甲肝IgM抗体诊断试剂盒在甲肝病毒抗原检测中的应用

将HAV IgM-Ab诊断试剂盒用HAV-Ag标准品调控灵敏度后,用于检测HAV-Ag,并比较快速检测法和常规过夜法两种检测方法的测定效果,以选择在甲肝疫苗生产中,抗原检测的合适方法.经过调控灵敏度后,抗HAV IgM诊断试剂盒完全可以用来检测HAV-Ag.并可以正确评价HAV-Ag滴度,HAV感染性滴度.适用于甲肝疫苗的检定工作.     

抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。     

甲型副伤寒沙门氏菌体抗原抗血清的简易提纯

目的 单克隆抗体以其结合抗原的专一性用于血清学检验是一种必然趋势,而多克隆机体则以其简易的制备方式在目前仍得到广泛的应用,但多克隆抗体的提纯仍有许多繁琐之处,使其优势受到影响。本试验以甲型副伤寒沙门氏菌体抗原多克隆抗体的制备及提纯为例,提出可行的更简易的提纯方法。方法 利用产G蛋白链球菌,以一种较为简易的特异性结合和解离的方法来纯化甲型副伤寒沙门氏菌体抗原免疫血清。结果 得到了特异性IgG抗体。结论 利用这种纯化方法在实验室简易可行。     

抗甲型肝炎病毒抗体Fab在大肠杆菌中的表达

目的 在大肠杆菌中高效表达人源抗HAV抗体Fab，为进一步研究该抗体的功能奠定基础。方法 依次将抗HAV抗体的Fd及轻链基因克隆到表达载体pASK84的不同信号序列下，构建成Fab表达质粒，在大肠杆菌JM83中进行表达，并对表达产物进行复性。用SDS－PAGE、western blot和ELISA法检测Fab的表达及其与甲肝病毒抗原的结合活性。结果 构建了抗HAV Fab的重组表达质粒p84Fab，在大肠杆菌JM83中获得表达，表达的Fab占全菌的25％，主要以包涵体形式存在，复性后具有抗原结合活性；培养基、菌体可溶性蛋白部分也能检测到有抗原结合活性的Fab。结论 抗HAV抗体Fab在大肠杆菌中得到了表达，并具有良好的抗原结合活性。     

用原位酶联免疫吸附法检测甲型肝炎病毒

目的　采用一种更加简单和敏感的检测方法对甲型肝炎病毒(HAV)进行检测。方法　用甲型肝炎病毒疫苗株H2M20K株和野毒株合34感染KMB17二倍体细胞,于96孔微量细胞板上培养,并在原位用HAV特异的单克隆抗体与单层细胞上的病毒结合,辣根过氧化物酶标记的抗鼠IgG作为指示,以细胞对照A值(OD)均数的18倍判为阳性。结果　病毒增殖动态显示,高峰期为20～25d,比ELISA终点滴定法提前4～6d;两种方法同时做13个样品的感染性滴度比较,结果差异无显著意义(t=1.13,P>0.05)。原位EIA较好地指示中和试验的结果;直接从12份粪便中分离病毒,经第一代培养检测有5份阳性。结论　EIA敏感性与ELISA法相似,由于原位EIA直接检测病毒细胞系统,有操作简单,重复性好等优点,可取代ELISA终点滴定法,同时也可望用于对其他病毒细胞系统的检测。     

合成肽抗原在庚型肝炎病毒抗体检测中的初步应用

为了研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在我国的感染状况，依照对ＨＧＶ氨基酸序列的亲水性和抗原决定簇位点分析，采用固相法合成了ＨＧＶ不同区段的４条多肽，以此为抗原建立了检测抗ＨＧＶ－ＩｇＧ的间接酶联免疫吸附试验。检测５７份非甲－戊型肝炎病人血清，抗ＨＧＶ－ＩｇＧ阳性者２０份，阳性检出率为３５．０９％（２０／５７），ＨＧＶ ＲＮＡ阳性者１４份，阳性率为２４．５６％（１４／５７）。检测甲型肝炎病人血清３０份，阳     

