ表达减弱．提示ＤＤＰＨ能抑制血管平滑肌细胞增殖，与癌基因调控的分子生物学机理有关．     

多药耐药基因与体外药敏检测在急性白血病中的临床意义

目的：研究急性白血病（ＡＬ）多药耐药－１（ＭＤＲ１）基因表达与临床疗效的关系，提高对肿瘤细胞耐药情况预测的准确性。方法：采用逆转录敏－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了３０例ＡＬ患者骨髓中ＭＤＲ１基因的表达，同时对每例均进行体外化疗药物敏感性（ＴＭＭ）检测。结果：３０例ＡＬ ＭＤＲ１基因过度表达占４０％，ＭＴＴ检出耐药为３０％（１０／３０），即有ＭＤＲ１基因过量表达又显示耐药者２７％（８／３０）；     

纤支镜下肺癌患者MDR1基因的表达

目的：研究原发性肺癌患者ＭＤＲ１基因的表达及其与病理组织分型的关系。方法：通过纤维支气管镜应用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,对３３例未治、５例化疗后的原发性肺癌和１７例非癌组织ＭＤＲ１基因的表达进行分析。结果：在３８例癌标本中有１７例观察到ＭＤＲ１基因的表达,主要分布在非小细胞鳞癌中,而非癌组织仅有１例ＭＤＲ基因的表达。结论：在未治的原发性肺癌尤其是非小细胞肺癌中,可检测到ＭＤＲ１基因     

恶性淋巴瘤诊断中荧光原位杂交分析基因状态的研究

目的 探讨恶性淋巴瘤中基因重排的特点.方法 回顾性分析87例恶性淋巴瘤组织样本,利用荧光原位杂交技术,分别检测弥漫大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤中BCL-6、BCL-2、MALT1、CCND1、C-MYC和ALK基因重排.结果 弥漫大B细胞性淋巴瘤中BCL-6基因重排的阳性率为29.03％(9/31),滤泡性淋巴瘤中BCL-2基因重排的阳性率为61.11％(11/18),黏膜相关淋巴组织淋巴瘤中MALT1基因重排的阳性率为47.37％(9/19),套细胞淋巴瘤中CCND1基因重排的阳性率为88.88％(8/9),Burkitt淋巴瘤中C-MYC基因重排的阳性率为100％(2/2)和间变性大细胞淋巴瘤中ALK基因重排的阳性率为75.00％(6/8).结论 基因重排对恶性淋巴瘤的诊断具有重要的实际价值.     

精蛋白在改进非病毒载体基因转染中的应用

非病毒基因载体的出现,为基因治疗提供了低毒、易于大规模制备的载体。但与病毒载体相比,非病毒基因载体的转染效率仍然偏低,阻碍了非病毒基因载体的临床应用。本文旨在探讨精蛋白在改进非病毒基因载体方面的应用,希望通过合理的载体设计与优化,制备出一种高效、低毒的基因载体。     

PCR-SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG,ahpC基因突变的研究

目的：应用PCR－SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG及ahpC基因突变,评价此方法用于结核分杆菌利福平（RFP）及异烟肼（INH）耐药性试验的意义。方法：以结核分支杆菌H37Rv为对照,30例耐RFP（单耐或多耐）、21例耐INH（单耐和多耐）的结核分枝杆菌临床分离株及10例敏感菌株;39例菌阳肺结核患者及30例非结核 性肺部疾病患者痰标本,采用PCR－SS－CP技术检测痰标本和菌株中的结核杆菌rpoB,katG,ahpC基因突变,并与药敏试验对照。结果：PCR－SSCP检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG及ahpC基因突变的阳性率分别为79％（31／39）、46％（18／39）及5％（2／39）.结论：PCR－SSCP可望成为直接检测临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平及耐异烟肼的快速方法。     

Livin基因和Survivin基因联合靶向siRNA抑制大肠癌细胞增殖的作用

采用1个载体编码2个shRNA技术, 构建Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体, 研究其对人大肠癌细胞生长协同抑制的增效作用。构建Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞, 通过RT-PCR和Western blotting方法检测Livin基因与Survivin基因的表达, 利用流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡效应。经酶切鉴定和测序分析证实Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功, 它对大肠癌细胞Livin和Survivin mRNA的抑制率分别为27.90%和32.24%, 对Livin和Survivin蛋白表达的抑制率分别为22.28%和40.86%, 诱导肿瘤细胞凋亡率为 (11.69 ± 1.37) %, 但协同干扰作用比单独干扰Livin基因或Survivin基因弱。Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功并能抑制Livin基因和Survivin基因的表达, 但协同抑制作用比单独干扰Livin基因或Survivin基因弱。     

Future prospects for gene delivery systems

Introduction: Gene therapy is the challenging area of biotechnology. Despite its promise for critical diseases, it has serious safety and efficiency issues, particularly with regards to gene transfer systems.