人源抗甲型肝炎病毒Fab在大肠杆菌中的表达及复性

目前已有用于接触前预防的甲肝疫苗 ,但对于接触后预防 ,则多采用特异性免疫球蛋白作被动免疫。血源性免疫球蛋白虽应用效果好 ,但可能被血源中难以检测的病原体污染 ;鼠源抗体易引起人抗鼠抗体反应。因此基因工程人源抗体有望成为接触后预防的首选制剂。本文在从噬菌体抗体库筛选的抗甲型肝炎病毒 (ＨＡＶ)人源抗体的基础上 ,选用大肠杆菌高效表达该抗体Ｆａｂ,并对表达产物进行了复性。为了便于将Ｆｄ基因克隆至表达载体ｐＡＳＫ84 ,设计 2条引物 ,上游引物Ｆｄ5 :5′ ＡＡＣＴＧＣＡＧＣＴＣＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＡ 3′ ;下游引…     

免疫复合物解离剂的研究及在HCV抗原检测中的应用效果分析

目的探索一种可以使免疫复合物发生解离的方法,并进行应用效果分析。方法通过对HAV抗原抗体复合物的解离,进行酸化剂、去垢剂的组合及解离时间、温度等相关条件筛选,优化出最佳的解离方法,应用于1 370份HCV血清样品,对解离前后的抗原阳性率进行统计分析。结果 160 EU/ml的HAV抗原能被效价为20 U/ml的HAV抗血清完全中和;只单独使用去垢剂对免疫复合物无解离效果;0.1 mol/LGly-HCL能解离抗原抗体复合物,加入1种或几种去垢剂后则其解离效果有不同程度的提高,其中以Gly-HCl+7%TritonX-100+5%CHAP的效果最好(q=27.177,P<0.01);免疫复合物在加入解离剂后在室温60 min、37℃30 min、60℃10 min为本试验较好的解离条件,其中以37℃30 min效果最佳;应用Gly-HCl+5%CHAPS+7%TritonX-100在37℃对样品进行预处理30 min后,可使HCV抗原阳性检出率由解离前的33.3%提升至75.56%,解离前后之间的阳性率差异具有显著地统计学意义(χ2=32.34,P<0.01)。结论酸化剂能将HAV及HCV抗原抗体免疫复合物解离,添加去垢剂后,解离效果好于单独使用酸化剂,且联合添加好于单独添加。     

乙型肝炎病毒前S2抗原／抗体检测方法的改进及其应用

通过改进乙型肝炎病毒表面前Ｓ２抗原（Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｇ）、前Ｓ２抗体（Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ）的检测方法,对１２８份正常人标本Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ进行测定,确定了Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ抑制率的阳性界值。用改进后的方法检测不同人群中的Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｇ及Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ,发现在慢性乙型肝炎患者中Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｇ比ＨＢｅＡｇ／Ａｂ系统更能反映机体的ＨＢＶＤＮＡ复制水平（Ｐ＜０．０１）,而Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ的检出则与急性乙型肝炎的预后密切相关,同时,Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｂ也可作为评价含有Ｐｒｅ－Ｓ２Ａｇ的乙肝疫苗主动免疫效果的指标。     

抗巨细胞病毒早晚期抗原单克隆抗体制备及在病毒培养物鉴定中的初步应用

目的 制备抗CMV早晚期抗原单克隆抗体并在病毒培养物鉴定中初步应用.方法 CMV感染MRC-5细胞24h、48h和72h后甲醛灭活的可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1进行融合.酶免法筛查阳性杂交瘤并有限性稀释法进行克隆.免疫荧光及印迹对筛选后的克隆进行鉴定,最终获得的杂交瘤制备腹水并使用Protein G进行纯化.纯化后单抗应用于CAP室间质评标本以及临床标本CMV培养物的鉴定.结果 3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合后初步筛查出约110株阳性克隆.剔除与其它抗原有交叉反应、抗体效价低、非全覆盖早晚期抗原的克隆最终获得抗CMV单抗杂交瘤1株,即23B5-1.免疫荧光显示23B5-1株单抗与CMV感染后3h-120h的MRC-5细胞均反应,即覆盖即刻、早期和晚期抗原.免疫印迹试验显示23B5-1株单抗与CMV抗原25KD-50KD之间的5个蛋白条带结合.23B5-1株单抗免疫球蛋白亚型为IgG1.Protein G纯化腹水后的单抗效价≥1∶12800.纯化单抗染色鉴定6份室间质评及10份临床标本CMV培养物全部符合.结论 初步应用显示制备的抗CMV早晚期抗原单克隆抗体性能良好.     

人源性抗HBsAg单抗重链可变区基因序列分析

应用生物工程菌表达法，本文建立了抗ＨＢｓＡｇ单克隆抗体片段组合文库。并筛选阳性株制备了相应的抗体活性片段。人工法对５个阳性株的抗体编码ＤＮＡ重链可变区序列进行了分析，结果表明，５株中有２株ＤＮＡ序列相同，与国外学者所作同类抗体的序列不同，提示是具有抗体活性的不同菌株。同时比较ＤＮＡ、序列发现，氨基酸排列的异同决定抗体的结合活性。ＤＮＡ序列相同的２株其抗体片段的表达能力也相似，表现为酶免疫测定时Ａ值近似。抗体编码基因的序列分析有助于深入探讨抗体的表达能力、亲和力等特性。     

丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用

目的 探讨丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用.方法 利用重组融合HCV抗原分别标记生物素及吖啶酯,建立起双抗原夹心法化学发光检测试剂盒,与间接法同时检测了866例阴性标本,440例阳性标本,3套BBI阳转血清盘.结果 双抗原夹心法与间接法灵敏度分别为100％、100％,特异性分别为99.9％、98.7％,特异性差别1.2％(95％可信区间:0.5％～2.1％),BBI阳转血清相对敏感性系数为-1.33.结论 双抗原夹心法特异性及早期感染检测能力优于间接法,将会成为丙型肝炎病毒抗体检测的主要方法.     

Antibodies to Hepatitis A Virus in Immune Serum Globulin

Two hundred one immune serum globulin (ISG) lots manufactured in the US between 1967 and 1977 were tested for antibodies to the hepatitis A virus (anti-HAV) by a competitive-inhibition radioimmunoassay (RIA); a lesser number were also tested by immune adherence hemagglutination (IAHA). The percentage of ISG lots that contained anti-HAV with a titer of 1:100 or greater by RIA was 50% for those manufactured in 1967, 69% for those manufactured in 1972, and 100% for those manufactured in 1977. The percentage of lots with anti-HAV titers equal to or greater than 1:500 by RIA was 7% in 1967, 18% in 1972, and 70% in 1977. Only ten lots of ISG (5%) had anti-HAV titers of 1:1,000 or greater by RIA; seven of these were manufactured in 1977. Both the mean titer of anti-HAV in ISG lots and the percentage of lots containing significant titers of this antibody appear to have increased in the US over the past ten years. This may reflect the increased use of source plasma from paid plasmapheresis donors in the US during this period. The lower titers of anti-HAV in the older lots of ISG studied were shown not to be due to fragmentation of antibody molecules during storage.     

HCV核心抗原C33肽单克隆抗体的研制与初步鉴定

用ＨＣＶ核心抗原（３３肽）与鼠血清白蛋白交联后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得有实用价值的２株ＭｃＡｂ。此两株ＭｃＡｂ除与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应外，与ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０也有很好的反应；但与ＨＣＶＮＳ３、ＮＳ５及核心区ＣＰ９抗原无反应性。在竞争ＥＬＩＳＡ中，对抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。将此两株ＭｃＡｂ用于慢性丙型肝炎病人肝活检免疫组化研究，获得较为满意的结果。     

丙型肝炎病毒抗体与核心抗原联合检测的诊断效能研究

目的 探讨丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)与核心抗原(HCV-cAg)联合检测对丙型肝炎的诊断效能.方法 经重组免疫印迹试验确证的92例阳性标本,81例阴性对照标本,同时进行HCV-Ab和HCV-cAg检测,分析HCV-Ab检测法、HCV-cAg检测法及两者联合检测法的敏感性、特异性和ROC曲线下面积.结果 HCV-Ab检测法敏感性为79.3％,特异性为93.8％;HCV-cAg检测法敏感性为87.0％,特异性为90.1％;HCV-cAg与HCV-Ab联合检测法敏感性为92.4％,特异性为88.9％.三种试验比较,敏感性差异有统计学意义(P＜0.05),特异性差异无统计学意义(P＞0.05).三种方法ROC曲线下面积分别为0.866、0.885和0.906.HCV-cAg与HCV-Ab联合检测法,诊断准确性较高.结论 HCV-cAg与HCV-Ab检测方法的联合应用对于丙型肝炎的诊断效能较高.     