Areas covered: We examined the current situation with gene transfer systems and addressed problems this technology. We then searched patent applications about in the area from the Patentscope online system, the international patent database. We analyzed the data obtained to get a general idea about gene delivery systems designed for future use and assessed approaches for more efficient, safer and valid delivery systems.

Expert opinion: When quality assurance terms are fulfilled, some of these issues (genetic changes, mutations) could be minimized during the production process. Modification of vectors for improving their efficiency and safety or development of alternative transfer systems could be the solutions for these problems. Gene transfer technologies are important for gene therapy and should demonstrate effective, target-specific and acceptable safety profiles. For this reason, searching for alternatives to current systems is a necessity.     

激活沉默基因以获取抗生素的发展动态

随着基因工程技术的不断发展和成熟,通过遗传学途径筛选新抗生素和新活性物质的方法不断出现.本文综述了采用基因工程手段激活沉默基因以开发新型抗生素和活性物质的发展动态.较为具体的介绍了两个采用此种方法取得成功的实例,为今后的科研工作提供参考.     

肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2／CD，pH2／UPRT的构建

目的利用婴儿双歧杆菌对实体瘤低氧区的靶向效应，构建肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2／CD和pH2／UPRT。方法用PcR的方法从质粒pGEX／CD和pGEX／UPRT中扩增出CD基因和UPRT基因，用内切酶BamHI和SalI酶切CD基因，UPRT基因和质粒pH2，分别连接后重组于大肠杆菌中。用电转化的方法将重组质粒转人婴儿双歧杆菌中。通过双酶切和基因测序的方法检验质粒pH2／CD和pH2／UPRT的正确性，RT—PCR检测该系统的mRNA表达。在黑色素瘤B16-F10细胞上检测该系统的体外肿瘤细胞杀伤效果。结果成功地将CD基因和UPRT基因转入了乳酸菌表达质粒pH2，在纯化后的质粒被双酶切后，CD基因被分割为6．9kb和1．3kb的两部分，UPRT基因被分割为6．9kb和620bp的两部分。CD基因和UPRT基因的测序结果表明序列与Genebank公布的序列一致。RT—PCR检测到CD和UPRTmRNA的明显表达。黑色素瘤细胞的低存活率证明pH2／CD，pH2／UPRT自杀基因治疗系统对黑色素瘤的强大杀伤作用。结论肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2／CD，pH2／UPRT构建成功并显示出强大的杀伤肿瘤细胞的作用。     

RT-PCR检测胃癌NY-ESO-1抗原的表达及其基因克隆

目的 研究NY-ESO-1基因在胃癌中的表达,以便了解胃癌患者是否可以使用NY-ESO-1抗原为基础的疫苗治疗。方法 采用RT-PCR方法检测NY-ESO-1基因在60例胃癌组织和相应的癌旁正常组织中的表达,采用分子克隆的方法从胃癌组织中克隆了NY-ESO-1 cDNA。结果 NY-ESO-1基因在胃癌组织中的表达率为55％(33／60),在相应的癌旁正常组织中未见表达,克隆的NY-ESO-1 cDNA序列与GenBank报道一致。结论 NY-ESO-1基因在胃癌中呈高表达率,NY-ESO-1抗原可以被具有HLA-1类分子限制性CIL识别。     

福建地区汉族健康人群维生素D受体基因TaqI多态性分析

目的了解福建地区汉族健康人群维生素D受体（VDR）基因单核苷酸多态性位点分布特点。方法抽取福建地区汉族健康人79例,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应法（PCR-RFLP）测定VDR基因TaqI酶切位点多态性分布。结果 VDR基因TaqI酶切位点有两种基因型,TT、Tt两种基因型分布频率分别为81.01%、18.99%。T等位基因频率占90.51%,t等位基因频率占9.49%。基因型频率分布符合Hardy-weinberg平衡定律（χ^2=0.87,P〉0.05）,具有群体代表性。结论福建地区汉族健康人群VDR基因TaqI酶切位点多态性的分布与其他地区人群的分布,存在差异,可能为种族差异及环境因素的基因频率发生变化。     

哮喘豚鼠嗜酸细胞凋亡与ICE、Fas基因表达关系的研究

目的 探讨哮喘豚鼠EOS凋亡与ICE和Fas基因表达的关系。方法 实验分为哮喘组和正常对照组,各15只豚鼠,采用原位细胞凋亡方法检测豚鼠BALF中EOS的凋亡率;应用免疫细胞化学方法检测豚鼠肺组织的ICE和Fas基因表达。结果 哮喘组EOS凋亡率为2.1％±1.3％,显著低于对照组10.1％±1.4％(P<0.01)。哮喘组ICE、Fas基因表达强度分别为21±5和17±6,对照组分别为36±8和38±9,哮喘组显著低于对照组(P<0.01)。哮喘组EOS凋亡率与ICE和Fas基因表达呈正相关(r=0.65和0.68,P<0.05)。结论 哮喘豚鼠肺组织的ICE、Fas基因表达均降低,可能在抑制哮喘EOS凋亡中起重要作用。