Incidence of hepatitis A virus (HAV) infection in rural Liberia

To provide background for future hepatitis A vaccine trials, sera were collected from 0- to 4-year-old Liberian infants and their mothers on two occasions an average of 14.75 months apart and tested for antibody to hepatitis A virus (anti-HAV). The prevalence of anti-HAV rose from 2.5% in infants 0-6 months of age to 70% in children 3-4 years of age and did not differ between male and female infants. The annual incidence of new infections was slightly lower in the first year of life (35%) than in the subsequent 3 years, when it averaged 45%. The presence of HBV infection did not affect the incidence of HAV seroconversion. No clinical hepatitis was recognized in the subjects who seroconverted. Dual hepatitis A and B virus infection were observed; these were all clinically inapparent. The extraordinary incidence of HAV infection documented in the present study offers an opportunity for vaccine efficacy trials requiring minimal numbers of subjects.     

单克隆抗体C-D11相应抗原在口腔颌面部肿瘤患者血清中的水平

本文应用单克隆抗体C-D11 ELISA抑制试验检测了C-D11相应抗原在口腔颌面部肿瘤患者血清中的水平。结果表明,C-D11相应抗原在29例恶性肿瘤血清中有13例呈显著升高,与正常血清和良性肿瘤血清组比较有非常显著性差异(P<0.01)。本试验的敏感性为44.8％,特异性为90.2％,尤其对伴有转移的肿瘤及口腔鳞癌有较高的敏感性,分别为83.3％和53.3％。这些资料提示,C-D11相应抗原血清学检测对口腔颌面部恶性肿瘤的诊断、监测及预后判断有一定的应用价值。     

抗鹭山病毒单克隆抗体的研制及应用

本文报告应用淋巴细胞杂交瘤技术，共获得５株能持续、稳定分泌抗鹭山（ＳＡＧ）病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系，间接免疫荧光法证实，两株ＭｃＡｂ具有病毒种的特异性，其它３株具有亚组特异性。免疫印迹分析发现，前者仅能识别ＳＡＧ病毒Ｃ蛋白上的表位，后者能识别ＳＡＧ病毒的三个结构蛋白（Ｅ１、Ｅ２和Ｃ），并与ＧＥＴ、ＭＡＹ及ＲＲ鹭甲病毒的Ｃ蛋白有明显的交叉反应。     

乙肝病毒前S1抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的利用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术建立乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒。方法应用双抗体夹心法建立乙肝preS1抗原TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项性能指标进行评估。结果对280份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果显示自制试剂盒的特异性更好：200份正常人血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×4．5。用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为3．4％～7．8％,6．9％-8.4％;检测HBsAg及HBeAg无交叉反应。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,TRFIA法精密度和特异性有较大提高,可替代酶免法试剂盒。     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测的临床意义

探讨乙型肝炎病毒前s1抗原（Pre-S1）检测在乙型肝炎病毒诊断中的临床意义。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量聚合酶链反应技术（fluorescenee quantitative PCR,FQ-PCR）对650份HBV-M不同阳性模式及40份HBV—M全阴性模式血清标本进行乙型肝炎病毒Pre-S1、乙肝五项和HBV—DNA检测,并对三种检测结果进行统计学分析。在650份HBV—M不同阳性模式标本中,在119份大三阳标本中Pre—S1阳性检出率92．4％,HBV-DNA阳性检出率100％,在186份小三阳标本中Pre—SI阳性检出率42．5％,HBV—DNA阳性检出率63．4％,在21例HBsAg（＋）和HBcAb（＋）阳性组中Pres1阳性检出率47．6％,HBV．DNA阳性检出率66．7％;在297例HBsAb（＋）标本中Pre—S1阳性检出率0．4％,HBV-DNA阳性检出率0％,在268例HBV—DNA阳性的标本中Pre-S1阳性检出率79．3％。在40份HBV—M全阴模式中Pre-S1阳性检出率0％,HBV-DNA阳性检出率0％。Pre—S1在大三阳、小三阳及HBV-DNA阳性组阳性检出率明显高于阴性组（P〈0．01）,Pre—S1检测可补充和完善乙肝“两对半”检测的不足,尤其对HBeAg阴性或变异的HBV感染者能更好的反映病毒的复制状态和传染性。